专利名称：一种天然植物源高钙蛋白粉的制备方法
技术领域：
本发明属于功能性食品的制备技术领域，具体涉及一种天然植物源高钙蛋白粉的
制备方法。
背景技术：
目前，钙营养不足是当今全球性健康问题，缺钙所导致的生命活动出现障碍，以及引发疾病的发生已经越来越受到重视。人体必需维持正常钙的生理水平，才能保证健康的需要。因此，改善钙营养状况，是世界也是我国迫切需要解决的问题。不仅儿童、青少年特别需要充足的钙质，孕妇、成年人和中老年人也一样需要通过补钙来调节体内钙的代谢，增进骨骼健康。由于人体对钙的需求量较大，所以需要钙制剂来补充体内所需的钙质。目前常见的市售钙剂包括碳酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙、柠檬酸钙、醋酸钙等，这些合成补钙剂具有毒副作用，且吸收率不高，导致补钙效果不理想，所以开发更好的补钙产品势在必行。
石榴籽中几丁质酶是一种天然结合钙的蛋白质，与钙元素的结合比例高达1 : 17，即每100g几丁质酶中含钙量为2.35g，是自然界少有发现的植源型天然高钙结合蛋白，它弥补了合成补钙试剂的吸收性差以及有毒副作用的影响，具有蛋白质和钙同时补充的双重功效，且几丁质酶在石榴籽总蛋白中所占比例较高(约0. 49g/100g)，所以具有非常好的应用前景，是21世纪新型补钙剂之一。 以植源性石榴籽几丁质酶作为主要成分的补钙产品一方面成本比较低，另一方面具有高度的安全性。我国是生产石榴大国，有着占世界第一位的种植面积和产量，而工业生产主要应用于榨油，对石榴籽蛋白包括几丁质酶的利用率很低。利用石榴籽或石榴籽粕生产天然高钙蛋白粉的功能性食品有着非常好的应用前景，在国内外未见公开报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种天然植物源高钙蛋白粉的制备方法。 —种天然植物源高钙蛋白粉的制备方法，具体方案如下将除杂并清洗过的
石榴籽或籽粕浸泡8 12小时，加入含有聚乙烯吡咯烷酮的45-55mM的磷酸缓冲液匀
浆，其中，石榴籽或籽粕与上述磷酸缓冲液的质量比为1 : (l-2)，匀浆后过滤，将滤液
10000-12000rpm离心10 20分钟，获得第一次上清液，然后加入硫酸铵，其中，硫酸铵与第
一次上清液的质量百分比为30-50%，溶解后静置3-7小时，10000-12000rpm、0 7"离心
20 40分钟，收集第二次上清液，向第二次上清液中再加入硫酸铵，其中，硫酸铵与第二次
上清液的质量百分比为50-70% ，溶解后静置3-7小时，10000-12000rpm、0 7。C离心20
40分钟，弃上清取沉淀，透析至无盐后冷冻干燥，即得到天然植物源高钙蛋白粉。 所述磷酸缓冲液中聚乙烯吡咯烷酮的质量百分比浓度为1%。 所述磷酸缓冲液的pH值为7. 0 9. 0，由于补钙功能性成分几丁质酶为水溶性蛋
白，在生产过程中过高或者过低的pH值溶液会对几丁质酶的稳定性和含钙量有比较大的影响。
所述透析是将离心后得到的沉淀物溶解于水中，然后以水为介质进行透析，以除去盐分及多余的小分子物质。 本发明方法的有益效果本发明所采用的原料石榴籽或籽粕廉价易得，加工工艺简单易操作。利用本发明的方法制得的高钙蛋白粉是一种天然植物蛋白质，主要成份为含钙几丁质酶，其中，含钙几丁质酶在高钙蛋白粉中的含量达到40%左右，它不仅提升了石榴籽和石榴籽粕的利用价值，也提供了 一种新型天然的补钙产品。
图1为本发明制备方法的流程图。
具体实施例方式
下面结合图1并举出实例来具体说明本发明的制备方法。
实施例1 称取2千克干石榴籽，除杂并清洗，然后将其浸泡8小时，用1倍石榴籽质量的含聚乙烯吡咯烷酮的50mM的磷酸缓冲液匀浆，其中，磷酸缓冲液中聚乙烯吡咯烷酮的质量百分比浓度为1 % ，磷酸缓冲液的pH为7. 0，用纱布过滤除不溶性残渣后12000rmp离心15分钟，取上清液加硫酸铵，硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为30%，充分溶解后静置5小时，12000rpm、4t:离心30分钟，弃沉淀，再次收集上清液，再向上清液中加硫酸铵，此次硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为50% ，静置5小时后，12000rpm、4t:离心30分钟，弃上清取沉淀；透析至无盐后冷冻干燥，即获得本发明的高钙蛋白粉。 经凯式定氮法检测最终蛋白粉为3.7g，几丁质酶含量约为351g/kg，等离子电感耦合质谱(ICP-MS)法测得含钙量约为8. 23g/kg。
实施例2 原料为石榴籽榨油后的籽粕，称取2千克干石榴籽籽粕，除杂并清洗，然后浸泡12小时，用2倍石榴籽籽粕质量的含聚乙烯吡咯烷酮的50mM的磷酸缓冲液匀浆，其中，磷酸缓冲液中聚乙烯吡咯烷酮的质量百分比浓度为1 % ，磷酸缓冲液的pH为8. 0，用纱布过滤除不溶性残渣后10000rmp离心10分钟，取上清液加硫酸铵，硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为30%，充分溶解后静置5小时，10000rpm、4t:离心30分钟，弃沉淀，再次收集上清液，再向上清液中加硫酸铵，此次硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为50%，静置5小时后，12000rpm、4t:离心30分钟，弃上清取沉淀；透析至无盐后冷冻干燥，即获得本发明的高钙蛋白粉。 经凯式定氮法检测最终蛋白粉为5. 83g，几丁质酶含量约为377g/kg，等离子电感耦合质谱(ICP-MS)法测得含钙量约为8. 84g/kg。
实施例3 称取2千克干石榴籽籽粕，除杂并清洗，然后浸泡8小时，用1倍石榴籽籽粕质量的含聚乙烯吡咯烷酮的50mM的磷酸缓冲液匀浆，其中，磷酸缓冲液中聚乙烯吡咯烷酮的质量百分比浓度为1%，磷酸缓冲液的pH为8. O，用纱布过滤除不溶性残渣后12000rmp离心15分钟，取上清液加硫酸铵，硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为50%，充分溶解后静置5小时，12000rpm、4t:离心30分钟，弃沉淀，再次收集上清液，再向上清液中加硫酸铵，此次硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为70% ，静置5小时后，12000rpm、4t:离心30分钟，弃上清取沉淀；透析至无盐后冷冻干燥，即获得本发明的高钙蛋白粉。 经凯式定氮法检测最终蛋白粉为4.6g，几丁质酶含量约为362g/kg，等离子电感耦合质谱(ICP-MS)法测得含钙量约为8. 43g/kg。
实施例4 称取2千克干石榴籽籽粕，除杂并清洗，然后浸泡10小时，用1. 5倍石榴籽籽粕质量的含聚乙烯吡咯烷酮的55mM的磷酸缓冲液匀浆，其中，磷酸缓冲液中聚乙烯吡咯烷酮的质量百分比浓度为1%，磷酸缓冲液的pH为7. O，用纱布过滤除不溶性残渣后11000rmp离心20分钟，取上清液加硫酸铵，硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为40%，充分溶解后静置7小时，11000rpm、4t:离心20分钟，弃沉淀，再次收集上清液，再向上清液中加硫酸铵，此次硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为60%，静置7小时后，11000rpm、4t:离心20分钟，弃上清取沉淀；透析至无盐后冷冻干燥，即获得本发明的高钙蛋白粉。
经凯式定氮法检测最终蛋白粉为4. 2g，几丁质酶含量约为334g/kg，等离子电感耦合质谱(ICP-MS)法测得含钙量约为8. 17g/kg。
实施例5 称取2千克干石榴籽籽粕，除杂并清洗，然后浸泡10小时，用1. 5倍石榴籽籽粕质量的含聚乙烯吡咯烷酮的45mM的磷酸缓冲液匀浆，其中，磷酸缓冲液中聚乙烯吡咯烷酮的质量百分比浓度为1%，磷酸缓冲液的pH为7. O，用纱布过滤除不溶性残渣后12000rmp离心20分钟，取上清液加硫酸铵，硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为45%，充分溶解后静置3小时，12000rpm、4t:离心40分钟，弃沉淀，再次收集上清液，再向上清液中加硫酸铵，此次硫酸铵的用量与上清液的质量百分比为65%，静置3小时后，12000rpm、4t:离心40分钟，弃上清取沉淀；透析至无盐后冷冻干燥，即获得本发明的高钙蛋白粉。
经凯式定氮法检测最终蛋白粉为4. 34g，几丁质酶含量约为327g/kg，等离子电感耦合质谱(ICP-MS)法测得含钙量约为7. 82g/kg。
权利要求
一种天然植物源高钙蛋白粉的制备方法，其特征在于，将除杂并清洗过的石榴籽或籽粕浸泡8～12小时，加入含有聚乙烯吡咯烷酮的45-55mM的磷酸缓冲液匀浆，其中，石榴籽或籽粕与上述磷酸缓冲液的质量比为1∶(1-2)，匀浆后过滤，将滤液10000-12000rpm离心10～20分钟，获得第一次上清液，然后加入硫酸铵，其中，硫酸铵与第一次上清液的质量百分比为30-50％，溶解后静置3-7小时，10000-12000rpm、0～7℃离心20～40分钟，收集第二次上清液，向第二次上清液中再加入硫酸铵，其中，硫酸铵与第二次上清液的质量百分比为50-70％，溶解后静置3-7小时，10000-12000rpm、0～7℃离心20～40分钟，弃上清取沉淀，透析至无盐后冷冻干燥，即得到天然植物源高钙蛋白粉。
2. 根据权利要求1所述的天然植物源高钙蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述磷酸 缓冲液中聚乙烯吡咯烷酮的质量百分比浓度为1%。
3. 根据权利要求1或2所述的天然植物源高钙蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述磷 酸缓冲液的pH值为7. 0 9. 0。
全文摘要
本发明公开了一种属于功能性食品的制备技术领域的天然植物源高钙蛋白粉的制备方法。该方法是将除杂并清洗过的石榴籽或籽粕浸泡8～12小时，加入含有聚乙烯吡咯烷酮的45-55mM的磷酸缓冲液匀浆，匀浆后过滤，将滤液离心，获得第一次上清液，加入硫酸铵，其中，硫酸铵与第一次上清液的质量百分比为30-50％，溶解后静置，离心，收集第二次上清液，向第二次上清液中再加入硫酸铵，其中，硫酸铵与第二次上清液的质量百分比为50-70％，溶解后静置，离心，弃上清取沉淀，透析至无盐后冷冻干燥。本发明所采用的原料石榴籽或籽粕廉价易得，加工工艺简单易操作，获得的高钙蛋白粉中含钙几丁质酶含量达到40％左右，提供了一种新型天然的补钙产品。
文档编号A23L1/305GK101715962SQ200910238779
公开日2010年6月2日 申请日期2009年12月1日 优先权日2009年12月1日
发明者冷小京, 杨海霞, 白宇飞, 赵广华 申请人:中国农业大学