一种紫色瓶子草的组培快繁方法
【专利摘要】本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种紫色瓶子草的组培快繁方法,包括如下步骤：取健壮母株带顶芽的茎段为外植体，分别进行①外植体用0.1%升汞消毒8～10min，②将消毒后的顶芽接入添加了6?BA、NAA的诱导与分化培养基中培养，③愈伤或不定芽团块接入到添加了6?BA、BR与NAA的增殖培养基中培养,④叶片5～12片、株高≥35mm的叶片≥3片、叶宽≥3mm的叶片≥4片的芽团接入添加了活性炭的生根培养基中培养。本发明提供了一种紫色瓶子草组培快繁方法，可以在短时间内获得大量无性繁殖的紫色瓶子草组培苗。
【专利说明】
一种紫色瓶子草的组培快繁方法
技术领域
[0001]本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种紫色瓶子草的组培快繁方法。【背景技术】
[0002]紫色瓶子草为瓶子草科瓶子草属多年生草本食虫植物。瓶子草外形奇美，叶子成瓶状，侧卧，颜色鲜艳，带有绚丽的紫色网纹。瓶子草可诱捕昆虫，其笼子可分泌蜜汁与消化液，引诱并捕食昆虫。是当今世界最受欢迎的趣味植物之一，具有很高的观赏价值和经济价值。
[0003]目前，瓶子草的繁殖的方法主要有分株、播种和组培。
[0004]分株繁殖，春季脱盆后，除去根际基质，用利刀将根茎切成3?4丛，每丛至少具一小瓶状叶。栽培基质采用细河沙、泥炭土或腐叶土、苔藓或活水苔混合物。
[0005]播种繁殖，瓶子草在自然状态下开花少，结果率低，需人工授粉提高结果率。种子采收后，需经“湿冷积层”的阶段才会发芽。而从种子到成熟植株约需3?5年。[〇〇〇6]组培繁殖，难度较大。目前，国内外相关的研究报道很少，主要以嫩芽茎尖、叶片进行愈伤组织诱导，然后再诱导愈伤组织分化不定芽，再由不定芽形成完整植株。如东莞市生物技术研发所以白叶瓶子草的竦芽茎尖为外植体，经消毒、愈伤与不定芽分化诱导、增殖、 生根，形成完整植株，目前已规模化生产。华南农业大学以瓶子草单芽及叶片为外体值，经消毒、愈伤与不定芽分化诱导、增殖、生根，形成完整植株，但仍处于科研阶段。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种紫色瓶子草的组培快繁方法，通过对紫色瓶子草茎尖及茎段的诱导，获得大量的紫色瓶子草再生植株。
[0008]本发明提供一种紫色瓶子草组培快繁的方法，包括如下步骤:采集紫色瓶子草带顶芽的茎段为外植体，依次进行①外植体消毒，②愈伤组织诱导与不定芽分化，③继代增殖，④不定芽生根，获得紫色瓶子草再生植株。
[0009]所述采集紫色瓶子草带顶芽的茎段，是在控水7?10d后采集，要求母株健壮。
[0010]所述①外植体消毒，是以带顶芽的茎段为外植体，以0.1%升汞为消毒剂，消毒8? lOmin，之后无菌水漂洗2?3次。
[0011]所述②愈伤组织诱导与不定芽分化，是将消毒后带顶芽的茎段接入诱导与分化化培养基中；1个茎段/杯，26±l°c，300?18001UX培养，光照12h/d。顶芽培养20d后开始萌动， 培养30d后，顶芽抽长，茎段长出新芽/叶。
[0012]所述诱导与分化培养基是以MS改培养基为基础，含有1?3mg/L 6-BA(6-苄基氨基噪呤，Benzylaminmopurine)、0 ? 01?0 ? lmg/L NAA(a-萘乙酉爱，1-Naphthaleneacetic acid), 30g/L鹿糖，5.5g /L琼酯，pH6.0。
[0013]所述的MS改培养基，其特征在于:硝酸钾、硝酸氨、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、 磷酸二氢钾、钼酸钠、硼酸用量减半。
[0014]所述③继代增殖，切下直径5?10mm的愈伤团块或2?4个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26± 1°C，1500?30001ux培养，光照12h/d。增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率多4。
[0015]所述增殖培养基是以MS改培养基为基础，含有1?3mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤， Benzylaminmopurine)、0.01?0 ? lmg/L BR(芸苔素内酯，Brassinolide)、0 ? 01?0 ? lmg/L NAA (a-萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)，30g/L鹿糖，6g /L琼酯，pH6.0〇[〇〇16] 所述④不定芽生根，切下叶片5?12片、株高彡35mm的叶片彡3片、叶宽彡3mm的叶片彡4片、根长彡20mm的芽团接入生根培养基中。50团/杯，21 ±1°C，1500?30001ux培养，光照12h/d。
[0017]所述生根培养基是以MS改培养基为基础，含有lg/L AC(活性炭，Acticarbon)， 30g/L蔗糖，6g /L琼酯，pH6.0。培养1周后，即可炼苗移栽。
[0018]本发明的创新之处是公开了紫色瓶子草顶芽及茎段愈伤诱导、不定芽分化、增殖、 生根的培养基配方及其规模化组培快繁的一种方法。本发明引入了芸苔素内酯，提高了紫色瓶子草的增殖系数，目前，国内外尚无相关研究报道。
[0019]本发明有利于规模化繁殖优良趣味食虫植物紫色瓶子草种苗，满足人们提高生活质量对紫色瓶子草盆花的要求，丰富家庭、办公场所的趣味植物景观。【具体实施方式】
[0020]—种紫色瓶子草组培快繁方法，该方法包括以下步骤。
[0021]实施例1:①选取外植体:选取健壮无病虫害的紫色瓶子草为母株，取其带顶芽的茎段为外植体， 去除叶片与外层苞片，备用。
[0022]②外植体消毒:在超净工作台上，将带顶芽的茎段装入无菌空瓶，以0.1%升汞为消毒剂，消毒1 Omin，之后无菌水漂洗2次。无菌率71.4%。
[0023]③愈伤组织诱导与不定芽分化:将消毒后的带顶芽茎段接入诱导与分化培养基中；1个茎段/杯，26±1°C，300?18001ux培养，光照12h/d，l个月转代1次。诱导分化培养基: MS改+2 ? 5mg/L 6-BA+0 ? 05mg/LNAA+30g/L蔗糖+5 ? 5g /L琼酯，pH6 ? 0。顶芽培养20d后开始萌动，培养30d后，顶芽抽长，莖段长出新芽/叶。
[0024]④继代增殖:切下直径5?10mm的愈伤团块或2?4个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26±1°(:，1500~300011?培养，光照1211/(1。增殖培养30(1后，愈伤或不定芽团块增殖率彡4。增殖培养基:MSg^2.5mg/L 6-BA+0.05mg/L BR+0.08mg/L NAA+30g/L蔗糖+5.5g /L 琼酯，pH6.0。[〇〇25] ⑤不定芽生根:切下叶片5?12片、株高彡35mm的叶片彡3片、叶宽彡3mm的叶片彡4 片、根长彡20mm的芽团接入生根培养基中。50团/杯，21±1°(:，1500~300011?培养，光照1211/d〇[〇〇26]生根培养基:MS改+0.1g/L AC+30g/L蔗糖+6g /L琼酯，pH6.0。培养7d后，即可炼苗移栽。[〇〇27] 实施例2:①选取外植体:选取健壮无病虫害的紫色瓶子草为母株，取其带顶芽的茎段为外植体，去除叶片与外层苞片，备用。
[0028]②外植体消毒:在超净工作台上，将带顶芽的茎段装入无菌空瓶，以0.1%升汞为消毒剂，消毒8min，之后无菌水漂洗3次。无菌率76.3%。[〇〇29]③愈伤组织诱导与不定芽分化:将消毒后的带顶芽茎段接入诱导与分化培养基中；1个茎段/杯，26±1°C，300?18001ux培养，光照12h/d，l个月转代1次。诱导分化培养基: MS改+3mg/L 6-BA+0.lmg/LNAA+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0。顶芽培养22d后开始萌动， 培养30d后，顶芽抽长，茎段长出新芽/叶。
[0030]④继代增殖:切下直径5?10mm的愈伤团块或2?4个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26±1°(:，1500~300011?培养，光照1211/(1。增殖培养30(1后，愈伤或不定芽团块增殖率彡4。增殖培养基:MS改+3mg/L 6-BA+0.lmg/L BR+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+5.5g /L 琼酯，pH6.0。
[0031]⑤不定芽生根:切下叶片5?12片、株高彡35mm的叶片彡3片、叶宽彡3mm的叶片彡4 片、根长彡20mm的芽团接入生根培养基中。50团/杯，21±1°(:，1500~300011?培养，光照1211/d〇[〇〇32]生根培养基:MS改+0.1g/L AC+30g/L蔗糖+6g /L琼酯，pH6.0。培养7d后，即可炼苗移栽。
[0033]上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制。本发明的保护范围由所附的权利要求来限定。
【主权项】
1.一种紫色瓶子草的组培快繁方法，包括如下步骤:取健壮紫色瓶子草植株带项芽的茎段为外植体，依次进行①外植体消毒，②愈伤组织 诱导与不定芽分化，③继代增殖，④不定芽生根。2.根据权利要求1，所述紫色瓶子草的组培快繁方法，其特征在于:所述①外植体消毒， 以带顶芽的茎段为外植体，以0.1%升汞为消毒剂，消毒8?lOmin，之后无菌水漂洗2?3次。3.根据权利要求1，所述紫色瓶子草的组培快繁方法，其特征在于:所述②愈伤组织诱 导与不定芽分化，将消毒后的带顶芽茎段接入诱导分化培养基中，26±rC，300?ISOOlux培 养，光照12h/d;顶芽培养20d后开始萌动，培养30d后，顶芽抽长，茎段长出新芽/叶。4.根据权利要求3,所述紫色瓶子草的组培快繁方法，其特征在于，所述诱导与分化培 养基是以MS改培养基为基础，含有1?3mg/L 6-BA(6-节基氨基噪呤，Benzylaminmopurine)、 0.01?0.1mg/L NAA(a-蔡乙酸，1-Naphthaleneacetic acid), 30g/L鹿糖，5.5g /L琼酯， pH6.0 〇5.根据权利要求4,所述的MS改培养基(下同)，其特征在于:硝酸钾、硝酸氨、硫酸镁、硫 酸锰、硫酸锌、硫酸铜、磷酸二氢钾、钼酸钠、硼酸用量减半。6.根据权利要求1，所述紫色瓶子草的组培快繁方法，其特征在于:所述③继代增殖，切 下直径5?10mm的愈伤团块或2?4个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26 ±1°C， 1500?3000 lux培养，光照12h/d;增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率彡4。7.根据权利要求6，所述紫色瓶子草的组培快繁方法，其特征在于:所述增殖培养基是 以皿5改培养基为基础，含有1~311^/1^的6-1^(6-节基氨基噪呤，1361127131111111]1(^111'；[116)、0.01~ 0.1mg/L BR(芸苔素内酯，Brassinolide)、0.01?0.1mg/L NAA(a-蔡乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)，30g/L鹿糖，6g /L琼酯，pH6.0。8.根据权利要求1，所述紫色瓶子草的组培快繁方法，其特征在于:所述④不定芽生根， 切下叶片5?12片、株高彡35mm的叶片彡3片、叶宽彡3mm的叶片彡4片、根长彡20mm的芽团接 入生根培养基中；50团/杯，21 ± 1°C，1500?3000lux培养，光照12h/d。9.根据权利要求8,所述紫色瓶子草的组培快繁方法，其特征在于:所述生根培养基是 以MS改培养基为基础，含有lg/L AC(活性炭，Acticarbon)，30g/L蔗糖，6g /L琼酯，pH6.0; 培养1周后，即可炼苗移栽。
【文档编号】A01H4/00GK106069783SQ201610639585
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年8月8日 公开号201610639585.0, CN 106069783 A, CN 106069783A, CN 201610639585, CN-A-106069783, CN106069783 A, CN106069783A, CN201610639585, CN201610639585.0
【发明人】吴子平, 纪超群
【申请人】吴子平