一种采用pcr方法扩增粪便细粒棘球绦虫dna的方法
【专利摘要】本发明公开了一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，(1)PCR反应总体积为25μl，包括0.1μg?BSA、pH9.2?104μmol/L?Tri?s-HCl、2.5×104μmol/L?KCl、1.5×103μmol/LMgCl2、200μmol/L?dNTP、0.4μmol/L引物、2.5UTaq酶及2.5μl?DNA样品；上游引物Eglf：5′-CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物Eglr：5′-CACATCATCTTA-CAATAACACC-3′；目的片段大小为255bp；(2)热循环参数：95℃预变性5min；95℃30s；53.5℃30s；72℃45s；共40次循环；72℃后延伸10min；(3)1.5％琼脂糖电泳检测PCR产物。本发明所带来的有益效果是：采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。
【专利说明】-种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及寄生虫检测【技术领域】，具体为一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦 虫DNA的方法。
【背景技术】
[0002] 细粒棘球绦虫有较广泛的宿主适应性，分布遍及世界各大洲牧区，主要以犬和偶 蹄类家畜之间循环为特点，在我国主要是绵羊/犬动物循环，牦牛/犬循环仅见于青藏高原 和甘肃省的高山草甸和山麓地带。
[0003] 我国是世界上棘球蚴病流行最严重的国家之一，主要流行区在我国西部和北部广 大农牧地区，即新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙和四川7省区，其次是陕西、山西和河北 部分地区。另外，在东北三省、河南、山东、安徽、湖北、贵州和云南等省有散发病例。迄今全 国已有23个省、市、区证实有当地感染的病人。据几个重点流行省区的不完全统计，全国 受棘球蚴病威胁的人口约5000万，患病人数约为50?60万，人群中最易感染者是学龄前 儿童（新疆15289例病人中，15岁以下者占32. 1 %)。主要动物中间宿主绵羊的感染率在 3. 3%?90%之间，家犬的感染率在7%?71 %之间。随着西部大开发战略的实施，对本病 的防治日益成为重要的任务。
[0004] 因此，迫切需要一种有效检测细粒棘球绦虫DNA的方法。
【发明内容】
[0005] 为了克服以上技术缺陷，本发明提供一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫 DNA的方法。
[0006] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案为，一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘 球绦虫DNA的方法，具体为，
[0007] (l)PCR 反应总体积为 25μ 1，包括 0· lyg BSA、pH9.2 104ymol/L Tris-HCl、 2.5X104ymol/L KCl、1.5X103ymol/LMgC12、200ymol/L dNTP、0.4ymol/L 引物、 2. 5UTaq 酶及 2. 5 μ 1 DNA 样品；
[0008] 上游弓丨物 Eglf :5 ' -CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物 Eglr : 5' -CACATCATCTTA-CAATAACACC-3，；目的片段大小为 255bp ;
[0009] (2)热循环参数：95°C预变性 5min ;95°C 30s ;53. 5°C 30s ;72°C 45s ;共 40 次循环； 72°C后延伸 lOmin ;
[0010] (3) 1· 5%琼脂糖电泳检测PCR产物。
[0011] 本发明所带来的的有益效果是：采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消 除了虫卵的感染力，对操作者更加安全。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能 对虫卵数做出预测。
【具体实施方式】
[0012] 本发明为一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，
[0013] (l)PCR 反应总体积为 25μ 1，包括 0· lyg BSA、pH9.2 104ymol/L Tris-HCl、 2.5X104ymol/L KCl、1.5X103ymol/LMgC12、200ymol/L dNTP、0.4ymol/L 引物、 2. 5UTaq 酶及 2. 5 μ 1 DNA 样品；
[0014] 上游引物 Eglf :5 ' -CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物 Eglr : 5' -CACATCATCTTA-CAATAACACC-3，；目的片段大小为 255bp ;
[0015] (2)热循环参数：95°C预变性 5min ;95°C 30s ;53. 5°C 30s ;72°C 45s ;共 40 次循环； 72°C后延伸 lOmin ;
[0016] (3) 1· 5%琼脂糖电泳检测PCR产物。
[0017] 采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力，对操作者更 加安全。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。
[0018] 本发明不局限于上述实施方式，任何人应得知在本发明启示下做出的结构变化所 得出的相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。
[0019] 本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。
【权利要求】
1. 一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，其特征在于，具体为， (1) PCR 反应总体积为 25μ 1，包括 0· 1μ g BSA、pH9. 2 104ymol/L Tris-HCl、 2.5X104ymol/L KCl、1.5X103ymol/LMgC12、200ymol/L dNTP、0.4ymol/L 引物、 2. 5UTaq 酶及 2. 5 μ 1 DNA 样品； 上游引物 Eglf :5 ' -CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物 Eglr : 5' -CACATCATCTTA-CAATAACACC-3';目的片段大小为 255bp ; (2) 热循环参数：95°C预变性5min ;95°C30s ;53. 5°C30s ;72°C45s ;共40次循环；72°C 后延伸lOmin ; (3) 1. 5 %琼脂糖电泳检测PCR产物。
2. 如权利要求1所述的采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，其特征在于， 检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力。
【文档编号】C12Q1/68GK104195261SQ201410491712
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月24日 优先权日:2014年9月24日
【发明者】陈启龙, 马嵋, 张亚楼, 王雪梅 申请人:陈启龙, 马嵋