和ORSV病毒的石斛组培苗，取带有单芽的茎段1.5cm，接种到基本培养基上，在4°C黑暗条件下炼苗5周;所述I月苗龄是继代培养I月的石斛组培苗，苗高度为2-3cm;
所述基本培养基为:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8;
步骤(2)，在体视显微镜下，从步骤(I)所炼的苗上剥取3mm长的茎尖，然后将茎尖在4°C黑暗条件下预培养3d;接着在超净工作台上，采用高糖加载液对茎尖加载40min后，将茎尖转移到玻璃化溶液PVS2中脱水60min，再将茎尖放到lcm*2.2cm的铝箔条光滑的一面上，向茎尖上滴加PVS2，使茎尖完全包裹于PVS2溶液小滴中，之后将铝箔条直接浸入液氮中进行冷冻，冷冻后将铝箔条装入冻存管中，拧紧盖子后投入液氮中保存60min，之后将茎尖在室温下转入卸载液中解冻并卸载30min，卸载后的茎尖接种到成活培养基上，先暗培养3d，后转入正常光照下继续培养，获得石斛脱毒苗；60d后RT-PCR检测CyMV和ORSV，脱毒率为93.5%。
[0039]所述预培养的培养基为:1/2MS+0.6mol/L蔗糖+7g/L琼脂，ρΗ5.8;
所述加载和脱水过程都在冰上进行；
所述高糖加载液为:l/2MS+2mol/I/y^^+0.7mol/L鹿糖，pH5.8;
所述玻璃化液PVS2: 1/2MS+0.4mol/L蔗糖+30%w/v甘油+15%w/vDMS0 pH5.8 ；
所述卸载液为:1/2MS+1.2mol/L鹿糖，pH5.8;
所述成活培养基为:l/2MS+0.2ml/L NAA+2.0ml/L 6_BA+50g/L马铃薯+25g/L香蕉+7g/L 琼脂，pH5.8;
所述正常光照培养是在温度25土 1°C、光照强度1000-20001x、光照12h/d的条件下进行培养。
[0040]实施例3
一种石斛超低温保存脱毒的方法，包括如下步骤:
步骤(I)，取I月苗龄的带有CyMV和ORSV病毒的石斛组培苗，取带有单芽的茎段1.2cm,接种到基本培养基上，在4°C黑暗条件下炼苗4周;所述I月苗龄是继代培养I月的石斛组培苗，苗高度为2-3cm;
所述基本培养基为:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8;
步骤(2)，在体视显微镜下，从步骤(I)所炼的苗上剥取2mm长的茎尖，然后将茎尖在4°C黑暗条件下预培养2d;接着在超净工作台上，采用高糖加载液对茎尖加载30min后，将茎尖转移到玻璃化溶液PVS2中脱水50min，再将茎尖放到0.9cm*2.1cm的铝箔条光滑的一面上，向茎尖上滴加PVS2，使茎尖完全包裹于PVS2溶液小滴中，之后将铝箔条直接浸入液氮中进行冷冻，冷冻后将铝箔条装入冻存管中，拧紧盖子后投入液氮中保存45min，之后将茎尖在室温下转入卸载液中解冻并卸载25min，卸载后的茎尖接种到成活培养基上，先暗培养2d，后转入正常光照下继续培养，获得石斛脱毒苗；60d后RT-PCR检测CyMV和ORSV，脱毒率为93.7%。
[0041 ]所述预培养的培养基为:1/2MS+0.5mol/L蔗糖+7g/L琼脂，ρΗ5.8;
所述加载和脱水过程都在冰上进行；
所述高糖加载液为:l/2MS+2mol/I/y^^+0.6mol/L鹿糖，pH5.8;
所述玻璃化液PVS2: 1/2MS+0.4mol/L蔗糖+30%w/v甘油+15%w/vDMS0 pH5.8 ；
所述卸载液为:1/2MS+1.2mol/L鹿糖，pH5.8;
所述成活培养基为:l/2MS+0.17ml/L NAA+1.5m I/L 6_BA+50g/L 马铃薯+25g/L 香蕉+7g/L 琼脂，pH5.8;
所述正常光照培养是在温度25土 1°C、光照强度1000-20001x、光照12h/d的条件下进行培养。
[0042]实施例4
一种石斛超低温保存脱毒的方法，包括如下步骤:
步骤(I)，取I月苗龄的带有CyMV和ORSV病毒的石斛组培苗，取带有单芽的茎段I cm，接种到基本培养基上，在4°C黑暗条件下炼苗3周;所述I月苗龄是继代培养I月的石斛组培苗，苗高度为2-3cm;
所述基本培养基为:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8;
步骤(2)，在体视显微镜下，从步骤(I)所炼的苗上剥取Imm长的茎尖，然后将茎尖在4°C黑暗条件下预培养Id;接着在超净工作台上，采用高糖加载液对茎尖加载20min后，将茎尖转移到玻璃化溶液PVS2中脱水30min，再将茎尖放入冷冻管中，向冷冻管加入PVS2使茎尖浸泡在PVS2中，盖紧盖子后直接将冷冻管投入液氮中保存30min后，将冷冻管在37 °C水浴中解冻3min，之后将茎尖在室温下转入卸载液中卸载20min解冻，卸载后的茎尖接种到成活培养基上，先暗培养Id，后转入正常光照下继续培养，获得石斛脱毒苗;60d后RT-PCR检测CyMV和ORSV，脱毒率为90.0%。
[0043]所述预培养的培养基为:1/2MS+0.3mol/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8;
所述加载和脱水过程都在冰上进行；
所述高糖加载液为:l/2MS+2mol/I/y^^+0.3mol/L鹿糖，pH5.8;
所述玻璃化液PVS2: 1/2MS+0.4mol/L蔗糖+30%w/v甘油+15%w/vDMS0 pH5.8 ；
所述卸载液为:1/2MS+1.2mol/L鹿糖，pH5.8;
所述成活培养基为:1/2MS+0.lml/L NAA+0.lml/L 6_BA+50g/L马铃薯+25g/L香蕉+7g/L 琼脂，pH5.8;
所述正常光照培养是在温度25土 1°C、光照强度1000-20001x、光照12h/d的条件下进行培养。
[0044]实施例5
一种石斛超低温保存脱毒的方法，包括如下步骤:
步骤(I)，取I月苗龄的带有CyMV和ORSV病毒的石斛组培苗，取带有单芽的茎段1.5cm，接种到基本培养基上，在4°C黑暗条件下炼苗5周;所述I月苗龄是继代培养I月的石斛组培苗，苗高度为2-3cm;
所述基本培养基为:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8;
步骤(2)，在体视显微镜下，从步骤(I)所炼的苗上剥取3mm长的茎尖，然后将茎尖在4°C黑暗条件下预培养3d;接着在超净工作台上，采用高糖加载液对茎尖加载40min后，将茎尖转移到玻璃化溶液PVS2中脱水60min，再将茎尖放入冷冻管中，向冷冻管加入PVS2使茎尖浸泡在PVS2中，盖紧盖子后直接将冷冻管投入液氮中保存60min后，将冷冻管在37 °C水浴中解冻4min，之后将茎尖在室温下转入卸载液中卸载30min解冻，卸载后的茎尖接种到成活培养基上，先暗培养3d，后转入正常光照下继续培养，获得石斛脱毒苗;60d后RT-PCR检测CyMV和ORSV，脱毒率为89.9%。
[0045]所述预培养的培养基为:1/2MS+0.6mol/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8;
所述加载和脱水过程都在冰上进行；
所述高糖加载液为:l/2MS+2mol/I/y^^+0.7mol/L鹿糖，pH5.8;
所述玻璃化液PVS2: 1/2MS+0.4mol/L蔗糖+30%w/v甘油+15%w/vDMS0 pH5.8 ；
所述卸载液为:1/2MS+1.2mol/L鹿糖，pH5.8;
所述成活培养基为:l/2MS+0.2ml/L NAA+2.0ml/L 6_BA+50g/L马铃薯+25g/L香蕉+7g/L 琼脂，pH5.8;
所述正常光照培养是在温度25土 1°C、光照强度1000-20001x、光照12h/d的条件下进行培养。
[0046]实施例6
一种石斛超低温保存脱毒的方法，包括如下步骤:
步骤(I)，取I月苗龄的带有CyMV和ORSV病毒的石斛组培苗，取带有单芽的茎段1.3cm，接种到基本培养基上，在4°C黑暗条件下炼苗3.5周;所述I月苗龄是继代培养I月的石斛组培苗，苗高度为2-3cm;
所述基本培养基为:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8;
步骤(2)，在体视显微镜下，从步骤(I)所炼的苗上剥取2mm长的茎尖，然后将茎尖在4°C黑暗条件下预培养1.8d;接着在超净工作台上，采用高糖加载液对茎尖加载25min后，将茎尖转移到玻璃化溶液PVS2中脱水52min，再将茎尖放入冷冻管中，向冷冻管加入PVS2使茎尖浸泡在PVS2中，盖紧盖子后直接将冷冻管投入液氮中保存43min后，将冷冻管在37 V水浴中解冻3.5min，之后将茎尖在室温下转入卸载液中卸载26min解冻，卸载后的茎尖接种到成活培养基上，先暗培养2.5d，后转入正常光照下继续培养，获得石斛脱毒苗;60d后RT-PCR检测CyMV和ORSV，脱毒率为90.2%。
[0047]所述预培养的培养基为:1/2MS+0.47mol/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8; 所述