专利名称：胞二磷胆碱生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及化工产品的生产工艺，是一种将啤酒厂生产废弃的 酵母进行处理的胞二磷胆碱生产工艺。
背景技术：
现有的胞二磷胆碱生产工艺，产品的转化率和收得率低，生产 过程中废弃的酵母对环境造成很大的污染，酵母资源不能得到充分 利用，生产成本高。产品在生化反应后，发酵液不能有效地去除无 机盐等杂质，产品的纯度低。产品色泽及蛋白难以去除，产品的澄 清度不好，生产过程中存在杂菌污染问题。酒厂生产废弃的酵母的 菌种的活性低，从而使产品的转化率和收得率都很低，难以达到标 准要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种品转化率和收得率高，减少环境污 染，降低成本，提高产品纯度的胞二磷胆碱生产工艺。本发明的技术解决方案是 一种胞二磷胆碱生产工艺，其特征是首先进行投料在反应罐内加入水和葡萄糖，升温到4(K42"C 投入酵母，发酵后加入无机盐、磷酸胆碱，待升温后，投入胞苷酸 溶液，再继续升温到40±11>保温、反应，然后补加蔗糖，并每两小时补加一次，当转化率达8伊/ 以上时终止反应；升温到85t;,迅速用水冷却到室温，然后把反应液送压榨机压榨；压榨结束后用水顶 洗，将调节PH后所得清液送入纳嫫过滤器除盐；其次，碳柱上样压榨清液上碳柱，碳柱上样结束后，用纯水 冲洗碳柱，使碳柱流出液无CT;再用碱乙醇溶液将胞二磷胆碱钠 洗鋭下来，并在有紫外吸收物时开始收集；将洗脱液在薄膜真空浓縮罐中进行汽化浓缩；再其次是离子交换树脂分离将浓缩液用水稀释至浓度为2%， 上大孔离子交换树脂柱；上样结束后，水洗柱子；再用配好的 1MNaCl洗脱，并将洗鋭液浓缩到浓度75%;然后进行精制将收集到的胞二磷胆碱钠溶液加热至40度左右送至5000分子量超滤器除杂、脱色；再将騰色液用6000分子量超 滤器超滤，然后加入乙醇搅拌，并放置冷库过夜；再将结晶液进行 离心分离，再将湿品进行真空干燥，烘干后装袋称重密封干燥保存《本发明中所述的在投入酵母时，充分搅拌均匀，使其发酵3~5 小时再加入无机盐、磷酸胆碱，待温度升到30t时，投入胞苷酸溶
液，再继续升温到40i〗1C,保温计时。反应温度控制在40ii"C, 3 小时后取样送分析室瀏转化率，然后补加蔗糖，其添加量为投料时 的一半，以后，每两小时就需补加蔗糖一次，当转化率达80%以上 时即可终止反应，若低于70%可延长反应时间。压榨结束后用水顶 洗，直到流出液CDP《的浓度<10%时，停止收集。将压搾液调节 PH，再压榨处理，所得清液计量总体积，并取样溯定含量，计算总 含量。碳柱上样时，将调好PH的压榨清液上碳柱，4小时后适当降 低流速。冲洗碳柱，是用PH6.0的纯水，碳柱流出液是用1%的硝酸 银检查无C厂。洗鋭胞二磷胆碱钠，是用0力5N碱乙醇(25%乙醇)溶 液，流出液用玻片取样在紫外灯下观察，看到紫外吸收物便开始收 集。上样结束后，水洗柱子，检查无紫外吸收物流出时，流速可适 当加快。加入乙醇搅拌时，待白色沉淀析出后再继续搅拌2小时， 然后放置冷库过夜。本发明的有益效果为首先解决激活酵母细胞系，使磷酸胆碱 胞苷酰转移酶充分游离出来，提高产品的转化率和收得率，减少生 产过程中废弃的酵母对环境的污染，使醇母资源得到充分利用，生 产成本明显下降。解决产品在生化反应后，发酵液如何有效地去除 无机盐等杂质，提高产品的纯度。解决产品色泽及蛋白去除，提高 产品的澄清度，以及生产过程中的杂菌污染问题。酵母细胞中有较强的糖酵解能力及较高的磷酸胆碱胞苷酰转移酶。根据这一特性， 本发明将啤酒厂生产废弃的酵母通过补充碳源，培养，经二次发酵，添加适量的无机盐来激活酵母细胞中的磷酸胆碱胞苷酰转移 酶，催化合成胞二磷胆碱钠。采用此法，能使酵母菌种的活性提 高，从而产生较高的磷酸胆碱胞苷酰转移酶，使产品的转化率由 80%提高到90%以上，产品的收得率由100%提高到120%。采用超 滤技术，有效地去除蛋白，降低产品的色泽，有效地解决了生产过 程中的杂菌污染，使产品的纯度达到99%以上，并使澄清度和热源 均达到《中国药典》2005版标准要求。本发明充分利用酵母资源， 将生产胞二磷胆碱钠的酵母分离后，再生产酵母袖提物或维生素D2 的前体麦角甾干酵母，使生产成本下降至i500元/Kg,实现了清洁 生产，减少了环境污染，体现了循环经济价值。 以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明
具体实施例方式配料(以5，-跑苷酸为基数)- 5'-跑苷酸1Kg，啤酒酵母 30Kg,蔗糖3Kg,葡萄糖3Kg，水120Kg，磷酸胆緘5Kg。 实施例一 一、投料-
1、 在反应罐内加入自来水和葡萄糖，然后升温到411C,投入 酵母，充分搅拌均匀，使其发酵4小时再加入无机盐、磷酸胆碱， 待温度升到301C时，投入胞苷酸溶液，再缝续升温到401C,保温计 时。2、 反应温度控制在40t, 3小时后取样送分析室测转化率，然 后补加蔗糖，其添加量为投料时的一半，以后，每两小时就需补加 蔗糖一次，当转化率达80%以上时即可终止反应，若低于70%可延 长反应时间。3、 反应终了，升温到85t，迅速用水循环冷却到室温，然后 把反应液送压榨机压榨。4、 压榨结束后用水顶洗，直到流出液CDP《的浓度〈0%时， 停止收集。5、 将压榨液调节PH，再压榨处理，所得清液计量总体积，并 取样测定含量，计算总含量。6、 将上述清液送入纳膜过滤器除盐。二、 碳柱上样1、 将调好PH的压榨清液上碳柱，4小时后适当降低流速。2、 水洗碳柱碳柱上样结束后，用PH6.0的纯水冲洗碳柱，一直洗到碳柱流出液用1^的硝酸银检查无cr。3、 碳柱洗脱碳柱洗干净后，用0.05N碱乙醇(25%乙醇)溶液 将胞二磷胆碱钠洗脱下来，流出液用玻片取样在紫外灯下观察，看 到紫外吸收物便开始收集。三、 浓缩将洗鋭液在薄膜真空浓縮罐中进行汽化浓缩。四、 离子交换树脂分离1、 离子交换树脂上样将浓缩液用水稀释至浓度为2%,上大 孔离子交换树脂柱。2、 离子交换树脂水洗上样结束后,水洗柱子，检查无紫外吸 收物流出时，流速可适当加快。3、 离子交换树脂洗鋭用配好的l%NaC!洗鋭，洗脱完毕，计算收得率。4、 将洗脱液浓縮到浓度75%左右。五、 精制1、 鋭色将收集到的胞二磷胆碱钠溶液加热至40度左右送至5000分子量超滤器除杂、鋭色。2、 结晶将脱色液调PH，用6000分子量超滤器超滤，然后加 入乙醇搅拌，待白色沉淀析出后再继续搅拌2小时，然后放置冷库 过夜。3、 离心将结晶液进行离心分离，离心甩干。4、 干燥-将湿品放入不锈钢盘中，放入烘箱，真空干燥，烘干 后装袋称重密封干燥保存。实施例二一、 投料1、 在反应罐内加入自来水和葡萄耱，然后升温到401C,投入 酵母，充分搅拌均匀，使其发酵3小时再加入无机盐、磷酸胆碱， 待温度升到291C时，投入胞苷酸溶液，再继续升温到39t:，保温计 时。2、 反应温度控制在39C 2.5小时后取样送分析室测转化率， 然后补加蔗糖，其添加量为投料时的一半，以后，每两小时就需补 加蔗糖一次，当转化率达8伊/。以上时即可终止反应，若低于70%可 延长反应时间。3、 反应终了，升温到801C,迅速用水循环冷却到室温，然后 把反应液送压榨机压榨。4、 压榨结束后用水顼洗，直到流出液CDP《的浓度<10%时， 停止收集。5、 将压榨液调节PH，再压榨处理，所得清液计量总体积，并 取样漏定含量，计算总含量。6、 将上述清液送入纳嫫过滤器除盐。二、 碳柱上样1、 将调好PH的压榨清液上碳柱，3.5小时后适当降低流速。2、 水洗碳柱碳柱上样结束后，用PH6.0的纯水冲洗碳柱，一 直洗到碳柱流出液用1%的硝酸银检查无CT怨3、 碳柱洗脱碳柱洗干净后，用0.05N碱乙醇(25a/a乙斷溶液将胞二磷胆碱钠洗脱下来，流出液用玻片取样在紫外灯下观察，看 到紫外吸收物便开始收集。三、 浓缩将洗脱液在薄膜真空浓缩罐中进行汽化浓缩。 西、离子交换树脂分离1、 离子交换树脂上样将浓缩液用水稀释至浓度为1.8%，上 大孔离子交换树脂柱。2、 离子交换树脂水洗上样结束后，水洗柱子，检查无紫外吸收物流出时，流速可适当加快。3、 离子交换树脂洗鋭用配好的P/aNaa洗鋭，洗脱完毕，计算收得率。4、 将洗脱液浓縮到浓度70%左右。 五、精制
〗、鋭色将收集到的跑二磷胆碱钠溶液加热至38度左右送至5000分子量超滤器除杂、鋭色。2、 结晶将鋭色液调PH，用6000分子量超滤器超滤，然后加 入乙醇搅拌，待白色沉淀析出后再继续搅拌2小时，然后放置冷库过夜。3、 离心将结晶液进行离心分离，离心甩干》4、 干燥将湿品放入不锈钢盘中，放入烘箱，真空干燥，烘干 后装袋称重密封干燥保存。实施例三-一、 投料-1、 在反应罐内加入自来水和葡萄糖，然后升温到421C，投入 酵母，充分搅拌均匀，使其发酵5小时再加入无机盐、磷酸胆碱， 待温度升到3ir时，投入胞苷酸溶液，再继续升温到411C，保温计 时。2、 反应温度控制在411C， 3.5小时后取样送分析室測转化率， 然后补加蔗糖，其添加量为投料时誇一半，以后，每两小时就需补 加蔗糖一次，当转化率达80%以上时即可终止反应，若低于70%可 延长反应时间。3、 反应终了，升温到邻1C，迅速用水循环冷却到室温，然后 把反应液送压榨机压榨。4、 压榨结束后用水顶洗，直到流出液CDP《的浓度<10%时， 停止收集。5、 将压榨液调节PH,再压榨处理，所得清液计量总体积，并 取样漏定含量，计算总含量。6、 将上述清液送入纳膜过滤器除盐。二、 碟柱上样1、 将调好PH的压榨清液上碳柱，4.5小时后适当降低流速。2、 水洗碳柱碳柱上样结束后，用PH6.0的纯水冲洗碳柱，一 直洗到碳柱流出液用1%的硝酸银检査无a:3、 碳柱洗鋭碳柱洗干净后，用0.05N碱乙醇(25%乙斷溶液 将胞二磷胆碱钠洗脱下来，流出液用玻片取样在紫外灯下观察，看 到紫外吸收物便开始收集》三、 浓缩将洗脱液在薄膜真空浓縮罐中进行汽化浓缩^四、 离子交换树脂分离1、离子交换树脂上样将浓缩液用水稀释至浓度为2.2%,上 大孔离子交换树脂柱》2、 离子交换树脂水洗上样结束后，水洗柱子，检査无紫外吸 收物流出时，流速可适当加快。3、 离子交换树脂洗脱-用配好的P/eNaa洗鋭，洗脱完毕，计算收得率。4、 将洗鋭液浓缩到浓度80%左右。 五、精制1、 脱色将收集到的跑二磷胆碱钠溶液加热至42度左右送至5000分子量超滤器除杂、鋭色。2、 结晶将鋭色液调PH，用6000分子量超滤器超滤，然后加 入乙醇搅拌，待白色沉淀析出后再继续搅拌2.5小时，然后放置冷 库过夜。3、 离心将结晶液进行离心分离，离心甩干。4、 干燥将湿品放入不锈钢盘中，放入烘箱，真空干燥，烘干后装袋称重密封干燥保存。
权利要求
1、一种胞二磷胆碱生产工艺，其特征是首先进行投料在反应罐内加入水和葡萄糖，升温到40～42℃投入酵母，发酵后加入无机盐、磷酸胆碱，待升温后，投入胞苷酸溶液，再继续升温到40±1℃保温、反应，然后补加蔗糖，并每两小时补加一次，当转化率达80％以上时终止反应；升温到85℃，迅速用水冷却到室温，然后把反应液送压榨机压榨；压榨结束后用水预洗，将调节PH后所得清液送入纳膜过滤器除盐；其次，碳柱上样压榨清液上碳柱，碳柱上样结束后，用纯水冲洗碳柱，使碳柱流出液无Cl-；再用碱乙醇溶液将胞二磷胆碱钠洗脱下来，并在有紫外吸收物时开始收集；将洗脱液在薄膜真空浓缩罐中进行汽化浓缩；再其次是离子交换树脂分离将浓缩液用水稀释至浓度为2％，上大孔离子交换树脂柱；上样结束后，水洗柱子；再用配好的1％NaCl洗脱，并将洗脱液浓缩到浓度75％；然后进行精制将收集到的胞二磷胆碱钠溶液加热至40度左右送至5000分子量超滤器除杂、脱色；再将脱色液用6000分子量超滤器超滤，然后加入乙醇搅拌，并放置冷库过夜；再将结晶液进行离心分离，再将湿品进行真空干燥，烘干后装袋称重密封干燥保存。
2、 根据权利要求1所述的胞二磷胆碱生产工艺，其特征是在投入酵母时，充分搅拌均匀,使其发酵3 5小时再加入无机盐、磷 酸胆碱，待MJt升到30t:时，投入胞苷酸溶液，再继续升温到40ilr，保温计时。
3、 根据权利要求i或2所述的胞二磷鹏碱生产工艺，其特征 是反应温度控制在40U1C, 3小时后取样送分析室涵转化率,然 后补加蔗糖，其添加量为投料时的一半,以后，每两小时就需补加 蔗糖一次，当转化率达80%以上时即可终止反应，若低于70%可延 长反应时间。
4、 根据权利要求1或2所述的跑二磷胆碱生产工艺，其特征 是.-压榨结束后用水顶洗，直到流出液CDP《的浓度<10%时，停止收集。
5、 根据权利要求1或2所述的胞二磷胆碱生产工艺，其特征 是将压榨液调节PH,再压榨处理，所得清液计量总体积，并取样 测定含量，计算总含量。
6、 根据权利要求1或2所述的跑二磷胆碱生产工艺，其特征 是碳柱上样时，将调好PH的压榨清液上碳柱，4小时后适当降低 流速。
7、 根据权利要求1或2所述的胞二磷駆碱生产工艺，其特征 是:冲洗碳柱,是用PH6.0的纯水，碳柱流出液是用1%的硝酸银检 査无C〗—0
8、 裉据权利要求i或2所述的胞二磷胆碱生产工艺，其特征 是洗銳胞二磷胆碱钠，是用0.05N碱乙 (25%乙醇)溶液，流出液 用玻片取样在紫外灯下观察，看到紫外吸收物便开始收集。
9、 根据权利要求1或2所述的胞二磷胆碱生产工艺，其特征 是:上样结束后，水洗柱子，检查无紫外吸收物流出时，流速可适 当加快。
10、 根据权利要求1或2所述的胞二磷胆緘生产工艺，其特征 是加入乙醇搅拌时，待白色沉淀析出后再继续搅拌2小时，然后放置冷库过夜。
全文摘要
一种胞二磷胆碱生产工艺，其特征首先投料在反应罐内加入水和葡萄糖，再投入酵母，发酵后加入无机盐、磷酸胆碱，再投入胞苷酸溶液，补加蔗糖，升温后迅速用水冷却，再把反应液压榨，用水顶洗，将所得清液除盐；其次，压榨清液上碳柱，用纯水冲洗碳柱，再用碱乙醇溶液将胞二磷胆碱钠洗脱下来，并收集；再将洗脱液汽化浓缩，将浓缩液稀释上大孔离子交换树脂柱，结束后水洗柱子，再洗脱并将洗脱液浓缩，然后将收集到的胞二磷胆碱钠溶液加热送至超滤器除杂、脱色，加入乙醇搅拌，并放置冷库过夜再将结晶液进行离心分离、真空干燥，烘干后装袋称重密封干燥保存。其有益效果为提高产品转化率和收得率，减少环境污染，降低成本，提高产品纯度。
文档编号C12R1/85GK101130797SQ200710025780
公开日2008年2月27日 申请日期2007年8月1日 优先权日2007年8月1日
发明者剑 张 申请人:剑 张