专利名称：具有抗过敏作用的新乳酸菌、含该乳酸菌的抗过敏剂、食品及医药品组成物以及上述抗过 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新乳酸菌、含该乳酸菌的抗过敏剂、含该抗过敏剂的食品及医药 品组成物，具体而言，本发明涉及一种保藏在日本产业技术研究所的国际专利生物保藏库 (IPOD)的保藏号为 FERM BP-11098 的副干酪乳酸菌(lactobacillus paracasei)K71 株的 乳酸菌、含该乳酸菌的抗过敏剂和含该抗过敏剂的食品组成物及医药品组成物。
背景技术：
调查结果显示，过敏患者人数在不断地增加，例如在日本，每3个国民中就有1人 患有某种过敏症。如果能利用食品来减少过敏症患者人数，则不仅提高国民的生活质量，还 关系到医疗费用的大幅消减，其社会意义、经济意义重大。在特异反应性皮炎和花粉症等中观察到的速发型过敏(I型过敏)反应中，IgE是 重要因子。通过白介素(interleukin)4(IL-4)使B细胞接受IgE类别转换，并被诱导。IL-4 的主要产生源(来源)是Th2细胞。ThI细胞和Th2细胞等辅助性T细胞不断受到基于来自 树状细胞和巨噬细胞等细胞的抗原提示的刺激，并在IL-4和IL-12等细胞活素的影响下各 自分化。ThI细胞的分化由IL-12诱导，Th2细胞的分化由IL-4诱导。由于ThI细胞和TH2 细胞的失衡等原因，在TH2细胞明显占优的情况下，IL-4的影响增强，IgE的产生加剧。产 生的IgE与肥大细胞和嗜碱性白细胞的细胞表面上的高亲和性IgE受体结合。在此状态下， 一旦抗原(过敏原等)与IgE结合，则高亲和性IgE受体被交联，伴随着由脱颗粒引起的组 胺等化学遗传物质的放出、以及白细胞三烯等脂质介体的产生，引起以炎症为开始的过敏 症状。在IgE合成加剧状态下，过敏症状会加重。作为过敏疾病的治疗药物，主要是以抗组胺剂为代表的化学遗传物质的拮抗剂和 作为消炎剂使用的类固醇剂。这些药物的任何一种都是用于对症疗法的药剂，不具有使发 病的主要因素IgE的量直接减少的功能。而且，前者恐怕会引起困倦和口渴等副作用，后者 恐怕会引起全面抑制免疫系统等副作用。能缓解Th2细胞明显占优状况的药剂，被认为能 从根本上治疗过敏，但尚未研发。作为基于使IgE的量减少的治疗方法，有脱敏疗法。脱敏 疗法是通过从少量开始逐次递增地摄取(或注射)作为过敏疾病的原因物质的抗原性物质 以缓和其症状的治疗法。因为该治疗法包含抗原给药引起过敏反应的危险性，需要在医生 的严格指导下实施。在现阶段，脱敏疗法还不能被称为完全确定的治疗方法，包括需要长时 间治疗、根据个体差异等，在可靠性方面还有需要改善的地方。在这样的背景下，作为食品来摄取的经验丰富且具有抑制IgE的产生的功能的乳 酸菌越来越受瞩目。乳酸菌的抗过敏作用有菌株特异性，像这样具有抗过敏作用的乳酸菌 被筛选出来并作为酸奶、乳酸菌饮料不断地投放市场。为了发现抗过敏作用，坚持每日连续摄取这些乳酸菌是很重要的，然而，依个人嗜 好也有人不喜欢酸奶、乳酸菌饮料。而且，对日本人来说，非常容易饱，所以并不能说是用于 坚持每日连续摄取的良好的食品形态。相反，米是日本人的主食，虽说近年米摄入量有减少的倾向，但其仍然是三餐的至少一餐中必须摄取的食品。对于在米中赋予具有抗过敏作用的乳酸菌，将在其他罐体等中培养产生的乳酸菌 体和精米混合即可，但是，由于米粒和乳酸菌体粉体的比重、粒子径不同，在保存中它们会 分离，有可能仅乳酸菌沉在米袋等保存容器的底部。因此，即使称量了一定量的米，米中也 不一定含有所需数量的乳酸菌体。这样，很难在任何时候都摄入发挥抗过敏作用所必须量 的乳酸菌。此外，即使可以将在精米的表面上涂覆乳酸菌体作为一种技术，但不可否认需要 复杂的操作、高成本。因此，需要研发一种能够利用米特别是精米生长并以附着在米表面的状态与米一 起回收且能够烹制食用的、具有抗过敏作用的乳酸菌，以及以含该乳酸菌的米为材料的食 品组成物和医药品组成物。
发明内容
本发明提供一种保藏在日本产业技术研究所的国际专利生物保藏库(IPOD)(独 立行政法人産業技術糸忿合研究所特許生物寄託力 > 夕一)的保藏号为FERM BP-11098的 副干酪乳酸菌(lactobacillus paracasei，下文有时把属名Iactobacillus简称为“L. ”) K71株的乳酸菌。本发明提供一种含有本发明的乳酸菌的抗过敏剂。在本发明的抗过敏剂中，上述乳酸菌有时是活菌。在本发明的抗过敏剂中，上述乳酸菌有时是死菌。本发明的抗过敏剂，有时含有本发明的乳酸菌的菌体成分。本发明提供一种含有本发明的抗过敏剂的食品组成物。本发明提供一种含有本发明的抗过敏剂的医药品组成物。本发明提供一种含有已利用本发明的乳酸菌使其发酵的米、该米的粉碎物、或者 做饭烹调该米或米的粉碎物而得到的米饭的食品组成物。本发明提供一种抗过敏剂的制造方法，上述抗过敏剂包括在培养基中接种本发明 的乳酸菌后进行培养步骤。在本发明的抗过敏剂的制造方法中，上述培养基有时是米或米的粉碎物。本发明中，所谓抗过敏剂，有时是含有以具有抑制或阻碍过敏反应作用的物质作 为成分的药剂。抗过敏剂的作用点包括但不限于如下过程Th2细胞的分化过程；上述Th2 细胞接受抗原提示的过程；上述Th2细胞活化及繁殖过程；通过与上述Th2细胞的相互作用 使B细胞接受类别转换并成熟为IgE产生细胞的过程；所有辅助性T细胞亚群(TH1、Th2、 Th3(抑制性T细胞)TH17、TMg(调节性T细胞)等)及细胞伤害性T细胞、NKT细胞、自然杀 伤细胞分化、繁殖及活化的过程；包含介由上述辅助性T细胞亚群(TH1、Th2、Th3(抑制性T 细胞)TH17、TMg(调节性T细胞)等)及细胞伤害性T细胞、NKT细胞、自然杀伤细胞的工作 而产生IgE的免疫功能调节过程；IgE产生因过敏原的存在而加剧的过程；肥大细胞和嗜碱 性白细胞、嗜酸性白细胞等效应细胞的分化、成熟、活化过程；在上述效应细胞中合成组胺 等化学遗传物质并存储于颗粒的过程以及重新合成白细胞三烯等介体的过程；形成由上述 效应细胞的高亲和性IgE受体、IgE、抗原三者结合而成的复合体的过程；基于上述复合体 形成的信号引起脱颗粒的过程；脱颗粒释出的组胺和白细胞三烯等化学遗传物质在皮肤、呼吸器官、消化器官、眼、鼻以及其他全身的各种脏器中引起局部过敏反应的过程。本发明的抗过敏剂，具有抑制及/或阻碍上述过程的至少一个过程的作用。上述 抗过敏剂的作用点中，Th2细胞的分化、成熟过程由IL-4的促进，但通过IL-12促进ThI细 胞的分化、成熟来抑制Th2细胞的分化、成熟。因此，通过抑制IL-4的产生并促进IL-12的 产生，能够抑制Th2细胞分化、成熟的过程。利用这种机制的抗过敏剂，成为一种能对过敏 疾病对因疗法地使用的治疗剂。而且，因为没有抗组胺剂、类固醇剂那样的副作用的危险， 因此优选。本发明的乳酸菌有抗过敏作用，而且作为在精米表面生长良好的乳酸菌，通过以 下实施例所示的试验来筛选。本发明的乳酸菌的液体培养，只要是该细菌可生长的条件，任 何条件都可以，可使用乳酸菌的培养中经常使用的培养基(例如，MRS培养基和蔬果汁等) 在通常的培养条件下进行培养。培养基的PH为4. 0到7. 0，优选在6. 0到6. 5开始培养，培 养温度为35°C到42°C，优选在37°C到40°C下进行培养。而且，虽静置培养能够充分生长， 但为使培养基成分和菌体均勻分布，优选缓慢搅拌。随着乳酸菌的生长，乳酸在培养基中蓄 积，培养基的PH值慢慢下降。虽然不控制培养中的PH值也能在一定程度上回收乳酸菌，但 优选通过在培养基中添加碳酸钙、或者通过PH值自动控制来控制培养基的pH值。通过将 培养基的PH控制在4. 0到7. 0、优选控制在6. 0到6. 5，可得到高密度的乳酸菌。如以下实施例所示，本发明的对乳酸菌进行加热杀菌后得到的菌体被认为有抗过 敏作用。因此，本发明的抗过敏剂中含有的乳酸菌，不管是活菌、即处于繁殖及/或代谢状 态的菌，还是死菌，即不繁殖不代谢的状态的菌，都没有关系。而且，本发明的抗过敏剂是本 发明的乳酸菌的菌体成分，有时含有具有抗过敏作用的成分。本发明的食品组成物，除本发明的抗过敏剂之外，有时含有被允许作为调味剂、着 色剂、防腐剂其他食品的成分。本发明的食品组成物，在不损害本发明的抗过敏剂效果的条 件下，有时使用本发明的乳酸菌经发酵来制造。而且，有时也通过对本发明的乳酸菌及/或 利用本发明的乳酸菌制成的发酵品烹制成饭、施加其他加热、加压等来制造。经液体培养而 生长的本发明的乳酸菌可以直接或干燥后作为具有抗过敏作用的食品原料来利用，也可以 作为使精米发酵时的酵母(starter)来利用。利用本发明的乳酸菌发酵精米时，只要将洗过的精米浸渍在水中，然后添加含本 发明乳酸菌的酵母使其发酵即可。因为本发明的乳酸菌利用米表面的营养旺盛地生长且附 着在米的表面，所以即使用笸萝等盛放发酵结束的米、之后进行水洗处理，大部分的乳酸菌 体仍以附着在米表面上的状态存在。在适当条件下，发酵结束的精米表面上，每Ig原料米 附着有IO8 IO9个乳酸菌。干燥该米，从而可加工为原料米，另外，即使不干燥而直接加水 做饭，也可得到含抗过敏乳酸菌的米饭。本发明的医药品组成物，除本发明的抗过敏剂之外，有时含有作为制剂学上必需 物质及/或医药品而被允许的物质。根据本发明，通过使具有抗过敏作用的本发明的乳酸菌以精米作为原料进行发 酵，从而容易且便宜地得到使抗过敏乳酸菌均勻分布在表面的精米，并且提供可以将其做 成饭继而每日连续摄取的表现出抗过敏的作用的主食。
图1是乳酸菌的反复口服给药对OVA致敏小鼠的血清总IgE量的影响的效果图表。图2是乳酸菌的反复口服给药对OVA致敏小鼠的卵白蛋白特异性IgE水平影响的 效果图表。图3是乳酸菌的反复口服给药对OVA致敏小鼠脾细胞中的IL-4产生量的影响的 效果图表。图4是乳酸菌的反复口服给药对OVA致敏小鼠脾细胞中的总IgE产生量的影响的 效果图表。图5是乳酸菌的反复口服给药对特异反应性皮炎模型动物的血清总IgE量影响的 效果图表。图6是乳酸菌的反复口服给药对特异反应性皮炎模型动物的耳介过敏症状的影 响的效果图表。
具体实施例方式下面，根据本发明的实施例对本发明进行详细说明。本发明不受这些实施例的任 何限制。实施例11.筛选有抗过敏作用且在精米表面生长良好的乳酸菌(1)用于筛选的乳酸菌的出处用于筛选的乳酸菌，是从以米为原料的发酵食品(米糠层、米曲酱、酒糟、醪糟等) 中新分离。表1列举了在预备试验中已能够确认是归属于lactobacillus属的种的39种 乳酸菌的菌株名。(2)乳酸菌的抗过敏作用的体外评价。用从卵白蛋白(OVA)致敏小鼠中摘取的脾细胞，进行体外抗过敏试验。将购入的6 周龄的3只(Balb/c，查尔斯河(Charles River))雌小鼠，在SPF环境下饲养，按一周一次 的频率给每只小鼠腹腔注射0. 5ml含lmg/ml的Al (OH)3和ang/ml的OVA的悬浊液。适当 从尾静脉采血，确认血清总IgE量及OVA特异性IgE水平。血清总IgE量及OVA特异性IgE 水平的测定是分别采用碧迪(BectonDickinson)公司制造的Murine Opt EIA ELISA设备、 利用SandwichELISA法进行。S卩，测定总IgE时，使用将大鼠(，^卜)单克隆抗小鼠IgE 作为1次抗体来涂覆的板(plate)，在其中添加适当稀释过的血清，然后使用生物素化大鼠 单克隆抗小鼠IgE重链抗体作为2次抗体。测定OVA特异性IgE时，用涂布了 OVA的板来 代替1次抗体，通过同样操作，进行ELISA。选出血清总IgE量及OVA特异性IgE水平最高 的一只，在饲养开始观天后摘除脾脏。用手术刀把摘除的脾脏切碎，添加红细胞溶解缓冲 液(IMmM氯化铵、14mM的碳酸氢钠、0. IlmM的EDTA_2Na、pH为7. 3)来除去红血球，再用含 有10%牛胎血清(Difco公司制造)、青霉素G(100U/ml)、链霉素(100mg/ml)及含IOmM的 HEPES的RPM1640培养基(Sigma公司制造)稀释至2X IO6细胞/ml，然后，在96微孔板分 别注入100 μ L。接着，加入80 μ L的OVA溶液(lmg/ml)和20 μ L加热杀菌后的乳酸菌悬 浊液(lmg/ml)。在5% 二氧化碳、37°C环境下培养7天后，离心分离培养液，从而除去脾细 胞和乳酸菌。分别用碧迪公司制造的Mouse Opt EIA ELISA试剂盒(set)小鼠(々^ )IL-4(商品编号555232)和小鼠IL-12 (p70、商品编号555256)来测定培养上清液中含有的 IL-4及IL-12的浓度。(3)精米表面的乳酸菌生长实验将精米50g洗净，并向其中加入IOOml蒸馏水，浸渍。在该浸渍液中，添加Iml利用 MRS培养基在37°C下培养了 1夜的乳酸菌培养液(约IO9个/ml)，混合，然后，在38°C下保温 1天。把浸渍水倒掉，用大约IOOml蒸馏水洗，洗3次后，把发酵米粉碎，使附着在米表面的 乳酸菌游离、悬浊。发酵米的粉碎，是把发酵米IOg和90ml的灭菌生理盐水(0. 85% NaCL) 装进带有专用过滤器的无菌袋里，再安装到拍打式勻浆机(7卜7 7力一)(牛至(才 > 力‘ ))，拍打式勻浆机400T)上，以230rpm的转速运转120秒，粉碎。适当稀释粉碎后的发酵 米，涂布到LBS寒天培养基(BBL公司制造)上培养，由生长出的菌落(colony)数求出附着 在精米表面的乳酸菌数。(4)结果表1是抗过敏活性及用精米生长和附着实验的结果。表 权利要求
1.一种副干酪乳酸菌(lactcAacillus paracasei)K71株的乳酸菌，所述乳酸菌保藏 在日本产业技术研究所的国际专利生物保藏库(IPOD)，保藏号为FERM BP-11098。
2.一种抗过敏剂，其特征在于， 含有权利要求1所述的乳酸菌。
3.根据权利要求2所述的抗过敏剂，其特征在于， 所述乳酸菌是活菌。
4.根据权利要求2所述的抗过敏剂，其特征在于， 所述乳酸菌是死菌。
5.—种抗过敏剂，其特征在于，含有权利要求1所述的乳酸菌的菌体成分。
6.一种食品组成物，其特征在于，含有权利要求2至5中任一项所述的抗过敏剂。
7.—种医药品组成物，其特征在于，含有权利要求2至5中任一项所述的抗过敏剂。
8.一种食品组成物，其特征在于，含有用权利要求1所述的乳酸菌发酵的米、所述米的粉碎物、或者做饭烹调所述米或 米的粉碎物而得到的米饭。
9.一种抗过敏剂的制造方法，其特征在于，包括在培养基中接种权利要求1所述的乳酸菌并进行培养的步骤。
10.根据权利要求9所述的抗过敏剂的制造方法，其特征在于， 所述培养基是米或米的粉碎物。
全文摘要
本发明的课题是研发一种能够利用米特别是精米使其生长并以附着在米表面的状态与米一起回收且能够烹制食用的、具有抗过敏作用的乳酸菌，以及以含该乳酸菌的米为材料的食品组成物和医药品组成物。本发明提供一种保藏在日本产业技术研究所的国际专利生物保藏库(IPOD)的保藏号为FERM BP-11098的副干酪乳酸菌(lactobacillus paracasei)K71株的乳酸菌；含该乳酸菌的抗过敏剂；含该抗过敏剂的食品组成物；含有已利用本发明的乳酸菌使其发酵的米、该米的粉碎物、或者做饭烹调该米或米的粉碎物而得到的米饭的食品组成物以及含有本发明的抗过敏剂的医药品组成物。
文档编号C12N1/20GK102046777SQ20098011441
公开日2011年5月4日 申请日期2009年4月24日 优先权日2008年4月25日
发明者内山公子, 原崇, 城斗志夫, 斋藤真理子, 熊谷武久 申请人:国立大学法人新潟大学, 龟田制菓株式会社