一种苏芸金素的提取方法
【专利摘要】一种苏芸金素的提取方法，将苏芸金芽孢杆菌活化——培养——双水相萃取法提取得到含有苏芸金素的溶液的工艺路线。本发明是一种操作简便，生产成本低，提取过程中无环境污染、无有机溶剂残留，得到苏芸金素的生产工艺。
【专利说明】一种苏芸金素的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及应用天然质分离纯化的领域，尤其涉及应用双水相法从苏芸金芽孢杆菌菌株中分离提取得到苏芸金素的工艺方法。
【背景技术】
[0002]苏芸金素，又称为β -外毒素，是某些苏芸金芽孢杆菌菌株产生的一种核苷类似物，耐高温、易溶于水，性质稳定。苏芸金素与ATP竞争酶的结合位点，造成害虫死亡，它对鳞翅目、双翅目、直翅目等有害昆虫以及线虫和螨类都有不同程度的毒力。最近研究发现苏云金素毒性较一般的化学农药低，特别是证明其对哺乳动物安全以后，β_外毒素的研究及应用越来越受到重视。
[0003]目前，提取苏芸金素的方法有很多，如溶剂提取法，萃取加纤维素层析分离法，硅酸钙吸附法等，这些方法成本高，操作复杂，并且提取后存在有机溶剂残留问题，环境污染严重。
[0004]双水相萃取技术始于20世纪60年代，与一般的水-有机物萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配。随着生物技术的高速发展，常规的萃取技术在这些领域中的应用受到限制，因为大部分的生物制品原液是具有低浓度和生物活性的，对分离条件以及环境有着严格的要求。双水相萃取技术正是由于适应这种特殊的分离要求而被广泛应用于生物化工行业。由于其条件温和，容易放大，可连续`性操作，已经成功地应用于氨基酸、蛋白质和核酸的分离和提纯。国内自20世纪80年代开始对双水相萃取技术进行研究，经过几十年的发展，已经在生物制药、分析检测、稀有金属的分析分离等领域有研究和应用。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种操作简便，生产成本低，提取过程中无环境污染、无有机溶剂残留，得到苏芸金素的生产工艺。
[0006]为了达到上述目的，本发明将苏芸金芽孢杆菌菌种活化——培养——双水相萃取法提取得到含有苏芸金素(即外毒素)的溶液的工艺路线。
[0007]本发明的优点是:
[0008]1.本发明步骤简单，易操作，其中PEG (8000)可以回收利用，降低成本。
[0009]2.本发明实验中不存在有机溶剂残留问题，对环境无污染。
[0010]3.本发明中应用双水相萃取技术，实验结果可以放大到工业规模，各种参数可按比例放大而产物收率并不降低。
【具体实施方式】
[0011]下面结合本发明的实施例作进一步详细描述:
[0012]一种苏芸金素(即β-外毒素)的提取方法，将苏芸金芽孢杆菌活化一培养一双水相萃取法提取得到含有苏芸金素(即β-外毒素)的溶液的工艺路线。[0013]所述的苏芸金素(B卩β -外毒素)的提取方法，菌种活化条件为30°C，培养12_48h。
[0014]所述的苏芸金素(B卩外毒素)的提取方法，菌种培养条件为30土TC，转速为180r/min 培养 24_50h。
[0015]所述的苏芸金素(B卩β-外毒素)的提取方法，双水相萃取方法为发酵上清液中加入 15%PEG (8000)和 10%K2HP04，200r/min 振荡 lh，离心，取下层，4°C静置。
[0016]实施例1
[0017]将菌粉用灭菌后的牛肉膏蛋白胨液体培养基稀释，然后转接入斜面培养基上，于培养箱中30°C条件下培养2d，然后置于4°C冰箱中冷藏。将冷藏菌种接入种子培养基，30°C条件下培养至对数生长末期。用500ml三角瓶分装20ml培养液，用牛皮纸封口，灭菌后接入液体培养基种子，然后置于摇床上，30 ± I °C，转速为180r/min培养48h。将发酵液置于高速冷冻离心机中，以8820g离心15min，回收上清液。将15g发酵上清液置于50ml三角瓶中，然后在其中加入PEG (8000)3.15g、磷酸氢二钾2.85g。放入摇床上200r/min振荡lh。将加药品振荡后的液体置于高速冷冻离心机中，以4960g离心lOmin，然后静止隔夜，取下层液，该下层液即为含有苏芸金素(即外毒素)的液体。4°C冷藏备用。
【权利要求】
1.一种苏芸金素的提取方法，将苏芸金芽孢杆菌活化一培养一双水相萃取法提取得到含有苏芸金素的溶液的工艺路线。
2.按照权利要求1所述的苏芸金素的提取方法，菌种活化条件为30°C，培养12-48h。
3.按照权利要求1所述的苏芸金素的提取方法，菌种培养条件为30±1°C，转速为180r/min 培养 24_50h。
4.按照权利要求1所述的苏芸金素的提取方法，双水相萃取方法为发酵上清液中加入15%PEG (8000)和 10%K 2HP04，200r/min 振荡 lh，离心，取下层，4°C静置。
【文档编号】C12R1/07GK103805656SQ201210450202
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2012年11月12日 优先权日:2012年11月12日
【发明者】杨玉焕 申请人:东北林业大学