一种测定西瓜花粉活力的方法
【专利摘要】本发明涉及一种西瓜花粉活力测定方法，属于植物【技术领域】。本发明公开了一种离体萌发法测定西瓜品种花粉活力的方法，可有效的测定西瓜花粉活力。所用的花粉离体萌发培养基，组分为200g/L蔗糖、10mg/L?H3BO3、800mg/LCa(NO3)2·4H2O、和6.5g/L琼脂。将花粉均匀播种于该固体培养基，置于25℃、相对湿度85％的黑暗条件下培养。4h后用光学显微镜观察花粉萌发和花粉管生长情况。本方法简单，完全定量，数据可靠，可操作性强，具有较高的实际应用价值，对提高西瓜育种效率具有重要意义。
【专利说明】一种测定西瓜花粉活力的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种花粉活力测定方法，尤其涉及一种西瓜花粉活力的测定方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]西瓜（Citrullus lanatus Mansfeld)为葫芦科西瓜属植物，是一种广泛种植的世界性园艺作物，是人们喜爱的果品之一。测定花粉活力的方法很多，其中花粉离体萌发测定法是最有效、最接近实际结果的测定方法。离体萌发法测定花粉活力需要特定的培养基和培养条件。培养基的主要成分一般包括Ca2+、硼、碳源等，有的植物还需要其他物质如激素（如6-BA等）、PEG等。Brewbaker等研究表明，39科79属86种植物花粉在BK培养基上均能萌发良好（Brewbaker J K, Kwack B H. The essential role of calcium ionin pollen germination and pollen tube growth[J]. Amer J Bot,1963，50:859 - 865)。Ledue等用改良Monnier培养基MEdt萌发培养基，使荠菜（三核花粉）花粉的萌发率显著提高（Leduc N, Monnier M, Douglas G C. Germination of trinucleatedpollen:formulation of a new medium for Capsella bursa -pastoris[J]. Sexual PlantReproduction, 1990,3:228 - 235.)此外，花粉离体萌发测定法大多采用液体培养方式，虽然培养液能与花粉表面充分接触，但是静置时间过长营养物质易分布不均匀，且通气性较差，大大影响了花粉的正常萌发，使测定结果失真。
[0003]目前，关于西瓜花粉离体萌发的培养基和培养条件还未见报道，本发明可以为西瓜品种提供最适的花粉离体萌发培养体系，为花粉活力测定提供一个高效、快速、简便的方法。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是针对现有技术存在的缺陷，提出一种测定西瓜花粉活力的方法，可以高效快速地测定西瓜的花粉活力。
[0005]本发明通过以下技术方案解决技术问题，一种测定西瓜花粉活力的方法，包括以下步骤：
[0006]步骤一、配制培养基，成分包括200g/L蔗糖、10mg/L H3B03、800mg/LCa(NO3)2 · 4H20、和 6. 5g/L 琼脂，pH 值为 5. 8 ；
[0007]步骤二、采集花粉，于早晨9~11点采集盛开的西瓜花粉，将所述花粉装入离心管中，避光保存；
[0008]步骤三、培养花粉，将所述花粉均匀播种于该固体培养基上，培养4小时；
[0009]步骤四、显微镜观察计算花粉活力，培养完毕后，置于光学显微镜下观察发芽状况，以花粉管长度大于花粉直径视为花粉萌发，随机观察10个视野进行记录，实验重复3次。
[0010]步骤三中所述固体培养基的培养环境为：25°C、相对湿度85%的黑暗条件下培养。
[0011]本发明的测定方法科学合理：1.蔗糖、硼酸和钙对于花粉萌发和花粉管伸长是必需的，是花粉离体萌发培养基的主要成分。蔗糖在花粉萌发中主要起提供能源和调节渗透压作用，一定量的硼酸和钙离子能使花粉管长得较直且粗，不致过长。2.本发明采用固体培养方式，区别于常规测定花粉活力（液体培养基）的方法，克服了液体培养静置时间过长营养物质易分布不均匀和通气性较差的缺点。采用固体培养基，培养基成分均匀稳定，通气条件好，便于观察研究，测定的数据更加准确。3.本方法对西瓜花粉离体培养和活力检测，具有播种花粉均匀、检测方法简单和可操作性强等特点，数据科学可靠，并可完全定量，对于提高西瓜育种效率具有较高的实际应用价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0012]图I为显微镜下观察到的花粉发芽状况。
【具体实施方式】
[0013]以下是发明人按照技术方案进行的具体实验，该实验用相同的培养基成分，分别在液体和固体两种培养方式下进行培养，以探索出适宜西瓜花粉离体萌发的最适培养方式，同时为该方法的应用提供理论依据和技术支持。
[0014]I. I 材料
[0015]供试材料为西瓜自交系‘wmjOl’和‘wmj02’，均由镇江瑞繁农艺有限公司提供。
[0016]I. 2 方法
[0017]处理A :200g/L 蔗糖、10mg/L H3BO3>800mg/L Ca(NO3)2 · 4H20、和 6. 5g/L 琼脂，pH值为5. 8 ;
[0018]处理B :以蒸懼水为溶剂，配制含200g/L鹿糖、10mg/L H3B03、800mg/LCa(NO3)2 · 4H20的液体培养基，pH值为5. 8 ;
[0019]将花粉25°C、相对湿度85%的黑暗条件下培养。
[0020]于早晨10:00采集第一天开放的西瓜花的花粉，将花粉装入离心管中，避光保存；将花粉均匀播种于两种培养基上，培养4小时；培养完毕后，置于光学显微镜下观察发芽状况，以花粉管长度大于花粉直径视为花粉萌发，随机观察10个视野进行记录，实验重复3次。
[0021]1. 3结果与分析
[0022]1. 3. I不同培养方式对花粉活力测定的影响
[0023]结果如表1所示，西瓜花粉在设计的2种培养方式种均可萌发，但花粉萌发率存在显著差异，其中在琼脂固体培养基上花粉能够较好萌发，其萌发率可达到60%以上，花粉管也能得到较好生长。此外，在液体培养条件下，显微镜下观察到大量与花粉分离的花粉管，表明花粉萌发后由于液体的流动，使花粉与花粉管的分离，大大影响了其测定准确性。因此，固体培养条件更容易准确反映花粉真实的萌发情况，数据真实可靠。
[0024]表1不同培养方式对西瓜自交系花粉萌发的影响
[0025]
【权利要求】
1.一种测定西瓜花粉活力的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤一、配制培养基，成分包括蔗糖、H3B03、Ca(NO3)2 · 4H20、和琼脂，pH值为5. 8 ;步骤二、采集花粉，于早晨9~11点采集盛开的西瓜花粉，将所述花粉装入离心管中，避光保存； 步骤三、培养花粉，将所述花粉均匀播种于该固体培养基上，培养4小时； 步骤四、显微镜观察计算花粉活力，培养完毕后，置于光学显微镜下观察发芽状况，以花粉管长度大于花粉直径视为花粉萌发，随机观察10个视野进行记录，实验重复3次。
2.根据权利要求1所述测定西瓜花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤一中，培养基的组分为：200g/L 蔗糖、10mg/L H3BO3>800mg/L Ca(NO3)2 · 4H20、和 6. 5g/L 琼脂。
3.根据权利要求1所述测定西瓜花粉活力的方法，其特征在于：步骤三中所述固体培养基的培养环境为：25°C、相对湿度85%的黑暗条件下培养。
【文档编号】C12N5/04GK104178448SQ201410364358
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年7月28日 优先权日:2014年7月28日
【发明者】孙春青, 潘跃平, 马志虎, 戴忠良, 毛忠良, 吴国平, 秦文斌, 姚悦梅, 张振超, 潘永飞, 孙国胜, 王建华, 陈智超 申请人:镇江瑞繁农艺有限公司