专利名称：一种筛选高繁殖力山羊的方法及其专用引物的制作方法
技术领域：
本发明涉及筛选高繁殖力山羊的方法及其专用引物，特别是涉及一种利用山羊抑制素βA亚基基因的单核苷酸多态性筛选高繁殖力山羊的方法及其专用引物。
背景技术：
抑制素(Inhibin，INH)是下丘脑-垂体-性腺轴调控系统的重要激素，主要由雌性动物卵巢颗粒细胞和雄性动物睾丸支持细胞分泌。抑制素是由α和β亚基以二硫键联结而成的异二聚体(αβA，αβB)糖蛋白激素，其中α亚基的分子量为18kD；β亚基的分子量为14kD；β亚基有βA和βB两种形式，从而形成两种形式的INH，即INHβA(αβA)和INHβB(αβB)(Mason A J，Hayflick J S，Ling N，Esch F，Ueno N，Ying S Y，Guillemin R，Niall H，Seeburg P H.Complementary DNA sequences ofovarian follicular fluid inhibin show precursor structure and homology withtransforming growth factor-beta.Nature，1985，318(6047)659～663.；Burger HG.Inhibindefinition and nomenclature，including related substances.JEndocrinol，1988，117(2)159～160.)；β亚基之间通过二硫键结合(βAβA、βAβB、βBβB)构成不同形式的激活素(activin，ACT)(Tong S，Wallace E M，BurgerH G.Inhibins and activinsclinical advances in reproductive medicine.Clinical Endocrinology(Oxf)，2003，58(2)115～127.)。
β亚基之间的二硫键至关重要，若断裂则抑制素活性丧失。通过脑垂体，INH对FSH的合成和分泌进行负反馈调节(Ling N，Ying S Y，Ueno N，Esch F，DenoroyL，Guillemin R.Isolation and partiai characteristic of a Mr 32000 proteinwith inhibin activity from porcine follicular fluid.Proc Natl Acad Sci USA，1985，82(21)7217～7221.)；激活素则促进FSH合成和分泌。INH、ACT、TGF-β和MIF等都属于转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)超家族，具有自分泌和旁分泌的生长因子活性，参与垂体、性腺和胎盘等多种细胞、器官的生长和分化(Kingsley D M.The TGF-βsuperfamilynew members，new receptors，and new genetic tests of function in different organisms.Genes Dev，1994，8(2)133～146.)。抑制素的α亚基和β亚基都有保守的半胱氨酸残基，这与该家族中其它亚基的结构相似。绵羊抑制素βA(inhibin βA，INHBA)基因已被定位到染色体4q26(Brunner R M，Goldammer T，Hiendleder S，Jager C，Schwerin M.Mappingof the gene encoding for inhibin-βA(INHBA)to chromosome 4q26 in sheep.Mammalian Genome，1995，6(4)308～309.)。已发现绵羊INHBA基因具有遗传多态性(Hiendleder S，Leyhe B，Jaeger C，Wassmuth R.A Taq I polymorphism at theovine βA-inhibin(INHBA)locus.Animal Genetics，1992，23(3)291.；Leyhe B，Hiendleder S，Jaeger C，Wassmuth R.Pronounced differences in the frequencyof Taq I βA-inhibin alleles between sheep breeds with different reproductiveperformance.Animal Genetics，1994，25(1)41～43.)，但有关山羊INHBA基因的多态性研究国内外还未见报道。
据《中国羊品种志》记载，济宁青山羊是我国繁殖力最高的山羊品种，平均产活羔数为2.94，内蒙古绒山羊平均产活羔数为1.04，安哥拉山羊基本产单羔(《中国羊品种志》编写组.中国羊品种志.上海上海科学技术出版社，1988，88～90，98～100.)。
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP检测方法常采用一些已有的成熟技术，如DNA测序、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)、单链构象多态性(SSCP)及等位基因特异的寡聚核苷酸杂交(ASO)等。具体采用哪一种方法，需要结合靶序列的特点和实验条件来确定。
日本Orita等研究发现，单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的，当有一个碱基发生改变时，会或多或少地影响其空间构象，使构象发生改变，空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中受排阻大小不同，因此，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，可以非常敏锐地将构象上有差异的分子分离开。将SSCP用于检测PCR扩增产物的基因突变而建立的PCR-SSCP技术，进一步提高了基因突变检测方法的便捷性和灵敏性。
PCR-SSCP技术(Orita M，Iwahana H，Kanazawa H.Detection of polymorphismsof human DNA by gel electrophoresis as single-strand conformationalpolymorphisms.Proc Natl Acad Sci USA.1989，862766-2770.；Orita M，SuzukiY，Sekiya T，et al.A rapid and sensitive detetion of point mutation and geneticpolymorphism using polymerase chain reaction.Genomics.1989，5874-879.)是检测DNA突变最为直观而精确的实验技术手段之一，该方法对长度在100-300bp之间的DNA片段突变检测的灵敏度可达100％，结合序列分析，可做到对大批量样品的目的DNA片段的“全扫描”分析，不仅成本低，而且自动化程度较高，因此，在进行基因诊断和多态性分析，包括单核苷酸多态(SNP)的检测中，PCR-SSCP技术不失为一种准确、快速、简便、经济的技术手段。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用山羊抑制素βA亚基基因的单核苷酸多态性筛选高繁殖力山羊的方法及其专用引物。
本发明所提供的用于筛选高繁殖力山羊的引物，是由序列表中序列7和序列8的核苷酸序列组成的引物对。
序列表中的序列7由16个碱基组成，序列表中的序列8由17个碱基组成。
本发明的第二个目的是提供一种筛选高繁殖力山羊的方法。
本发明所提供的筛选高繁殖力山羊的方法，是以待测山羊的基因组DNA为模板，在由序列表中序列7和序列8的核苷酸序列组成的引物对的引导下进行PCR扩增，检测扩增片段自5’端第254位碱基(即INHBA基因自外显子2(exon 2)第254位碱基，INHBA基因组基因自5’端第583位碱基)为T、C还是N，N为T和C的杂合体；所述扩增片段自5’端第254位碱基为T时，其纯合体的基因型为AA；所述扩增片段自5’端第254位碱基为C时，其纯合体的基因型为BB；它们的杂合体基因型为AB；所述AA基因型山羊的繁殖能力高于AB和BB基因型山羊，AB基因型山羊的繁殖能力又高于BB基因型山羊。
所述待测山羊的基因组DNA的来源是广泛的，可以从血液(新鲜或冷冻)、精液(新鲜或冷冻)、组织样品(如耳组织等)或含有毛囊的羊毛样品中提取。
其中，以25μl总体积为例，PCR反应体系包括50ng/μl模板DNA 3.0μL，TaqDNA聚合酶1.0U，10pmol/L上、下游引物各2.0μl，dNTPs终浓度为200μmol/L，10×PCR缓冲液2.5μl，20mmol/L Mg2+1.5μL，用超纯水补充反应体系至25μl。10×PCR缓冲液的组成是Tris·HCl(pH8.3)100mM，KCl 500mM，MgCl215mM。PCR反应条件为先95℃预变性5min，然后94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸30s，共进行32个循环；最后72℃延伸8min。
所述检测PCR扩增产物的方法可为对扩增产物进行10％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后银染显色。具体方法可为取2μl PCR扩增产物，加入7μl上样缓冲液(98％甲酰胺，0.025％溴酚蓝，0.025％二甲苯氰，10mmol/L EDTA(pH8.0))，98℃变性10min后，冰浴8min，点样，用10％非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，银染显色。结果发现存在3种不同基因型AA型、AB型和BB型，基因分型结果如附图2所示。经测序发现，AA基因型山羊的INHBA基因第2外显子(exon 2)第254位碱基为T，BB基因型山羊的INHBA基因第2外显子第254位碱基为C，AB基因型山羊的INHBA基因第2外显子第254位碱基为N，所述AA基因型山羊的繁殖能力高于AB和BB基因型山羊，AB基因型山羊的繁殖能力又高于BB基因型山羊。
上述筛选方法的适用范围是广阔的，包括济宁青山羊、内蒙古绒山羊、安哥拉山羊、波尔山羊和文登奶山羊等任意山羊品种。
本发明提供了一种筛选高繁殖力山羊的方法及其专用引物。通过PCR-SSCP技术发现在生殖中起重要作用的抑制素βA亚基基因(inhibin βA，INHBA)的编码区在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)和低繁殖力山羊品种(内蒙古绒山羊、安哥拉山羊)中存在单核苷酸多态性，同时以济宁青山羊为例，利用该基因的多态性研究了其对济宁青山羊高繁殖力的影响，结果发现引物对P4的扩增片段具有多态性，P4扩增片段在济宁青山羊和安哥拉山羊中检测到AA、AB和BB 3种基因型，在内蒙古绒山羊中检测到AB和BB两种基因型(原因可能是样本数量较少)，进一步的测序分析结果表明BB基因型与AA基因型扩增片段相比，在外显子2的第254bp处由碱基T突变C，并使得编码的氨基酸残基由脯氨酸变为亮氨酸。其中，济宁青山羊AA、AB和BB基因型频率分别为0.4786、0.4143和0.1071；AA基因型济宁青山羊产羔数的最小二乘均值比AB基因型的多0.42只(P＜0.05)，比BB基因型的多1.14只(P＜0.001)；AB基因型济宁青山羊产羔数的最小二乘均值比BB基因型的多0.72只(P＜0.05)。上述统计结果表明AA基因型山羊的繁殖能力显著高于AB和BB基因型山羊，AB基因型山羊的繁殖能力又高于BB基因型山羊，故可初步认为A等位基因可能具有增加山羊产羔数的作用，可利用山羊INHBA基因进行标记辅助选择来提高山羊的产羔数。本发明的方法及其专用引物将在高繁殖能力山羊的筛选中发挥重要作用，应用前景广阔。
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
图1为在P1-P4 4对引物引导下的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果图2为引物对P4对不同山羊品种PCR扩增产物的SSCP分析结果图3为AA和BB纯合基因型山羊个体的PCR扩增产物的序列比对结果具体实施方式
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参见《Molecular CloningA Laboratory Manual》(Sambrook，J.，Russell，David W.，Molecular CloningA Laboratory Manual，3rdedition，2001，NY，Cold SpringHarbor)。所用引物合成及测序工作均由上海英骏生物技术有限公司完成。
实施例1、用于筛选高繁殖力山羊的引物设计及PCR-SSCP分析一、引物设计根据Thompson等(Thompson D A，Cronin C N，Martin F.Genomic cloning andsequence analyses of the bovine alpha-，beta A- and beta B-inhibin/activingenes.Identification of transcription factor AP-2-binding sites in the5’-flanking regions by DNase I footprinting.Eur J Biochem，1994，226(3)751～764.)发表的牛抑制素βA亚基(INHBA)基因的外显子1、外显子2序列(GenBank登录号分别为U16238和U16239)设计4对引物，其中，引物对P1和P2扩增INHBA基因外显子1的全序列，引物对P3和P4扩增外显子2长662bp的序列，这4对引物扩增产物的预期大小分别为224bp、193bp、335bp、333bp，引物序列如下引物对P1F1(上游引物)5’-CAGGATGCCCTTGCTTT-3’(序列表中序列1)；R1(下游引物)5’-CATCGGGTCTCTTCTTCAA-3’(序列表中序列2)。
引物对P2F2(上游引物)5’-CACTTGAAGAAGAGACCCG-3’(序列表中序列3)；R2(下游引物)5’-CACCTGATTCCGCGAAC-3’(序列表中序列4)。
引物对P3F3(上游引物)5’-GGCACAGCCAGGAAGACG-3’(序列表中序列5)；R3(下游引物)5’-CGTATGTCCAGGGAGCTCTTG-3’(序列表中序列6)。
引物对P4F4(上游引物)5’-ATACGGATTGCCTGTG-3’(序列表中序列7)；R4(下游引物)5’-CTCACAGTAGTTGGCGT-3’(序列表中序列8)。
二、PCR扩增选择具有头3胎产羔数记录的济宁青山羊母羊，颈静脉采血，所采血样均为10mL/只，用柠檬酸葡萄糖抗凝，-20℃冻存。用酚氯仿抽提法提取血样的基因组DNA，溶于TE缓冲液(10mmol/L Tris·HCl(pH 8.0)，1mmol/L EDTA(pH 8.0))，4℃保存。然后以所提取的不同血样的基因组DNA为模板，分别在上述4对引物的引导下进行PCR扩增，25μl PCR反应体系为50ng/μl模板DNA 3.0μL，Taq DNA聚合酶(北京鼎国生物技术有限公司)1.0U，10pmol/L上、下游引物各2.0μl，dNTPs(北京鼎国生物技术有限公司)终浓度为200μmol/L，10×PCR缓冲液(Tris·HCl(pH8.3)100mM，KCl 500mM，MgCl215mM)2.5μl，20mmol/L Mg2+1.5μL，用超纯水补充反应体系至25μl。PCR反应条件为先95℃预变性5min，然后94℃变性30s，退火30s(引物对P1-P4的退火温度分别为49.7℃、62.2℃、64.2℃、54.0℃)，72℃延伸30s，共进行32个循环；最后72℃延伸8min，4℃保存。反应结束后，对4对引物的PCR扩增产物进行2％琼脂糖凝胶电泳检测，检测结果如图1所示(泳道1和泳道2引物对P1的PCR扩增产物；泳道3和泳道4引物对P2的PCR扩增产物；泳道5和泳道6引物对P3的PCR扩增产物；泳道7和泳道8引物对P4的PCR扩增产物；泳道MSD002Marker)，4对引物用于PCR扩增都获得了较好的效果，引物对P1的PCR扩增产物的长度为224bp，引物对P2的PCR扩增产物的长度为193bp，引物对P3的PCR扩增产物的长度为335bp，引物对P4的PCR扩增产物的长度为333bp，与预期结果一致，而且没有非特异扩增条带，表明上述4对引物可以直接用于SSCP分析。
三、PCR-SSCP分析1、基因型检测取具有头3胎产羔数记录的140只济宁青山羊母羊血样(采自农业部济宁青山羊保种基地(山东省嘉祥县))，40只内蒙古绒山羊母羊血样(采自内蒙古白绒山羊种羊场(内蒙古鄂尔多斯市鄂托克旗))和32只安哥拉山羊母羊血样(采自山西省晋城市沁水示范牧场(山西省沁水县郑庄镇))，然后提取血样的基因组DNA，采血及DNA提取方法与步骤二相同，再分别在引物对P1、P2、P3和P4的引导下进行PCR扩增，PCR反应体系及反应条件与步骤二相同。反应结束后，对扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，具体方法为取2μl PCR扩增产物，加入7μl上样缓冲液(98％甲酰胺，0.025％溴酚蓝，0.025％二甲苯氰，10mmol/L EDTA(pH8.0))，98℃变性10min后，冰浴8min，点样，用非变性聚丙烯酰胺凝胶中4℃电泳分离，检测这4对引物扩增产物所用的聚丙烯酰胺凝胶浓度分别为8％(P1)、10％(P2)、8％(P3)、10％(P4)，聚丙烯酰胺凝胶交联度分别为29∶1(P1)、39∶1(P2)、29∶1(P3)、39∶1(P4)，电压均为150V，电泳结束后银染显色，最后用AlphaImagerTM2200 and1220 Documentation and Analysis Systems(Alpha Innotech Corporation，SanLeandro，CA，USA)拍照并对图像进行分析。
SSCP分析结果表明4对引物中只有引物对P4的PCR扩增片段具有多态性，其余3对引物的PCR扩增片段均不存在多态性，表明山羊INHBA基因外显子1不具有多态性，其中引物对P4对不同山羊品种PCR扩增产物的SSCP分析结果如图2所示，发现存在3种不同基因型纯合基因型AA(见图2中的泳道2，5，7，8)，纯合基因型BB(见图2中的泳道4)和杂合基因型AB(见图2中的泳道1，3，6)。
2、克隆测序对步骤1经SSCP分析后的AA、BB 2种纯合基因型个体的PCR扩增产物用DNA片段快速纯化回收试剂盒(北京鼎国生物技术有限公司)回收并纯化，然后将回收后的DNA片段连接入载体pGEM-T Easy(北京鼎国生物技术有限公司)中，将连接产物转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆，用质粒提取纯化试剂盒(北京鼎国生物技术有限公司)提质粒，经酶切鉴定后在3730(ABI)测序仪上测序。BB基因型扩增片段具有序列表中序列9的核苷酸序列，AA基因型扩增片段具有序列表中序列10的核苷酸序列，如图3所示(箭头指示突变碱基)，BB基因型扩增片段与AA基因型扩增片段相比，自5’端第254位碱基(即INHBA基因自外显子2(exon 2)第254位碱基)由碱基T突变为C，并导致所编码的氨基酸残基由脯氨酸残基变为亮氨酸残基，即AA基因型山羊的INHBA基因第2外显子(exon 2)第254位碱基为T，BB基因型山羊的INHBA基因第2外显子第254位碱基为C，AB基因型山羊的INHBA基因第2外显子第254位碱基为N(N为T和C的杂合体)。
3、统计分析1)3个山羊品种中INHBA基因的等位基因频率和基因型频率统计根据步骤1和步骤2的检测结果对INHBA基因第2外显子在上述3个山羊品种(济宁青山羊、内蒙古绒山羊、安哥拉山羊)中的等位基因频率和基因型频率进行统计，结果如表1所示，表明山羊INHBA基因第2外显子具有遗传多态性，上述PCR-SSCP分析结果表明在济宁青山羊和安哥拉山羊中检测到AA、AB、BB三种基因型，而在内蒙古绒山羊中没有检测到AA基因型，产生这些结果的原因可能是所检测的样本数较少。在济宁青山羊和安哥拉山羊中A等位基因频率较高，分别为0.6857和0.7188，在内蒙古绒山羊中B等位基因频率较高(0.8875)。且通过χ2适合性检验，引物对P4在三个不同品种山羊中的基因型χ2值都未达到显著水平，即这三个不同品种山羊在基因座上都达到了Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05)，说明INHBA基因的P4这对引物的扩增片段不受选育措施的影响，在选育过程中它们的遗传仍然是随机的。
表1 3个山羊品种中INHBA基因的等位基因频率和基因型频率(括号内的数字是个体数)
2)济宁青山羊产羔数在INHBA各基因型之间的差异分析配合下列模型对步骤1和步骤2的检测结果进行最小二乘方差分析，比较济宁青山羊产羔数在INHBA各基因型之间的差异yijklm＝μ+Si+HYSj+Pk+Gl+eijklm
其中yijklm为产羔数的记录值；μ为群体平均值；Si为第i头公畜的固定效应；HYSj为第j个场年季的固定效应；Pk为第k个胎次的固定效应；Gl为INHBA基因第l种基因型的固定效应；eijklm为随机残差效应。统计分析用SAS(V8.12)软件的GLM(General Linear Model)过程完成。
不同INHBA基因型的140只济宁青山羊产羔数的最小二乘均值及标准误统计结果如表2所示，AA基因型济宁青山羊产羔数的最小二乘均值比AB基因型的多0.42只(P＜0.05)，比BB基因型的多1.14只(P＜0.001)；AB基因型济宁青山羊产羔数的最小二乘均值比BB基因型的多0.72只(P＜0.05)，即AA基因型山羊的繁殖能力高于AB和BB基因型山羊，AB基因型山羊的繁殖能力又高于BB基因型山羊。由上述结果可初步认为A等位基因可能具有增加山羊产羔数的作用，可利用山羊INHBA基因进行标记辅助选择来提高山羊的产羔数。
上述分析结果表明，本发明的方法及其专用引物可用于筛选繁殖能力高的山羊。
表2 INHBA基因不同基因型济宁青山羊产羔数的最小二乘均值及标准误
序列表<160>10<210>1<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>1caggatgccc ttgcttt 17<210>2<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>2catcgggtct cttcttcaa 19<210>3<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>3cacttgaaga agagacccg 19<210>4<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>4cacctgattc cgcgaac 17<210>5<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>5ggcacagcca ggaagacg18<210>6<211>21<212>DNA<213>人工序列
<220>
<230>
<400>6cgtatgtcca gggagctctt g21<210>7<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>7atacggattg cctgtg 16<210>8<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>8ctcacagtag ttggcgt 17<210>9<211>333<212>DNA<213>人工序列
<220>
<230>
<400>9tatgcctaac ggacactcgt cacagtcctc tggccgcgtt cggaccacga ggacccgttc60ttcttctcct ttcttctcct tccccttccc ttcttctccc tacctcttcc tccccgccct120cccctgctcc tcttcctcgt cagcgtgtct ggaaaggagt acgacgtccg ggcggtcaga180cttctagtag gagtggccgc ggccgccgcc ccgaacctca cactgccgtt ccagttgtaa240acgacattct ttgccaagat acaatcaaag ttcctgtaac cgaccttact gacctagtag300cgagggaggc cgatggtgcg gttgatgaca ctc 333<210>10<211>333<212>DNA<213>人工序列<220>
<230>
<400>10tatgcctaac ggacactcgt cacagtcctc tggccgcgtt cggaccacga ggacccgttc60ttcttctcct ttcttctcct tccccttccc ttcttctccc tacctcttcc tccccgccct120cccctgctcc tcttcctcgt cagcgtgtct ggaaaggagt acgacgtccg ggcggtcaga180cttctagtag gagtggccgc ggccgccgcc ccgaacctca cactgccgtt ccagttgtaa240acgacattct ttgtcaagat acaatcaaag ttcctgtaac cgaccttact gacctagtag300cgagggaggc cgatggtgcg gttgatgaca ctc 33权利要求
1.用于筛选高繁殖力山羊的引物，是由序列表中序列7和序列8的核苷酸序列组成的引物对。
2.一种筛选高繁殖力山羊的方法，是以待测山羊的基因组DNA为模板，在由权利要求1所述的引物对的引导下进行PCR扩增，检测扩增片段自5’端第254位碱基为T、C还是N，N为T和C的杂合体；所述扩增片段自5’端第254位碱基为T时，其纯合体的基因型为AA；所述扩增片段自5’端第254位碱基为C时，其纯合体的基因型为BB；它们的杂合体基因型为AB；所述AA基因型山羊的繁殖能力高于AB和BB基因型山羊，AB基因型山羊的繁殖能力又高于BB基因型山羊。
3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于所述PCR反应体系包括50ng/μl模板DNA 3.0μl，Taq DNA聚合酶1.0U，10pmol/L上、下游引物各2.0μl，dNTPs终浓度为200μmol/L，10×PCR缓冲液2.5μl，20mmol/L Mg2+1.5μL，用超纯水补充反应体系至25μl。
4.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于所述PCR反应条件为先95℃预变性5min，然后94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸30s，共进行32个循环；最后72℃延伸8min。
5.根据权利要求2或3或4所述的筛选方法，其特征在于所述山羊品种包括济宁青山羊、内蒙古绒山羊、安哥拉山羊、波尔山羊和文登奶山羊。
全文摘要
本发明公开了一种筛选高繁殖力山羊的方法及其专用引物。该引物是由序列表中序列7和序列8的核苷酸序列组成的引物对。该方法是以待测山羊的基因组DNA为模板，在由权利要求1所述的引物对的引导下进行PCR扩增，检测扩增片段自5’端第254位碱基为T、C还是N，N为T和C的杂合体；所述扩增片段自5’端第254位碱基为T时，其纯合体的基因型为AA；所述扩增片段自5’端第254位碱基为C时，其纯合体的基因型为BB；它们的杂合体基因型为AB；所述AA基因型山羊的繁殖能力高于AB和BB基因型山羊，AB基因型山羊的繁殖能力又高于BB基因型山羊。本发明的方法及其专用引物将在繁殖能力高的山羊的筛选中发挥重要作用，应用前景广阔。
文档编号C12N15/11GK101029340SQ20071006535
公开日2007年9月5日 申请日期2007年4月11日 优先权日2007年4月11日
发明者储明星, 彭志兰, 陈宏权 申请人:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所