专利名称：：中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法
技术领域：
：本发明涉及一种动物DNA分子遗传标记技术，具体为一种中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法。技术背景微卫星(Microsatellite)又称简单序列重复(Simplesequencer印eats，SSR)，是指以少数几个核苷酸(一般为1-6个)经多次重复单位组成的简单多次串联重复序列，如(CA)、(TG)n等，又被称为短串联重复序列，简单序列重复其长度大多在lOObp以内，广泛分布在真核基因组中。微卫星序列两侧有保守的DNA序列，根据其两侧的保守序列涉及引物，可用PCR扩增出微卫星位点的序列。由于微卫星重复单元的重复的次数不同，因而扩增出的微卫星序列的长度呈现多态性。由于微卫星序列具有多态性丰富、重复性高、共显性遗传等优点，被广泛应用于遗传图谱的构件、基因定位、遗传关系分析、品种鉴定等领域。中国地鼠是源于中国的实验动物。20世纪40年代末，Schwentker从我国取十对野生原种，仅数年，其后裔即遍及欧、美、日等国的一些主要实验室。1919年，我国学者谢恩增首次将中国地鼠引入实验室进行医学研究，用于肺炎球菌的检定。其后，科学工作者相继发现中国地鼠对黑热病和许多致病性细菌以及病毒都有高度感受性，并且发现中国地鼠有自发性糖尿病遗传倾向，可以建立成糖尿病模型。目前，中国地鼠已为细胞遗传学、辐射遗传学、实验肿瘤和分子生物学等许多领域所应用，在医学和生物学等实验研究中，占有重要的地位。常用的实验动物遗传检测的方法有形态学方法、免疫学方法、生物化学标记方法等，如在国家标准中大小鼠遗传检测近交系用生化位点标记基因的方法。随着分子生物学的迅速发展，分子遗传标记技术在实验动物的遗传检测中得以广泛应用，其中包括限制性酶切片段多态性标记(RFLPs)、随机扩增多态性DNA标记(RAPD)、扩增片段长度多态性标记(AFLP)、微卫星DNA标记(MicrosatelliteDNA)、单核苷酸多态性标记(SNPs)等。其中微卫星DNA标记多态性丰富，均匀分布于哺乳动物基因组，检测技术成熟，稳定性好，重复性高，可比性强，已成为目前动物遗传多样性评估和遗传监测研究的首选标记，但是这一源于我国的实验动物资源——中国地鼠的基因组等基础资料报道甚少，其微卫星标记以及微卫星标记在中国地鼠分子遗传学分析中的应用尚属空白，成为影响中国地鼠作为疾病模型进一步深入研究的因素之一。开发微卫星遗传标记，为纯系中国地鼠遗传检测及种质资源保护、基因流动、群体变异和遗传连锁图谱构建等许多工作提供研究手段；且将加速我国实验用中国地鼠的标准化建设。而且现有关于筛选微卫星标记的方法中，在提取出物种的基因组DNA后，需要将其打碎成各个基因片段进行研究，目前通常的采用的方法是酶切法，其缺陷是对温度和时间有一定要求，需要查找适当的酶切位点。当物种的全序列未知时，如果酶切位点不单一，酶切片段大小就很难控制，并且很难辨别所切割片段是否是自己所需片段；如果酶切位点处于某一类微卫星的中间部分，则可能根本钓不出该类微卫星。
发明内容本发明为了解决现在未见有关于中国地鼠微卫星标记的报道，以及现有筛选微卫星标记的方法中大都采用酶切法将物种DNA基因组打碎，存在上述缺陷的问题，提供一种中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法。本发明是采用如下技术方案实现的中国地鼠微卫星遗传标记，所述微卫星标记的编号分别为Chm35、Chm93、Chml47、Chm79、Chml20、Chml62、ChmlO、Chml08、Chml15、Chml24、Chml34、Chml4、Chml40、Chm48、Chm54、Chm9、Chm91，上述17个微卫星核苷酸序列及其两端的引物序列如序列表所记载；微卫星核苷酸序列两端的引物的退火温度分别为5rC、58°C、58°C、5rC、58°C、58。C、59°C、59°C、59°C、59°C、59°C、59°C、60°C、60°C、59。C、59°C、59。C。引物的退火温度对PCR扩增的结果有很大影响，如果退火温度选择不合理，可能出现假阴性结果。在本发明所述的退火温度下，PCR扩增产物经电泳检测后的数据能为中国地鼠遗传性的判定提供精确依据。筛选所述的中国地鼠微卫星遗传标记的方法，包括提取中国地鼠的DNA基因组，本发明的创新是对中国地鼠的DNA基因组釆用超声波进行打碎，使得超声后的片段大小在500bp-1000bp之间。该方法只需要很少的时间，对温度没有特定要求，不用查阅酶切位点，而且由于是随机切割，不会完全损害某一类微卫星，只要控制功率和时间，片段大小就基本确定。本发明首先提取中国地鼠的基因组DNA，4'C冰箱保存备用；然后利用超声波打断DNA，电泳回收500-1000bp的DNA片段；构建中国地鼠基因组微卫星富集文库，从构建的微卫星文库中挑取阳性克隆提取质粒进行测序，后经筛选得到17个多态性丰富的微卫星标记，根据微卫星重复序列两侧的保守侧翼序列设计引因组DNA进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，根据检测数据及图谱确定每个个体的基因型；当采用多对引物来检测中国地鼠的遗传性时，数据更可靠、系统更稳定，避免了采用一对引物检测时，不能完全反映物种遗传性的缺陷。本发明所述的中国地鼠微卫星遗传标记及筛选方法稳定性好，重复性高，可比性强，操作简单，为中国地鼠遗传检测及种质资源保护、基因流动、群体变异和遗传连锁图谱构建等许多工作提供了研究手段，且将加速我国实验用中国地鼠的标准化建设。具体实施方式一、构建中国地鼠基因组微卫星富集文库1、DNA提取(1)取中国地鼠尾巴组织，用剪刀剪碎，加入500nl裂解缓冲液，混匀，加入蛋白酶K至终浓度100L，混匀，于5(TC缓慢摇床消化过夜。(2)将溶液冷却至室温，加入等体积的Tris饱和酚，缓慢颠转直至两相混合成乳浊液。4'C13200/rpm离心IOmin，用lml枪头缓慢将上清液移至另一离心管。(3)加入等体积的Tris饱和酚和氯仿，摇匀后4'C13200/rpm离心IOmin，将上清液移至另一离心管。(4)加入等体积的氯仿摇匀后4°C13200/rpm离心10min，将上清液移至另一离心管。(5)加入1/10倍体积的醋酸钠(PH5.2)及2倍体积的-2(TC无水乙醇，缓慢颠转离心管，可见白色絮状沉淀，用枪头将DNA钩出转移到另一EP管。(6)剩余没有沉淀的DNA放入-20'C冰箱中静止2-3小时。(7)7(^乙醇洗涤DNA沉淀2次，最后100%乙醇洗涤，于室温下风干DNA(尽量避免完全风干，否则很难溶解)。加入TE缓冲液或ddH20后，于4"C缓慢摇动溶解储存于4'C或-20'C备用。2、超声波打碎基因组DNA(1)用纯水清洗变幅竿头，把离心管放入冰水混合物中，先用1%的盐酸，再用O.1M的NaOH，接着用纯水分别超声一次2s，20%的功率，超声2s，间隔ls。(2)准备多个样品备份以做梯度，分别超声6s、8s、10s、12s把探头伸入上述提取出的中国地鼠DNA溶液中，探头应在整个管子的中心，以使每个点的超声波强度相等，从而使超声后的DNA片段长度更集中。(3)电泳，看超声后片段大小是否在500bp-1000bp之间。(4)将超声后DNA放入65'C的温水浴中，逐渐冷却。3、DNA末端补平将超声后的中国地鼠DNA溶液放入65°C水浴中缓慢冷却，以使超声过程中分开的双链复性。由于超声会造成DNA链的断裂而形成粘末端，为了不影响DNA与接头的连接，需要对其进行末端补平从而形成平末端。把盛有上述混合液的EP管放入37'C水浴中温浴lh。所用的补平体系如下表l所示，成分(composition)用量Oil)DNA320dNTP(lOmM)610XT4DNA聚合酶缓冲液40T4DNA聚合酶(7.9u4il)2ddH2032总体积4004、沉淀浓缩DNA和胶回收(1)向上述体系中加入40nl3M的NaAc和lm1-2(TC的无水乙醇，放入-2(TC冰箱中静置30min;(2)离心，13000rpm，10min，(室温，有利于DNA沉淀)，弃上清；(3)向沉淀中加入70%的乙醇，颠倒数次；(4)13000rpm，4'C离心5min;(5)弃上清，离心机甩一下，吸去上清，室温静置15min，以使酒精挥发干净；(6)向管中加入60^UddH20溶解，3nl上样电泳；(7)配置2%的琼脂糖凝胶；(8)4'C恒温电泳3h;(9)紫外下切500bplkbp的片段，称重；(10)QIAquick试剂盒回收DNA。5、定量加linker关于linker与insert比例的计算方法5Q0x:=跳130bp2.5k在MgZ+和ATP存在下，T4DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端连接成重组DNA分子。按照接头与回收DNA100:l的比例，在10nl的反应体系中加入回收DNA片段；将碱基互补的寡核苷酸A和磷酸化的寡核苷酸B等摩尔混合，98'C变性1min,60'C退火结合2min，冷却至室温形成具有平末端的接头。采用双链接头2pl(5(^M)、10xT4DNA连接缓冲液lpl、T4连接酶Gu/pl)(购自Promega公司)1^1、总体积10p的体系，在14。C条件下连接16小时，70°C灭活15min。接头序列为SNXForward5，-CTMGGCCTTGCTAGCAGMGC-3'SNXReverse3，-AAMGATTCCGGAACGATCGTCTTCGp-5，正向链的5'端带生物素标记，反向链的5'端带磷酸根。6、杂交考虑到碱基互补配对和重复序列拷贝数起始碱基顺序的差异，将同类重复兼并为一种重复代表，2-3碱基重复可以兼并为以下14种类型，14种探针如下表2:1.5，-biotin-ATAGAATAT(AT)12-3，；2.5，-biotin-ATAGAATAT(AG)12-3，3.5，-biotin-ATAGAATAT(AC)12-3，4.5，-biotin-ATAGAATAT(GC)12-3，5.5，-biotin陽ATAGAATAT(AAT)8-3'6.5，-biotin-ATAGAATAT(AAG)8-3，7.5，-biotin-ATAGAATAT(ACG)8-3'8.5，-biotin-ATAGAATAT(AAC)8-3，9.5，陽biotin-ATAGAATAT(ACT)8-3，10.5'扁biotin-ATAGAATAT(ATC)8-3，11.5，-biotin-ATAGAATAT(AGC)8-3，12.5，-biotin-ATAGAATAT(GCC)8-3，13.5'-biotin-ATAGAATAT(AGG)8-3，14.5，-biotin-ATAGAATAT(ACC)8-3，把上述DNA在96。C变性10min，迅速冰浴5min，分装，分别加入Tm值相近的探针，以DNA16pl;HB缓冲液52)il(20xSSC);探针(luM)各2jil，ddH202化1:总体积100W的杂交体系，分别放入低于Tm值2。C的水浴中杂交6h以上，间隔摇动；降低2'C重复杂交一次。7告隹,、田果(1)把上述杂交过的lOOnlDNA加入到盛磁珠的管中，加入20(Hi1HB杂交缓冲液，43'C摇床上摇动3h，间隔震动；(2)将离心管放在磁力架上lmin，用移液器吸弃HBbuffer;(3)加入200(jl2XSSC和0.ly。的SDS溶液，室温下静置5min，然后放在磁力架上lmin，弃上清；按照上述步骤并依次在45。C、60°C、9(TC重复三次。8、PCR扩增把两次杂交富集洗脱下来的单链DNA做PCR，采用5(V1反应体系。PCR反应体系如下DNA34^1dNTP(10mM)5(J10xTaq聚合酶缓冲液5jtlTaqDNA聚合酶(5u/pl)1^1MgCl2(25mM)%U上游引物(10pM)0.4plddH200.6pl扩增程序为94'C预变性5min;94'C变性30s，62'C退火30s,72'C延伸45s,35个循环后72'C补齐7min，获得双链目的片段。PCR反应结束后取3pl反应液在2W琼脂糖凝胶中电泳检测。QIAGen试剂盒切胶回收纯化PCR产物。电泳检测结果。Qiaquick试剂盒胶回收，步骤同上。9、插入片段与载体的连接(1)外源DNA与载体的比例根据外源片段和载体的分子量大小，计算连接体系中需要加入的各DNA片段的含量，一般插入片段DNA分子摩尔数载体DNA分子摩尔数-38:l，(2)连接反应体系(10nl)如下表3所示，成分(composition)用量(nl)回收DNA32XT4■LigationBuffer5pGEM-Tvector(50ng/nl)0.5PromegaTDNA连接酶(3u/jil)1ddH200.5终体积10(3)在PCR仪中4C连接过夜，然后70'C酶灭活15min。10、电转化与涂板(1)从-80'C冰箱中取出感受态大肠杆菌放在冰上解冻；(2)将3(Hil解冻的感受态大肠杆菌转入1.5ml离心管中，小心混匀和洗净的电击杯一起放在冰上预冷；(3)取3yl纯化后的质粒于预冷过的离心管中，小心混匀，冰上放置；(4)打开转化仪，调至Manual，电压调至2.lkv;(5)将上述混合物转移至预冷过的电击杯中，轻轻混匀，使混合物均匀进入电击杯底部，一定要避免气泡产生；(6)将电击杯推入电转化仪，按下piilse键，听到短暂的蜂鸣声，转化时间为4.91113，然后向电击杯中迅速加入lml的SOC液体培养基，重悬细胞混匀后转移到一灭过菌的EP管中；(7)37'C,120rpm复苏lh(保菌见详细);(8)在超净台中取20nl复苏后的菌液与180iil的S0C混合，在超净台中把涂布器用酒精灯烧一下，将上述混合物均匀涂布在涂有8(V1X-Gal,80filS0C，20^1IPTG的培养基上；(9)37t:温箱中培养14h;(10)克隆培养到适当大小后，挑取2X96个克隆于2个96孔板中，230rpm37'C培养过夜。二、含微卫星序列的阳性克隆的筛选、测序及微卫星引物的设计1、质粒提取(1)将菌液转入深孔板中，室温1000g离心lmin，弃上清；(2)向沉淀中加入200pl冰预冷的溶液I(溶液中己经加入Rnase)重悬沉淀，室温放置10min:(3)然后加入新鲜制备的溶液II200nl(0.4MNaOH，2Y。的SDS比例是1比1)轻轻颠倒混匀数次室温下不超过5min;(4)然后各加入20(Vl冰预冷的溶液m,轻轻颠倒数次混匀，冰浴30min，4'C1300g离心20min收集上清；(5)向上清液中加入80%体积160^1的异丙醇，摇匀，离心1300rpra,20'C离心20min;(6)加入75%的酒精200^1,混匀，13000rpm，4'C，5min,弃上清，室温下蒸发掉痕量酒精，用40plddH20溶解沉淀。2、测序(1)将上述准备好的模板和384MIX按适当比例混合在一起，封上胶垫，用滚轴压紧，漩涡震荡器上混匀，1000rpm4TC离心1分钟。(2)PCR仪上进行测序反应。扩增程序如下94'C预变性5min:95'C变性15s，50'C退火15s，60'C延伸lmin30s,共35个循环。(3)在热循环后，待温度降到10'C以下时，将PCR板取出，4'C离心，近1000rpm时停止，将PCR板取出甩一下；(4)向每孔中加入15nl的95。/6乙醇乙酸铵混合液；(5)封胶膜，在旋涡震荡器上震荡混匀，然后放入-2(TC冰箱中静置20miii;(6)将PCR板取出，配平放入离心机，4°C，4300rpm离心30min;(7)离心后甩出孔中液体倒扣在吸水纸上，倒甩(待离心机转到300rpm时按下STOP键,转速不能过大，时间不能过长)；(8)将384PCR板取出，用连续加样器向每孔加入75W的乙醇33nl;(9)封白膜，4。C，4300rpm，离心15min;(10)离心后将384PCR板取出，甩出孔中液体，倒扣在吸水纸上，倒甩，(待离心机转到300rpm时，按下STOP键，时间不能过长，转速不能太大)；(11)将PCR板取出，放入抽屉中避光静置30min，至乙醇挥发干净；(12)向每孔中加入甲酰胺溶液8pl，封胶膜；(13)放入离心机离心，等DNA完全溶解于甲酰胺后，上机测序，用phred/phrep/consed等软件进行拼接处理，筛选出135个含有微卫星序列，然后又随机挑选出40个含有微卫星序列，用primer3.0设计引物。3、筛选具有多态性的微卫星引物先用单个个体进行PCR,后用混合DNA的PCR,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)观察多态性；根据PAGE结果，选取多态性好的引物并在正向链的5'端进行蓝色(FAM)荧光标记。随机选取48个个体，提取DNA并进行定量，模板浓度稀释为10ng/nl做PCR，上机荧光扫描，经过数据处理最终筛选出17对引物。经过富集文库构建与对引物多态性的筛选，得到17对多态性较高的微卫星引物，现对其引物序列，退火温度，观察杂合度与期望杂合度，多态信息含量等参数总结如下表4所示:表4<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table>三、利用上述得到的中国地鼠微卫星DNA标记分析中国地鼠SYB1的遗传相似性1、材料与方法1.1实验动物山西医科大学实验动物中心培育的中国地鼠SYB1群体，随机取24只地鼠作为研究对象，取尾巴组织作为实验材料。1.2基因组DNA的提取用常规酚氯仿方法提取中国地鼠基因组DNA，提取方法同前。1.3微卫星PCR反应所用微卫星引物序列和退火温度见表5。PCR反应总体积为10pl，其中模板DNAl.Opl，上下游引物各1.0pl，10xbuffer0.^1，dNTP0.7^1，rTaq酶0.0^1，ddH205.42^1。PCR扩增程序为94。C5min，94°C30s，退火45s(根据不同引物采用不同的退火温度，具体温度见表24)，72°C45s，共35个循环，最后72'C20min。在每次PCR扩增时，均设一个阴性对照，以ddH20为模板，其他条件均相同，以确定每次PCR过程中均不存在由于外源性DNA污染所产生的不真实的电泳条带。取2til的PCR扩增产物加2^上样缓冲液混匀后，在2%的琼脂糖凝胶上进行电泳分离，电泳缓冲液为lxTBE，电压180V，电泳时间约为15min。1.4毛细管电泳取水平电泳有条带的PCR产物进行纯化，进行STR扫描，即毛细管电泳。纯化的步骤如下(1)根据水平电泳的结果，移取35^1PCR反应产物至一新的384孔板中；(2)每孔加入95%的乙醇乙酸铵混合液(30:1)，乙醇乙酸铵混合物与PCR产物的比例约为3:1，使乙醇的终浓度为70%，混匀放在-2(TC冰箱中冷却20min;(3)4300rpm，4°C，离心30min;弃上清，倒扣在吸水纸上放入离心机倒甩至500卬m;(4)每孔加入33^70%的乙醇，混匀，4300rpm，4'C离心15min,倒扣在吸水纸上放入离心机倒甩至500rpm;(5)避光晾干，约20min。加入有内标GeneScanTM-500LIZTM(AppliedBiosystems，Inc.)的loadingbuffer(去离子甲酰铵)8^1，上机荧光扫描。21表5编号微卫星引物序列退火温度(。c)Chm35F:AGGCTGCTTCCTAAACCCAT951R:CTGGGAAGGCTGAACTCAAGChm93F:TCTGTGTGTCTGTGAATGCG58R:GGATGTAAGATGGCTCCGAAChml47F:CATCTGGGCTTTCAATGGAT58R:GCTCCCTAAATAACCCCCAAChm79F:AGGGGAGATCTTGGGTCAGT51R:AACATGGAGGAGCACAAACCChml20F:GATAGGAGGGAGCAAAAGGG58R:CCTGAGAGCCTCAGAGCAGTChml62F:TCTTCCCTTCACAACCCAAG58R:AGCAGTGCCCTTTGAAACATChmlOF:GGCTGGTGATTTCAATGGTT59R:GTTCTTAATGGATCTACCCTGGGACCChml24F:CAGATGCCCAAACTCTCTCC59R:GTTCTTGTCACCCCATGGACTACACC1.5数据处理1、荧光扫描结果用GeneMarkerV1.6(AppliedBiosystems，Inc.)进行基因型判读，用microchecker(VanOoseterhautetal.2004)，MStools(Park,S.D.E.，2001)检査数据的准确性，用popgene计算SYBl个体间遗传相似性。2、中国地鼠SYB1的遗传相似性分析用p叩gene软件计算SYB124个样本间的Nei氏遗传相似性，详见表6，由表可知，24个样本间的平均遗传相似性为0.9195，遗传距离为0.0805,进一步说明该群体的遗传形状得到纯化。此外，用上述方法还可以进行中国地鼠品种分析、遗传关系分析及标记辅助育种等，重复性好，是一种比较可靠有效的分子标记。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>序列表<110>山西医科大学<120〉中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法〈160>17<210>1〈211>903〈212〉DNA<213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220〉〈221>重复单元〈222>354…391〈400>1gctctcttgtgcatgaatttaccaaaactcaaaaaaatttctccaacaccgtcataccca60ttttctggaggtatagactgatctccacaaaaagtgaggaggtttgcctctttctagata120ggacaatgaagcttgctgttgcaacggggatgatgatgacc犯aaaaggggagagccagt180tggtgaatatgtaagaaaagtgtgaaggggcagccag卿gggatgggctggagtgttcei240ggctaaatatcaatttaggcaggctgcttcctaaacccatggctagtgttttatcactct300cctacctgttggcttgctgtcccctcctgaactctggtagcaaaatcaaaaaagtgtgtg360tgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtatgtgtgtaacaaatgcatgtgg鄉tca420caggataacacccaaggtcagttctctctaggatctggggcttgagttcagccttcccag480actgcacaggcacctctatcctatccactaagccataacgttggtctctagttactagtt540ttagtgtaaccctaagttcccctcccagaataacataattctcaaatagagaccacacct600atsttttagagagatacttca_caacaaattttatatttaaattgsattagacaaastgcc660ttctagaatgcaaaatttaagaattgcttaattacatggcaccactttaaaatatatatt720aagaatagatacataaatgcttgctaggtattggcagcagggatcctagctcacatagat780ttaattagttcttatgaaaggagccaagagtccagaagactttaataaaggaaacgaacc840ggggtagaaggatgcttctgctagcaaagccttagaagcactagtgcggccgcctgcagg900teg903<210〉2<211〉652<212〉DNA<213〉中国地鼠(Cricetulusgriseus)<220〉<221〉重复单元<222〉242…299<400〉2ggatctaaggccttgctagcagaagecaatcgaattcagatgctctggaggctactttta60accactaagccaatccagtageccttaattctttttagttatatttattcttttgtgtat120gcctggtgtgtgtgtatatgtgtgtctgtgtgtctgtgaaggtgtgtgtgtgtggggggttgtgtgtgtgtccatgccac犯tgagttttctccacccacacttcagataccttgaccttccctccctccctctctccaatgagttctatggtttcaagagccagatttgggaatttcac〈210>3<211>787〈212〉画〈213〉中国地鼠(Cricetulus<220><221>重复单元〈222〉233…292<400〉3cctggtgtgttgcgtatgtcgtgtgtgtatcgaacacattcctgtgaatccggagccatcataa_ga<caaggtaaaccacacaaatatatggriseus)tcgacctgca3gtccaca肌tttagattgaatctgggctttgtgtgtgtgtgtggttgctacat犯catgactcttgaactggagcctgatataaaattattttctttctcgccttctttagccccacct3gatcccggcggccgcagatcaagtcatggtaggggctcaatggatatgtgtgtgtg卿卿gggc卿ggtgagatgtagttgggttcccacttatctcatctactattctgttgtgcactcccc3gCt3gtggCgtgtctgcgatgtagatgtggtctgtgg3tggagatcac3ccgggggtcattacatcctcgtcttgttatccaaaggaaacttctgctaggtgtgtatgtaatatgtgtggtatgcagtgggacaacctcaacttgagtattcttcctccgactttttgccaaggccttaatgtggtgtg180gtgtgtatgt240tgtgtgtgtc300agctttaatg360gtt鄉cgtg420tcctgcctct480ctcagcctct540tgtgcttcat600ga652ctagtgattctgaagtccattttcctcaatgctgtcaagttgtgtgtgtgatcaggttccaccaaax:tccggttatttagtgaatgcctgtttttgcctccaggttgtgttctcctctttcattcaactctaaggccttgtgtgcaattttcaaatttgaggctattttttgtgtgtgtgctggacctgaagtcttttgcggagcaccacacttagcttgtggaattttaacctgggtggttctccttcttttattagacctagcagaagagacataatggccaatgagcttaaagactttgtgtgtgtgagttgtaggtaagaatactgtgaactcccaacttatttcttctttctccactaccccctgatttattctcgcttctgctactgttaaatc60aaccattctt120caatatagtc180attgtgtgtg240tgtaggtgcc300tgttgtaagc360agtcctctta420aataaatsLcei480agccagcttt540ttctatatac600atgtccacct660tttgcctgtc720gcaaggcctt780787〈210〉4〈211>811<212>DNA〈213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)<220>〈221>重复单元〈222>270…355〈400〉4gatctaaggccttgctagcagastgcgga^ccacatctcaacttctccaacaaccaccacg60atcaacatgcctggagagatctcccagcctgatcatgtggtctggtccatgttcaatatt120ctcttcatgaacttctgctgcctgggtttcatagcatatgcctactctgtgaaggtattg180tatgtgaacctcaagttttacttgctccagtggtacctggggtgcaggggagatcttggg240tcagtgtgagagtttatatgtattatctcgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtg300tgtgtgtgtgagtgtgtgtgtgtgtgagtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgctcc360tatgtggtataagcatgtgtgtataggtttgtgctcctccatgttagttgtcttcctcaa420ttacttcaccttattttttgagacaacgtctcacttcacttgaagtgtgcagtttcattt480agattagaccaacttgcctacaacaactcaggattggtcaatctctgtgccccagcatgg540ggactagcatggtctgcctggtccccatctcctgagttacagagtgaaaagctgtatgtg600gatttgatgtgtatgctgaggaggtgaactcaggttctcatgtttgcatagcaagccctg660taccgagtaatccatgccccaaactctaagatgatttaaagaaacatatgtagttatctt720cagtgatgatttgatttaatttgtgtaggctaattttgtgcttgaagatttattactgct780catgatctgcttctgctagcaaggccttaga811<210>5〈211〉931〈212〉DNA<213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220〉〈221〉重复单元<222〉376…432<5gatctaaggccttgctagcagaagctgggccacgtgtaccctggaaggttagctattctt60caaaagccactggaatcagcaaatgccatcagcatttccccctagcaattctgatagacc120tttggtcttgagtcttagaaataaggggtggtagcactgactgctgaggagctctgtccc180tcgcctgttgtttagcttga-actgtgctggatgtgtcaatttaatagcctcccagctata240aacaacagactagggcagtgcttcagtccggaaaacaaaagagctcacctgcaactaata300gaatattaattacttcaagagaagctgggataggagggagcaaaaggggcaagagaatga360aggcatggggaaggctgtgtgtgtgtgagtgtgtgtatgagtgtgtgtgtgtgtgtgtgt420gtgtgtgtgtgtgaacatgttaatcaagttgttcagacagtgttgaggatgcatgacttt480aagggtaaagacaagtcaggataaagggaagttacaaaaccaccgaacactatcccctga540ctgctctgaggctctcagggaatggacactcaggcacctggattcttgggagtactgggg600cttctgcgcaggggccattgattacaggcacatcaaacctctttgctggggcagtgaaca660tgtctctgagggactccagaccacaggccctctgggttcaggtcccatttccacccatga720ctctttcatctccaacagccgtgagtgtgctaaatgtcttgatagaggaggtcatatttg780ggaatattcttgggattcaataggactctggacaataagttttcccctcattgctccccgg840说明书第17/23页tagatgacttcaatcaaatccatgaagtcttgtttggttttgcttctgctagcaaagcct900tagaagcactagtgcggccgcctgcaggtcg931<210>6<211>606〈212>DNA<213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220〉〈221>重复单元〈222>167…214<400>6gcctttctggctattacaaatagtgccagcattttcctcttgattttgactatt,ggttct60gaaatcaacactcagaatcttcccttcacaacccaagcactgctgtttctgaaaagaact120gccattccataaataaatatgtcctagagtcaatcaatatccaacagtgtgtgtgtgtgt180gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtactttaagggccctctgagtgctgga240gcagaagtttctttgcaatggcatcacaggtgaatttctctattcagatgatgtttcaaa300gggcactgctcattgaaatcctctatgtaaacactccagaacctttttcctaaagagttg360aatctagaattatcatccgatgca肪ggtcccagagaaggagcctactgtgtgtatgagg420atcagtgaggaggttggagtggcctgcatagagt犯gtgagggatgaagataagaatctg480ggaatggaagggtttgacctcttgccctgagggaggcaagacgcactggaggaattgtgg540gcatatgagtggcatgccccaactaggattgaacaggtcatttgcttctgctagcaaggc600cttaga606〈210>7<211〉530<212〉腿<213〉中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220〉<221〉重复单元<222〉217…280<221〉重复单元〈222〉337…357<400〉7tctaaggccttgctagcagaagccaccagagtccaccttctcttccatgtttatctattt60cctgagtctttgctcagggcaagttttcagcctaactgggcaatgggctttcccaccgag120atcctcagagcagatgccccacattgtcctgttaaacagagtttgggacatattttccct180ccaatagttgtaggctggtgatttcaatggttaggagtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt240gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgcatgtacatacagagacca300gaagtcaatgtcagttcctctattattctctctaggtttttttttttttttttttttgag360acagggtctctccctgaacccgggcttgctgtttcggccggactgggtggcgggtggcta420atgtggtcccagggtagatccatttctcccctttcccagatgtacccatctgtgcacaac480tcttccataggggctagggatccaaactcagggtgtgtgcttgcacacca530<210>8〈211>642<212>DNA<213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220〉〈221>重复单元<222>392'"430〈220>〈221〉重复单元〈222〉431…472〈400>8tgctagcagaagctgataatcaaaattctgtgccaggatatctcetttttaamttttcca60aacgttggctctccacactattaatatctccatttaagaagaaactgatgctttgagagc120tctgagtctatgaaatctcaacaataccatcacctaLaacaetgaicctgcacattggcaaca180ctaactaacatatcaacacagatggaagaaatctcccagggtcttagatgaagaaccata240ggttatcaatggctgctaagagagggagagtcagtcgttcccagggacaaggtgatctaa300tcccaag犯gtctaccctaaacacatatgcettaggatcaa犯ctaaatggactccgtagg360ttgtatttatctatgcatatatgtgcctgtatgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt420gtgtgtgtgtg卿g卿gag卿gag卿gag卿g卿gagagag卿gaattaaaga480attggccattattttgaggggtacacaaggaaaattgtgagtgggagaga3gagatggaa540ttgctgtaaatatagtactcaagtatgaaattctcaaiaatgagtttaaatttttaaaata600aHaaaaacagiatagcttatgcttctgctagcaaggccttaga642〈210〉9<211，〈212>DNA〈213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220〉<221〉重复单元<222>171…220〈400>9catgctccggcaggctggccccctgagatggtgtgtgtgtctatgtgtgcacaggcagctg3g33Ctg3gtaagttcccacctgaaggcactgctcaactg3C犯CCtggtC3ttg3tggctgtgcatttgaacctctcctatcaatgaacgccatggccatgaactcccatagatetcsiagtgtgtgtgtaggtacctgcacaaaacaccctctcctaaatccagaggtcaggctgtcttgaattttactcaattcttttacatatttcccaagcctgaatagagtgcEicgagtgtgctagtaggatctataggtaaccagccaacactcgtgtgtgtgtccagctataacaaccagccatacctccacacccactttccactcactgcc肪t朋gcata犯t犯幼ctgagggttccagtcccatccccccaggtatctaggccttgctaggatgatax:tggattttttgtgtgtgtgtaacaccccaccctctccagcctgggctccactttcacaagctgaggsatgccac肪gggctsctacataaacccagacacctgcacggaaggcctcttcgagcagaagcgtcctgtctcctttacgtgtggcttgtgccccatcccccagcaaacctgggctggigactatgcgtcctgctcagtgccggaaaatctgcagtacacccttcctggactcactgggctctgtggaagctaggcttctgctagatatgtacat60acctcccaaa120gtgtgtgtgt180tgtgtatgtc240sgctggagtt300tcctccagaa360ttttaaggaa420gtgcggagtg480aaggcatctc540tggtcaaagg600tttcacaata660gtcttggcag720ggaaagcaga780tgtctgggga840caaggcctta900902〈210〉10〈211>771〈212〉DNA<213〉中国地鼠(Cricetulusgriseus)<220>〈221〉重复单元<222>355…404〈400>10gatctaaggccttgctagcagaagcattgtcctttagacgatagaatctcttataaataacgacacaggaagggtgcttgtttcatagtattcccctggcccttaagtcacagaagtgaaacacagatgcccaaactctctccacggggcaggaaaaacagggatgcattttctaaeigacgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtcaggccagaggtgtcggatcccctaagaacggtgctgccatgaaaagtggtgtagtccattactatctcgggttcattactgtgttctagctgtgtcctaaggcagtgttcttcaaattt60aaactaacacagaatcccaaagcaagaagt120agggtggtggctcaaacccctcctaagcag180gacttgggactctgagagatctggtatgaa240aggaagcagtaactgtgagtttcactcatc300ttatttttagtaattttgagtgtggtgtgt360gtgtgtgtgtgtgtaaatgcaggtgctgtg420catagttagagcctgttgtgaaccacasica480ggggtgacttccaagattsgaactaaagca540aatcgagctttgtgccctttccatgtctgc600ca/ttgctactgtcctcactcatctgagagatttgagtccataaaacttagtgtgttgtcaggcttctgctagcaagaccttagaatgact<210〉11<211>657<212>DNA<213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)cttaacatgaaaataccttagttttagtat660gcttccacacttgaccattatagactcata720agtgcggccgcctgcaggtcg771〈220>〈221〉重复单元〈222〉383…428〈11ggattctaagctaaacagaccacatggtgaacaaceitgg"tttgggaagagagatttgttttgtgtgtgtaagctggagttagacatcactctgaatgcttgccttgctagaagtagggcagtacatgtgcacgagtaatgtatgttttcacatgagcgcaacaggttagcccagctccagctgctagcaacagaagcgctgtgaggtggccagactcccaccacatacatgtgaaaagtaagagacccagattgtgtgtgggtacccacattattcctggagttggtgtaggccttagaacttgagaagccggagcttggcaaattatccgacaca犯atgaaaaaggacagatccctgatgtgtgtgtggaggtcagaagttctgggaatgtggactattgactagtgctgagaitaggacctcaccccttccaatttccaaatgacacaatttattcaaattgtgagggtgtgtgtgtggagggtgttgccaaacccggggggacctccggccgcctgcggattcccga60ccccagagcc120acaatacacc180aaatEtaatgt240tgtgaccaca300ttaggtttaa360tgtgtgtgtg420ggattcctgg480gtcctctgaa540tggcccttcc600aggtcga657<210〉12<211〉430〈212〉腿<213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220>〈221>重复单元〈222〉259…316<400>12tcgacctgcaggcggccgcactagtgattcacacacctacactgatagtttttaggtactctgggtctcaggatatcctgctagttactgaccagagtggaacattaggatctggagtgttaaggccttgctagcagaagccttctgaag60gccagataccttcctaagataaatcatgtg120acccatgctagatactgaccccattcgtaa180tatgggtaatgtgagtttstccctacctaa24030c犯caaaagtactcataaacacacacacacacacacacacacacacagagacagagacagggtatcctgtgtaatctgcttaagaaaggagactgtggggacacacacacacacacacgcacacacaaac300agagaactggataggtgtcaagtactacta360gattcctttcagtacaccaaatatagggct420430〈210>13〈211>724<212〉DNA<213〉中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220>〈221〉重复单元〈222〉168…205<400>13ggatctaaggcttgagttcttgctgctttctgtgtgtgtgttttctcctaggtgcctttgaacaaaataagtaat犯tttatccacggcctagacggagtggcttacattcctcttaattgtcgccttgctagcgggaatgaactctccagccttgtgtgtgtgctttatgggttggtgcagccattcsLgatsLgatatttgttttgcacctgttttctgtcccaaattttataaattsagcttcagaaccgagctcaggtcctccttataggtctgtgtgcEitatccagtgatcatttcactggctctgccttcgatttgtctcagctcagcaccctgattccaactgtttgattgctagcaagtggatttgcatggaagagaatttcaattcctggaggtcagaaacaacteacttgatttttaatcttctatttttggggtgt犯actgcactsgccgtttactatggcttagecttagaatgctggttttgagcaagctsgatttaaagtgaagacaacsaggtcttcagcttagaaaaactctattcttcgggttcatgccccccagcccgccccaaataggcttcttacgact叫tgcgagctacctgg60tgatcttagc120tgtgtgtgtg180tttgtggaag240gttggcaaca300aataatctaa360ctttccccag420tgaaaatgga480ctcattggtg540aacacacaga600tggctagctc660gccgcctgca720724<2脂4<211〉547<212〉DNA<213〉中国地鼠(Cricetulusgriseus)<220>〈221〉重复单元〈222〉369…448〈14agaagctcctccttcccctctccaggcatgccatgaggtcatttcattgctaacgcttgt60ttgccattcttgtgccatctgccatgaggttgagctacggtgcttagactttctgcctcctcataagtacccagtttggggatattttattgaga犯acattaggtaaatgatagtcaccccELggccaeiaggccttgaggtggagttggatgaaccacctctctctctctctctctctctgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtccgtccctgcctacctctttattttggactttccttaga〈210>15〈211>799〈212>DNA〈213>中国地鼠(Cricetulusgriseus)aatgtagccaagggggttcttgccagagcc120aaaaccgtaagttaaataagcctcttttct180tataataaagaaaaccaggctaatcaaaag240aaaacagtgtttgtgtggctagactgaagg300gtaggaggcttcagatgaacgtgaaccacc360ctctctctctctctctgtgtgtgtgtgtgt420acacatgtggatgttagaggatagctgtca480cccactcagtttccgcttctgctagcaagg540547〈220>〈221>重复单元〈222>326."367〈400>15gatctaaggccttgctagcagaagccgaatctcaaatccattcactctggactgttttctccagctgtgcactaggcactgggccaggcagggcagcaagacagtgcagtgaggaaaggcgatgatccccagcacctacatggtaggagactgacctccacacatgtcgtggcctacacacacacacaatttt肌atactaaaaaagsicctgaactcagtgccaacacaggttgctgagactgtgataatcacttcatgtcacatagagcgcactctgaacagaagagcacgcctggctttacttgctatggccgaaggaggttcataaagcccctgtaatcccagtaatccagaggcagcctcaaaccaaaacagagcctaggagatgactgctagcaaagccttaga〈210〉16<211〉648<212〉DNA<213〉中国地鼠(Cricetulusgriseus)ttaat犯atctctccaaeiaggccacttaca60caaatatttcttcagcctctgtgttgagca120cttttgtccttaagatctgtcttatggaag180acctggcaccaagcctgatggcctgagttt240agataacagactcccacaagttgttgtcct300cacacacacacacacacacacacacacaca360ccatgaaagatatttatctttgcagagaag420ggggtagattgaggtaaacttccaagtttc480acttctatgttaccagagacttcacaacaa540cacagagtctgtagcgaggaaggaaatgac600ttgatgcttctgagcagagtacactggcgt660gtgcaggaggagcagatcctgagttttagc720ctcagcagttagagcacttaccatgcgctt780799<220〉<221>重复单元〈222〉94…135<400〉16tctaaggccttgctagcagaagcttactaagtcttcaagcagctttaaaggaccctggta60aagacagatcctctctctctttgtctttgcctctaccaaatctgtctctgtgccttttatttgcttgtatttttcatgtaccagataaacttccctgggaccgacccatttaggccttattattctctctctctctatctatctatctatctctccaagtcgctgcaacctggatgaatggcagcagctctctgttcaattgtctgtctgtttgcatgtgtcagagtattgaaga_gcatgct犯accacttgtcctgtagataccattctttttcaaacac犯aaaggcagctgatgtgtctccaatttaeigtacaagtgagatgaatgggacccatgcaagtattcatcctctcaacgttcccacattcaaacactccctcatctgaccatgcaaccctctctttccctctctctctct120ctctcagagacactctggcc180tggacttgctcaggactgtt240tatcccttgctgtgtgtgtt300ctaaaatggcaaaattaagg360tgtgaatgttttcagtcaag420tgtttttggcaaacccaaag480aaaaggtccaaagattcact540ctctcttcctcatctggtac600ctgtcagc648〈210>17<211>614〈212>DNA〈213〉中国地鼠(Cricetulusgriseus)〈220>〈221>重复单元〈222〉104…145〈柳>17taaggccttgctagcagaagcacaaaccaagcaacaagtggaaattttggaigatgaaaaatgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtggcgaactgaccaagcagaagacagaatatcaagg3幼atactaatcagg朋gag肪gsgcttggcaagaggcaaaatagaaggatccsggggattataagaaatcaaactgatatattgtagccagaaagaatggtcatttaatgcaagagcatatagttaggatgttgacaaca^aasgcaascta/tggtggttcaaactactcatcatatgagtctgctttaaggaatgtcccctctattgaagcaaggccttagacaaaaaaaatcaactttt朋肪taaaaccs60ctcaatg3atccagtgtgtgtgtgtgtgtg120ggggcgggtagtggacagtatcactaatat180ttaagggicaaggttgagg犯atactacatg240cctcaatgtctaagaattctgagatataac300aga卿gggacctgaaatsaa^tt犯agg360tattccccacCCCCCC8CC3ccaaatctga420gatcacagaagaagtgctctatgacatatg480gaagaaatattaaaaactgtaagaggccag540ccagaaggccaeigaggaagsggaaggcaca600cctatggacctcccactatccgcttctgct66061权利要求1、一种中国地鼠微卫星遗传标记，其特征是所述微卫星标记的编号分别为Chm35、Chm93、Chm147、Chm79、Chm120、Chm162、Chm10、Chm108、Chm115、Chm124、Chm134、Chm14、Chm140、Chm48、Chm54、Chm9、Chm91，其核苷酸序列分别如下Chm35gctctcttgtgcatgaatttaccaaaactcaaaaaaatttctccaacaccgtcataccca60ttttctggaggtatagactgatctccacaaaaagtgaggaggtttgcctctttctagata120ggacaatgaagcttgctgttgcaacggggatgatgatgaccaaaaaaggggagagccagt180tggtgaatatgtaagaaaagtgtgaaggggcagccagagagggatgggctggagtgttca240ggctaaatatcaatttaggcaggctgcttcctaaacccatggctagtgttttatcactct300cctacctgttggcttgctgtcccctcctgaactctggtagcaaaatcaaaaaagtgtgtg360tgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtatgtgtgtaacaaatgcatgtggaggtca420caggataacacccaaggtcagttctctctaggatctggggcttgagttcagccttcccag480actgcacaggcacctctatcctatccactaagccataacgttggtctctagttactagtt540ttagtgtaaccctaagttcccctcccagaataacataattctcaaatagagaccacacct600atattttagagagatacttcacaacaaattttatatttaaattgaattagacaaaatgcc660ttctagaatgcaaaatttaagaattgcttaattacatggcaccactttaaaatatatatt720aagaatagatacataaatgcttgctaggtattggcagcagggatcctagctcacatagat780ttaattagttcttatgaaaggagccaagagtccagaagactttaataaaggaaacgaacc840ggggtagaaggatgcttctgctagcaaagccttagaagcactagtgcggccgcctgcagg900tcg903Chm93ggatctaaggccttgctagcagaagccaatcgaattcagatgctctggaggctactttta60accactaagccaatccagtagcccttaattctttttagttatatttattcttttgtgtat120gcctggtgtgtgtgtatatgcctggtgtgtgtgtctgcgagtgtgtatgtatgtggtgtg180tgtgtctgtgtgtctgtgaatgcgtatgtctgtagatgtgaatatgtgtggtgtgtatgt240ggtgtgtgtgtgtggggggtgtgtgtgtatgtctgtggatgtatgcagtgtgtgtgtgtc300tgtgtgtgtgtccatgccaccgaacacattggagatcacaggacaacctcagctttaatg360aatgagttttctccacccaccctgtgaatcccgggggtcaaacttgagtagttaggcgtg420acttcagataccttgaccttcggagccatcttacatcctcttcttcctcctcctgcctct480ccctccctccctctctccaaataagacaaggtcttgttatgactttttgcctcagcctct540tgagttctatggtttcaagagtaaaccacaccaaaggaaaaaaaattaaatgtgcttcat600gccagatttgggaatttcaccaaatatatgcttctgctagcaaggccttaga652Chm147tcgacctgcaggcggccgcactagtgattctaaggccttgctagcagaagctgttaaatc60agtccacaaagatcaagtcatgaagtccattgtgcaatttagacataatgaaccattctt120tttagattgatggtaggggctttcctcaattcaaatttgagccaatgagccaatatagtc180atctgggctttcaatggatagctgtcaagtggctatttttttaaagacttattgtgtgtg240tgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtaggtgcc300tgtggttgctagaagagggcatcaggttccctggacctgaagttgtaggttgttgtaagc360acataacatgagaggtgagaaccaaactccagtcttttgcaagaatactgagtcctctta420actcttgaactgtagttgggggttatttagggagcaccactgaactcccaaataaataca480tggagcctgattcccacttatgaatgcctgacttagcttgacttatttctagccagcttt540tataaaattatctcatctactttttgcctctggaattttatctttctccattctatatac600ttttctttcttattctgttgcaggttgtgtacctgggtggctaccccctgatgtccacct660cgccttcttttgcactcccctctcctctttttctccttctatttattctctttgcctgtc720agccccacctagctagtggccattcaactctttattagacgcttctgctagcaaggcctt780agatccc787Chm79gatctaaggccttgctagcagaagcggaaccacatctcaacttctccaacaaccaccacg60atcaacatgcctggagagatctcccagcctgatcatgtggtctggtccatgttcaatatt120ctcttcatgaacttctgctgcctgggtttcatagcatatgcctactctgtgaaggtattg180tatgtgaacctcaagttttacttgctccagtggtacctggggtgcaggggagatcttggg240tcagtgtgagagtttatatgtattatctcgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtg300tgtgtgtgtgagtgtgtgtgtgtgtgagtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgctcc360tatgtggtataagcatgtgtgtataggtttgtgctcctccatgttagttgtcttcctcaa420ttacttcaccttattttttgagacaacgtctcacttcacttgaagtgtgcagtttcattt480agattagaccaacttgcctacaacaactcaggattggtcaatctctgtgccccagcatgg540ggactagcatggtctgcctggtccccatctcctgagttacagagtgaaaagctgtatgtg600gatttgatgtgtatgctgaggaggtgaactcaggttctcatgtttgcatagcaagccctg660taccgagtaatccatgccccaaactctaagatgatttaaagaaacatatgtagttatctt720cagtgatgatttgatttaatttgtgtaggctaattttgtgcttgaagatttattactgct780catgatctgcttctgctagcaaggccttaga811Chm120gatctaaggccttgctagcagaagctgggccacgtgtaccctggaaggttagctattctt60caaaagccactggaatcagcaaatgccatcagcatttccccctagcaattctgatagacc120tttggtcttgagtcttagaaataaggggtggtagcactgactgctgaggagctctgtccc180tcgcctgttgtttagcttgaactgtgctggatgtgtcaatttaatagcctcccagctata240aacaacagactagggcagtgcttcagtccggaaaacaaaagagctcacctgcaactaata300gaatattaattacttcaagagaagctgggataggagggagcaaaaggggcaagagaatga360aggcatggggaaggctgtgtgtgtgtgagtgtgtgtatgagtgtgtgtgtgtgtgtgtgt420gtgtgtgtgtgtgaacatgttaatcaagttgttcagacagtgttgaggatgcatgacttt480aagggtaaagacaagtcaggataaagggaagttacaaaaccaccgaacactatcccctga540ctgctctgaggctctcagggaatggacactcaggcacctggattcttgggagtactgggg600cttctgcgcaggggccattgattacaggcacatcaaacctctttgctggggcagtgaaca660tgtctctgagggactccagaccacaggccctctgggttcaggtcccatttccacccatga720ctctttcatctccaacagccgtgagtgtgctaaatgtcttgatagaggaggtcatatttg780ggaatattcttgggatcaataggactctggacaataagttttcccctcattgctccccgg840tagatgacttcaatcaaatccatgaagtcttgtttggttttgcttctgctagcaaagcct900tagaagcactagtgcggccgcctgcaggtcg931Chm162gcctttctggctattacaaatagtgccagcattttcctcttgattttgactattggttct60gaaatcaacactcagaatcttcccttcacaacccaagcactgctgtttctgaaaagaact120gccattccataaataaatatgtcctagagtcaatcaatatccaacagtgtgtgtgtgtgt180gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtactttaagggccctctgagtgctgga240gcagaagtttctttgcaatggcatcacaggtgaatttctctattcagatgatgtttcaaa300gggcactgctcattgaaatcctctatgtaaacactccagaacctttttcctaaagagttg360aatctagaattatcatccgatgcaaaggtcccagagaaggagcctactgtgtgtatgagg420atcagtgaggaggttggagtggcctgcatagagtaagtgagggatgaagataagaatctg480ggaatggaagggtttgacctcttgccctgagggaggcaagacgcactggaggaattgtgg540gcatatgagtggcatgccccaactaggattgaacaggtcatttgcttctgctagcaaggc600cttaga606Chm10tctaaggccttgctagcagaagccaccagagtccaccttctcttccatgtttatctattt60cctgagtctttgctcagggcaagttttcagcctaactgggcaatgggctttcccaccgag120atcctcagagcagatgccccacattgtcctgttaaacagagtttgggacatattttccct180ccaatagttgtaggctggtgatttcaatggttaggagtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt240gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgcatgtacatacagagacca300gaagtcaatgtcagttcctctattattctctctaggtttttttttttttttttttttgag360acagggtctctccctgaacccgggcttgctgtttcggccggactgggtggcgggtggcta420atgtggtcccagggtagatccatttctcccctttcccagatgtacccatctgtgcacaac480tcttccataggggctagggatccaaactcagggtgtgtgcttgcacacca530Chm108tgctagcagaagctgataatcaaaattctgtgccaggatatctcattttaacattttcca60aacgttggctctccacactattaatatctccatttaagaagaaactgatgctttgagagc120tctgagtctatgaaatctcaacaataccatcacctaaacaagacctgcacattggcaaca180ctaactaacatatcaacacagatggaagaaatctcccagggtcttagatgaagaaccata240ggttatcaatggctgctaagagagggagagtcagtcgttcccagggacaaggtgatctaa300tcccaagaagtctaccctaaacacatatgcataggatcaaaactaaatggactccgtagg360ttgtatttatctatgcatatatgtgcctgtatgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt420gtgtgtgtgtgagagagagagagagagagagagagagagagagagagagagaattaaaga480attggccattattttgaggggtacacaaggaaaattgtgagtgggagagaagagatggaa540ttgctgtaaatatagtactcaagtatgaaattctcaaaatgagtttaaatttttaaaata600aaaaaaacaaatagcttatgcttctgctagcaaggccttaga642Chm115catgctccggcgccatggccgtaggatctaaggccttgctagcagaagcgatatgtacat60caggctggccatgaactccctaggtaaccaaggatgatactcctgtctccacctcccaaa120ccctgagatgatagatacaagccaacactctggatttttttttacgtgtggtgtgtgtgt180gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgcttgtgccctgtgtatgtc240ctatgtgtgcaggtacctgcagagacaagaagagagcatacatcccccagagctggagtt300acaggcagctacaaaacaccccagctataaaacaccccaccaaacctgggtcctccagaa360gagaactgagctctcctaaacaaccagccacctctccagcctgagactatttttaaggaa420taagttcccatccagaggtctacctccacactgggctccagcgtcctgctgtgcggagtg480cctgaaggcaaggctgtcttcccactttccctttcacaagcagtgccggaaaggcatctc540ctgctcaactgaattttactactcactgccctgaggaatgaaatctgcagtggtcaaagg600gacaacctggcaattcttttaataagcataccacaagggctacacccttctttcacaata660tcattgatggacatatttccaataaaactgtactacataactggactcacgtcttggcag720ctgtgcatttcaagcctgaaagggttccagacccagacactgggctctgtggaaagcaga780gaacctctcctagagtgcactcccatccccctgcacggaaggaagctaggtgtctgggga840tatcaatgaagagtgtgctaccaggtatctggcctcttcgcttctgctagcaaggcctta900ga902Chm124gatctaaggccttgctagcagaagcattgtctgtgtcctaaggcagtgttcttcaaattt60cctttagacgatagaatctcttataaataaaaactaacacagaatcccaaagcaagaagt120cgacacaggaagggtgcttgtttcatagtaagggtggtggctcaaacccctcctaagcag180ttcccctggcccttaagtcacagaagtgaagacttgggactctgagagatctggtatgaa240acacagatgcccaaactctctccacggggcaggaagcagtaactgtgagtttcactcatc300aggaaaaacagggatgcattttctaaagacttatttttagtaattttgagtgtggtgtgt360gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtaaatgcaggtgctgtg420caggccagaggtgtcggatcccctaagaaccatagttagagcctgttgtgaaccacaaca480ggtgctgccatgaaaagtggtgtagtccatggggtgacttccaagattagaactaaagca540tactatctcgggttcattactgtgttctagaatcgagctttgtgccctttccatgtctgc600cattgctactgtcctcactcatctgagagacttaacatgaaaataccttagttttagtat660tttgagtccataaaacttagtgtgttgtcagcttccacacttgaccattatagactcata720ggcttctgctagcaagaccttagaatgactagtgcggccgcctgcaggtcg771Chm134ggattctaaggccttgctagcagaagcgctcttgagaagctgagataggaggattcccga60ctaaacagacaagtagggcagtgaggtggccggagcttggcctcacccctccccagagcc120cacatggtgagagaagagaacagactcccacaaattatcctccaatttccacaatacacc180acaacatggtgtacatgtgcccacatacatgacacaaaataaatgacacaaaataaatgt240taagaaaaagacgagtaatggtgaaaagtagaaaaaggacatttattcaatgtgaccaca300ttgggaagagaaacagaaaaagagacccagagatccctgaattgtgagggttaggtttaa360agatttgttttatgttttcaattgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtg420tgtgtgtgtacatgagcgcaggtacccacagaggtcagaagagggtgttgggattcctgg480agctggagttacaggttagcttattcctgggttctgggaaccaaacccgggtcctctgaa540agacatcactccagctccagagttggtgtatgtggactatggggacctcctggcccttcc600ctgaatgcttctgctagcaaggccttagaatgactagtgcggccgcctgcaggtcga657Chm14tcgacctgcaggcggccgcactagtgattctaaggccttgctagcagaagccttctgaag60acacacctacactgatagtttttaggtactgccagataccttcctaagataaatcatgtg120ctgggtctcaggatatcctgctagttactgacccatgctagatactgaccccattcgtaa180accagagtggaacattaggatctggagtgttatgggtaatgtgagtttatccctacctaa240caacaaaagtactcataaacacacacacacacacacacacacacacacgcacacacaaac300acacacacacacacacagagacagagacagagagaactggataggtgtcaagtactacta360ggtatcctgtgtaatctgcttaagaaaggagattcctttcagtacaccaaatatagggct420gactgtgggg430Chm140ggatctaaggccttgctagcagaaccgagctggatttgcagctggttttgagctacctgg60cttgagttctgggaatgaactcaggtcctctggaagagaaagcaagctagtgatcttagc120tgctgctttctctccagcctcttataggtctttcaattccatttaaagtgtgtgtgtgtg180tgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgcatatggaggtcagaagacaacaatttgtggaag240ttttctcctactttatgggttccagtgatcaaacaactcaggtcttcagcgttggcaaca300ggtgcctttgtggtgcagccatttcactggcttgatttttttagaaaaacaataatctaa360aacaaaataaattcagatagctctgccttcaatcttctattctattcttcctttccccag420gtaataatttatatttgtttgatttgtctcttttggggtggggttcatgctgaaaatgga480atccacggcctgcacctgttagctcagcactaaactgcaccccccagcccctcattggtg540tagacggagtttctgtcccacctgattccatagccgtttagccccaaataaacacacaga600ggcttacattaattttataaactgtttgatctatggcttaggcttcttactggctagctc660cctcttaattattaagcttctgctagcaaggccttagaatgactagtgcggccgcctgca720gtcg724Chm48agaagctcctccttcccctctccaggcatgccatgaggtcatttcattgctaacgcttgt60ttgccattcttgtgccatctgccatgaggtaatgtagccaagggggttcttgccagagcc120tgagctacggtgcttagactttctgcctccaaaaccgtaagttaaataagcctcttttct180tcataagtacccagtttggggatattttattataataaagaaaaccaggctaatcaaaag240tgagaaaacattaggtaaatgatagtcaccaaaacagtgtttgtgtggctagactgaagg300ccaggccaaaggccttgaggtggagttggagtaggaggcttcagatgaacgtgaaccacc360tgaaccacctctctctctctctctctctctctctctctctctctctgtgtgtgtgtgtgt420gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtccacacatgtggatgttagaggatagctgtca480gtccctgcctacctctttattttggactttcccactcagtttccgcttctgctagcaagg540ccttaga547Chm54gatctaaggccttgctagcagaagccgaatttaataaatctctccaaaaggccacttaca60ctcaaatccattcactctggactgttttctcaaatatttcttcagcctctgtgttgagca120ccagctgtgcactaggcactgggccaggcacttttgtccttaagatctgtcttatggaag180gggcagcaagacagtgcagtgaggaaaggcacctggcaccaagcctgatggcctgagttt240gatgatccccagcacctacatggtaggagaagataacagactcccacaagttgttgtcct300ctgacctccacacatgtcgtggcctacacacacacacacacacacacacacacacacaca360cacacacaattttaaatactaaaaaagaccccatgaaagatatttatctttgcagagaag420tgaactcagtgccaacacaggttgctgagaggggtagattgaggtaaacttccaagtttc480ctgtgataatcacttcatgtcacatagagcacttctatgttaccagagacttcacaacaa540gcactctgaacagaagagcacgcctggcttcacagagtctgtagcgaggaaggaaatgac600tacttgctatggccgaaggaggttcataaattgatgcttctgagcagagtacactggcgt660gcccctgtaatcccagtaatccagaggcaggtgcaggaggagcagatcctgagttttagc720cctcaaaccaaaacagagcctaggagatgactcagcagttagagcacttaccatgcgctt780ctgctagcaaagccttaga799Chm9tctaaggccttgctagcagaagcttactaagtcttcaagcagctttaaaggaccctggta60aagacagatcccgacccatttaggccttattattctctctctctttccctctctctctct120ctctctctctctctctatctatctatctatctctccaagtctctcagagacactctggcc180ttgtctttgccgctgcaacctggatgaatggcagcagctctggacttgctcaggactgtt240ctctaccaaatctgttcaattgtctgtctgtttgcatgtgtatcccttgctgtgtgtgtt300tctgtctctgtcagagtattgaagagcatgctaaaccactctaaaatggcaaaattaagg360tgccttttattgtcctgtagataccattctttttcaaacatgtgaatgttttcagtcaag420ttgcttgtatcaaaaaggcagctgatgtgtctccaatttatgtttttggcaaacccaaag480ttttcatgtaagtacaagtgagatgaatgggacccatgcaaaaaggtccaaagattcact540ccagataaacagtattcatcctctcaacgttcccacattcctctcttcctcatctggtac600ttccctgggaaaacactccctcatctgaccatgcaaccctctgtcagc648Chm91taaggccttgctagcagaagcacaaaccaacaaaaaaaatcaacttttaaaataaaacca60gcaacaagtggaaattttggagatgaaaaactcaatgaatccagtgtgtgtgtgtgtgtg120tgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtggcgaggggcgggtagtggacagtatcactaatat180actgaccaagcagaagacagaatatcaaggttaaggacaaggttgaggaaatactacatg240aaaatactaatcaggaagagaagagcttggcctcaatgtctaagaattctgagatataac300caagaggcaaaatagaaggatccaggggatagaagagggacctgaaataaaaattaaagg360tataagaaatcaaactgatatattgtagcctattccccacccccccaccaccaaatctga420agaaagaatggtcatttaatgcaagagcatgatcacagaagaagtgctctatgacatatg480atagttaggatgttgacaacataaagcaaagaagaaatattaaaaactgtaagaggccag540ctatggtggttcaaactactcatcatatgaccagaaggccaagaggaagaggaaggcaca600gtctgctttaaggaatgtcccctctattgacctatggacctcccactatccgcttctgct660agcaaggccttaga614。2、根据权利要求2所述的中国地鼠微卫星遗传标记，其特征是编号分别为Chm35、Chm93、Chml47、Chm79、Chml20、Chml62、ChmlO、Chml08、Chml15、Chml24、Chml34、Chml4、Chml40、Chm48、Chm54、Chm9、Chm91的微卫星核苷酸序列两端的引物的退火温度分别为51°C、58°C、58°C、51°C、58。C、58。C、59°C、59。C、59°C、59。C、59°C、59°C、60°C、60°C、59'C、59。C、59°C。3、筛选如权利要求1所述的中国地鼠微卫星遗传标记的方法，包括提取中国地鼠的DNA基因组，其特征是对中国地鼠的DNA基因组采用超声波进行打碎，使得超声后的片段大小在500bp-1000bp之间。全文摘要本发明涉及一种动物DNA分子遗传标记技术，具体为一种中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法，解决未见有关于中国地鼠微卫星标记的报道，以及筛选微卫星标记的方法中采用酶切法将DNA基因组打碎，存在很多问题，本发明提取中国地鼠基因组DNA，利用超声波打断DNA，电泳回收DNA片段；构建中国地鼠基因组微卫星富集文库，从中挑取阳性克隆质粒进行测序，筛选得到17个微卫星标记，根据微卫星重复序列设计引物，筛选出17对引物用于遗传检测。具体应用时，使用该17对引物对中国地鼠不同群体或群体内的不同个体的基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，根据检测数据及图谱确定每个个体的基因型；本发明所述方法稳定性好，重复性高，可比性强，操作简单。文档编号C12Q1/68GK101328500SQ200810055310公开日2008年12月24日申请日期2008年6月27日优先权日2008年6月27日发明者刘田福,宋国华,岳文斌,耿佳宁,胡松年,莉高申请人:山西医科大学