培养皿及培养套件的制作方法
【专利摘要】培养皿（10）具备皿主体（20）和支承部件（60）。皿主体（20）具备：内底面（32）成为培养面的有底圆筒形状的颈缩部（30）、圆筒形状且直径大的开口部（40）、和将颈缩部（30）与开口部（40）连结的连结部（50）。开口部（40）的外径与通用的培养皿的外径相同。此外，支承部件（60）形成为环状，外径与通用的培养皿的外径相同。此外，该培养皿（10）的高度与通用的培养皿的高度相同。
【专利说明】培养皿及培养套件
【技术领域】
[0001]本发明涉及培养皿及培养套件。
【背景技术】
[0002]作为用于细胞或组织的培养的培养容器，例如作为通用品而市售有Φ35.ι、Φ 60mm> Φ 100mm、Φ 150mm等的有底圆筒形状的培养皿。
[0003]在角膜或皮肤、口腔粘膜等薄片状的培养细胞(细胞薄片)中，将培养细胞培养到作为培养面(培养皿的内底面)整面的铺满状态的制品作为最终制品用于移植。培养面的面积越大，为了培养到铺满状态越花费时间，需要较多的播种细胞等而效率较差，所以希望培养面的面积相比需要的细胞薄片的尺寸不过大。例如，在角膜中，只要能够得到Φ25πιπι左右的细胞薄片就足够，所以培养面的面积优选的是Φ 25mm左右。
[0004]另一方面，如果单单使培养皿整体的大小匹配于培养面的面积而变小，则发生操作性变差而掉落、或不能对应于设计为适合于通用品的一般的设备仪器等的不良状况。因为这样，所以开发了在通用尺寸的培养皿中配置具有与培养面的面积匹配的底面积的圆筒、能够在该圆筒内培养少量的细胞的结构(参照专利文献I)。
[0005]专利文献1:外观设计注册第1382462号公报。
【发明内容】
[0006]但是，在专利文献I的培养皿中，虽然能够对应于设计为适合于通用品的设备仪器，但在操作性上存在问题。具体而言，有圆筒的开口部过小而难以将细胞薄片取出、或难以将培养液供给到圆筒内的问题。
[0007]本发明是为了解决这样的课题而做出的，目的是提供一种能够对应于设计为适合于通用品的设备仪器、并且操作性较好的培养皿。
[0008]本发明的培养皿及培养套件为了达到上述的主要目的，采用了以下的技术手段。
[0009]即，本发明的培养皿具备皿主体和支承部件；所述皿主体将颈缩部和开口部经由连结部连结，所述颈缩部为内底面成为培养面的有底圆筒形状且直径小，所述开口部为圆筒形状且直径大；所述支承部件设在上述颈缩部的底面的外侧；上述开口部的外径及上述支承部件的外径与通用的培养皿的外径相同。
[0010]在该培养皿中，由于开口部的外径及支承部件的外径与通用的培养皿的外径相同，所以能够对应于适合于通用品而设计的设备仪器。此外，由于用直径小的颈缩部的内底面进行培养，所以能够得到比用通用品进行培养的情况小的细胞薄片。此外，由于在颈缩部上连结着直径大的开口部，所以容易进行细胞薄片比较容易取出的培养液的供给。
[0011]在本发明的培养皿中，也可以是，上述支承部件是环状的支承部件，所述环状的支承部件形成为外径与上述通用的培养皿的外径一致，在上述支承部件与上述颈缩部之间形成有间隙。如果这样，则在将得到的细胞薄片连同培养皿一起浸溃在输送液中的状态下进行输送，在从输送液将培养皿取出而操作细胞薄片时等，由于输送液不易残留在支承部件，所以能够不担心输送液的滴下等而进行操作。
[0012]在本发明的培养皿中，也可以是，上述培养皿的高度与通用的培养皿的高度相同。如果这样，则更容易对应于适合于通用的培养皿而设计的一般的设备仪器等。
[0013]本发明的培养套件具备:上述的本发明的培养皿；和载体，载置在该培养皿的内底面上，以使上述内底面的一部分露出；上述培养皿的内底面被温度响应性聚合物覆盖，所述温度响应性聚合物以规定的临界温度为边界，细胞粘接性和细胞剥离性转换；上述载体具有不依存于温度的细胞粘接性。在该培养套件中，当培养粘接依存性细胞时，通过将内底面维持为作为细胞粘接性的温度，不仅是具有细胞粘接性的载体上，在露出的内底面上，粘接依存性细胞也粘接而增殖，成为细胞薄片。另一方面，通过在成为铺满状态的时点将内底面维持在为细胞剥离性的温度，细胞薄片从内底面剥离，能够得到仅粘接在载体上的细胞薄片。由于细胞薄片非常薄，所以难以取出，但在该培养套件中，只要把持载体而从培养皿取出，就能够将细胞薄片同时取出。这样，能够容易地进行粘接依存性细胞的培养及取出。
[0014]在本发明的培养套件中，也可以是，上述载体具备环状部和耳部，所述环状部具有比上述培养皿的颈缩部的内径稍稍小的外径，所述耳部设在该环状部的外侧，当将上述环状部载置在上述培养皿上时，所述耳部沿着上述培养皿的颈缩部的侧壁竖起，一部分伸出到该侧壁的上方。如果这样，则能够在细胞薄片的外周整体粘接在载体上的状态下将细胞薄片取出，所以能够抑制细胞薄片的收缩及变形等。此外，由于载体的耳部伸出到颈缩部的侧壁的上方，所以容易把持载体，更容易将细胞薄片取出。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1是培养皿10的立体图。
[0016]图2是将培养皿10从上方观察的图。
[0017]图3是将培养皿10从下方观察的图。
[0018]图4是表示图2的各切断面的端面的图。
[0019]图5是培养套件15的立体图。
[0020]图6是载体90的说明图。
[0021]图7是使用培养套件15的细胞薄片的制作方法的说明图。
[0022]图8是包装容器100的说明图。
[0023]图9是包装体200的说明图。
[0024]图10是表示从培养皿10将细胞薄片取出的方法的说明图。
【具体实施方式】
[0025]1.培养皿
接着，使用附图对本发明的优选的一实施方式进行说明。图1是培养皿10的立体图，图2是将培养皿10从上方观察的图，图3是将培养皿10从下方观察的图，图4是表示图2的各切断面的端面的图。图4 (八)对应于八一八切断面，图4 (8)对应于8 — 8切断面，图4 (0对应于(:一(:切断面。
[0026]培养皿10如图1?图4所示，具备皿主体20、支承部件60和桥接部70。该培养皿10是聚苯乙烯树脂制，整体是透明的。因此，在图1?图3中，虽然也应记载透明的里侧的线，但为了方便而将透明的里侧的线省略。
[0027]皿主体20具备颈缩部30、开口部40和连结部50。该皿主体20与通用的培养皿高度相同(这里是12mm)。颈缩部30形成为内底面32为培养面的有底圆筒形状，在底上设有脚36。内底面32的直径在这里为Φ25πιπι。在该内底面32上铺设有温度响应性聚合物。温度响应性聚合物以规定的临界温度(这里是32°C )为边界，在比其低温下显现细胞剥离性，在比其高温下显现细胞粘接性。因此，在培养粘接依存性细胞时，将内底面32的温度维持为例如37°C左右而使内底面32为细胞粘接性，由此细胞粘接在内底面32上而增殖。另一方面，在成为铺满状态的时点，将内底面32的温度降低到例如20°C左右而成为细胞剥离性，由此细胞从内底面32剥离。另外，关于温度响应性聚合物，例如在特开2003 - 38170等中被详细地说明，所以这里省略详细的说明。脚36与设在通用的培养皿的底上的脚同样，是用来防止因皿主体20的底直接接触在作业台等上而发生的损伤等的。该脚36形成为外径与内底面32相同、按照90°具有间隙的环状。开口部40形成为直径比颈缩部30大的圆筒形状，外径与通用的培养皿的外径相同(这里是Φ35πιπι)。连结部50将颈缩部30的上端与开口部40的下端连结。该连结部50具有从颈缩部30的侧壁的上端大致水平地朝外侧扩大、逐渐向外侧上方延伸的剖视圆弧状的形状。另外，在本发明中，所谓通用的培养皿，是指Φ35ι?πι、Φ 60mm> Φ 100mm、Φ 150mm等的作为通用品市售的培养皿。此外，在本发明中，所谓外径或高度与通用的培养皿相同，只要是以能够对应于一般的设备仪器等的程度相同就可以，所述一般的设备仪器适合于该通用的培养皿而设计。
[0028]支承部件60形成为环状。该支承部件60外径与通用的培养皿的外径相同(这里是Φ35πιπι)。此外，支承部件60的下端与皿主体20的脚36的下端高度方向的位置一致。在支承部件60上设有突起62。
[0029]桥接部70在皿主体20与支承部件60之间按照90°设有4处，将皿主体20和支承部件60桥接。由此，形成由皿主体20、支承部件60和桥接部70包围的间隙80。在桥接部70中，有将皿主体20的颈缩部30和支承部件60桥接的第I桥接部72、和不仅是颈缩部30也与连结部50桥接的第2桥接部74，将它们交替地配置。桥接部70的底与皿主体20的底(除了脚36以外)高度方向的位置相同。
[0030]2.培养套件
以下，使用附图对包括上述培养皿10的培养套件的一例进行说明。图5是培养套件15的立体图，图6是载体90的说明图。
[0031]培养套件15如图5、图6所示，具备培养皿10和载体90。关于培养皿10，由于已在上述“1.培养皿”中说明，所以省略说明。载体90是厚度为0.1mm以下(更优选的是0.05mm以下)的聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂(PET)制的薄片，作为细胞粘接面的表面被亲水处理。通过亲水处理，而具有不依存于温度的细胞粘接性。这里，所谓“具有不依存于温度的细胞粘接性”，是指至少在铺设于培养皿10的内底面32上的温度响应性聚合物的临界温度附近(正负10°C以内)不具有细胞粘接性和细胞剥离性明确地转换的温度。该载体90具备具有比培养皿10的颈缩部30的内径稍稍小的外径的环状部92、和在环状部92的外侧按照90°设置的4个耳部94。如果将环状部92载置到培养皿10的内底面32上，则内底面32的一部在环状部92的内侧露出。耳部94如图6那样在虚线部弯折而使用。该耳部94当将环状部92载置到培养皿10上时，沿着培养皿10的颈缩部30的侧壁竖起，一部分伸出到侧壁的上方。
[0032]3.细胞薄片的制作
以下，对使用包括培养皿10的培养套件15制作细胞薄片的操作的一例使用附图进行说明。图7是使用培养套件15的细胞薄片的制作方法的说明图。
[0033]在采取约Imm2的角膜环部组织后，通过胰蛋白酶处理从组织将细胞分散，调制细胞悬浊液。
[0034]在培养皿10的内底面32上铺设载体90 (图7 (A))。并且，在铺设了载体90的内底面32上铺设饲养细胞，播种细胞悬浊液(图7 (B))。作为饲养细胞，使用通过丝裂霉素C或X射线照射等的不活化处理抑制了增殖能力的鼠纤维芽细胞。在细胞播种后，供给含有10v/v%FBS (胎牛血清)的DMEM/F12混合培养基作为培养用培养基，在饲养细胞的存在下培养角膜细胞。通过持续培养角膜细胞，在7天左右达到铺满状态，形成培养角膜细胞的细胞薄片(图7 (C))。在达到铺满状态的时候，饲养细胞几乎全部被从培养系统中排除。培养在培养皿10的内底面32显现细胞粘接性的37°C左右的温度条件下进行。因此，在使用培养套件15的培养中，在培养皿10的内底面32露出的部分中细胞粘接在内底面32上而增殖，在铺设有载体90的部分中，细胞粘接在载体90的上表面上而增殖。此时，粘接在内底面32上的细胞和粘接在载体90上的细胞超过载体90的厚度而结合，形成成为一体的细胞薄片。此时，如果载体90的厚度是0.1mm以下，则细胞容易超过载体的厚度而结合。另外，虽然省略了图示，但在培养时，对培养皿10盖上盖而进行培养。本实施方式的培养皿10由于开口部40及支承部件60的外径是与通用的培养皿相同的Φ 35mm，所以能够原样应用适合于Φ35_的通用的培养皿而设计的盖(通用品)。此外，培养也可以根据需要而在中途进行培养基更换或继代操作。在培养中，也可以使用自动进行温度管理或培养基更换等的自动培养装置。另外，这样的装置一般是适合于通用的培养皿而设计的，从其偏离的培养皿不能使用的情况较多，需要准备专用夹具等的对策。特别是，在把持培养皿而进行培养皿的移动或培养基更换等的类型的装置中，如果外径与通用的培养皿不一致则不能把持培养皿、不能使用的情况较多。本实施方式的培养皿10由于开口部40及支承部件60的外径是与通用的培养皿相同的Φ 35mm,所以能够对这样的装置原样应用。
[0035]4.细胞薄片的包装
以下，对将在上述“3.细胞薄片的制作”中制作出的细胞薄片连同培养皿10 —起包装的操作进行说明。这里，对使用图8所示的包装容器100包装的情况进行说明。
[0036]首先，对包装容器100进行说明。包装容器100是用来将细胞薄片连同培养皿10一起包装而进行保存或输送的容器，具备容器主体110、适配器170和盖体140。
[0037]容器主体110是能够储存输送液等液体的容器，是在侧壁上具有多个阶差的杯状的容器。具体而言，从内底面112朝向上方，形成有第I阶差部114、第2阶差部116、第3阶差部118。在该容器主体110的侧壁上，形成有在上下方向上延伸的一对纵槽124、125。一对纵槽124、125相互面对而形成，从内底面112经过第I阶差部114达到第2阶差部116。在第3阶差部118的外周侧，形成有隔开了较小的阶差的水平面120。
[0038]适配器170用来将培养皿10以从容器主体110的内底面11离开间隔的状态保持。适配器170具备圆筒172、和设在圆筒172的上端的凸缘174。圆筒172是在其内侧固定培养皿10的部位，内径形成得比培养皿10的外径稍大。此外，圆筒172在下端设有折入到内侧的爪186，使得培养皿10不向下方错移。凸缘174弯曲为凹状，具备俯视的形状是将圆用两个平行的弦切掉的形状的弯曲部176、和从两个弦垂直地竖起的I对纵壁178、179。弯曲部176的外周为与容器主体110的第2阶差部116的内周大致相同的形状。此外，在弯曲部176的背侧，设有具有水平的底面的载置爪188，以便稳定地载置到容器主体110的第I阶差部114的上表面上。纵壁178、179分别具备流通用缺口 180、181。该适配器170具备横跨圆筒172和凸缘174的两方将内外贯通而设置的流通孔182、及设在圆筒172的下端处的流通狭缝184。另外，设在培养皿10的支承部件60上的突起62钩挂在流通狭缝184上，限制培养皿10的向上方的移动。
[0039]盖体140将容器主体110的开口封堵。盖体140具备底面142、和设在底面142的外周侧的水平面144，底面142和水平面144用壁面146连结。此外,盖体140具备从底面142隆起的捏手148。在底面142上，平行地形成有多个向下凸的线状的加强用凹部150。该盖体140的外周为与容器主体110的第3阶差部118的外周大致相同的形状。
[0040]使用这样的包装容器100，如以下这样连同培养皿10 —起将细胞薄片包装。首先，将制作出的细胞薄片用清洗液清洗多次。接着，将具有细胞薄片的原状的培养皿10推入到适配器170的圆筒172中而固定，将该适配器170安设到容器主体110内。如果将适配器170安设到容器主体110中，则圆筒172进入到容器主体110的内底面112与第I阶差部114之间，凸缘174的弯曲部176进入到第2阶差部116的内周，设在弯曲部176的底面上的载置爪188被载置到第I阶差部114上。此时，I对的纵壁178、179与设在容器主体110上的I对纵槽124、125对置，在适配器170与容器主体110之间形成将适配器170的上侧的区域与下侧的区域连结的通路。接着，从在纵壁178、179与纵槽124、125之间形成的通路向适配器170的下侧的区域注入输送液，注入直到其水位成为容器主体110的第2阶差部116的上表面的高度。输送液如果其水位超过适配器170的流通用缺口 180、181，则经由流通用缺口 180、181也向适配器170的上侧的区域进入。在输送液的注入时等，有在培养皿10的下方形成空气积存部的情况，但这样的空气除了形成于纵壁178、179与纵槽124、125之间的通路以外，还能够经过设在适配器170上的流通孔182及流通狭缝184、设在培养皿10的脚36与脚36之间的间隙、以及皿主体20与支承部件60之间的间隙80等向适配器170的上方排出。输送液的注入结束后，用盖体140盖住。如果用盖体140将容器主体110盖住，则底面142和壁面146进入到第3阶差部118的内周，水平面144被载置到第3阶差部118的上表面上,水平面144的上表面和水平面120的上表面成为大致同面。然后，在包装容器100的上方载置密闭薄片210 (图中用阴影网格表示)，通过热熔接到包装容器100的上表面上，得到图9所示那样的包装体200。密闭薄片210具备作为从包装容器100剥下时的把手的耳212。
[0041]5.细胞薄片的取出
以下，对从由上述“4.细胞薄片的包装”得到的包装体200将移植用的细胞薄片取出的操作进行说明。
[0042]首先，将包装体200的密闭薄片210从包装容器100剥下，将盖体140从容器主体110拆下，从容器主体110将适配器170取出。接着，在将培养皿10固定在适配器170上的原状下，通过将其倾斜，从流通用缺口 180、181将培养皿10内的不需要的输送液排出。另夕卜，关于输送液的排出，也可以不将适配器170倾斜，而使用注射器或吸管排出。
[0043]接着，从培养皿10将细胞薄片取出。关于以后的操作，使用图10进行说明。首先，通过将培养皿10冷却到201左右，使培养皿10的内底面32成为细胞剥离性，将内底面32和细胞薄片直接接触的部分剥离。此时，是在作为不具有温度响应性的细胞粘接性的薄片的载体90上粘接着细胞薄片的原状。接着，把持载体90的耳部94，连同载体90—起，将形成在其上的细胞薄片取出(图10 (八接着，将细胞薄片中的在载体90的环状部92的内侧部分处形成的部分用手术刀切下(图10 (8)),用于移植等。
[0044]在以上说明的实施方式的培养皿10中，由于开口部40的外径及支承部件60的外径是与通用的培养皿的外径相同的0 35臟，所以能够对应于适合于35臟的通用品而设计的设备仪器。此外，在对培养皿10铺设温度响应性聚合物时，也能够原样使用适合于小35臟的通用的培养皿而设计的设备。
[0045]此外，由于用￠25111111的内底面32进行培养，所以能够得到比用小35臟的通用品进行培养的情况小的细胞薄片，具有以下这样的优点。在上述角膜细胞的培养中，由于细胞薄片是￠25111111左右就足够，所以如果用￠35111111的通用品进行培养，则为了成为铺满状态而花费时间、或播种较多的细胞、或在多余的区域中形成细胞薄片。另一方面，如果使用培养皿10，则能够有效率地得到细胞薄片。
[0046]进而，由于在有底圆筒形状的颈缩部30上连结着直径大的开口部40，所以细胞薄片比较容易取出。关于这一点，在没有开口部40的有底圆筒形状的培养容器中，也可以想到只要容器的深度较浅，细胞薄片就能够容易取出。但是，在细胞的培养中需要某种程度的培养液的液量，在操作时在容器的深度上需要余量以使培养液不会溢出，所以难以使容器变浅。此外，只要对直径大的开口部40供给培养液，该培养液就必然向直径小的颈缩部30流入，所以培养液向培养面的供给较容易。
[0047]进而，由于支承部件60是形成为使外径与通用的培养皿一致的环状的支承部件，在与颈缩部30之间形成有间隙80，所以能够将得到的细胞薄片连同培养皿10 —起在浸溃于输送液中的状态下进行输送，当从输送液将培养皿10取出而操作细胞薄片时等，输送液不易残留在支承部件60中。因此，能够不担心输送液的滴下等而进行操作。
[0048]此外，皿主体20与通用的培养皿高度相同，培养皿10作为整体而与通用的培养皿高度相同。因此，更容易对应于适合于通用的培养皿而设计的一般的设备仪器等。
[0049]此外，培养皿10的内底面32铺设有在规定的临界温度下细胞粘接性和细胞剥离性转换的温度响应性聚合物，进而，将具有不依存于温度的细胞粘接性、当载置时内底面32的一部分露出那样的形状的载体90载置于内底面32上而使用。因此，细胞薄片的培养和取出较容易。此外，由于载体90具备具有比培养皿10的颈缩部30的内径稍稍小的外径的环状部92，所以能够在外周整体粘接在载体90上的状态下将细胞薄片取出。因此，能够抑制细胞薄片的收缩及变形等。此外，由于载体90的耳部94伸出到颈缩部30的侧壁的上方，所以容易把持载体94，更容易将细胞薄片取出。
[0050]此外，通过使用包装容器100那样的包装容器，能够连同培养皿10 —起包装而进行保存及输送。在该包装容器100中，也可以代替培养皿10而使用通用的培养皿。
[0051]另外，本发明完全不限定于上述实施方式，当然只要属于本发明的技术范围，就能够以各种形态实施。
[0052]例如，在上述实施方式中，支承部件60是环状的支承部件，在与颈缩部30之间形成有间隙80，但只要外径与通用的培养皿的外径相同就可以，并不限定于此。例如，支承部件60也可以是在与颈缩部30之间不形成间隙80的圆盘形状，也可以由从颈缩部30以放射状延伸的多个棒状部件构成。这样，也能够对应于适合于通用品而设计的设备仪器。
[0053]在上述实施方式中，培养皿10为聚苯乙烯树脂制，但并不限定于此。例如，可以使用聚氯乙烯树脂、聚乙烯树脂、丙烯酸树脂、聚丙烯树脂、聚甲基戊烯树脂、氟树脂、苯酚树月旨、尿素树脂、环氧树脂、三聚氰胺树脂、硅树脂等各种树脂。此外，培养皿10整体为透明，以便容易确认细胞的状态，但并不限定于此。例如，只要颈缩部30的底是透明的，就能够进行显微镜观察，所以其以外的部分也可以不是透明的。
[0054]在上述实施方式中，假设开口部40和支承部件60的外径是Φ35πιπι，内底面32的直径是Φ 25mm,高度是12mm,但并不限定于此。例如,在细胞薄片的尺寸是Φ 1mm就足够的情况下，内底面32的直径只要设为(MOmm就可以。此外，在需要Φ40πιπι的细胞薄片的情况下，内底面32的直径只要设为Φ40πιπι就可以，在此情况下，例如可以将开口部40和支承部件60的外径设为Φ60mm,以便能够对应于适合于Φ60mm的通用品的设备。高度既可以与通用品相同，也可以不同。
[0055]在上述实施方式的培养皿中，假设内底面32铺设有温度响应性聚合物，但并不限定于此。例如，也可以代替温度响应性聚合物的铺设，而通过细胞粘接性聚合物的铺设或亲水处理等表面处理单单赋予细胞粘接性。通过这样，也能够培养角膜细胞等粘接依存性细胞。在此情况下，为了将细胞剥离而进行酵素处理，由此能够将细胞薄片剥离。表面处理只要是能够得到细胞粘接性的处理，是怎样的处理都可以，例如可以举出骨胶原、纤连蛋白等粘接因子或由温度响应性聚合物等化学材料进行的涂层、通过离子照射或等离子处理等进行的表面改性等。
[0056]在上述实施方式中，桥接部70按照90°设有4处，但并不限定于此。例如也可以不以等间隔设置，也可以设置3处以下或5处以上。此外，为具备将皿主体20的颈缩部30的侧面与支承部件60桥接的第I桥接部72、和不仅是颈缩部30的侧面、与连结部50的下表面也桥接的第2桥接部74、它们交替地配置的结构，但也可以仅具备第I桥接部72，也可以仅具备第2桥接部74。此外，它们也可以不是交替地配置。另外，由于第I桥接部72有液体不易滞留在培养皿10的底上的优点，第2桥接部74有容易提高强度的优点，所以只要根据使用方法等适当选择就可以。此外，桥接部70的底与皿主体20的底(除了脚36以外)高度方向的位置相同，但并不限定于此。例如，也可以与脚36的下端高度方向的位置相同。
[0057]在上述实施方式中，在皿主体20的底上设有脚36，但也可以不具有脚36。此外，脚36按照90°具有间隙，但也可以不具有间隙，间隙也可以不是等间隔地设置，间隙的间隔也可以不是90°。
[0058]在上述实施方式中，使连结部50的形状为从颈缩部30的侧壁的上端大致水平地朝向外侧扩大、逐渐向外侧上方延伸的剖视圆弧状，但并不限定于此。例如，也可以从颈缩部30的侧壁的上端朝向开口部40的上端为平缓的斜坡形状，也可以朝向颈缩部30的侧壁的上端和开口部40的上端的中途地点为平缓的斜坡形状，也可以为从那里到开口部40的上端垂直地竖立的形状。
[0059]在上述实施方式中，进行角膜细胞的培养，但培养的细胞并不限定于此。例如，可以适当地用于皮肤或口腔粘膜等粘接依存性细胞的培养。此外，也可以用于细胞的培养以外的用途。
[0060]在上述实施方式中，铺设使用载体90，但并不一定需要铺设载体90。此外，载体90具备具有比培养皿10的颈缩部30的内径稍稍小的外径的环状部92，但并不限定于这样的结构，只要在将载体90载置在培养皿10的内底面32上时，内定面32的一部分露出就可以。此外，载体90将耳部94按照90。具备4个耳部94，但也可以不具备耳部94，也可以不是等间隔地具备，也可以具备3个以下或5个以上。
[0061]在上述实施方式中，在将得到的细胞薄片用包装容器100包装后取出使用，但也可以不进行这样的包装。此外，也可以用包装容器100以外的包装容器包装。
[0062]本申请以2012年5月31日提出申请的日本专利申请第2012 — 124818号为基础主张优先权，在本说明书中通过引用而包含其全部内容。
[0063]产业上的可利用性
本发明能够在生物体外(111 ^1^0)培养细胞的细胞培养技术中使用。
[0064]附图标记说明
10培养皿，15培养套件，20皿主体，30颈缩部，32内底面，36脚，40开口部，50连结部，60支承部件，62突起，70桥接部，72第1桥接部，74第2桥接部，80间隙，90载体，92环状部，94耳部，100包装容器，110容器主体，112内底面，114第1阶差部，116第2阶差部，118第3阶差部，120水平面，124、125纵槽，140盖体，142底面，144水平面，146壁面，148捏手，150加强用凹部，170适配器，172圆筒，174凸缘，176弯曲部，178、179纵壁，180、181流通用缺口，182流通孔，184流通狭缝，186爪，188载置爪，200包装体，210密闭薄片，212耳。
【权利要求】
1.一种培养皿,其特征在于， 具备皿主体和支承部件； 所述皿主体将颈缩部和开口部经由连结部连结，所述颈缩部为内底面成为培养面的有底圆筒形状且直径小，所述开口部为圆筒形状且直径大； 所述支承部件设在上述颈缩部的底面的外侧； 上述开口部的外径及上述支承部件的外径与通用的培养皿的外径相同。
2.如权利要求1所述的培养皿，其特征在于， 上述支承部件是环状的支承部件，所述环状的支承部件形成为外径与上述通用的培养皿的外径一致，在上述支承部件与上述颈缩部之间形成有间隙。
3.如权利要求1或2所述的培养皿，其特征在于， 上述培养皿的高度与通用的培养皿的高度相同。
4.一种培养套件，其特征在于， 具备:权利要求1?3中任一项所述的培养皿；和 载体，载置在该培养皿的内底面上，以使上述内底面的一部分露出； 上述培养皿的内底面被温度响应性聚合物覆盖，所述温度响应性聚合物以规定的临界温度为边界，细胞粘接性和细胞剥离性转换； 上述载体具有不依存于温度的细胞粘接性。
5.如权利要求4所述的培养套件，其特征在于， 上述载体具备环状部和耳部，所述环状部具有比上述培养皿的颈缩部的内径稍稍小的外径，所述耳部设在该环状部的外侧，当将上述环状部载置在上述培养皿上时，所述耳部沿着上述培养皿的颈缩部的侧壁竖起，一部分伸出到该侧壁的上方。
【文档编号】C12M3/00GK104334713SQ201380028128
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2013年5月17日 优先权日:2012年5月31日
【发明者】淡海阳子, 井家益和, 杉浦诚, 诹访裕子, 小笠原隆广 申请人:株式会社日本组织工程