专利名称：：生物复合多糖高效营养液的制作方法
技术领域：
：本发明属于一种生物复合多糖高效营养液的制作方法。技术背景人类跨入21世纪，"健康、长寿已经成为人类生命的永恒主题"，然而近年来大工业化的进程、大气、水、食物的污染，生活节奏的加快，人们的不良情绪等导致了系列疾病的产生。对抗肿瘤、降底血脂、血糖、预防心脑血管疾病，已经成为全人类共同面临的挑战。尤其肿瘤患者不断增多，人类的健康受到了极大威胁。向肿瘤宣战已在全世界展开。生物活性多糖(BiologicallyActivePolysaccharides简称BAP)是一类具有多种生理活性和特殊保健功能的高分子碳水化合物聚合体。一般由七个以上一种或多种以上的单糖以特殊糖苷键縮合而成的单一聚糖、杂聚糖或粘多糖。随着医药科学技术的飞速发展，对BAP的理化性质、有效成分、制备方法、检测手段、生物活性及其作用机理等方面研究的不断深入，人们发现各种不同的BAP分别具有不同程度的调节和提高机体免疫力的作用。对于抗氧化、抗疲劳、延绶衰老、抗肿瘤、抗突变、抗风湿、抗辐射、抗凝血、抗菌消炎、降血脂、降血压、降血糖，防治心脑血管疾病的脑血栓、冠心病、动脉粥样硬化、脂肪肝、肥胖症、糖尿病，同时还能促进骨髓造血，升高白细胞、血小板、改善血象，对单纯性白细胞减少症、血小板减少症，再生障碍性贫血有纠正作用。在保护肝、肾功能，提高血液学指标等有明显作用。总之，对免疫功能低下和多种免疫缺损疫病及各种中老年性疾病具有良好的辅助治疗效果和保健功能作用。无论是药用或者是实用的微生物多糖虽然对于提高人的免疫功能和基本体质能起到明显作用，但作用单一，且不持久。也就是说其作用只能暂时解决血液中某一方面的异常指标的改善，并不能彻底改善血液内全部超标指数。其它辅助性作用更谈不到。能够全面有效地降低血中胆固醇、甘油三酯、血液粘稠度、血糖的同时，又起到营养软化血管，补充血管壁营养成份，提高人体综合免疫功能的复合多糖类产品目前尚未出现。进一步的研究发现有明显保健作用的多种微生物多糖经混合后形成的复合多糖，保健效果呈几倍，几十倍地提高。复合多糖具有多方面的生物活性。是当今世界上优质且无任何毒副作用的免疫调节剂，能有效地全面提升人体免疫力，又包含人体细胞和器官组成中必需要的重要成分，是人体细胞或脏器维持正常功能不可缺少的营养补充。多糖在国际上被列为有显著效果的抗癌剂，免疫增强剂和干扰素诱生剂。
发明内容本发明的目的是提供一种借助微生物深层发酵技术制取以生物复合多糖为主要成分的高效率营养液的方法。以适人类应对抗肿瘤、降底血脂、血糖、预防心脑血管疾病中对高效保健品的需要。本发明是一种生物复合多糖高效营养液的制作方法，该方法中包括菌种的选取、营养基的配制、液体菌种的培养、发酵罐中菌丝体的生成、发酵液的过滤、浓縮后生成富含微生物多糖的营养液，关键的技术是本方法中所说的复合营养液是由多于一种的微生物菌种经以上方法制取得营养液后混配而成的，具体步骤如下a、分别选取灵芝(LucudiumGanoderma)、冬虫夏草(MilitrisGordyc印s)、茯苳(CocosDoria)、灰树花(FrondonsGrifola)、牛肝菌(EdulisBoletus)、桑黄(IgniariusPhellinus)、云芝(VersicolorConorus)、香燕(EdodusLentinula)、白灵燕(NebrodensisPleurotus)、姬松茸菌(BispocusAgaricus)的菌种，采取斜面菌种培育，摇床液体育种，种子罐液体菌种三级菌种培育出各自的液体菌种，再将液体菌种分别引入配套的发酵罐在配套液态培养基中发酵3—7天，待菌丝体生长浓度或湿重比达到65-80%时停止发酵，过滤发酵液中的固体残渣，获得所对应菌种发酵滤过液待用，b、在温度不低于9(TC、环境压力1.2-1.5个大气压下将以上各菌种发酵滤过液中加入0.5-1.5%的、由等重量的胃蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合蛋白酶后进行热解、灭活处理，c、将经过热解、灭活处理的各菌种发酵滤过液进一步过滤、浓縮去除10%-15%的水份及杂物，使其浓縮生成菌丝体湿重比达到80%以上的提取液，d、然后将以上所说的由各个菌种制得的提取液按照以下的体积百分比混配成复合营养液:灵芝茯苓牛肝菌白灵燕:5-20%,冬虫夏草:5-15%，灰树花:5-15%，桑黄:5-20%,香恭:5-10%，姬松莺菌:5-20%，5—15%，5—10%，6—20%，5—20%，e、在无菌环境下进行分瓶，封装，消毒成为成品。本发明中所选用的灵芝、冬虫夏草、茯冬、灰树花、牛肝菌、桑黄、云芝、香菇、白灵菇、姬松茸均是无毒无害的食用菌或药用菌种。是经过发明人长期的研究和反复的对比筛选出来的完美组合。各种微生物的菌丝体在发酵罐中进行深度发酵处理，湿重达65—85%时，其多糖的有效含量产生明显的提高，其滋补和药用效果可以达到及至。复合多糖之间作用使得其滋补功能和药效互相强化。本方法所制取的生物复合多糖经检测证明富含铁、铜和维生素C。富含的有机硒和铬有保护肝脏、胰脏、预防贫血、坏血病，肝硬化作用。经病理实验说明本产品中的复合多糖BAP能使CC14所致脂肪肝大鼠肝组织甘油三酯，总胆固醇和游离脂肪酸含量显著下降，肝组织细胞脂变程度明显减缓，对脂肪肝有很好保护作用。经检测本产品中复合多糖分子量达900万，核酸、有机硒、有机铬、有机锌、有机锗等主要抗肿瘤成分，含有较高养分子36种微量元素、13种氨基酸，多种维生素。具有攻补兼施，营养均衡、全面调整、提高机体免疫功能等作用。临床实验已经证明本方法制造的产品对抗肿瘤、降底血脂、血糖、预防心脑血管疾病均具有明显的疗效，是目前最具有应用前景的保健产品。具体实施方式本发明是一种生物复合多糖高效营养液的制作方法，该方法中包括菌种的选取、营养基的配制、液体菌种的培养、发酵罐中菌丝体的生成、发酵液的过滤、浓縮后生成富含微生物多糖的营养液，关键技术在于本方法中所说的复合营养液是由多于一种的微生物菌种经以上方法制取得营养液后混配而成的，具体步骤如下a、分别选取灵芝(LucudiumGanoderma)、冬虫夏草(MilitrisGordyc印s)、茯零(CocosDoria)、灰树花(FrondonsGrifola)、牛月干菌(EdulisBoletus)、桑黄(IgniariusPhellinus)、云芝(VersicolorConorus)、香薛(EdodusLentinula)、白灵恭(NebrodensisPleurotus)、姬松茸菌(BispocusAgaricus)的菌种，采取斜面菌种培育，摇床液体育种，种子罐液体菌种三级菌种培育出各自的液体菌种，再将液体菌种分别引入配套的发酵罐在配套液态培养基中发酵3—7天，待菌丝体生长浓度或湿重比达到65-8Q%时停止发酵，过滤发酵液中的固体残渣，获得所对应菌种发酵滤过液待用，b、在温度不低于90。C、环境压力1.2-1.5个大气压下将以上各菌种发酵滤过液中加入0.5-1.5%的、由等重量的胃蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合蛋白酶后进行热解、灭活处理，C、将经过热解、灭活处理的各菌种发酵滤过液进一步过滤、浓縮去除10%-15%的水份及杂物，使其浓縮生成菌丝体湿重比达到80%以上的提取液，d、然后将以上所说的由各个菌种制得的提取液按照以下的体积百分比混配成复合营养液灵芝茯苓:牛肝菌:五Z:白灵燕:5-20%，冬虫夏草5-15%，灰树花5-15%，桑黄:香菇5-20%，5-10%，姬松茸菌e、在无菌环境下进行分瓶，封装，消毒成为成品,体积百分比混配成复合营养液实施例<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>以上所说的发酵或育种过程中所掌握的工艺条件是，发酵温度24—26°C，发酵罐压为30-50KPa，培养基碳、氮比为1:16—1:24，接种量为1Q%，通气量量0.4-0.6立方米/立方米分，搅拌速度120-180转/分。以上所说的生物复合多糖高效营养液的制作方法中所配套采取的以-.匕步骤中发酵或育种罐中的液态培养基是按照以下的重量百分比的配制的a、该方法中灵芝、茯苓、灰树花、桑黄、云芝的液态培养基配比土豆汁20—30豆浆25—35小米汁5—15玉米汁10—15酵母粉0.5—1庶糖0.5—3葡萄糖0.5—2蛋白胨0.3—1.5琼脂0.5—1KHm0.1—0.3K2HP040.05—0.15Mnso40.2—-a5G3co30.5—-0.8Znso40.2—-0.4Mncl20.1—-0.3维生素Bl0.1-一i花生油0.3—-0.5水余:b、牛肝菌、香菇、白灵菇、姬松茸的液态培养基配比:土豆汁20—35豆浆20—30玉米汁5—10酵母粉0.5—1庶糖0.5—2葡萄糖0.5—3蛋白胨0.3—1琼脂0.5—1KH2P040.l—O.3K2HP04Mns040.2—0.4Gaco3<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>以上所说的生物复合多糖高效营养液的制作方法的发酵或育种罐中的液态培养基配置过程中，将马铃薯去皮与芽眼，切片加6-9倍重量水、煮沸搅拌为糊状，玉米粉加25-30倍重量水煮沸，小米加30-40倍重量水煮沸后保持30分钟，用3-6斤黄豆做成100斤豆浆，以上的半成品经用6—8层纱布过滤取滤液形成所说的马铃薯汁、玉米粉汁、小米汁、豆浆，然后按照以上给出的配伍比例准确称取所需各种填加剂，最后加入琼脂搅动至完全溶化，最后进行蒸汽高压灭菌，冷却至3(TC以下备用。以上生物复合多糖高效营养液的制作方法的步骤d中所制得的复合营养液进一歩通过喷雾干燥制成粉剂，再制成复合多糖胶囊、或冲剂、或片剂。以上步骤中所制得的复合营养液是采用超滤膜分离浓縮或反渗透膜纯化浓縮而获得的复合多糖营养液。本发明人通过进一步的实验检测和临床应用证实了使用本方法制造的产品的积极效果1、抗肿瘤功能以本方法制造的营养液药效对小鼠做的药理实验时，按照4一6克/公斤的注入量给小鼠腔腹灌入复合多糖，对转移性肿瘤有显著抑制作用，并可抑制肿瘤转移和生长。复合多糖对人胃瘤细胞SGC-790和人直肠癌CO10-205有较好疗效，能阻止SGC-790人胃癌细胞内S0/G1期进入S期，升高癌细胞凋出指数，诱导癌细胞调出而形成抗癌作用。2、抗氧化功能复合多糖能显著降低小鼠组织中丙二醛(MDA)含量，促进细胞、肝、脑等组织中S0D的活性，能使肝组织中谷脘甘态过氧化物酸的活性恢复至正常水平，增强了机体抗氧化及抗自由基损伤的能力。复合多糖能在内皮细胞表面形成一层糖屏障，保护膜结构的完整性，防止了氧自由基的功击。还可与0H形成有关的金属离子相结合，抑制了0H的产生，亦可降低线粒体内MDA含量，减了肝脂质过氧化程度，改善了线粒体膜流动性，清除了脂肪酸P—氧化障碍而产生抗氧化作用。3、抗心血管疾病功能复合多糖具有明显降低高血脂以及升高高密度脂蛋白作用。其机理在于多糖能与血清中的脂类物质结合，作为一种载体参与了胆固醇、脂蛋白的代谢活动，加速了脂类物质的转运和排泄，并能使胆固醇更快地氧化成胆酸，影响其代谢途径。BAP能显著增加受试家兔抗凝血激活酶的活性，延长凝血时间，抑制血栓的形成，能显著抑制血小板活化因子的活性，抑制了胶原和花生四稀酸诱导的血小板聚集，改善了微循环，加速了血液流动，防止血栓形成，使血液流度学指标超正常，从而防止了心梗、脑梗，冠状动脉硬化等心脑血管疾病的产生。4、抗疲劳功能给小鼠灌胃复合多糖，每只10mg/kg.d，连续10天，结果发现，与对照组相比，该糖能显著增加小鼠肌糖原，肝糖原储备量，显著提高糖原恢复率，对大运动量后恢复疲劳提供了物质基础。复合多糖能显著增加对用锯未烟熏所致肺气虚模型小鼠的游泳死亡时间，具有较显著的抗缺氧、抗疲劳作用。5、抗菌消炎功能低分子量复合多糖在啮齿类动物中具有直接抑制致病菌生长其病理反应功能，大分子量多糖所特有的吸水保湿功能，能在皮肤表面易形成一层水化膜，此膜如同一道天然屏障，能有效将皮肤与细菌隔离开，阻止了细菌侵入皮肤内部，间接产生了抗菌消炎效果。此外，在皮肤组织内部、多糖与蛋白结合形成透明质酸，蛋白复合物存在于细胞间隙中，并形成高分子凝胶，将细胞粘合在一起，发挥细胞正常代谢及组织持水作用，产生保护组织细胞免受病原菌的侵害和防止感染等，所以复合多糖有抗菌消炎、抗病毒作用。6、降血压降血糖用自发性高血压大鼠进行实验，给药组在饲料中加入5%复合多糖，对照组不加，4周后可见给药组血压明显降低，血桨及肝脏中的胆固醇含量亦下降。本产品通过进一步毒理试验证明，不含防腐剂。经急性、亚急性和慢性毒理测试，无毒副作用。本发明产品复合多糖的药用效果试验报告中参考了以下疗效标准的制定原则1、世界卫生组织(WHO和我国卫生部制定的(中药新药临床指导原则中有关疗效评定标准(即尼莫地平法{治疗前积分一治疗后积分}/治疗前积分)*100%。显效中医症状积分药后较药前下降2/3以上，神经缺损积分下降^50%。'有效中药症状积分下降1/3—2/3，神经缺损积分下降<20%。2、参照卫生部试行了15类药物临床研究指导原则(试行)中有关调整血脂药物研究制定的标准。显效达以下任一项者，TC下降^20，TG降》40，TDG—C上升》10mg/dl，AL下降》200/0。有效达以下任一项者，TC下降10—19%，TG下降20—39%，HDC-C上升1—9mc/dl，AL下降10—20%。无效未达到有效标准者恶化达以下任一项者TC上升》10%，TG上升》10。/。，HDC—C下降》4mg/dl，AL上升》100/0。选择心脑血管疾病急性期过后恢复期病人100名做对比实验，服用本复合营养液每日4次，每次20-40毫升，IO天一个周期，四个周期后进行个同期后进行相关指标的检测和中药症状疗效评定显效76例，有效18例，无效6例，总有效率94%。没有服用本专利产品的常规治疗对照组病人相关评价数据显效6例，有效29例，无效48例，总有效率42.16%。相关神经功能缺损恢复疗效评定<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>对血流度学指标的影响评价:<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>P〈0.05P<0.01，对纤维蛋白质，细胞压积，红细胞电泳时间影响<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>小结药前后两组对照中医症状效评定有显著性差异。神经功能缺损恢复疗效评定，两组有显著性差异。血液变学指标的影响，治疗组药后，全血比粘度，血浆比粘度，全血还原粘度，红细胞压积，纤维蛋白质，红细胞电泳时间均有显著降低。高脂血症两组疗效比较<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>对TC、TG、HDL-C、AL的变化组别例数TCTGHDL-CAl治疗组60184.62±18。59173.56±14。4939.55±2。724.29±1。02对照组60165.62±16。01163.90±11。3939.98±2。563.63±0。83P〈0.05P〈0.01小结两组对比有显著差异药后TC、TG、Al均下降，经统计学处理有显著性差异HDC-C有所上升，但有明显差异。通过以上的各面试验证明本方法所制作的复合多糖营养液做为一种新型微生物强化营养剂，对降低血脂五项中的相应指标有十分明显作用，进一歩的分析证明，该营养剂中含有在一定丰富的氨基酸和血管营养中所必须的核酸、有机锌、有机硒、有机铬、有机锗微量元素、维生素等。是一种营养均衡、攻补兼施、全面调整机体免疫功能的优秀营养助剂。在预防肿瘤、抗肿瘤、降血脂、预防心脑血管疾病的实践中，是人体细胞或脏器维系正常功能不可缺少的营养品。对免疫功能低下和多种免疫缺损疾病具有良好辅助治疗效果和保健功能作用。权利要求1、一种生物复合多糖高效营养液的制作方法，该方法中包括菌种的选取、营养基的配制、液体菌种的培养、发酵罐中菌丝体的生成、发酵液的过滤、浓缩后生成富含微生物多糖的营养液，其特征在于本方法中所说的复合营养液是由多于一种的微生物菌种经以上方法制取得营养液后混配而成的，具体步骤如下a、分别选取灵芝(LucudiumGanoderma)、冬虫夏草(MilitrisGordyceps)、茯苓(CocosDoria)、灰树花(FrondonsGrifola)、牛肝菌(EdulisBoletus)、桑黄(IgniariusPhellinus)、云芝(VersicolorConorus)、香菇(EdodusLentinula)、白灵菇(NebrodensisPleurotus)、姬松茸菌(BispocusAgaricus)的菌种，采取斜面菌种培育，摇床液体育种，种子罐液体菌种三级菌种培育出各自的液体菌种，再将液体菌种分别引入配套的发酵罐在配套液态培养基中发酵3-7天，待菌丝体生长浓度或湿重比达到65-80％时停止发酵，过滤发酵液中的固体残渣，获得所对应菌种发酵滤过液待用，b、在温度不低于90℃、环境压力1.2-1.5个大气压下将将以上各菌种发酵滤过液中加入0.5-1.5％的、由等重量的胃蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合蛋白酶后进行热解、灭活处理，c、将经过热解、灭活处理的各菌种发酵滤过液进一步过滤、浓缩去除10％-15％的水份及杂物，使其浓缩生成菌丝体湿重比达到80％以上的提取液，d、然后将以上所说的由各个菌种制得的提取液按照以下的体积百分比混配成复合营养液灵芝5-20％，冬虫夏草5-20％，茯苓5-15％，灰树花5-15％，牛肝菌5-15％，桑黄5-10％，云芝5-20％，香菇6-20％，白灵菇5-10％，姬松茸菌5-20％，e、在无菌环境下进行分瓶，封装，消毒成为成品。2、根据权利要求1所说的生物复合多糖高效营养液的制作方法，其特征在于以上所说的发酵或育种过程中所掌握的工艺条件是，发酵温度24一26°C，发酵罐压为30-50MPa，培养基碳、氮比为1:16—24，接种量为10%,通气量量0.4-0.6立方米/立方米分，搅拌速度120-180转/分。3、根据权利要求1所说的生物复合多糖高效营养液的制作方法，其特征在于以上步骤中发酵或育种罐中的液态培养基是按照以下的重量百分比的配制的a、该方法中灵芝、茯苳、灰树花、桑黄、云芝的液态培养基配比土豆汁20—30豆浆25—35小米汁5—15玉米汁10—15酵母粉0.5—1庶糖0.5—3葡萄糖0.5—2蛋白胨0.3—1.5琼脂0.5—1KH2P040.1—0.3K2HP040.05—0.15Mnso40.2—0.50.5—0.80.2—0.4Mncl20.1—0.3维生素Bl0.1—1花生油0.3—0.5水錢b、牛肝菌、香菇、白灵恭、姬松茸的液态培养基配比:土豆汁20—35豆浆20—30玉米汁5—10酵母粉0.5—1庶糖0.5—2葡萄糖蛋白胨琼脂KH2P04K2HP04MnscvG3co3Mncl2维生素Bl花生油水C、冬虫夏草的液态培养基配比:蚕蛹粉奶粉土豆汁豆浆小米汁玉米汁酵母粉庶糖0.5—30.3—10.5—10.l—O.30.2—0.40.2—0.40.1—0.30.1—10.3—0.51-2，2-320—3025—3510—2010—20l一20.5—3葡萄糖1_3蛋白胨0.5—1琼脂0.8—1.5KH2P040.2—0.5K2HP040.05—1Mnso40.2—0.50.5—1Zl"lSO40.2—0.5Mncl20.1—0.3维生素Bl0.3—1花生油0.3—0.5水賴4、根据权利要求1所说的生物复合多糖高效营养液的制作方法，其特征在于以上步骤中发酵或育种罐中的液态培养基配置过程中，将马铃薯去皮与芽眼，切片加6-9倍重量水、煮沸搅拌为糊状，玉米粉加25-30倍重量水煮沸，小米加加30-40倍重量水煮沸后保持30分钟，3-6斤黄豆做成100斤豆浆，以上的半成品经用6—8层纱布过滤取滤液形成所说的马铃薯汁、玉米粉汁、小米汁、豆浆，然后按照以上给出的配伍准确称取所需各种药品，后加入琼脂搅动至完全溶化，进行蒸汽高压灭菌，冷却至3(TC以下备用。5、根据权利要求1所说的生物复合多糖高效营养液的制作方法，其特征在于以上步骤d中所制得的复合营养液进一步通过喷雾干燥制成粉剂，再制成复合多糖胶囊、或冲剂、或片剂。6、根据权利要求1所说的生物复合多糖高效营养液的制作方法，其特征在于以上步骤中所制得的复合营养液是采用超滤膜分离浓縮或反渗透膜纯化浓缩而获得的复合多糖营养液。全文摘要本发明是一种生物复合多糖高效营养液的制作方法。该方法中包括菌种的选取、营养基的配制、液体菌种的培养、发酵罐中菌丝体的生成、发酵液的过滤、浓缩后生成富含微生物多糖的营养液。关键在于本方法中所说的复合营养液是由以下的微生物菌种经过上述步骤分别在各自发酵罐中深度发酵提取的菌丝体培养液按照以下的重量百分比混配而成灵芝5-20％、冬虫夏草5-20％、茯苓5-15％、灰树花5-15％、牛肝菌5-15％、桑黄5-10％、云芝5-20％、香菇6-20％、白灵菇5-10％、姬松茸菌、5-20％。以上营养液在无菌环境下进行分瓶，封装，消毒成为成品。文档编号C12N1/14GK101228951SQ200810054558公开日2008年7月30日申请日期2008年2月22日优先权日2008年2月22日发明者张真元申请人:张真元