含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品的制作方法

本发明属于保健品领域，具体涉及一种具有抗乳腺癌功能的含有稻壳黄酮的保健品。

背景技术：

肿瘤是严重威胁人类健康的一类常见疾病，是人类健康的三大杀手之一，其中乳腺癌是一种常见的严重影响女性身心健康甚至危及生命的恶性肿瘤，据资料统计，乳腺癌发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10％，在妇女中仅次于子宫癌，寻找有效的抗癌药物和方法，是世界医学面临的重要课题。中药是祖国医学用来防治疾病的有力武器，与化学合成药物相比，中药除了具有取材方便、价格低廉和毒副作用小等优点外，更重要的是，在减轻临床症状，提高生存质量，防止复发转移，延长生存期，预防肿瘤，提高患者免疫力，增强放、化疗敏感性，减轻放、化疗不良反应等很多方面发挥着重要作用。同时，随着社会的进步，生产力的发展，现代人越来越把注意力从化合成药转向天然药，希望从天然药物中开发出更为安全有效的新药以替代前者，从而减少药源疾病的发生。因此，发展中草药不仅传承了中华民族千百年的精华，也具有广大的市场前景及经济效益。

技术实现要素：

本发明目的是以我国广泛种植的禾本科粮食作物水稻的加工副产物稻壳出发，制备稻壳黄酮和其他中药提取物混合，提供一种抗乳腺癌的天然保健品。

本发明采用的技术方案是：

含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

稻壳黄酮50-70％，肉苁蓉提取物5-10％，补骨脂提取物5-10％，

桑寄生提取物5-10％，川芎提取物5-10％，紫河车提取物5-10％。

所述的含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，所述稻壳黄酮的制备方法如下：

1)纤维素酶酶解提取：料液比按质量比1:20-1:30，将稻壳粉末溶于水，纤维素酶加入量为150-180u/g，进行热水浸提，控制温度为40-60℃，ph范围值4.0-6.0，酶解时间为1-3h，离心，过滤，得纤维素酶酶解提取液备用，沉淀物a继续进行乙醇辅助提取；

2)乙醇辅助提取：料液比按质量比1:10-1:30，将沉淀物a溶于乙醇，乙醇体积分数为50-70％，提取时间为2-3h，离心，过滤，得乙醇辅助提取液备用，沉淀物b继续进行超声浸提；

3)超声浸提：料液比按按质量比1:20-1:30，将沉淀物b溶于乙醇，乙醇体积分数为50-70％，超声波功率为160-200w，超声时间为20-40min，抽滤，得超声浸提提取液备用；

4)合并纤维素酶酶解提取液、乙醇辅助提取液和超声浸提提取液，将总提取液旋转蒸发浓缩，滤纸初过滤后，用滤膜进行超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得到粗稻壳黄酮干粉。

所述的含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，所述肉苁蓉提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的肉苁蓉固体粉末；分别按质量比1:10比例称取肉苁蓉固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得肉苁蓉提取物。

所述的含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，所述补骨脂提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的补骨脂固体粉末；分别按质量比1:10比例称取补骨脂固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得补骨脂提取物。

所述的含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，所述桑寄生提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的桑寄生固体粉末；分别按质量比1:10比例称取桑寄生固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得桑寄生提取物。

所述的含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，所述川芎提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的川芎固体粉末；分别按质量比1:10比例称取川芎固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得川芎提取物。

所述的含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，所述紫河车提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的紫河车固体粉末；分别按质量比1:10比例称取紫河车固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得紫河车提取物。

本发明的有益效果是：采用水稻加工副产物稻壳粉末提取的黄酮作为活性物质，制备抗乳腺癌保健品或药品，提取方法简单，不存在合成药剂的毒副作用，对设备的要求低，中间产物及终产物均无毒，安全性高，生产成本低，而且服用和携带十分的方便，吸收快速且效果好，因此拥有十分广阔市场前景，适合工业生产。

本发明开创性的技术是将稻壳黄酮最为抗乳腺癌的核心功能性原料，根据现代营养学模型合理搭配、科学组合应用，形成具有抗乳腺癌的黄酮、中草药混合保健品。本发明通过对人体外乳腺癌细胞的实验研究，发现稻壳黄酮的组合物对体外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于乳腺癌的防治有着非常显著的效果，相对于现有技术，本发明所得的治疗乳腺癌的黄酮与中药组合物，成本低，工艺简单，不仅能够进一步提高疗乳腺癌疗效，还能显著降低化药治疗的副作用。

附图说明

图1是稻壳黄酮组合物对人乳腺癌细胞株mcf-7细胞生长影响。

图2是稻壳黄酮组合物抑制mcf-7细胞集落形成的集落试验结果。

图3是稻壳黄酮组合物抑制mcf-7细胞迁移试验结果。

具体实施方式

实施例1含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品

(一)稻壳黄酮的制备

采用纤维素酶酶解—乙醇浸提—超声波分步法的工艺组合提取稻壳黄酮，具体步骤如下：

1)纤维素酶酶解：将稻壳去除杂质，干燥，经粉碎机粉碎，过60目筛，制成稻壳粉末。料液比按质量比1:30，将稻壳粉末溶于水，纤维素酶加入量为150u/g，进行热水浸提，控制温度为50℃，ph＝5.0，酶解时间为2h，4000r/min进行离心15min，过滤，得纤维素酶酶解提取液备用，沉淀物a继续进行乙醇辅助浸提；

2)乙醇辅助提取：料液比按按质量比1：20，将沉淀物a溶于乙醇，乙醇体积分数为60％，提取时间为3h，离心，过滤，得乙醇辅助提取液备用，沉淀物b继续进行超声浸提；

3)超声浸提：料液比按按质量比1:20，将沉淀物溶于乙醇，乙醇体积分数为60％，超声波功率为180w，超声时间为30min，抽滤，得超声浸提提取液备用；

4)合并纤维素酶酶解提取液、乙醇辅助提取液和超声浸提提取液，将总提取液旋转蒸发浓缩，滤纸初过滤后，用滤膜进行超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得到粗稻壳黄酮干粉。

(二)肉苁蓉提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的肉苁蓉固体粉末；按质量比1:10比例称取肉苁蓉固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得肉苁蓉提取物。

(三)补骨脂提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的补骨脂固体粉末；按质量比1:10比例称取补骨脂固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得补骨脂提取物。

(四)桑寄生提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的桑寄生固体粉末；按质量比1:10比例称取桑寄生固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得桑寄生提取物。

(五)川芎提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的川芎固体粉末；按质量比1:10比例称取川芎固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得川芎提取物。

(六)紫河车提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的紫河车固体粉末；按质量比1:10比例称取紫河车固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得紫河车提取物。

(七)含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品组合物(简称稻壳黄酮组合物)

由以下原料按重量百分比组成：

稻壳黄酮70％,肉苁蓉提取物10％，补骨脂提取物5％，

桑寄生提取物5％，川芎提取物5％，紫河车提取物5％。

(八)mtt实验

本实施例使用人乳腺癌细胞株mcf-7细胞，采用mtt法检测稻壳黄酮组合物体外抗癌活性，实验步骤如下：

1)取对数生长期的乳腺癌癌细胞系(mcf-7)细胞接种于96孔板，过夜培养使其贴壁；

2)稻壳黄酮组合物的浓度(12.5、25、50mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后将96孔板放在37℃恒温培养箱中继续培养4h；

5)处理结束后，将mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓒晶体完全溶解；

6)通过测量每个孔在490nm处的吸光度值来评估mcf-7细胞的增值；结果如图1所示。

如图1所示，不同浓度的稻壳黄酮组合物(12.5、25和50mg/ml)分别孵育mcf-7细胞24h，然后利用mtt比色法检测。结果显示，处理乳腺癌细胞一段时间后，浓度为25、50mg/ml的稻壳黄酮组合物均表现出显著的抑制作用，浓度为50mg/ml组抑制率在24h后达到了78％，结果表明，稻壳黄酮组合物在体外可抑制人乳腺癌细胞生长。

(九)集落形成实验

不同的处理组的乳腺癌细胞以每孔1000个细胞的密度接种于孔板上，培养过夜使其贴壁。分别加入25和50mg/ml的稻壳黄酮组合物培养10d，吸出培养基，每孔用pbs仔细洗两次。使用甲醇将集落固定20min，然后用0.5％结晶紫染色15min，用清水冲洗并拍照，结果如图2所示。

如图2所示，稻壳黄酮组合物抑制乳腺癌细胞集落形成的集落试验结果。稻壳黄酮组合物孵育mcf-7细胞一段时间后，集落数量与对照组相比明显降低。24h后浓度为25mg/ml时能够显著减少乳腺癌细胞形成的集落，浓度为50mg/ml时集落的减少极显著。

(十)transwell实验

肿瘤细胞迁移实验采用直径为6.5mm的transwell小室，其中内孔大小为8.0μm。将mcf-7细胞血清饥饿24h，然后使用胰蛋白酶消化，计数，并用无血清dmem培养基重悬。大约1×10⁵细胞被接种到上层小室，下层小室加入含有10％胎牛血清的dmem培养基。细胞放在37℃培养24h。培养后，上层小室内表面的细胞被迁移。将穿过小室的细胞固定和染色并在显微镜下统计。每个实验组做三个平行取其平均值，结果如图3所示。

由图3可见，肿瘤细胞的一个重要特点是他们具有入侵和迁移到远端器官的能力，这是几乎所有癌症死亡的主要原因，利用transwell实验分析稻壳黄酮组合物对mcf-7细胞的迁移影响。如图3所示，与对照组相比，稻壳黄酮组合物处理组mcf-7细胞跨膜迁移的数量大幅下降，结果显示稻壳黄酮组合物可以显著抑制mcf-7细胞迁移。

实施例2含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品

含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

稻壳黄酮60％，肉苁蓉提取物5％，补骨脂提取物10％，

桑寄生提取物5％，川芎提取物10％，紫河车提取物10％。

实施例3含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品

含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

稻壳黄酮50％，肉苁蓉提取物10％,补骨脂提取物10％，

桑寄生提取物10％，川芎提取物10％，紫河车提取物10％。