专利名称：海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及几丁质的一种应用与活性物质发酵促进剂，尤其是将几丁质作为用于海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵的一种促进剂。
背景技术：
小单孢菌(Micromonospora)是放线菌中的一个稀有属，产生了多种重要的抗生素，如庆大霉素、球红霉素和新霉素等。生活于海洋环境中的小单孢菌通常统称为海洋小单孢菌。它们不同于陆生的小单孢菌，例如其生长通常要求有NaCl的存在。近年来，对海洋小单孢菌生理活性物质的研究受到人们的广泛注意。
戴桂馥等(郑州大学学报，1996，31(2)65-69)报道了葡萄糖和青霉素能够促进绛红小单孢菌提高抗生素产量，但仅限于该属的一个种，且与本发明的促进剂不同。洪文荣(中国药科大学学报，2003，4(5)469-472)推荐了淀粉、玉米粉、葡萄糖和蛋白胨组成的配方有利于伊尼奥小单孢提高发酵产量。Ju Chu等(Process Biochemistry，2004，391145-1150)、Takenaka.S.等(FEMS Microbiology Letters，1998，16795-100)和Lazzarini.A.等(Antonievan Leeuwenhoek，2000，78399-405)分别报道了Mg+、Na+离子、硫酸酯、酮戊二酸、生物素等对某些小单孢菌抗生素发酵的促进作用。申请号为95107909.3的发明专利申请公开了用几丁质作为一种微生物的发酵培养基，但目的在于制备不同分子量的聚氨基糖。申请号为94100947.5和02103056.1的发明专利申请公开了利用几丁质作为培养基，用于提高苏云金杆菌和淡紫拟青霉的杀虫效果。
发明内容
本发明旨在提供一种可高效地提高抗菌效价和产量的海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂。
本发明的技术方案是将几丁质作为海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵的一种促进剂。
在胶体几丁质中以水作为溶剂，配成海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂。所说的液体几丁质的含量为促进剂总质量的0.2％～3.5％，余为溶剂。所说的溶剂为25％～100％的海水，余为淡水。
在实用中，在胶体几丁质中以水作为溶剂，配成海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂。再以海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂为溶剂，加入海洋小单孢菌发酵培养基(如淀粉培养基、查氏培养基、玉米粉培养基)的各种成分，搅匀，灭菌。以上述发酵培养基培养发酵分离自海洋并具有抗菌活性的海洋小单孢菌，即可提高抗菌活性100％～400％。
本发明不同于以往小单孢菌抗菌活性物质发酵的促进技术，其区别在于利用胶体几丁质为主要成分，制备成海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵生产的一种促进剂，在常规的海洋小单孢菌发酵生产培养基中加入本促进剂，即可高效地提高抗菌效价，具有较高的经济价值。
虽然刘志恒(放线菌现代生物学与生物技术，北京科学出版社，2003)报道了几丁质可作为放线菌分离的选择培养基，但并未涉及几丁质作为抗菌活性的促进剂，也未涉及几丁质在抗生素发酵生产中的应用；戴桂馥等(郑州大学学报，1996，31(2)65-69)报道了葡萄糖和青霉素能够促进绛红小单孢菌提高抗生素产量，但仅限于该属的一个种且与本发明的促进剂不同；洪文荣(中国药科大学学报，2003，4(5)469-472)推荐了淀粉、玉米粉、葡萄糖和蛋白胨组成的配方有利于伊尼奥小单孢提高发酵产量；Ju Chu等(ProcessBiochemistry，2004，391145-1150)、Takenaka.S.等(FEMS Microbiology Letters，1998，16795-100)和Lazzarim.A.等(Antonie van Leeuwenhoek，2000，78399-405)分别报道了Mg+、Na+离子、硫酸酯、酮戊二酸、生物素等对某些小单孢菌抗生素发酵的促进作用，但均无涉及到海洋小单孢菌，同时与本发明的抗菌活性促进剂不同。
以下给出添加本发明所说促进剂与未添加促进剂抗菌活性的比较。
对分离自厦门海区、泉州湾的35株具有抗菌活性的海洋小单孢菌，以本发明的促进剂为溶剂，配制高氏一号、查氏培养基、玉米粉培养基进行发酵实验，发酵液以纸片法为抗菌测定方法，以枯草芽孢杆菌和白色念珠菌为指示菌，32株菌株(97％以上)的抗菌活性提高了100％～400％，表1列出10株菌株发酵液的抗菌活性测定结果。实验结果显示，本发明的抗菌活性物质促进剂对分离自海洋、同时具有抗菌活性的小单孢菌具有普遍性，可有效地提高抗菌活性物质的发酵水平。
表1添加本发明所说促进剂与未添加促进剂的抗菌活性比较
注1、B为枯草芽孢杆菌；A为白色念珠菌。
2、抗菌活性纸片直径5mm，试验24小时后测定抑菌圈大小。
3、G、C、M分别为常规的高氏一号培养基、查氏培养基、玉米粉培养基；G+CH、C+CH、M+CH分别表示上述培养基添加胶体几丁质促进剂。
具体实施例方式
以下实施例将对本发明作进一步的说明。
实施例1将几丁质粉碎，过60目筛，制成细粉几丁质，在1.0g细粉几丁质中加入8mL浓度为85％的磷酸溶液，于4℃间隔搅拌20小时后，倒入100mL蒸馏水中，反复离心沉淀洗涤至中性，制成胶体几丁质。取上述胶体几丁质0.2g，以25％海水和自来水为溶剂，配制成含0.2％几丁质的海洋小单孢抗菌活性物质促进剂。以上述海洋小单孢抗菌活性促进剂为溶剂，加入常用的各种海洋小单孢发酵的高氏一号培养基(具体配方可溶性淀粉2％，KNO30.1％，NaCl 0.05％，K2HPO40.05％，MgSO40.05％，FeSO40.001％，本促进剂97.7％)，搅匀，121℃灭菌20分钟。以上述发酵培养基培养发酵，接种具有抗菌活性的海洋小单孢菌，按常规方法进行发酵。
实施例2将几丁质粉碎，过80目筛，制成细粉几丁质，在1.0g细粉几丁质中加入7mL浓度为80％的磷酸溶液，于5℃间隔搅拌18小时后，倒入80mL蒸馏水中，反复离心沉淀洗涤至中性，制成胶体几丁质。取上述胶体几丁质3.5g，以100％海水为溶剂，配制成含3.5％几丁质的海洋小单孢抗菌活性物质促进剂。以上述海洋小单孢抗菌活性促进剂为溶剂，加入常用的海洋小单孢发酵的查氏培养基(具体配方蔗糖3％，NaNO30.1％，KCl 0.05％，K2HPO40.1％，MgSO40.05％，FeSO40.001％，本促进剂96.8％)，搅匀，121℃灭菌30分钟。以上述发酵培养基接种具有抗菌活性的海洋小单孢菌，按常规方法进行发酵。
实施例3将几丁质粉碎，过70目筛，制成细粉几丁质，在1.0g细粉几丁质中加入9mL浓度为82％的磷酸溶液，于3℃间隔搅拌24小时后，倒入90mL蒸馏水中，反复离心沉淀洗涤至中性，制成胶体几丁质。取上述胶体几丁质2.0g，以50％海水和自来水为溶剂，配制成含2.0％几丁质的海洋小单孢抗菌活性物质促进剂。以上述海洋小单孢抗菌活性促进剂为溶剂，加入常用的海洋小单孢发酵的玉米粉培养基(具体配方玉米粉3％，蛋白胨0.5％，葡萄糖1％，酵母膏0.2％，本促进剂95.3％)，搅匀，121℃灭菌30分钟。以上述发酵培养基培养发酵，接种具有抗菌活性的海洋小单孢菌，按常规方法进行发酵。
权利要求
1.几丁质作为海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂。
2.如权利要求1所述的海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂，其特征在于在胶体几丁质中以水作为溶剂，配成海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂。
3.如权利要求2所述的海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂，其特征在于所说的液体几丁质的含量为促进剂总质量的0.2％～3.5％，余为溶剂。
4.如权利要求2或3所述的海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂，其特征在于所说的溶剂为25％～100％的海水，余为淡水。
全文摘要
海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵促进剂，涉及几丁质的一种应用与活性物质发酵促进剂，尤其是将几丁质作为用于海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵的一种促进剂。在胶体几丁质中以水作为溶剂。利用胶体几丁质为主要成分，制备成海洋小单孢菌抗菌活性物质发酵生产的一种促进剂，在常规的海洋小单孢菌发酵生产培养基中加入本促进剂，即可高效地提高抗菌效价，具有较高的经济价值。
文档编号C12N1/20GK1587381SQ20041007504
公开日2005年3月2日 申请日期2004年8月25日 优先权日2004年8月25日
发明者黄耀坚, 胡志钰, 郑忠辉, 徐庆妍, 宋思杨, 苏文金 申请人:厦门大学