专利名称：快速革兰氏染色液及方法
技术领域：
本发明涉及革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌快速革兰氏染色液，本发明还涉及快速革兰氏染色液的操作方法。
革兰氏染色液，首先采用结晶紫溶液或龙胆紫溶液(95％酒精100毫克，结晶紫400毫克)20毫克、1％草酸铵溶液8毫克，分别配合，然后混合；其次采用卢戈氏碘液，碘化钾200毫克、碘100毫克、蒸馏水300毫克，先用200毫克蒸馏水，将200毫克碘化钾溶解，然后再加入100毫克碘充分混合，使碘完全溶解，然后加蒸馏水至300毫克；再一种是脱色剂，采用95％酒精；最后用复染液、碱性复红10毫克、95％酒精10毫克、5％石碳酸90毫克。其操作步骤是首先涂片在火焰上固定，滴加结晶紫溶液染1分钟，水洗，其次是滴加卢戈氏碘液，染1分钟后水洗；再次是滴加95％酒精脱色，此时应将玻片不时摇动，直至无紫色脱落为止，30秒钟后水洗；第四是滴加复染液染1分钟，水洗，待干，镜检。上述方法主要存在的问题是一是结晶紫与草酸铵溶液混合后，保存时间短，若有沉淀出现，应重新配制使用，成本高；二是卢戈氏碘液放久后易变质，操作中，稍有不慎，就产生不同结果，而且整个染色过程需要210秒，比较费时间，增加了操作人员的劳动强度。
本发明的目的在于提供一种易配制、不变质、成本低、保存时间长的快速革兰氏染色液。
本发明的另一目的在于提供一种操作方便，快速、准确的操作方法。
本发明的目的是这样实现的染色液，由如下几种原料配制A、结晶紫溶液结 晶 紫600-1000毫克 无水乙醇 8-12毫克丙二醇甲醚8-12毫克 草 酸 铵 700-900毫克蒸 馏 水70-90毫克混合均匀，不产生沉淀，保存1-2年。
B、碘液碘化钾200-500毫克碘50-300毫克氯化钠 150-350毫克蒸馏水80-120毫克混合均匀，呈棕色并存放，不变质，保存1-2年。
C、脱色剂丙 酮 35-45毫克95％乙醇55-65毫克混合均匀。
D、复染液碱性品红 450-550毫克无水乙醇8-12毫克5％石碳酸 8-12毫克 吐温-80 200-500毫克蒸馏水70-90毫克其操作方法是1、涂片经火焰固定，加结晶紫溶液，染3-7秒水洗，用滤纸吸干水份；2、加碘液染3-7秒，水洗，用滤纸吸干水份；3、加脱色剂不断摇动，至无紫色脱落为止10-30秒，水洗；4、加复染液染3-7秒，水洗，干后镜检。便得菌体呈紫色为革兰氏阳性菌，呈红色为革兰氏阴性菌。
快速革兰氏液的碘液进入菌体后，有足够的量迅速与结晶紫结合，此结合物又与革兰氏阳性菌体内的核糖核酸镁盐蛋白质复合物结合，因此，革兰氏阳性菌摄取结晶紫多且较牢固、革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐，所以，不与结晶紫结合，而被石碳酸复红结合。革兰氏阳性菌的等电点(PH2-3)比阴性菌(PH4-5)为低，在一定PH下所带负电荷较多，因此容易和带正电荷的碱性染料结合，不易被脱色剂脱色。革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌菌膜的通透性不同，脱色剂相应采用95％酒精和丙酮的混合液，革兰氏阳性菌不易透入，故不易脱色，由于丙酮溶解性强，使染料和碘复合物溶解彻底，所以，不会产生假革兰氏阳性菌。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果配比容易，易于被临床医务人员掌握，特别适合初学者，染色全过程只需30秒，操作方便，不造成假阳性和假阴性，不沉淀，不变质，成本低廉，存放时间长1-2年，易携带，易掌握，能快速、方便、准确检测细菌，尤其适合农村基层卫生单位。
实施例1染色液有如下原料制配A、结晶紫溶液结 晶 紫 800毫克 无水乙醇 10毫克丙二醇甲醚 10毫克 草 酸 铵 800毫克蒸 馏 水 80毫克B、碘液碘化钾 300毫克碘 150毫克氯化钠 270毫克蒸馏水 100毫克C、脱色剂丙 酮 40毫克95％乙醇 60毫克D、复染液碱性品红 500毫克无水乙醇 10毫克5％石碳酸 10毫克 吐温-80 500毫克蒸馏水 80毫克其操作步骤如下1、涂片经火焰固定，加结晶紫溶液，染5秒水洗，用滤纸吸干水份；2、加碘液染5秒，水洗，用滤纸吸干水份；3、加脱色剂不断摇动，至无紫色脱落为止20秒，水洗；4、加复染液染5秒，水洗，干后镜检，便得菌体呈紫色为革兰氏阳性菌，呈红色为革兰氏阴性菌。
实施例2A、结晶紫溶液结 晶 紫1000毫克 无水乙醇8毫克丙二醇甲醚12毫克草 酸 铵700毫克蒸馏水 90毫克B、碘液碘化钾 200毫克碘 50毫克氯化钠 350毫克蒸馏水 80毫克C、脱色剂丙 酮 45毫克95％乙醇 55毫克D、复染液碱性品红 450毫克无水乙醇 8毫克5％石碳酸 12毫克 吐温-80 500毫克蒸馏水 90毫克实施步骤与实施例1相同。实施例3A、结晶紫溶液结 晶 紫600毫克无水乙醇 12毫克丙二醇甲醚8毫克 草 酸 铵 900毫克蒸馏水 70毫克B、碘液碘化钾 500毫克碘 300毫克氯化钠 150毫克蒸馏水 120毫克C、脱色剂丙 酮 35毫克95％乙醇 65毫克D、复染液碱性品红 550毫克无水乙醇 12毫克5％石碳酸 8毫克 吐温-80 200毫克蒸馏水 70毫克实施步骤与实施例1相同。
权利要求
1.一种快速革兰氏染色液，它由下述重量配比的原料配制的染色液A、结晶紫溶液结 晶 紫 800毫克无水乙醇 10毫克丙二醇甲醚 10毫克 草 酸 铵 800毫克蒸 馏 水 80毫克B、碘液碘化钾 300毫克碘 150毫克氯化钠 270毫克蒸馏水 100毫克C、脱色剂丙 酮 40毫克95％乙醇 60毫克D、复染液碱性品红 500毫克无水乙醇 10毫克5％碳酸 10毫克 吐温-80 500毫克蒸馏水80毫克。
2.根据权利要求1所述的一种快速革兰氏染色液，其中各原料的重量配比是A、结晶紫溶液结 晶 紫 800毫克无水乙醇 10毫克丙二醇甲醚 10毫克 草 酸 铵 800毫克蒸 馏 水 80毫克B、碘液碘化钾 300毫克碘 150毫克氯化钠 270毫克蒸馏水 100毫克C、脱色剂丙 酮 40毫克95％乙醇 60毫克D、复染液碱性品红500毫克无水乙醇 10毫克5％石碳酸 10毫克 吐温-80 500毫克蒸馏水 80毫克。
3.根据权利要求1所述的一种快速革兰氏染色液，其中各原料的重量配比是A、结晶紫溶液结 晶 紫1000毫克无水乙醇8毫克丙二醇甲醚12毫克 草 酸 铵700毫克蒸 馏 水90毫克B、碘液碘化钾 200毫克碘 50毫克氯化钠 350毫克蒸馏水 80毫克C、脱色剂丙 酮 45毫克95％乙醇 55毫克D、复染液碱性品红 450毫克无水乙醇8毫克5％石碳酸 12毫克 吐温-80 500毫克蒸馏水 90毫克。
4.根据权利要求1所述的一种快速革兰氏染色液，其中各原料的重量配比是A、结晶紫溶液结 晶 紫600毫克 无水乙醇 12毫克丙二醇甲醚8毫克 草 酸 铵 900毫克蒸 馏 水70毫克B、碘液碘化钾 500毫克碘 300毫克氯化钠 150毫克蒸馏水 120毫克C、脱色剂丙 酮 35毫克95％乙醇 65毫克D、复染液碱性品 550毫克无水乙醇 12毫克5％石碳酸 8毫克 吐温-80 200毫克蒸馏水 70毫克。
5.一种实现权利要求1所述的一种快速革兰氏染色液的方法，包括下列步骤A、涂片经火焰固定，加结晶紫溶液，染5秒水洗，用滤纸吸干水份；B、加碘液染5秒，水洗，用滤纸吸干水份；C、加脱色剂不断摇动，至无紫色脱落为止20秒，水洗；D、加复染液染5秒，水洗，干后镜检，便得菌体呈紫色为革兰氏阳性菌，呈红色为革兰氏阴性菌。
全文摘要
本发明公开了一种快速革兰氏染色液及方法，它由以下原料制配，结晶紫溶液由结晶紫、无水乙醇、丙二醇甲醚、草酸铵、蒸馏水构成；碘液由碘化钾、碘、氯化钠、蒸馏水组成；脱色剂为丙酮和乙醇；复染液由碱性品红、无水乙醇、石碳酸、吐温、蒸馏水组成。其方法是首先涂片经火焰固定，加结晶紫，水洗，吸干水份；其次是加碘液，水洗，吸干水份；再次是加脱色液不断摇动，至无紫色脱落，水洗；然后加复染液染，水洗，干后镜检。本发明易配制，不变质，保存时间长，操作方便，快速、准确检测细菌，尤其适合在农村和基层卫生单位。
文档编号C12Q1/04GK1392266SQ0111429
公开日2003年1月22日 申请日期2001年6月19日 优先权日2001年6月19日
发明者张华 申请人:张华