本发明涉及饲料添加剂的技术领域，具体涉及一种具有饲料添加剂的混合鱼饲料及制备方法。
背景技术
一方面，金银花是我国广泛分布的传统中草药植物资源，主要包含有机酸类、挥发油、黄酮类和三萜皂苷类化合物以及微量元素等活性成分。其根、茎、叶和花朵，均可被有效利用于药品、保健品和食品等。而中药企业每天都会产生药渣，包括大量的金银花药渣，以往，工业处理药渣的方式，主要是堆放、填埋或者是焚烧等。近来，报道中药渣的综合利用方法，主要有粗加工为食用菌的栽培料、禽畜饲料和有机肥等。但是都未能提高药渣的综合利用价值。特别是金银花经传统乙醇回流法(包括索氏提取法)提取之后，其药渣仍含有大量绿原酸、黄酮等活性成分，如不能提高其综合利用方法，对中药生产企业是一个重要的浪费。
另一方面，水体富营养化已成为一个全球性的现象，并呈现出增长的趋势。流入水体的过量营养物质(如氮、磷等)，被认为是富营养化的主要原因。水体轻度富营养化虽然不会造成大量的养殖鱼死亡，但是会造成鱼肉中粗脂肪和粗蛋白含量升高，肌苷酸、鲜味氨基酸和必需氨基酸显著下降，饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的比例失衡，脂质过氧化产物丙二醛的产生，从而降低了鱼肉新鲜度、鲜香度和营养品质。其主要原因在于富营养化导致了有毒藻类的疯狂生长，当鱼虾等动物吃了这些有毒的藻类后，大量的毒素会直接或间接的在体内累积，导致鱼体的代谢出现了紊乱，其抗病能力、抗应激力和耐低氧能力都显著降低。但是，目前却缺少具有明确改善轻度富营养化水体中鱼肉品质的饲料添加剂。常规的饲料添加剂通过添加抗生素短暂追求高效益，不仅不会改善肉类品质而且长期使用还会因为抗生素副作用而造成的鱼类死亡，不利于水产养殖业的长期发展。因此，本发明利用微波辅助提取法，对金银花药渣中的有效成分进行提取再利用，提取物作为饲料添加剂，来改善富营养化水体养殖鱼的鱼肉品质。
技术实现要素：
本发明是针对上述问题，设计了金银花药渣醇提物作为添加剂添加在鱼饲料中，使传统索氏提取后的金银花药渣变废为宝，实现对中药资源综合利用的最大化，同时改善轻度富营养水中鱼肉品质。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种饲料添加剂：
所述饲料添加剂为金银花药渣醇提物粉末；所述金银花药渣醇提物粉末的原料为经索氏提取后的金银花药渣，对所述金银花药渣进行乙醇～微波提取，制得金银花药渣醇提物；将所述金银花药渣醇提物经研碎过50目筛制得所述金银花药渣醇提物粉末；所述金银花药渣醇提物粉末的有效成分包括绿原酸28～35mg/g、木樨草素8～15mg/g、槲皮素4～10mg/g、芦丁5～13mg/g。
进一步的，金银花药渣醇提物粉末的有效成分包括，所述绿原酸的含量为29.8mg/g，所述木樨草素的含量为9.53mg/g，所述槲皮素的含量为5.07mg/g，所述芦丁的含量为6.98mg/g。
由上述饲料添加剂制得的一种混合鱼饲料：
所述混合鱼饲料为基础鱼饲料和所述饲料添加剂搅拌均匀后制的混合物，适用于轻度富营养水体中的鱼类养殖；其中，所述基础鱼饲料和所述饲料添加剂的质量比为
1000:8～1000：15；所述轻度富营养水体是指综合营养状态指数为50～60的水体。
进一步的，所述基础鱼饲料的有效成分包括蛋白质60％，粗脂肪24％，水分8％。
本发明还包括一种饲料添加剂的制备方法：
包括以下步骤：
(1)将经索氏提取后的金银花药渣进行烘干，烘干温度为40℃；
(2)向烘干后的金银花药渣中加入乙醇溶剂，其中金银花药渣与乙醇溶剂的料液比为1:15～1:25，制得金银花药渣料液；所述乙醇溶剂的浓度为50％～70％；
(3)对所述金银花药渣料液进行乙醇～微波提取，其微波功率200～400w，提取温度40℃～60℃，提取时间15～30min，制得金银花药渣滤液；
(4)将所述金银花药渣滤液进行旋转蒸发，浓缩至原滤液体积的8％～15％，其中旋转温度为60℃～75℃，制得金银花药渣浓缩液；
(5)将所述金银花药渣浓缩液进行冷冻干燥，制得金银花药渣醇提物；
(6)将所述金银花药渣醇提物研碎过50目筛制得金银花药渣醇提物粉末，所述金银花药渣醇提物粉末的有效成分包括绿原酸28～35mg/g、木樨草素8～15mg/g、槲皮素
4～10mg/g、芦丁5～13mg/g。
进一步的，所述步骤(5)中将所述金银花药渣浓缩液进行冷冻干燥，制得金银花药渣醇提物，其中冷冻温度-40℃～-60℃，真空度20pa～40pa，冷冻时间2～4天。
本发明的有益效果包括：
1.经索氏提取后的金银花药渣进行再提取，实现废物利用，改变了以往处理药渣的方式即主要是堆放、填埋或者是焚烧，提高其综合利用价值，节约了中药生产企业的成本，避免浪费，绿色经济。
2.采用微波辅助醇提取金银花药渣中的有效成分，这种方法快速高效，加热均匀，能够快速升温和破坏植物的细胞膜，从天然金银花植物组织中提取各种化学成分，其有效成分不会降解。
3.饲料添加剂有效成分：绿原酸、木樨草素、槲皮素、芦丁等，其中，绿原酸具有抗氧化、抗肿瘤、抑制突变等作用；木犀草素是一种天然黄酮类化合物，存在于多种植物中，具有多种药理活性，如消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等；槲皮素的碱性水溶液，呈黄色，几乎不溶于水、乙醇溶液，味苦，可作为药品，有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用；芦丁可用作食用抗氧化剂和营养增强剂等，芦丁有维生素p样作用和抗炎作用。
4.添加剂添加于基础鱼饲料中，用于轻度富营养化水体中鱼类的养殖，调节养殖鱼的代谢功能，从而增强其抗病能力，提高了养殖鱼的成活率。
5.添加剂添加于基础鱼饲料中，用于轻度富营养化水体中鱼类的养殖，充分发挥了其活性成分的抗氧化和代谢调节功效，从而在显著增加鱼的体重和鱼肉粗蛋白水平的同时，也提升了鱼肉肌苷酸和k值、鲜味氨基酸和必需氨基酸水平、不饱和脂肪酸水平，而降低了其粗脂肪与饱和脂肪酸水平，达到了改善鱼肉新鲜度、鲜香味和营养水平的目的。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本发明金银花药渣醇提物的制备：
原料准备：金银花中药材经索氏提取器提取后得到金银花药渣。
(1)将经索氏提取后的金银花药渣进行烘干，烘干温度为40℃，烘干至可以用粉碎机粉碎即可；
(2)向烘干后的金银花药渣中加入乙醇溶剂，其中金银花药渣与乙醇溶剂的料液比为1:20，制得金银花药渣料液；所述乙醇溶剂的浓度为60％；
(3)对所述金银花药渣料液进行乙醇～微波提取，微波装置为新仪mas-ii型常压微波合成/萃取反应工作站；具体方法是将所述金银花药渣料液置于二口烧瓶中，将二口烧瓶放置于微波装置内，在所述微波装置外设置冷凝管，并将所述冷凝管与所述二口烧瓶中的其中一口接通，所述二口烧瓶的另一口设置有温度探测器；其微波功率300w，提取温度50℃，提取时间20min，制得金银花药渣滤液；
(4)将所述金银花药渣滤液进行旋转蒸发，浓缩至原滤液体积的10％，其中旋转温度为70℃，制得金银花药渣浓缩液；
(5)将所述金银花药渣浓缩液进行冷冻干燥，其中冷冻温度-58℃，真空度30pa，冷冻时间3天，制得金银花药渣醇提物；
(6)将所述金银花药渣醇提物研碎过50目筛制得金银花药渣醇提物粉末，所述金银花药渣醇提物粉末的有效成分包括绿原酸29.8mg/g、木樨草素9.53mg/g、槲皮素5.07mg/g、芦丁6.98mg/g。
实施例2
本发明金银花药渣醇提物作为饲料添加剂，提高轻度富营养化水体中养殖鱼的鱼肉品质的试验。
1实验材料
1.1实验药物
本发明金银花药渣醇提物作为鱼饲料添加剂，金银花药渣醇提物粉末由实施例1制备而成，将基础鱼饲料与添加剂搅拌混匀后备用；其中，基础鱼饲料有效成分包括蛋白质60％，粗脂肪24％，水分8％，其他8％；基础鱼饲料和所述饲料添加剂的质量比为1000:10。
2试验方法
2.1试验动物与分组
为便于实验室操作，本试验采用ab野生型斑马鱼，由中国科技大学生命科学院友情提供。提供时，斑马鱼体长约1.5cm，体重约为0.12g左右，按体重随机将斑马鱼分成3组(每组100尾)，分别是除氯自来水正常饲料组(简称正常组)、轻度富营养化水正常饲料组(简称富营养化组)、轻度富营养化水体中每1000g鱼饲料中的加入量为10g金银花药渣醇提物的饲料组(简称醇提物组)。轻度富营养化水采集自野外轻度富营养化养殖水源，其综合营养状态指数为55。
2.2养殖条件：水温控制在27-28℃，光照时间：黑暗时间为14:10h，每周换水两次，换水时检测水体中总氮和总磷变化，持续喂养6周。
2.3鱼的生长指标测定
2.3.1每周记录斑马鱼体重和死亡率。
2.3.2粗蛋白含量的测定，采用凯氏定氮法(gb/t33862-2017)。
2.3.3粗脂肪含量的测定，采用索氏提取法(gb/t14772-2008)。
2.3.4水分含量的测定，采用冷冻干燥法，比较干燥前后的质量差。
2.3.5肌苷酸(以及atp降解产物)含量测定，采用高效液相色谱法。
2.3.6游离氨基酸的组成和含量测定，使用氨基酸分析仪分析。
2.3.7脂肪酸的组成和含量测定，采用气-质联用法分析。
2.3.8鱼肉脂质过氧化产物丙二醛(mda)和dpph自由基清除效果测定，使用酶标仪测定。
3试验结果
3.1添加金银花药渣醇提物对不同水体中斑马鱼生长性能的影响：体重方面，富营养化组相比正常组体重增加2.5％，醇提物组体重比富营养化组增加5.1％。成活率方面，富营养化组斑马鱼比正常组降低了12.9％，醇提物组比富营养化组增加12.9％。
3.2添加金银花药渣醇提物对不同水体鱼肉中粗蛋白含量的影响：富营养化组斑马鱼粗蛋白含量比正常组增加了25.6％，醇提物组比富营养化组高26.4％，各组鱼肉水分含量无明显差异。
3.3添加金银花药渣醇提物对不同水体中鱼肉肌苷酸和k值的影响：从肌苷酸水平来看，富营养化组斑马鱼比正常组降低了31.6％，醇提物组比富营养化组增加了49.8％。从k值来看，富营养化组斑马鱼比正常组增加了11％，醇提物组比富营养化组降低了39.9％。说明醇提物组鱼体新鲜度最高。
3.4添加金银花药渣醇提物对不同水体中鱼肉脂肪酸的组成和含量的影响：饱和脂肪酸含量方面，富营养化组比正常组增加了25.3％，醇提物组比富营养化组降低10.2％；单不饱和脂肪酸方面，富营养化组比正常组增加了47.1％，醇提物组比富营养化组增加了19.9％；多不饱和脂肪酸方面，富营养化组比正常组降低了1％，醇提物组比富营养化组增加了14.7％。说明醇提物组相对于富营养化组，鱼体脂肪酸相关营养品质改善。
3.5添加金银花药渣醇提物对不同水体中鱼肉氨基酸组成和含量的影响：鲜味氨基酸(asp、glu、gly、ala)方面，富营养化组比正常组降低了85.6％，醇提物组比富营养化组增加了95.6％；必需氨基酸方面，富营养化组比正常组降低了46％，醇提物组比富营养化组增加了58.9％。说明醇提物组相对于富营养化组，鱼肉鲜香度和氨基酸营养品质大大改善。
3.6添加金银花药渣醇提物对不同水体中鱼肉脂质过氧化产物丙二醛和dpph清除自由基能力的影响：mda含量方面，富营养化组比正常组增加了74.7％，醇提物组比富营养化组降低了42.9％。从dpph清除自由基能力来看，富营养化组比正常组降低了5％，醇提物组比富营养化组提高了21.8％。说明醇提物组相对于富营养化组，鱼体抗氧化能力显著改善。
由上述一系列试验可看出金银花药渣醇提物粉末添加于基础鱼饲料后制得的混合鱼饲料，用于轻度富营养化水体中鱼类的养殖，充分发挥了其活性成分的抗氧化和代谢调节功效，从而在显著增加鱼的体重和鱼肉粗蛋白水平的同时，也提升了鱼肉肌苷酸和k值、鲜味氨基酸和必需氨基酸水平、不饱和脂肪酸水平，而降低了其粗脂肪与饱和脂肪酸水平，达到了改善鱼肉新鲜度、鲜香味和营养水平的目的。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。