专利名称：一种夜光藻活细胞的定量浓缩方法
技术领域：
本发明涉及藻类浓缩技术，具体涉及一种夜光藻活细胞的定量浓缩方法。
背景技术：
WiMQtoctiluca scintillans iN.組Viaris)又名夜光虫，是一种异养的单细胞浮游甲藻种类，营养细胞通常成球形，直径在200Mm至2000Mffl。夜光藻是一种常发赤潮的有害浮游甲藻种类，在世界范围内的海域和养殖环境中，都有赤潮发生报道，但是，夜光藻赤潮的关键问题研究进展一直相对缓慢，一个重要的原因是有关夜光藻细胞分裂、细胞生活史及其意义、种群增殖过程中关键信息物质作用机制等研究相当缺乏。由于夜光藻属于完全异养的甲藻，种群动态以及赤潮的形成与外界的食物条件、水体营养条件、细胞微环境变化、离子变化、信息物质等的大范围持续作用，都可能影响夜光藻的生理代谢活动以及触手的捕食活动。可见，仅依赖于常规监测中的固定细胞数量变化进行夜光藻赤潮的预报和防治远远不够。在夜光藻赤潮发生机理研究和野外监测中，聚集之前大量细胞样品的获取至关重要；在室内研究中也发现，由于夜光藻严重的随波漂浮特征，夜光藻培养水体不能形成均勻密度的悬液，要分析培养水体中的夜光藻活细胞数量往往只能取全部水体计数， 工作量很大，耗时长；而且，夜光藻细胞比较柔弱，过分扰动会导致细胞皱缩衰败，造成对研究结果的影响，不利于有关夜光藻细胞分裂、细胞生活史及其意义、种群增殖过程中关键信息物质作用机制等研究。因此，需要一个能在夜光藻活细胞还相对密度低的情况下就能获取大量样品的方法，达到在夜光藻数量很低的情况下，就可能预示着夜光藻的细胞行为和种群发展方向信息。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种细胞皱缩衰败少，维持夜光藻活体细胞悬浮态的浓缩和定量的定量浓缩方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为一种夜光藻活细胞的定量浓缩方法，包括下述步骤
a、取一玻璃器皿，在该玻璃器皿内放置一个直径不大于1/3玻璃器皿直径、设有支脚的定位套，该定位套的高度不高于该玻璃器皿高度的1/2 ；
b、在定位套上覆盖上直径大于1倍定位套直径的筛绢，该筛绢的网目孔径为80-180 微米；
c、拉紧筛绢，将一无底的收集筒从筛绢上插入所述定位套内，让筛绢的边缘从所述定位套的上缘翻出，所述收集筒的筒口高于所述玻璃器皿的器皿口 ；
d、取定量夜光藻活细胞水样，缓慢勻速倒入收集筒中，倒毕，至所述玻璃器皿的器皿口无水流溢出，用滴管轻柔混勻，定量吸取所述收集筒内的水样，也可以先用滴管吸出收集筒内的水样，全部转移至量筒或新的容器中，再定量吸取单位体积细胞悬液，在显微镜下计数和观察。
这样可以开展夜光藻细胞分裂、细胞生活史及其意义、种群增殖过程中关键信息物质作用机制等研究。与现有技术相比，本发明的优点在于一种夜光藻活细胞的定量浓缩的方法，通过玻璃器皿内放置设有支脚的定位套，定位套的高度低于该玻璃器皿高度，定位套上覆盖筛绢，无底的收集筒插入定位套内，收集筒的筒口高于玻璃器皿的器皿口，组成一个对夜光藻活细胞水样始终维持悬浮态浓缩的简易装置；将定量夜光藻培养水样或野外水样，缓慢勻速倒入收集筒内，就让夜光藻活细胞水样的大部份水流入玻璃器皿并溢出，玻璃器皿的高度所维持的液面高度，而夜光藻活细胞被筛绢截留在收集筒的水体中，能使夜光藻始终处于悬浮状态而不干出，这样夜光藻活细胞就在收集筒浓缩，且不会导致细胞皱缩衰败，待璃器皿的液面稳定，所得浓缩后的夜光藻水体含活细胞密度较高，均勻好，利于计数和对大量细胞的观察研究；就可以定量吸取活细胞，在显微镜下计数和观察；有利于开展夜光藻细胞分裂、细胞生活史及其意义、种群增殖过程中关键信息物质作用机制等研究。因此本发明是一种细胞皱缩衰败少，维持夜光藻活体细胞悬浮态的浓缩和定量的定量浓缩方法。
图1为为本发明中装配后简易浓缩装置的结构示意图。
具体实施例方式以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。 实施例一种夜光藻活细胞的定量浓缩方法，取一玻璃器皿1，在该玻璃器皿1内放置一个直径不大于1/3玻璃器皿直径(具体直径差依浓缩要求配置)、设有支脚4的定位套3，该定位套3的高度不高于该玻璃器皿1高度的1/2，具体高度差依浓缩要求配置，在定位套3上覆盖上直径大于1倍定位套直径的筛绢5，该筛绢5的网目孔径为80 -180微米；拉紧筛绢 5，将一无底的收集筒2从筛绢5上插入定位套3内，收集筒2直径略少于定位套3直径，即方便插入，又对筛绢5固定较牢，让筛绢5的边缘从定位套3的上缘翻出，收集筒2的筒口高于玻璃器皿1的器皿口，具体高度差依浓缩要求配置，就组成如图1所示的简易浓缩装置， 定量取夜光藻活细胞水样，缓慢勻速倒入收集筒2中，倒毕至玻璃器皿1的器皿口无水流溢出，用滴管轻柔混勻，定量吸取收集筒2内的水样，在显微镜下计数和观察研究。本发明在浓缩中对夜光藻活细胞扰动少，始终维持悬浮态，很少损伤细胞，简单方便，浓缩效果较好， 所用筛绢的网目孔径依夜光藻细胞大小可以选用网目孔径为80、100、120、130、150或180 微米等的筛绢。
权利要求
1. 一种夜光藻活细胞的定量浓缩方法，其特征在于包括下述步骤a、取一玻璃器皿，在该玻璃器皿内放置一个直径不大于1/3玻璃器皿直径、设有支脚的定位套，该定位套的高度不高于该玻璃器皿高度的1/2 ；b、在定位套上覆盖上直径大于1倍定位套直径的筛绢，该筛绢的网目孔径为80-180 微米；c、拉紧筛绢，将一无底的收集筒从筛绢上插入所述定位套内，让筛绢的边缘从所述定位套的上缘翻出，所述收集筒的筒口高于所述玻璃器皿的器皿口 ；d、取定量夜光藻活细胞水样，缓慢勻速倒入收集筒中，倒毕，至所述玻璃器皿的器皿口无水流溢出，用滴管轻柔混勻，定量吸取所述收集筒内的水样，在显微镜下计数和观察。
全文摘要
本发明公开了一种夜光藻活细胞的定量浓缩方法，通过玻璃器皿内放置设有支脚的定位套，定位套的高度低于该玻璃器皿高度，定位套上覆盖筛绢，无底的收集筒插入定位套内，收集筒的筒口高于玻璃器皿的器皿口，组成一个对夜光藻活细胞水样始终维持悬浮态浓缩的简易装置，再将定量夜光藻活细胞水样，缓慢匀速倒入收集筒内，这样夜光藻活细胞就在收集筒浓缩，且不会导致细胞皱缩衰败，待璃器皿的液面稳定，就可以定吸取收集筒内的水样，在显微镜下计数和观察。因此本发明是一种细胞皱缩衰败少，维持夜光藻活体细胞悬浮态的浓缩和定量的定量浓缩方法。
文档编号C12N1/12GK102367469SQ20111032604
公开日2012年3月7日 申请日期2011年10月24日 优先权日2011年10月24日
发明者严小军, 刘宝宁, 周成旭, 蒋莹, 骆其君 申请人:宁波大学