专利名称：真菌麦角菌(Fr.)Tul.的工业生产菌株的制作方法
真菌麦角菌(Fr.) Tul.的工业生产菌株发明领域
本发明涉及生产生物碱的麦角菌(C/owce， ，^wrea)菌株。更具 体地说，涉及麦角菌(C/owce^戶，^^ (Fr.)菌株Tul.，该菌株在寄生生长 于谷物时生产高含量的总麦角肽生物碱并且P -麦角环肽的含量高于a -麦角环 肽的含量。发明背景
麦角肽生物碱(Ergot peptide alkaloids)又名麦角肽石咸，是用来生产 药物的天然产品。麦角肽碱(ergopeptines)的大类包括一组对治疗有用的称为 麦角环月太(ergokiyptines)的化合物。麦角环肽包括两禾中同分异构体a-麦角环 肽和P-麦角环肽，两者都用于药用制剂。a-麦角环肽的结构最初是Stoll和 Ho&iann描述的(Helv. Chim. Acta 26， 1570， 1943)。 麦角环肽的结构最初 是Schlientz等人描述的(Expenentia23， 991， 1967)。a -麦角环肽P -麦角环肽
麦角环肽是重要的药物材料。在药物中，通常与其他活性物质齢 用于剂型的P -麦角环肽和a -麦角环肽，往往以氢化形式作为甲磺酸双氢麦角毒 碱(codergocnne) (DH-麦角柯宁碱、DH-ergoknstine、 DH-a-麦角环肤禾口 DH-|3-麦角环肽的甲磺酸盐混合物-参见英国药典2004， I巻，第534-535页)的组 分。a画和P-二氢麦角环肽或者12'陽羟基-2'画(l匿甲基乙基)隱5'-a"画(2-甲基丙 基)-9，10-二氢-麦角它曼(ergotaman) -3'，6',18-三酮是已知的化合物，衍生于天 然生物碱a-或P-麦角环肽的9,10位双键的氢化作用。麦角环肽也可以用作生 产半合成的生物碱衍生物(例如尼麦角林(nicergoline)、培高利特(pergolide) 禾口卡麦角林(cabergoline))的起始丰才料。由分离于麦角菌C7awce/w/7M^7wm2) 新菌株菌核(sderotia)的生物碱制备的具有这些活性物质的药物具有广谱作用 并且可用作a-交殿申经阻Y带药、多巴胺能药、抗血清素药、催乳素抑制剂、抗 偏头疼药(antimigraine agents)、抗高血压药，以及用于外周代谢和脉管紊乱的 治疗，诸如血栓闭塞性脉管炎、脑血管动脉硬化、老年脑病及本领域技术人员 已知的其他疾病。
P -麦角环肽和a -麦角环肽可分离于寄生生长于田间作物黑麦或其 他谷^li:的真菌麦角菌(Fr.) Tul.形成的菌核(sderotm)。保藏于捷克微生物保 藏中心(CCM)编号为CCMF-721的专有菌株在生长于黑麦上时，形成具有相 对生物质干重的总生物碱平均含量为0.56 wt。/。的菌核。该菌株通常用来生产P -麦角环月太禾B a -麦角环肽(如CS 225 272 "New industrial strain of microorganism Qaviceps purpurea ( Fr. ) Tul. , CCM F-721" ( "Nov^ prCimyslov^ kmen mikroorganismuC7av,ce/2s'/7wpwa7 (Fr.) Tul. CCM F-721")中的描述一仅仅在捷克公开)。由CCM F-721生产的a-麦角环肽对p麦角环肽的比率是1.15:1。然 而，几种已知的其他麦角菌菌株生产更高量的a-麦角环肽或者仅生产a形。商 业的药物制剂中a -麦角环S树P -麦角环肽的 比率是2:1 。因此，在其制备 中的常规操作是将P -生产菌株的发酵产品和a -生产菌株的发酵产品结合在一 起。4顿可生产相对更高量P型的菌株是有益的，因为为了达到a-和P-麦角环 肽的优选比剩每需要更少的菌株。
因此，本发明的第一个方面是提供麦角菌C/m^'e戸戶r戶reaXFr.) 菌株Td.或其突变体菌株，该菌株在寄生生长于谷物时，生产P-麦角环肽的量发明和M高于a -麦角环肽的量，即P -麦角环肽对a -麦角环肽的重量比大于1:1 。另一个 方面，本发明提供麦角菌(Oawce戸戸，^^(Fr.)菌株Tul.或其突变体菌株， 其相对于CCMF隱721生产含有较高含量麦角肽生物碱(ergot peptide alkaloids) 的菌核。另一个方面，本发明提供麦角菌(Ctowce戸；7^wed (Fr.)菌株Tul. (保藏号CCM8360)或其突变体菌株，该菌株寄生生长于谷物时，生产含有P -麦角环肽和a -麦角环肽生物碱的菌核。本发明也提供生产a -麦角环肽和3 -麦 角环肽生物碱的方法，该方法包括培养所述的麦角菌菌株。也提供制备具有这 些性质的CCM F-721或者CCM 8360突变体的方法。 发明详述
惊奇地发现，在麦角菌的新菌株(保藏号CCM 8360)中，麦角肽 生物碱的含量增加并且a -麦角环肽对^ -麦角环肽的比率在利于e -麦角环肽的 方向发生改变，该新菌株Mil菌株CCM F-721突变和筛选方法获得。
除非另外定义，本文使用的技斜诉斗学术语具有本发明相关领域技 术人员常规知晓的含义。本领域技术人员可在实行本发明时利用已知的任何适 当禾才料或者方法。
如本文使用的，"菌株"表示基于遗传背景的具有相同表型和基因型 特征的一群细胞、真菌组织和丝体。
如本文使用的，"菌核(sclerotium)"表示寄生的C/,ce戸真菌生 活周期的一个阶段。菌核在C/awceAv孢子侵染子房后发育(参见Tenberge， K. B.(1999 ): Biology and Life Strategy of the Ergot Fungi ， V Kf en和L. Cvak编辑 ERGOT. The Genus C/顯.c， Harwood Acad. Publ.，第25-56页)。
如本文使用的，"寄生生长"表示麦角菌生活周期的一部分，它以孢子侵染谷物子房为起点，然后发育和生长菌核并以形成具有最大麦角生物碱含量的成熟菌核为终点(参见N6meth， E (1999): Parasitic Production of Ergot Alkaloids. V. Kfen和L. Cvak编辑ERGOT. The Genus aowce戸.Harwood Acad. Publ.，第303-320页)。
如本文使用的，"腐生生长"表示麦角菌属真菌(Clavicepsfiingus) 在人工条件下的生长，在本发明的上下文它指真菌菌丝生长和分生孢子生成(参 见Malinka, Z. (1999 ): Saprophytic cultivation of Claviceps. V Kfen禾口 L. Cvak编 辑ERGOT. The Genus Claviceps. Hanvood Acad. Publ.，第321 -371页)。
如本文使用的，"分生孢子"表示各种真菌的无性孢子。在本发明的上下文它是可用于侵染谷物谷穗子房的麦角菌的无性孢子(参见N6meth， R (1999): Parasitic Production of ErgotAlkaloids. V Kfen和L. Cvak编辑ERGOT. The Genus Claviceps. Harwood Acad. Publ.，第303-320页及Pa^outov6， S.和 Parbery ， D. P. (1999): The Taxonomy and Phylogeny of Claviceps. V Kf en禾卩L. Cvak 编辑ERGOT. The Genus Claviceps. Harwood Acad Publ.，第57-78页)。
对于麦角肽生物碱的大规模田地产物，可利用具有开放花序花的谷类或者禾本科植物。它们的4OT使得麦角侵染可以传播。主要利用黑麦物种，，没有可育花粉的cms(细胞质雄性不育)黑麦或者其他品种。(参见N6meth， E.(1999): Parasitic Production of Ergot Alkaloids. V Kfen和L. Cvak编辑:ERGOT. The Genus Claviceps. Harwood Acad. Publ.，第303-320页及Geiger， H.H.和 Bausback ， G A. (1979 ) Untersuchimgen ueber die Eignung pollensterilen Roggens zur parasitischen Mutterkomerzeugung. Z. Pflanzenzuechtg. ， 83 ， 163-175 )。
如本文使用的，"干重(drymass)"表示10(TC干燥2小时后得到的 菌核质量。
本发明提供麦角菌(C/ov/ce戸戶vw化a, (Fr.)菌株Tul.，该菌株在 寄生生长于谷物例如黑麦时，生产含有P -麦角环肽和a -麦角环肽生物碱的菌 核。认为该菌株是非天然存在的。
本发明也提供麦角菌(C/awce戸，r戸^^ (Fr.)菌株Tul.或其突变 体菌株，该菌株在寄生生长于谷物时，生产含有P-麦角环肽和a-麦角环肽生物 碱的菌核。与起始菌株CCM F-721相比，P-麦角环肽和a-麦角环肽生物碱的 含量高。所述菌株生产比a -麦角环肽更多的P -麦角环肽(即，重量比率大于1 )。
本发明进一步提供麦角菌C/m^取v戶^w陀W (Fr.)菌株Tul.(保 藏号CCM8360)，该菌株在寄生生长于谷物时，相对于CCMF-721生产含有相 对高含量麦角肽生物碱的菌核及重量比大于1:1的P -麦角环肽和a -麦角环肽生 物碱。也提供制备具有这些性质的CCMF-721或者CCM 8360突变体的方法。
根据布达佩斯条约将菌株CCM 8360样本保藏于捷克共和国 Tvrd6ho14， Bmo马萨里克大学的国际保藏单位捷克微生物保藏中心(CCM)。 该菌株在寄生生长于谷物时，生产含有麦角肽生物碱尤其是P -麦角环肽和a -麦角环肽的菌核。合适的谷类的典型实例是黑麦或黑小麦(tnticale)。
—般地，"高"表示存在于生产菌株的麦角菌核中的麦角肽生物碱的量并且表明该生产菌株中的水平大于亲本菌株(CCMF-721)。
通过菌株CCM 8360生产的菌核中麦角肽生物碱的含量范围是总麦 角肽生物MM量占生物质干重的0.6-1.92 wt%。通常，总麦角肽生物碱的含量范 围是总麦角肽生物碱为生物质干重的0.94-1.58 wt%，平均含量是1.38 wt%。如 本文使用的，"wt%"表示麦角环肽的重量除以生物质干重再乘以100。除非另 有说明。/o值表示wt。/。值。申请人已发现菌株CCMF-721生产总麦角肽生物fet 生物质干重平均含量为0.56 wty。的菌核。该菌株通常用来生产a -麦角环肽和P -麦角环肽。a-麦角环月树e-麦角环肽的比率是U5:l。
菌核中麦角肽生物碱的含量范围为3743%的01-麦角环肽、47-58% 的P-麦角环肽及5-10%的麦角柯宁碱(ergocomine)，平均比例为41%的"麦 角环肽、52%的P -麦角环肽及7%的麦角柯宁碱。
a-麦角环狀对3-麦角环肽的比率范围为0.63:l到0.91:1，平均含量 为0.79:1。这意瞎当考虑a-麦角环肽对P-麦角环肽的比率时，CCM 8360菌 株生产多于50wt。/。的3 -生物碱。
3-麦角环肽和a-麦角环肽的含量大于总生物碱含量的90wt%，通 常P -麦角环肽和a -麦角环肽为总生物碱含量的90-96wt%。
菌核中高含量的麦角肽生物碱使生物碱的提取和提纯更高效。提取 可利用描述于Cvak， L. (1999): Industrial Production of Ergot Alkaloids. V Kf en 和L. Cvak编辑ERGOT. The Genus Claviceps. Harwood Acad. Publ.第373410 页的甲苯提取方法和进一步的纯化步骤。也可以利用描述在WO/2005082910中 的方法实现从高生物碱含量的菌核中分离生物碱。这些生物碱可用于药物生产， 例如Secatoxin、 DCCK、 Derginal、 D-Ergotox、 Progenl、 Geroplus、 Zodalin、 Permax、 Nikotergoline、 Sermion、 Dopergin、 Parlodel、 Ergotop及Dostinex。
本发明的菌株可容易地生长(如实施例l描述的)，并且当与常规麦 角肽生物碱的生产菌株相比时，不需任何补充技术条件即可收获所形成的菌核。 这些方法可放大。
本发明的菌株允许
段中描述的现有提取和分离方法用于生产 a和e-麦角环肽。也可更有效地提取半合成的衍生物并且显著增加回收率。菌 核中更高含量的a和P -麦角环肽使得提取时可获得更高的产量。
当与亲本菌株CCM F-721相比时，由于菌核中高含量的a-麦角环 肽禾口 P -麦角环肽可实现增加的回收率。为了生产1公斤a和P -麦角环J级麦角 柯宁碱的粗提物，需要CCMF-721菌株的250公斤菌核。如果使用本发明的菌 株仅仅需要100-150公斤的菌核。
在农田规模培养中，当4細麦角培养的当前农业方法时，产量范围 为700 kg/ha到2200 kg/ha，平均产量为1000 kg/ha。实施例实施例1菌株CCM 8360的生长特性 處姓长
在琼脂-稠化的麦芽汁培养基(35 g麦，取物、5 g蛋白胨、13 g 琼脂、1000 ml水)中腐生生长时，麦角菌(Dowce;^/7^pM/raJ (Fr.)菌株Tul. CCM8360形成腐败的空心菌丝体的集落。该菌丝体最初是白色而光滑的，但在 培养约27天后，菌丝体变成淡米色并且起铍。该菌丝体由分枝的菌丝和分生 包 子组成，分生孢子是椭圆形并约8微米长5微米宽。教主长
在寄生生长于黑麦时，该真菌产生深紫色、有颜色的平均重量为33 mg的菌核。单个菌核含有生物质干重的0.6-1.92 wt。/。量的麦角生物碱。总生物 碱平均含量的范围为0.94-1.58 wt%，通常为1.38wt。/。，其中总生物碱的47%-58 wt。/。是P-麦角环月太。农娜微长
从所需量的菌株CCM 8360的可储存干麦角接种制剂制备分生孢子 的水悬浮液(参见CS 276 530 "Process for production of the storable preparations with the high content of living spores of filamentous fungi" ("Zpfisob \^roby skladovatelnfch pfipravkfi s vysok^m obsahem 2iv^ch sp6r vMkn妙ch hub")-仅仅在 捷克公开)。其他类型的接种制剂公开在CS 243 009 "Process of fermentation production of the ergot inoculating preparation" (Zpiisob fermenta6ni p饰ravy n^melov6 o汰ovaci Mtky")-仅仅在捷克公开；EvaN6meth， E. (1999): Parasitic Production of Ergot Alkaloids. V Kfen禾卩L. Cvak编车葺ERGOT. The Genus Claviceps.HarwoodAcad.Publ.第303-320页；及Malinka， Z. (1999): Saprophyticcultivation of Qaviceps V Kfen禾口 L. Cvak编车葺ERGOT. The Genus Qaviceps. Harwood Acad. Publ.第321-371页。通常使用如N6meth， K (1999): Parasitic Production of Ergot Alkaloids. V Kfen禾口 L. Cvak编辑ERGOT. The Genus Claviceps. Harwood Acad. Publ.第303-320页描述的接种机，在生长的抽穗阶段 (heading phase)对不育黑麦(cms)品种Hyclaro穗接种该分生孢T^浮液， 以便每公顷使用3.2x10"的有发育力的分生孢子。
在黑麦成熟时(穗变干)，当接种后约55天菌核开始从其床脱落时， ^ffl联合收割^几收获菌核。总收获量1094 kg^ia的深紫色菌核在干生物质菌核 中平均含有1.38 wtn/。的总生物碱，总生物碱的93 wty。是P -麦角环肽和a -麦角 环肽并且总生物碱的58%是|5 -麦角环欣。
如
段中的描述提取所获得的菌核，所获得的提取物用来生产 肽类麦角生物碱或麦角毒碱(ergotoxine)和/鋼来生产半合成的生物碱，供如 Cvak， L.: Industrial Production of Ergot Alkaloids. V Kfen和L. Cvak编辑ERGOT. The Genus Claviceps. Harwood Acad. Publ. 1999第373-410页描述的不同剂型药 物生产之用。实施例2突变和筛选(或者分离)方法
从专有菌株F-721培育新的工业生产微生物麦角菌(T/ov/ce戸 (Fr.)菌株Tul.CCM8360。该菌株的菌核转入腐生培养一菌核表面杀 菌并移到琼脂稠化的麦芽汁培养基。在25'C温度下28天后，分生孢子的生物质 (biomass)覆盖琼脂表面。对生物质利用0.2MN-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍溶 液突变8小时。禾拥注射器在黑麦上接种突变的分离物，并对生长的菌核进行 麦角生物碱含量的定性和定量分析。具有最高含量的菌核再一次转入腐生培养， 利用0.2M乙基甲烷磺酸酯处理16小时使其发生突变。禾拥注射驗黑麦上接 种如此获得的突变分离物，并分析生长的菌核。在小块土地规模(small-plot scale, 约lm2)试验中在黑麦上使具有最高含量的菌核传代。将这些菌株的菌核转入 腐生培养，处于辐射剂量为3000 Gy的y射线条件下。利用注射器在黑麦上接 种辐射的分离物，并对生长的菌核进行麦角生物碱含量的定性和定量分析。在 中等规模(pilot-scale,约lha)逸验中在黑麦上使具有最高含量的菌核传代。将 从这些地块收获的最高含量的菌核转入腐生培养，并保藏于捷克共和国Tvrd6ho14， Brno马萨里克大学的捷克微生物保藏中心(CCM)，保藏编号CCM 8360。 与起始菌株CCMF-721相比，结合附性筛选的，突变方法导致CCM8360菌 株菌核中麦角生物碱的平均含量增加为146 wt%。同时，ilil朝利于所希望的 P-麦角环肽的方向改变a-麦角环月树e-麦角环肽的比率从U5:l到0.79:1而改善各生物碱的谱质量。
然后利用注射器在黑麦上接种突变的分离物。在菌核已发生生长后， 对菌核进行麦角生物碱含量的定性和定量分析。可通过高效液相色谱(HPLC) (柱HypersilODSC18， 250x4.6mm，流动相49.5%乙腈、49.5%水、1%三 乙胺)，或者通过如欧洲药典5.0， 2004，第1347-1348页描述的液相色谱测定生 物碱含量。将具有最高含量麦角生物碱的菌核转入腐生培养。菌核表面杀菌并 移到琼脂稠化的麦芽汁培养基。在25匸温度下培养28天后，分生孢子的生物质 覆盖琼脂表面。利用0.2M乙基甲烷磺酸酯处理16小时使分生孢子发生突变。
随后禾,注射器在黑麦上接种突变分离物，并分析所获得的菌核。 在小块土地规模(约lm2)试验中在黑麦上使具有最高麦角生物碱含量的菌核 传代。将这些菌株的菌核转入腐生培养并处于辐射剂量为3000 Gy的Y射线条 件下。利用注射器在黑麦上接种辐射后的分离物，然后如
段的描,所获 得的菌核进行麦角生物碱含量的定性和定量分析。
在中等规模(约lha)试验中在黑麦上使具有最高含量的菌核传代。 收获具有最高含量的菌核并转入腐生培养。该新菌株目前保藏于捷克共和国 Tvrd6ho 14， Bmo马萨里克大学的捷克tt生物保藏中心(CCM),保藏编号CCM 8360。
与祖先菌株CCM F-721相比，结合阳性筛选的i^突变方法导致 CCM8360菌株菌核中麦角生物碱的平均含量增加为146wtQ/。。同时，通过向利 于更希望的P -麦角环肽的方向增加a -麦角环肽对P -麦角环肽的比率从1.15:1 到0.79:1而使a -和0 -麦角肽生物碱的生产惊人地改善。
可对CCM F-721或CCM 8360应用相同的诱变流程，随后选择那些 生产麦角肽生物碱含量高于CCM F-721并且生产的P-麦角环肽高于a-麦角环 肽的突变株。因此，本发明的此方面涉及一禾中生产CCM F-721和CCM 8360突 变体并选择或者鉴定那些比CCM F-721生产更高含量麦角肽生物碱且e-麦角 环肽的量高于a-麦角环肽的突变体的方法。该方法需要诱变CCM F-721或者CCM 8360，随后分析突变体以确定其是否比CCM F-721生产更多含量的麦角 肽生物碱，并且卜麦角环肽的量高于a-麦角环肽。如该实施例说明的，通常通 过在适当的条件下与包含化学诱变齐啲培养基接触或在该i咅养基中培养CCM F-721或CCM 8360禾口/或将真菌暴露于方鄉线进fiH秀变。
在一些实施方案中，该方法需要CCM F-721或CCM 8360的至少一 裕秀变，其中对来自前一轮的生产麦角肽生物碱含量高于CCM F-721且P -麦角 环肽的量高于a-麦角环肽的菌核实施追加轮次的诱变。因此，在一些实施方案 中，该方法需要诱变CCM F-721或CCM 8360，例如通过将菌株的菌核转移到 腐生培养；菌核表面杀菌并转移该杀菌的部分到适当的(例如琼脂-稠化麦芽) 培养基；在适当的时间和温度条件下培养该菌核(例如在25'C温度下培养28 天)；将表面覆盖有分生 包子生物质的培养基处于化学诱变处理剂溶液中(例如 0.2 M N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍)适当的时间(例如8小时)以形成CCM F-721 或CCM 8360突变体；在谷物诸如黑麦上处理(例如接种)该突变体；并对由 此生长的菌核麦角生物碱的含量进行定性和定量分析；筛选具有最高含量麦角 肽生物碱的菌核，并将该筛选的菌核转移到存在化学诱变剂(例如0.2M乙基甲 烷磺酸酯)的腐生培养培养适当的时间(诸如16小时)，以产生CCMF-721或 CCM 8360的进一步突变体；将该突变tt谷物诸如黑麦上处理，并筛选由此生 长的菌核间具有最高麦角肽生物碱含量的菌核；转移该菌核到腐生培养并将该 培养物暴露于方妇寸线(例如剂量为3000Gy的Y射线)；在谷物诸如黑麦上处理 (例如接种)辐射分离物，并对由此生长的菌核进行麦角生物碱含量的定性和 定量分析。 实施例3由a-麦角环肽和P-麦角环肽生产尼麦角林(mcergoline)、培高利特 (pergolide)禾口卡麦角林(cabergoline)
本领域技术人员熟知由麦角环肽生物碱到半合成的生物碱衍生物诸 如尼麦角林(nicergoline)、培高利特(pergolide)和卡麦角林(cabergoline)的 转换。首先，麦角环S太生物碱转换为麦角酸(lysergic acid) (Jacobs, W.A.和Craig， L.C.: The degradation ergotinine with alkali. Lysergic acid. J. biol. Chem. 104， 547-551 (1934))。然后，麦角酉細于制备半合成的麦角生物碱，根据EP0003667 公开的方法制备培高利特，根据CZ 287047公开的方法制备尼麦角林及根据CZ287176公开的方法制备卡麦角林。Cvak， L. (1999): Industrial Production of Ergot Alkaloids. V Kfen禾口 L. Cvak编车茸ERGOT. The Genus Claviceps. Harwood Acad. Publ.，第373410页提供了由麦角环肽制备麦角酸和由麦角酸制备半合成的麦 角生物碱的综述。
说明书中弓阅的全部出版物，包括专利出版物和非专利出版物都表 明本发明所属技术领域技术人员的技术水平。未舰弓l用而加入的任何出版物 此 1引用而加入，达到如同每个个体出版物是具体地个别;bH31弓阅而加 入的相同程度。
尽管本发明己参考具体实施方案进行了描述，将理解这些实施方案 仅仅是本发明原理和应用的说明。因此应理解，可对作例证的实施方案进行很 多修改并且正如附加权利要求所定义的其他可能的设计方案在不脱离本发明的 精神和范围的情况下可被设计出来。
权利要求
1.麦角菌(Clavicepspurpurea)(Fr.)菌株Tul.，该菌株在寄生生长于谷物时生产β-麦角环肽的含量高于α-麦角环肽的含量。
2. 权利要求1的菌株，其中谷物是黑麦的常规品种。
3. 权利要求1或2的菌株，其中黑麦的常规品种是细胞质雄性不育黑麦品种。
4. 权利要求1-3任一项的菌株，其中菌核干重中总生物碱的含量是干重的 0.60-1.92 wt%。
5. 权禾腰求l-4任一项的菌株，其中干重中总生物碱的含量是1.38wty。。
6. 权利要求1-5任一项的菌株，其中菌核中麦角肽生物碱的含量范围为 37-43 wt。/。的a -麦角环肽、47-58 wt。/。的P -麦角环肽和5-10 wt。/。的麦角柯宁碱。
7. 权利要求l-6任一项的菌株，其中菌核中麦角肽生物碱的含量是41wt13/。 的a -麦角环肽、52 wt。/。的3 -麦角环肽和7 wt。/。的麦角柯宁碱。
8. 权利要求1-7任一项的菌株，其中e-麦角环B树a-麦角环肽的比率范 围为0.63:1到0.91:1。
9. 权利要求1-8任一项的菌株，其中卜麦角环月树ci-麦角环肽的比率是 0.79:1。
10. 权利要求l-9任一项的菌株，其中菌核中P-麦角环肽和a-麦角环肽的 含量大于总麦角肽生物碱含量的90%。
11. 权利要求1-10任一项的菌株，其中菌核中P -麦角环肽和a -麦角环肽的 含量是总麦角肽生物碱含量的90%-96%。
12. 权利要求1-11任一项的菌株，其中菌核干重的产量范围为700-2200 kg/ 公顷。
13. 权利要求1-12的菌株，相对于CCMF-721生产含有高含量麦角肽生物 碱的菌核。
14. 权利要求1-13任一项的菌株，具有保藏编号CCM8360。
15. 麦角菌(O謂ce戸戶r戸rra, (Fr.)菌株Tul.，已根据布达佩斯条约保 藏于捷克共和国Tvrd6ho 14， Bmo马萨里克大学的国际保藏单位捷克微生物保 藏中心(CCM)，保藏编号CCM8360。
16. 麦角菌Ctowce戸pwpwra, C ):)菌株Tul.，相对于CCMF-721生产 含有高含量麦角肽生物碱的菌核。
17. 衍生于CCMF-721菌株的麦角菌菌株，其具有的麦角肽生物碱的平均 含量高于存在于CCMF-721中的。
18. 权利要求15-17的麦角菌菌株，其中麦角肽生物碱的含量是0.6/0.56 wt。/。到1.92/0.56 wt%，高于CCM F-721 。
19. 权利要求18的麦角菌菌株，其中麦角肽生物碱的含量是0.94/0.56 wt% 到1.58/0.56 wt%，高于CCM F-721 。
20. 生产a誦麦角环肽禾口 P画麦角环肽生物碱的方法，包括培养根据任一项前 述丰又利要求的麦角菌菌株。
21. 权利要求20的方法，进一步包括将麦角环肽生物碱转换为半合成的生 物碱衍生物诸如a-二氢麦角环肽、P-dihydrokiyptine、尼麦角林、培高利特和 卡麦角林。
22. 权利要求20或21的方法，进一步包括将麦角环肽生物碱或半合成的 生物碱与药用赋形剂混合。
23. 生产CCM F-721突变体的方法，该突变体生产的麦角肽生物碱含量比 CCMF-721高，并且P-麦角环肽的含量比a-麦角环肽的含量高，该方、 跑括诱 变CCM F-721,从而产生CCM F-721突变体，并确定是否该突变体生产的麦角 生物碱含量高于CCM F-721 ，并且|3 -麦角环肽的量比a -麦角环肽的量高。
24. 权利要求23的方法，其中通过将CCMF-721与化学诱变剂接Mit行所 述诱变。
全文摘要
本发明公开的是真菌麦角菌(Claviceps purpurea)(Fr.)菌株Tul.，在寄生生长于谷物时，该菌株生产高含量的麦角肽生物碱并且β-麦角环肽的量高于α-麦角环肽的量。
文档编号C12N15/01GK101238208SQ200680029114
公开日2008年8月6日 申请日期2006年11月7日 优先权日2005年11月7日
发明者J·博哈克, J·瓦利克, T·科瓦罗瓦 申请人:伊瓦克斯制药有限公司