专利名称：一种苏子种培养基及其应用的制作方法
一种苏子种培养基及其应用
技术领域：
本发明涉及一种微生物培养基，具体地说，是一种苏子种培养基及其在新生和格 特隐球菌鉴定中的应用。
背景技术：
新生隐球菌主要感染免疫抑制人群，感染率约为5 10% ；为HIV感染患者最常 见的致病真菌，感染率可高达30% ；常引起脑膜脑炎、肺部感染。格特隐球菌主要感染免疫正常人群，主要引起肺部感染、脑膜脑炎，其中部分亚型 如VGII，可引起区域性的暴发流行，发病率为平常的10 30倍。鉴定新生和格特隐球菌，多采用植物的种子或其他部分制作培养基，以及一些 用化学试剂制作的培养基，包括多巴培养基、咖啡酸培养基。其中常用的植物种子包括 ^MIl (Guizotia abyssinica) > ^f ^lff (Brassica juncea)、jft 巾·丰公白勺禾中 (Pinus hal印ensis)、刺毛黎豆(Cowitch seed)、葵花籽(sunflower)等。常用的植物的其他部分 包括指甲花叶(Lawsonia inermis)、黑莓果实(blackberry)、红辣椒(red hot pepper)、烟 草(tobacco)等。这些培养基均不同程度的存在以下问题1.由植物叶子或新鲜果实为原料的培养基，如指甲花叶、黑莓果实等，其原料不能 长期保存，必需用新鲜的原料；2.部分原料如刺毛黎豆、黑莓果实、红辣椒、烟草为原料制作的培养基颜色很深， 不易于菌株颜色的早期快速分辨；3.部分原料不易在市场上直接获得，如小葵子、地中海松的种子、刺毛黎豆、指甲 花叶等；4.价格相对昂贵，如烟草等；5.未对新生和格特隐球菌中的所有分子类型进行鉴定的评价。中国专利公开号CN1092468A，
公开日1994年9月21日，发明创造的名称为新生 隐球菌的鉴定方法及其所用的培养基，该发明公开了一种新生隐球菌的鉴定方法及其所用 的培养基，可以在一种培养基上同时检测新生隐球菌的两种生物特性。中国专利公开号 CN101724682A，
公开日2010年6月9日，发明创造的名称为一种快速检测新型隐球菌的染 色液和方法，该发明公开了一种快速检测新型隐球菌的染色液和方法，能够快速灵敏的检 测新型隐球菌。但是关于苏子(紫苏或白苏)种培养基及其用途目前还未见报道。
发明内容本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种由植物种子为原料制作的能够 快速、简便的鉴定新生和格特隐球菌的培养基。本发明的第二个目的是提供了一种苏子种培养基的用途。为实现上述目的，本发明采取的技术方案是
一种苏子种培养基，用苏子种子、琼脂和水配制而成。所述，每升培养基中含有苏子种子提取物按苏子种子原材料计30-70克，琼脂 15-20 克。所述苏子种子原材料50克，琼脂18克。所述苏子种子是白苏种子或紫苏种子。所述苏子种子是紫苏种子。为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是一种苏子种培养基，在鉴定致病真菌新生和格特隐球菌中应用。本发明优点在于1.培养基所用原材料苏子种子和琼脂容易获得，价格低廉，培养基采用传统方法 可以制得，所得培养基易于保存。2.本发明对苏子种培养基发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。3.经大量真菌鉴定实验研究证明，苏子种培养基能够快速鉴定新生和格特隐球 菌，鉴别特异性高，鉴定效果良好。
附图1是在苏子种培养基上格特隐球菌WM178 (Cg)和白念珠菌ATCC10231 (Ca)的 菌落颜色和形态。附图2是不同时间段产生色素的菌株数及其所占比例的条状图。
具体实施方式下面结合附图对本发明提供的具体实施方式
作详细说明。实施例1取50g苏子种子(紫苏)在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min， 4层纱布滤过后，加入18g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例2取30g苏子种子(紫苏)在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min， 4层纱布滤过后，加入15g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例3取40g苏子种子(紫苏)在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min， 4层纱布滤过后，加入16g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例4取60g苏子种子(紫苏)在中药粉碎机中粉碎1. 5min后，加IL蒸馏水煮沸30min， 4层纱布滤过后，加入18g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例5
取70g苏子种子(紫苏)在中药粉碎机中粉碎2min后，加IL蒸馏水煮沸30min， 4层纱布滤过后，加入20g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例6取40g苏子种子(紫苏)在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸25min， 4层纱布滤过后，加入20g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例7取70g苏子种子(紫苏)在中药粉碎机中粉碎2min后，加IL蒸馏水煮沸30min， 4层纱布滤过后，加入15g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例8取50g苏子种子(白苏)在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min， 4层纱布滤过后，加入18g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例9取30g苏子种子(白苏)在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min， 4层纱布滤过后，加入15g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例10取40g苏子种子(白苏)在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min， 4层纱布滤过后，加入16g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得苏子种
培养基。实施例11培养基对致病真菌的鉴定效果试验处理A 苏子种培养基(采用实施例1制备)。B 小葵子培养基取50g小葵子在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min，4层纱布滤 过后，加入18g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得小葵子培养基。C 葵花子培养基取50g葵花子在中药粉碎机中粉碎Imin后，加IL蒸馏水煮沸20min，4层纱布滤 过后，加入18g琼脂，补足水份至1L。培养基于121°C下灭菌15min，制得葵花子培养基。待测菌株92株新生和格特隐球菌，包括新生隐球菌VNI基因型(34株)、VNB基 因型(3株)、VNII基因型(4株)、VNIII基因型(6株)、VNIV基因型(6株)；格特隐球菌 包括VGI基因型(19株)、VGII基因型(6株)、VGIII基因型(8株)、VGIV基因型(6株)； 其他相似致病酵母菌包括罗伦隐球菌(3株)、浅白隐球菌(3株)、白念珠菌(6株)、都柏 林念珠菌(2株)、热带念珠菌(3株)、近平滑念珠菌(5株)、季也蒙念珠菌(4株)、皱落念 珠菌(2株)、克柔念珠菌(2株)、光滑念珠菌(2株)、西弗念珠菌(1株)、法码念珠菌(1
5株)、葡萄牙念珠菌(1株)、产膜念珠菌(1株)。测试前，受试菌株在28°C条件下，YPD培养基上预培养2天。取1环菌分别接种于 上述3种培养基，置28 °C下培养至48h，在3h、6h、12h、24h和48h 5个时间点上观察色素的 生成情况。测试结果所有除新生和格特隐球菌外的其他受试酵母菌在3种培养基上培养7 天均不变色。与小葵子和葵花子培养基上新生和格特隐球菌产生棕褐色色素不同，在苏子 种培养基上，该菌产生的色素为红棕色。附图1为苏子种培养基上格特隐球菌WM178 (Cg) 和白念珠菌ATCC10231 (Ca)的菌落颜色和形态。经卡方配对检验，结果显示，在3h时，苏子 种培养基上菌株的显色比例与小葵子培养基有显著差异(P = 0.016)，与葵花子无显著差 异(P = 0. 250)；在6h时，苏子种培养基上菌株的显色比例与小葵子和葵花子培养基均有 显著差异(P = 0. 031)。在12、24、48h时间段，均无统计学差异。不同时间段产生色素的菌 株数及其所占比例见表1，表1数据总结后的条状图见附图2。表1和图2显示本研究发明的苏子种培养基在早期(3h、6h)2个时间段发生变色 的菌株百分比明显高于其余2种培养基。其中3h时，与小葵子培养基具有显著差异；在6h 时，与小葵子和葵花子均有显著差异。实施例12试验处理A 苏子种(紫苏)培养基(采用实施例1制备)。B 苏子种(白苏)培养基(采用实施例8制备)。待测菌株92株新生和格特隐球菌，包括新生隐球菌VNI基因型(34株)、VNB基 因型(3株)、VNII基因型(4株)、VNIII基因型(6株)、VNIV基因型(6株)；格特隐球菌 包括VGI基因型(19株)、VGII基因型(6株)、VGIII基因型(8株)、VGIV基因型(6株)； 其他相似致病酵母菌包括罗伦隐球菌(3株)、浅白隐球菌(3株)、白念珠菌(6株)、都柏 林念珠菌(2株)、热带念珠菌(3株)、近平滑念珠菌(5株)、季也蒙念珠菌(4株)、皱落念 珠菌(2株)、克柔念珠菌(2株)、光滑念珠菌(2株)、西弗念珠菌(1株)、法码念珠菌(1 株)、葡萄牙念珠菌(1株)、产膜念珠菌(1株)。测试前，受试菌株在28°C条件下，YPD培养基上预培养2天。取1环菌分别接种于 上述2种培养基，置28 °C下培养至48h，在3h、6h、12h、24h和48h 5个时间点上观察色素的 生成情况。测试结果显示无论在显色深度，还是在变色时间上，紫苏种培养基对新生和格特 隐球菌的鉴定效果均明显优于白苏。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为 本发明的保护范围。
权利要求
一种苏子种培养基，其特征在于，所述的苏子种培养基用苏子种子、琼脂和水配制而成。
2.根据权利要求1所述的苏子种培养基，其特征在于，每升培养基中含有苏子种子提 取物按苏子种子原材料计30-70克，琼脂15-20克。
3.根据权利要求2所述的苏子种培养基，其特征在于，所述的苏子种子原材料50克，琼 脂18克。
4.根据权利要求1-3任一所述的苏子种培养基，其特征在于，所述的苏子种子是白苏 种子或紫苏种子。
5.根据权利要求4所述的苏子种培养基，其特征在于，所述的苏子种子是紫苏种子。
6.根据权利要求1-5任一所述的苏子种培养基，其特征在于，在鉴定致病真菌新生和 格特隐球菌中应用。
全文摘要
本发明涉及一种苏子种培养基，所述的苏子种培养基是用苏子种子、琼脂和水配制而成。所述，每升培养基中含有苏子种子提取物按苏子种子原材料计30-70克，琼脂15-20克。本发明还提供了一种苏子种培养基的用途。本发明优点在于培养基所用原材料苏子种子和琼脂容易获得，价格低廉，培养基采用传统方法可以制得，所得培养基易于保存。对苏子种培养基发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。经大量真菌鉴定实验研究证明，苏子种培养基能够快速鉴定新生和格特隐球菌，鉴别特异性高，鉴定效果良好。
文档编号C12Q1/04GK101974608SQ201010248930
公开日2011年2月16日 申请日期2010年8月10日 优先权日2010年8月10日
发明者冯晓博, 姚志荣 申请人:上海交通大学医学院附属新华医院