一种三疣梭子蟹半同胞家系规模化建立方法
【专利摘要】一种三疣梭子蟹半同胞家系规模化建立方法，属于三疣梭子蟹育种技术领域，包括核心育种群体营养强化培育、人工调控个体交配和半同胞家系规模化建立；本发明适用于三疣梭子蟹半同胞家系规模化构建，通过亲蟹交尾前强化培育和不同发育期合理搭配，避免了自然交尾无法识别父母本及雄蟹争夺配偶导致的残杀，相对于梭子蟹室内人工控制定向交尾方法，提高了室内养殖期间成活率与半同胞家系构建效率。
【专利说明】
一种三疣梭子蟹半同胞家系规模化建立方法
技术领域
[0001]本发明属于三疣梭子蟹育种技术领域，具体地涉及一种三疣梭子蟹半同胞家系规 模化建立方法。
【背景技术】
[0002] 三疏梭子蟹(Portunustrituberculatus)是一种重要的海洋经济动物，目前全国 养殖面积50万亩，产量达10万吨，已成为我国海洋养殖主导种类之一。近年来，随着梭子蟹 养殖规模的不断扩大，各种病害也开始接踵而至，并出现大规模发生和暴发性流行的趋势， 给产业和区域经济的发展造成重大损失。选育具有生长速度快、抗逆能力强的新品种已成 为三疣梭子蟹养殖业健康发展的关键。遗传参数估计是水产动物选择育种的一项基础工 作，主要用来估计育种值，制定选择指数，预测选择反应，比较选择方法以及进行育种规划。 而遗传参数都要通过半同胞家系进行精确估计，且半同胞家系数量越多，遗传参数估计的 准确性越高。可见半同胞家系规模化构建是三疣梭子蟹选择育种的一项基本工作。三疣梭 子蟹雌蟹第一次生殖蜕壳和第二次生殖蜕壳时间间隔一年左右，考虑到越冬、生长成活率 等因素，构建三疣梭子蟹母系半同胞基本不现实。由于三疣梭子蟹雌蟹弯曲、复杂的生殖系 统，人工授精技术一直未突破，在一定程度上阻碍了父系半同胞的构建;同时在雌蟹生殖蜕 壳前，雄蟹有追逐雌蟹的求偶行为，一般持续2-5天，有时长达10天，一旦雌蟹蜕壳即行交 配，交配时间持续2h到48h不等，这种特殊的交配行为也在一定程度上阻碍了父系半同胞的 构建;因此三疣梭子蟹半同胞家系规模化构建是开展遗传育种工作的一个技术瓶颈。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题在于提供一种三疣梭子蟹半同胞家系规模化建立方法， 该方法能够成功构建三疣梭子蟹父系半同胞家系，且本发明方法操作简单、周期短、效率 高，能满足选择育种要求。
[0004] 本发明是通过如下技术方案来实现的：
[0005] -种三疏梭子蟹半同胞家系规模化建立方法，包括核心育种群体营养强化培育、 人工调控个体交配和半同胞家系规模化建立；
[0006] 1)核心育种群体营养强化培育
[0007] (1)核心育种群体建立:收集我国不同野生群体三疣梭子蟹亲蟹，利用标准化苗种 培育技术繁育苗种，培育至II期幼蟹，采用等比例放苗方式，在室外养殖池塘建立核心育种 群体；
[0008] (2)投饵:8月初，投喂消毒的鲜活杂鱼和鱿鱼，对养殖个体进行营养强化培育，为 雌蟹生殖蜕壳储备能量，同时促进性腺发育，每日做好水质测定；
[0009] 2)人工调控个体交配
[0010] (1)雌蟹生殖蜕壳前发育标准制定
[0011]根据雌蟹生殖蜕壳前脐部颜色，将其分为4个时期:A、B、C、D，随着生长发育的递 进，脐部黑色比例逐渐增大，其中D期临近生殖蜕壳，每期时间间隔4天以上；
[0012] A:雌蟹脐部完全亮白；
[0013] B:雌蟹脐部亮白部分大于黑色部分；
[0014] C:雌蟹脐部亮白部分小于黑色部分；
[0015] D:雌蟹脐部完全黑色；
[0016] (2)交配设计
[0017] 捕获核心育种群体120日龄个体，1 (；|__与4罕为1组放入1个独立水泥池中，4罕为A、 B、C、D期各1只，测量每个个体的生长指标，然后做好标记，放入水泥池；
[0018] 进一步，步骤(2)所述的雄蟹符合以下特征:健康、活力强、附肢完整、无机械损伤、 体表光鲜无附着物、体重为250g以上;雌蟹符合以下特征:健康、活力强、附肢完整、无机械 损伤、体表光鲜无附着物、体重为120g以上。
[0019] (3)管理:傍晚向水泥池中投喂消毒鲜活杂鱼，每天早晨吸污换水一次，检查记录 亲蟹交尾情况，交尾成功个体，重新做好标记;保持池内及工具清洁；
[0020] 3)半同胞家系规模化建立
[0021] 交尾后的雌蟹经过越冬、强化培育，转移至孵化池，每只雌蟹放入1个孵化池，进行 幼体标准化培育。
[0022] 进一步，步骤3)所述的幼体标准化培育
[0023] 每个孵化池选取健康潘状幼体，单独放入幼体标准化培育桶中进行培育，具体方 法如下：
[0024] (1)投饵
[0025] Ζ〗~Ζπ培育期间投喂褶皱臂尾轮虫，Zm~ZIV培育期间投喂卤虫无节幼体，MX:、 Cil培育期间投喂丰年虫成体；
[0026] (2)水质调控
[0027]向培育桶中添加小球藻，使水体呈黄绿色，Z〗第一天时培育桶水位0.7m，然后每天 添水0. lm，至Zm开始换水，日换水量10% ;叾:第一天时培育桶水温为20.5°C，以后按0.5°C/ d的升幅逐步提高育苗水温，达26 °C时，恒温培育。
[0028] (3)标准化养殖
[0029] 培育至II期幼蟹，转移至室外标准化养殖，室外养殖模式:养殖池塘，用纱网平均 分格，每个家系随机选取相同数量苗种放入1个格，每个格水环境基本一致;前期投喂卤虫 成体、中后期投喂饵料包括小蓝蛤、鲜活杂鱼，进行标准化养殖管理。
[0030] 本发明与现有技术相比的有益效果：
[0031] 1、本发明适用于三疣梭子蟹半同胞家系规模化构建，通过亲蟹交尾前强化培育和 不同发育期合理搭配，相对于梭子蟹室内人工控制定向交尾方法，提高了室内养殖期间成 活率与半同胞家系构建效率。
[0032] 2、本发明适合三疣梭子蟹遗传参数精确评估，通过设立孵化池和幼体培育桶，实 现了家系幼体培育期密度的标准化，提高了参数评估结果的精确度。
[0033] 3、本发明适合三疣梭子蟹遗传育种，通过0与4罕搭配完成交尾，避免了自然交尾 无法识别父母本及雄蟹争夺配偶导致的残杀。
【具体实施方式】
[0034]下面通过实施例详细叙述本发明的技术方法：
[0035] -种三疏梭子蟹半同胞家系规模化建立方法，包括核心育种群体营养强化培育、 人工调控个体交配和半同胞家系规模化建立，具体步骤如下：
[0036] 1、核心育种群体营养强化培育
[0037] (1)核心育种群体建立:收集我国莱州湾、海州湾、鸭绿江口、舟山不同野生群体三 疣梭子蟹亲蟹，利用标准化苗种培育技术繁育苗种，培育至II期幼蟹，通过等比例放苗方 式，收集200个亲蟹子代，在室外养殖池建立核心育种群体，苗种密度为3000只/亩。
[0038] (2)投饵:前期投喂大卤虫、小蓝蛤，8月初，对100日龄的幼蟹投喂经高锰酸钾消毒 的鲜活杂鱼和鱿鱼，对养殖个体进行营养强化培育，日投饵量控制在梭子蟹体重的1〇%_ 15 %，早晨6:00和傍晚16:00 2次投喂，其中傍晚投喂量占日投喂量70 %，为雌蟹生殖蜕壳 储备能量，同时促进性腺发育。
[0039] (3)水质调控:每日要做好温度、盐度、pH值、溶解氧和透明度等水质测定，配备微 孔增氧机，每3-5天换水1次，每次换水量30-40% ;pH值在7.6-8.6，透明度30-40cm，溶解氧〉 4.5mg/L〇
[0040] 2、人工调控个体交配
[0041] (1)交配设计
[0042]捕获核心育种群体120日龄梭子蟹1000只，按照制定的标准，将雌蟹分为4期，然后 id与4罕（A、B、C、D期各1只）为1组放入1个独立水泥池中，共建立100组，水泥池底面积7m2， 高1·5m 〇
[0043] A、B、C、D各期的发育标准为：
[0044] A:雌蟹脐部完全亮白；
[0045] B:雌蟹脐部亮白部分大于黑色部分；
[0046] C:雌蟹脐部亮白部分小于黑色部分；
[0047] D:雌蟹脐部完全黑色；
[0048] 其中雄蟹符合以下特征：健康、活力强、附肢完整、无机械损伤、体表光鲜无附着 物、体重为250g以上;雌蟹符合以下特征:健康、活力强、附肢完整、无机械损伤、体表光鲜无 附着物、体重为120g以上。每个个体测量以下指标:全甲宽、甲宽、甲长、体高、体重，然后用 白色油漆笔做好标记后，放入水泥池。
[0049] (2)管理
[0050] 傍晚16:00向水泥池中投喂消毒鲜活杂鱼，投喂量为梭子蟹体重每天 早晨8点吸污换水一次，换水量为70 % -90 %，检查记录亲蟹交尾情况，交尾成功个体，重新 用白色油漆笔做好标记;保持池内及工具清洁，保证饵料质量，操作人员的手套和雨鞋要及 时消毒。
[0051] 3、半同胞家系规模化建立 [0052] (1)亲蟹排幼
[0053] 交尾成功雌蟹325只，经过越冬、强化培育，次年4月份，抱卵亲蟹195只，心跳达170 次/分钟时，转移至孵化池，每只亲蟹放入1个孵化池，孵化池为室内l〇m 3水泥池，亲蟹排幼 5h后，采用光诱的方式，每个孵化池选取健康潘状幼体3万只，分别放入独立的幼体标准化 培育桶中：底面积lm2，高1.3m。
[0054] (2)幼体标准化培育
[0055] a、投饵
[0056] 在Z:\Zn培育期主要投喂褶皱臂尾轮虫，使其在育苗水体中保持有不少于10个/ ml的密度水平;Zm培育期投喂卤虫无节幼体，每天投喂4-6次，每次的投喂量为1.5~3个/ πιΚΖη培育期投喂卤虫无节幼体，每天6~8次，每次的投喂量为2~3个/ml，在ZIV第3天投喂 卤虫成体，为大眼幼体提供饵料。
[0057] MX^Cn培育期主要投喂卤虫成体，Μ培育期每天平均投喂10~20个丰年虫成体/ 尾，C:培育期每天平均投喂20个丰年虫成体/尾，Cn培育期每天平均投喂30个丰年虫成体/ 尾。投喂时间上午8~9时，中午12时，下午3~4时，傍晚6~7时，晚上12时和凌晨4时，在投喂 前可用烧杯盛池水检查，根据饵料剩余情况，决定下次投喂量;饵料均需高锰酸钾消毒，然 后用海水冲洗干净，再投喂。
[0058] b、水质调控
[0059] 在幼体标准化培育桶中添加小球藻(2~3 X 106个/ml )，使水体呈黄绿色。前期采 取添水方式，每天添加 l〇cm，逐渐添满，至Zm开始换水，日换水量10 %。溶氧量5mg/L以上，Ζι 期时水温为20.5°C，以后按0.5°C/d的升幅逐步提高育苗池水温，达26°C时，恒温培育。
[0060] (3)标准化养殖 [0061 ] a、养殖方式
[0062]每个培育桶为1个全同胞家系，根据实验记录，同一父本的不同全同胞家系，即互 为半同胞家系，培育至Π 期幼蟹，转移至室外标准化养殖，室外养殖模式:5亩养殖池塘，用 纱网平均分为12个格，每个家系随机选取1500只苗种放入1个格，每个格水环境基本一致。
[0063] b、投饵
[0064] 前期（II期~V期）以卤虫成体为主，V期幼蟹以后，以小蓝蛤（俗称海沙子、小白 蛤）、新鲜杂鱼为主，前期日投喂量为体重的8~10%，中期日投喂量为体重的10~15%，后 期日投喂量为体重的8%，在II、III、IV期幼蟹阶段，投喂丰年虫成体，投喂量可达体重50% ~70% ;早晨6:00和傍晚16:00 2次投喂，其中傍晚投喂量占日投喂量70%。
[0065]共建立89个全同胞家系，其中半同胞家系40个，80、120日龄时，每个家系随机选取 30个个体，测量生长性状，利用半同胞数据进行遗传力等遗传参数估计，为水产动物遗传育 种开展提供数据支持。
【主权项】
1. 一种三疣梭子蟹半同胞家系规模化建立方法，其特征在于它包括核心育种群体营养 强化培育、人工调控个体交配和半同胞家系规模化建立； 1) 核心育种群体营养强化培育 (1) 核心育种群体建立:收集我国不同野生群体三疣梭子蟹亲蟹，利用标准化苗种培育 技术繁育苗种，苗种培育至Π 期幼蟹，采用等比例放苗方式，在室外养殖池塘建立核心育种 群体； (2) 投饵:8月初，投喂消毒的鲜活杂鱼和鱿鱼，对养殖个体进行营养强化培育，为雌蟹 生殖蜕壳储备能量，同时促进性腺发育，每日做好水质测定； 2) 人工调控个体交配 (1) 雌蟹生殖蜕壳前发育标准制定 根据雌蟹生殖蜕壳前脐部颜色，将其分为4个时期:A、B、C、D，随着生长发育的递进，脐 部黑色比例逐渐增大，其中D期临近生殖蜕壳，每期时间间隔4天以上； 发育标准的制定依据为： A:雌蟹脐部完全亮白； B:雌蟹脐部亮白部分大于黑色部分； C:雌蟹脐部亮白部分小于黑色部分； D:雌蟹脐部完全黑色； (2) 交配设计 捕获核心育种群体120日龄个体，1 (|与4罕为1组放入1个独立水泥池中，4罕为A、B、C、D 期各1只，测量每个个体的生长指标，然后做好标记，放入水泥池； (3) 管理:傍晚向水泥池中投喂消毒鲜活杂鱼，每天早晨吸污换水一次，检查记录亲蟹 交尾情况，交尾成功个体，重新做好标记;保持池内及工具清洁； 3) 半同胞家系规模化建立 交尾后的雌蟹经过越冬、强化培育，转移至孵化池，每只雌蟹放入1个孵化池，进行幼体 标准化培育。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)交配设计中所述的雄蟹符合以下特 征:健康、活力强、附肢完整、无机械损伤、体表光鲜无附着物、体重为250g以上;雌蟹符合以 下特征:健康、活力强、附肢完整、无机械损伤、体表光鲜无附着物、体重为120g以上。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)所述的幼体标准化培育为 每个孵化池选取健康潘状幼体，单独放入幼体标准化培育桶中进行培育，具体方法如 下： (1) 投饵 Z^Zn培育期间投喂褶皱臂尾轮虫，Zm~Ziv培育期间投喂齒虫无节幼体，M J^C1I培 育期间投喂丰年虫成体； (2) 水质调控 向培育桶中添加小球藻，使水体呈黄绿色，Z1第一天时培育桶水位0.7m，然后每天添水 0.1111，至2111开始换水，日换水量10%;21第一天时培育桶水温为20.5°(：，以后按0.5 1€/(1的 升幅逐步提高育苗水温，达26°C时，恒温培育； (3) 标准化养殖
【文档编号】A01K61/00GK105994082SQ201610523920
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月3日
【发明人】高保全, 刘萍, 李健, 于飞, 陆波, 张庆起, 孟宪亮, 吕建建
【申请人】中国水产科学研究院黄海水产研究所