一种ext1基因突变序列的制作方法
【专利摘要】本发明一种EXT1基因突变序列，属于基因工程【技术领域】。所述EXT1基因突变序列与EXT1正常基因序列相比具有c.1325delC突变。本发明具有提供了HME致病的新突变，可能用于早期诊断HME，并且可以应用于早期产前基因筛查的优点。
【专利说明】-种EXT1基因突变序列
【技术领域】
[0001] 本发明属于基因工程【技术领域】，具体涉及一种EXT1基因突变序列。
【背景技术】
[0002] 骨软骨瘤是最常见的软骨结构的良性肿瘤之一，它包括遗传性多发性外生骨疣和 遗传性单一性外生骨疣。骨软骨瘤（HME)是一种常染色体显性遗传病伴随有五万分之一得 发生率，使之成为流行的遗传性肌肉骨骼疾病之一。约20%的报道说明多发性外生骨疣是 没有家族史的。HME具有三个特点，第一，HME病人表现出多发的良性外生骨疣，;第二，具有 明显的遗传性；最后，是严重的并发症，具有〇. 5%到2%的概率转化为恶性肿瘤。
[0003] 已有的研究证明EXT基因家族与大多数HME有很大的关系。在该基 因家族，拥有 Exostosin-l(EXTl)，Exostosin-2(EXT2)，Exostosin-3(EXT3)和 Exostosin-likel(EXTLl)，Exostosin-like2(EXTL2)，Exostosin-like3(EXTL3)基因。EXT1 含有11个外显子编码区域，它位于8号染色体长臂24. 1位置。EXT1基因的突变被认为导 致了大部分的HME。EXT基因家族被报道是编码一种蛋白，该蛋白与硫酸乙酰肝素合成相 关。先前的研究表明硫酸乙酰肝素是一种必需分子，并且硫酸乙酰肝素的功能紊乱会导致 HME。由EXT1基因突变导致的HME相比于EXT2基因引发的HME更易癌变。尽管已经有许 多关于EXT基因家族的研究，但是一小部分病人并不含有EXT基因的突变。所以HME的发 病机理和遗传基础尚未彻底弄清。
[0004] 随着DNA测序技术的快速发展，疾病基因图谱的外显子比对得到证实，由于它包 含有所有外显子区域，新的基因变异能够被证实。
【发明内容】
[0005] 在该研究中，发明人对来自HME家庭的三个病人和三个健康人进行了全外显子测 序。对外显子数据分析得到突变进行了过滤后，锁定了 EXT1中的一个突变，并对这个突变 在所有家庭成员中进行了 sanger验证。另外，免疫组化实验用于更深入探究，去鉴定相关 基因突变的重要性。
[0006] 本发明的目的在于公开了一种EXT1基因突变序列。
[0007] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0008] -种EXT1基因突变序列，其中，所述EXT1基因突变序列与EXT1正常基因序列相 比具有c. 1325delC突变。
[0009] 本发明的EXT1基因是负链翻译，其对应的NCBI上的正链序列的登录号为 NM_000127. 2GI:46370065,序列如SEQ ID No. 1所示，EXT1基因突变序列对应的正链序列 如SEQ ID No. 2所示，其中突变位点为在SEQ ID No. 1序列的第2098位删除了 g。
[0010] EXT1基因是EXT基因家族的一员，位于8号染色体长臂24. 1位置，包含有11个外 显子区域。EXT1基因编码的蛋白具有葡萄糖醛酸糖基转移酶和N乙酰氨基葡萄糖糖基转移 酶（它能催化合成聚合硫酸乙酰肝素链在内质网和高尔基体内）的活性。硫酸乙酰肝素在 细胞表面广泛表达并且是细胞外基质糖蛋白的组成部分，调停细胞的黏着，信号传导，受体 配体的结合过程。以前的研究表明硫酸乙酰肝素是个必要的分子，硫酸乙酰肝素的功能紊 乱可能会导致HME。
[0011] 本发明发现了新的突变C. 1325deic位于5号外显子区域，该移码突变在除了 22 号病人和健康家庭成员外的所有患者身上都有发现。
[0012] 这个c. 1325delC位于exostosin基因和糖基转移酶区域，该突变导致密码子442 位点的移码突变，导致丝氨酸到异亮氨酸的改变。在密码子443位置出现的终止密码子，导 致了包括有糖基转移酶区域的丢失的截断的蛋白产物。免疫组化实验证明了突变EXT1的 表达量的下降。HME在病人身上截断的EXT1基因产物可能导致不能正确的折叠被快速降解 掉。该结果与之前关于HME病人存在减少的EXT1蛋白的研究一致根据所有HME突变数据 内关于EXT1基因的突变，所有不同类型的变异几乎平等的分布在11个外显子上。
[0013] 合起来看，本发明通过对一个HME家族进行全外显子测序发现了位于EXT1基因的 一个新的移码突变，c. 1325delC。通过桑格测序和免疫组化实验对HME家族的c. 1325delC 的突变进行了验证。本发明的结果提供了一个关于HME致病的新的突变，可能用于早期诊 断HME。并且可以应用于早期产前基因筛查。
[0014] 本发明具有以下有益效果：
[0015] 本发明提供了 HME致病的新突变，可能用于早期诊断HME。并且可以应用于早期产 前基因筛查。
【专利附图】
【附图说明】：
[0016] 1、图1为用于软骨瘤研究的家族的谱系情况；
[0017] 2、图2为桑格测序的色谱图痕迹；
[0018] 3、图3为EXT1基因的编码区域结构；
[0019] 4、图4为免疫组化结果显示基因突变前后蛋白表达量变化图谱。
【具体实施方式】：
[0020] 为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明一种EXT1基因 突变序列作进一步的说明。
[0021] 实施例1 :
[0022] -、样本来源：
[0023] 在中国河南省的一个五代人都出现HME的家族内，挑选了 3个患者（19、113和 1119,其中1个发生了恶性转移）和3个健康个体（IKKII2和1126)进行外显子测序。该 家族内的16个患者和13个未患HME的人，还有3个非该家族的人（其中包括2个患者和 1个未患HME的人），共32个样本都通过了 PCR实验确认，样本信息如表1和图1所示，其 中图1为用于软骨瘤研究的家族的谱系情况，" + "标明这些个体经过了检查和测序，病人的 箭头指向标明原发病患者，黑框或椭圆表示活着的病人，白框或者椭圆标示健康个体，充满 线条的框或者椭圆代表已故的病人，框或者椭圆被线条隔断标示已故的健康个体：
[0024] 表1样本信息
[0025] 该家族外显子测序临床表现
【权利要求】
1. 一种EXT1基因突变序列，其特征在于：所述EXT1基因突变序列与EXT1正常基因序 列相比具有c. 1325delC突变。
【文档编号】C12N15/54GK104195149SQ201410364178
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年7月28日 优先权日:2014年7月28日
【发明者】吴松, 王大平, 杨雷, 刘红杰, 蔡志明 申请人:王大平, 吴松