用于检测egfr基因热点突变t790m的试剂盒的制作方法

用于检测egfr基因热点突变t790m的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用于检测EGFR基因热点突变T790M的试剂盒，包括盒体、盒盖和设置在盒体内的衬垫，所述衬垫上设有小孔，装有EGFR20-F1引物的试剂管、装有EGFR20-R1引物的试剂管、装有EGFR20-F2引物的试剂管、装有EGFR20-R2引物的试剂管、装有酶切缓冲液的试剂管、装有PCR扩增试剂的试剂管（9）、装有BSA溶液的试剂管、装有内切酶BstU?Ⅰ的试剂管、装有内切酶Nla?III的试剂管、装有阴性对照的试剂管、装有阳性对照的试剂管被设置在所述小孔内。该试剂盒可用于检测EGFR基因的突变T790M的情况，检测方法快捷方便，检测敏感度高。
【专利说明】用于检测EGFR基因热点突变T790M的试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于分子生物学【技术领域】，涉及基因突变检测试剂盒，尤其涉及一种用于检测EGFR基因热点突变I790M的试剂盒。
【背景技术】
[0002]表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor, EGFR)是一种跨膜受体酪氨酸激酶，属于受体酪氨酸激酶(tyrosine kinase, TK) erbB / HER家族的一个成员，EGFR的激活即磷酸化对调节肿瘤细胞的生长、侵袭、转化、存活、血管生成及转移具有重要意义，研究表明，EGFR在许多恶性肿瘤中过高表达。
[0003]近年来，随着医学分子生物学的发展，分子靶向治疗作为恶性肿瘤治疗的新手段，正日益受到临床工作者们的重视，因此，EGFR作为恶性肿瘤治疗的分子靶标而受到普遍关注。目前已开发出了吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)等表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinases inhibitor,EGFR-TKI )，然而在临床中，有些患者对EGFR-TKI的治疗并不敏感或对该类药物产生耐药，故对EGFR-TKI耐药机制的探索成为国内外研究的热点。有研究结果显示，20号外显子突变为 M (T790M, threonine at position790)是肿瘤对 gefitinib 和 erlotinib 获得性耐药的重要原因。因此，在一线治疗的恶性肿瘤患者中检测EGFR基因热点突变I790M具有重要的临床意义，是决定患者是否能够应用EGFR-TKI治疗的先决条件。
[0004]目前检测EGFR突变主要通过直接测序法，该方法需要通过石蜡组织DNA提取，再进行PCR扩增、测序，最后对测序数据进行分析。这个方法对石蜡包埋组织标本要求高，要求标本中肿瘤组织含量达20%以上，检测敏感度低，检测流程复杂繁琐，对数据分析要求高，且目前无商用试剂盒，对实验室的仪器配备要求也较高。
实用新型内容
[0005]为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测EGFR基因热点突变I790M的试剂盒，可以快速、准确地检测EGFR基因热点突变I790M。
[0006]为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是:一种用于检测EGFR基因热点突变I790M的试剂盒，包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有EGFR20-F1引物的试剂管(4 )、装有EGFR20-R1引物的试剂管(5 )、装有EGFR20-F2弓丨物的试剂管(6)、装有EGFR20-R2弓丨物的试剂管Cl)、装有酶切缓冲液的试剂管(8 )、装有PCR扩增试剂的试剂管(9 )、装有BSA溶液的试剂管(10 )、装有内切酶BstU I的试齐[J管(11 )、装有内切酶NI a 111的试剂管(12 )、装有阴性对照的试剂管(13 )、装有阳性对照的试剂管(14)被设置在所述小孔内。
[0007]其中，所述试剂盒还包括:装有去离子水的试剂管(15)。
[0008]其中，所述阴性对照为EGFR20野生型DNA，所述阳性对照为EGFR20T790M突变型DNA。[0009]其中，所述衬垫(3)上设有12个小孔，所述小孔在所述衬垫(3)上分成三排平行排列。
[0010]其中，引物浓度为5~lOiimol/L，所述引物的序列如下:
[0011]
【权利要求】
1.一种用于检测EGFR基因热点突变I790M的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括盒体(I )、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有EGFR20-F1引物的试剂管(4)、装有EGFR20-R1引物的试剂管(5)、装有EGFR20-F2引物的试剂管(6)、装有EGFR20-R2弓丨物的试剂管(7)、装有酶切缓冲液的试剂管(8)、装有PCR扩增试剂的试剂管(9)、装有BSA溶液的试剂管(10)、装有内切酶BstU I的试剂管(11)、装有内切酶NlaIII的试剂管(12)、装有阴性对照的试剂管(13)、装有阳性对照的试剂管(14)被设置在所述小孔内。
2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括:装有去离子水的试剂管(15)。
3.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述阴性对照为EGFR20野生型DNA，所述阳性对照为EGFR20T790M突变型DNA。
4.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于:所述衬垫(3)上设有12个小孔，所述小孔在所述衬垫(3 )上分成三排平行排列。
【文档编号】C12Q1/68GK203530342SQ201320688950
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】张涵, 熊凯, 程宇, 邢军英, 刘晓峰, 胡广庆, 侯然, 朱立文, 梁超, 王绪华 申请人:北京海思特临床检验所有限公司