专利名称：便于反转录pcr扩增的试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及ー种试剂盒，具体涉及ー种便于反转录PCR扩增的试剂盒。
背景技术：
聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的ー种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成ー个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，目前很多的片段扩增是以mRNA序列为模板，经过反转录声称cDNA，然后进行PCR扩增，步骤较为复杂，涉及的试剂较多，目前在进行mRNA提取、反转录和PCR扩增试验时，需要进行试剂的配制和准备，对于实验人员来说配制和准备试剂増加了实验过程中的复杂性。并且因为制作 实验试剂的过程中熟练程度和认知水平的不同，可能配制出的试剂也并不相同，从而不能保证实验结果的稳定性和可靠性。
实用新型内容本实用新型为解决进行反转录PCR扩增实验时，由于实验人员的熟练程度和认知水平的不同，导致实验结果的稳定性和可靠性不能得到保证的问题，进而提供一种便于反转录PCR扩增的试剂盒。本实用新型为解决上述技术问题采取的技术方案是本实用新型所述的ー种便于反转录PCR扩增的试剂盒由盒体和七个试剂瓶组成，所述七个试剂瓶位于盒体内，所述七个试剂瓶分别为TRIZOL试剂瓶、氯仿试剂瓶、异丙醇试剂瓶、こ醇试剂瓶、RNase-Free水试剂瓶、反转录体系混合液试剂瓶和PCR体系混合液试剂瓶，盒体盒底的上端面上加工有七个圆形凹槽，所述TRIZOL试剂瓶、氯仿试剂瓶、异丙醇试剂瓶、こ醇试剂瓶、RNase-Free水试剂瓶、反转录体系混合液试剂瓶和PCR体系混合液试剂瓶对应安装在七个圆形凹槽上，所述七个试剂瓶均为不透光的棕色瓶。本实用新型的有益效果是本实用新型的便于反转录PCR扩增的试剂盒在实验中试剂能够快捷、稳定地进行生物学实验室的mRNA提取、反转录和PCR扩增试验；本实用新型的试剂盒实验有效率高、大大提高了实验结果的稳定性和可靠性，并且操作简便，适合实验室中使用。
图I是本实用新型的便于反转录PCR扩增的试剂的立体图，图2是具体实施方式
一中盒底的俯视图。
具体实施方式
具体实施方式
一如图I所示，本实施方式的便于反转录PCR扩增的试剂盒由盒体8和七个试剂瓶组成,所述七个试剂瓶位于盒体8内，所述七个试剂瓶分别为TRIZOL试剂瓶
I、氯仿试剂瓶2、异丙醇试剂瓶3、こ醇试剂瓶4、RNase-Free水试剂瓶5、反转录体系混合液试剂瓶6和PCR体系混合液试剂瓶7，盒体8盒底的上端面上加工有七个圆形凹槽8-1，所述TRIZOL试剂瓶I、氯仿试剂瓶2、异丙醇试剂瓶3、こ醇试剂瓶4、RNase-Free水试剂瓶5、反转录体系混合液试剂瓶6和PCR体系混合液试剂瓶7对应安装在七个圆形凹槽8-1上，所述七个试剂瓶均为不透光的棕色瓶。
具体实施方式
ニ 如图2所示本实施方式盒体8的长度L为25cm，盒体8的宽度W为10cm，盒体8的高度H为15cm。其他组成及连接关系与具体实施方式
一相同。便于反转录PCR扩增的试剂盒实验的操作步骤步骤一、取IOOmg组织加入Iml TRIZOL试剂瓶I中的试剂匀浆，室温放置5分钟；步骤ニ、在匀浆液中加入200 μ I氯仿试剂瓶2中的试剂，混匀后室温放置5分钟，保持温度为4°C，将混匀后匀浆液放置在离心机离上，离心时间15分钟，控制转速12000转/分钟；步骤三、离心后取上清液加入新EP管中，加入500 μ I异丙醇试剂瓶3中的试剂，混匀后室温孵育10分钟；步骤四、保持温度为4°C，将步骤三混匀的浆液放置在离心机离上，离心时间10分钟，控制转速12000转/分钟，倒掉上清液，加入75%こ醇试剂瓶4中的试剂清洗沉淀；步骤五、保持温度为4°C，将步骤四混匀的浆液放置在离心机离上，离心时间10分钟，控制转速7500转/分钟，倒掉上清液，使沉淀物干燥呈现半透明状，加入50 100 μ IRNase-Free水试剂瓶5中的试剂溶解沉淀，所得溶液为提取到的总mRNA ；步骤六、取2. 5 μ I总mRNA加入PCR管中，加入反转录体系混合液试剂瓶6中的溶液17. 5 μ I，混合后在65°C保温I分钟，在30°C保温I分钟，逐渐升温至65°C，升温时间为15 30分钟，在98°C保温5分钟，在5°C保持5分钟；步骤七、反转录完成后,取反转录后的cDNA溶液I μ I加入PCR管中,加入设计好的上下游引物各I μ I，加入PCR体系混合液试剂瓶7中的试剂17μ 1，PCR反应条件为94°C预变性5分钟，30个循环的94°C 30秒、55°C 30秒、72°C 30秒，最后72°C延伸10分钟，所得PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳观察結果。
权利要求1.一种便于反转录PCR扩增的试剂盒，其特征在干所述试剂盒由盒体(8)和七个试剂瓶组成，所述七个试剂瓶位于盒体(8)内，其特征在于所述七个试剂瓶分别为TRIZOL试剂瓶(I)、氯仿试剂瓶(2)、异丙醇试剂瓶(3)、こ醇试剂瓶(4)、RNase-Free水试剂瓶(5)、反转录体系混合液试剂瓶(6)和PCR体系混合液试剂瓶(7)，盒体(8)盒底的上端面上加工有七个圆形凹槽(8-1)，所述TRIZOL试剂瓶(I)、氯仿试剂瓶(2)、异丙醇试剂瓶(3)、こ醇试剂瓶(4)、RNase-Free水试剂瓶(5)、反转录体系混合液试剂瓶(6)和PCR体系混合液试剂瓶(7)对应安装在七个圆形凹槽(8-1)上，所述七个试剂瓶均为不透光的棕色瓶。
2.根据权利要求I所述的便于反转录PCR扩增的试剂盒，其特征在干盒体(8)的长度(L)为25cm，盒体⑶的宽度(W)为10cm，盒体⑶的高度⑶为15cm。
专利摘要便于反转录PCR扩增的试剂盒，它涉及一种试剂盒。本实用新型为解决进行反转录PCR扩增实验时，由于实验人员的熟练程度和认知水平的不同，导致实验结果的稳定性和可靠性不能得到保证的问题。七个试剂瓶分别为TRIZOL试剂瓶、氯仿试剂瓶、异丙醇试剂瓶、乙醇试剂瓶、RNase-Free水试剂瓶、反转录体系混合液试剂瓶和PCR体系混合液试剂瓶，盒体盒底的上端面上加工有七个圆形凹槽，TRIZOL试剂瓶、氯仿试剂瓶、异丙醇试剂瓶、乙醇试剂瓶、RNase-Free水试剂瓶、反转录体系混合液试剂瓶和PCR体系混合液试剂瓶对应安装在七个圆形凹槽上，七个试剂瓶均为不透光的棕色瓶。本实用新型用于反转录PCR扩增实验。
文档编号C12M1/00GK202465677SQ2012201061
公开日2012年10月3日 申请日期2012年3月20日 优先权日2012年3月20日
发明者侯晓明, 倪华 申请人:东北农业大学