本发明涉及生物医药健康
技术领域：
，特别是涉及一种雪莲蛹虫草组合物、制品、应用及制备方法。
背景技术：
：衰老是生物器官功能随着时间的推移逐步衰退的一种生理现象，是一个缓慢渐进而又不可避免的自然规律。人体衰老过程中的生理变化主要体现在机体组织细胞和构成物质的丧失，机体代谢率的减缓，机体和器官功能的减退等。此外，根据美国全国衰老研究所对各年龄段人们健康状况的衰老研究，发现随着时间的推移而出现的衰老，其过程包含了很多种表现形式，例如：(1)随着大脑的衰老，会出现反应迟钝、长期记忆和瞬间记忆的减退等现象；(2)随着皮肤的衰老，会出现皱纹、色斑以及干燥等情况；(3)随着性功能的衰老，男性会出现由于精子产生能力下降而导致的性欲衰退以及不育等症状，女性会出现由于雌激素分泌减少而导致的性欲减退和不孕等症状；(4)随着五官功能的衰老，会出现听觉、嗅觉、视觉和味觉减退等情况；(5)随着肺部功能的衰老，会出现由于肺部弹性下降，不能够充分充气和排气，而出现肺活量减少的情况；(6)随着动脉、骨骼、肌肉、心脏等机体的衰老而出现的其他相关症状等。虽然现在已经有许多关于导致衰老原因的学说，但是很多学说都还未得到实验研究的支持，衰老的生物机制研究尚不明确。衰老与一些慢性人类疾病存在密切的关系，包括各种癌症、2型糖尿病(t2dm)、心血管疾病和神经退行性疾病等。虽然衰老是不可避免的，但延缓衰老却是可能的，如加强营养、补充抗衰老的保健品药物、保持健康的作息规律、良好的生活环境和心理环境等。传统的抗衰老的保健品药物大多存在营养单一以及单一营养补充过多，导致营养平衡失调等问题，因此，开发一种具有抗衰老作用，且能满足人体对营养需求的多样性和平衡性的制品成为人们研究的热点。技术实现要素：基于此，有必要提供一种具有抗衰老作用，且能满足人体对营养需求的多样性和平衡性的雪莲蛹虫组合物，其具体技术方案如下：一种雪莲蛹虫草组合物，以质量百分含量计，包括以下组分：在其中一个实施例中，以质量百分含量计，所述雪莲蛹虫草组合物包括以下组分：上述雪莲蛹虫草组合物，主要组分的功效如下：雪莲培养物，是甄选最佳野生天山雪莲种子，经过上千次的筛选、培养、再筛选，并严格控制培养条件获得的雪莲体细胞产品，含有绿原酸及其衍生物以及丰富的黄酮类、多糖类、酚酸类等五大类功效成分，具有抗氧化、抗辐射和抗疲劳等药效学作用，且相较于天然雪莲更易被人体吸收。雨生红球藻，被公认为自然界中天然虾青素的最好生物，具有强大的抗氧化活性，且雨生红球藻红的虾青素为左旋结构，其结构稳定，与人体、动物体内所需虾青素结构一致，易被人体吸收，可最大程度发挥其生物功效。蛹虫草，又称北冬虫夏草、北虫草，是虫草属(cordyceps)的一种，与冬虫夏草为同属异种，是在模拟冬虫夏草的自然生态环境下人工培育而成的虫菌结合体。蛹虫草中含有大量的虫草素、虫草多糖、虫草酸、虫草sod等保健成分，可有效消除机体内超氧自由基，具有抗衰老、抗癌抑癌等作用，人参，为药食同源的植物，营养丰富，具有多种为人体所需的营养成分和生物活性物质，如人参皂苷、有机酸及酯类、维生素类、甾醇及其甙类等，具有抗癌、抗肿瘤、调节中枢神经系统及心脑血管、改善消化系统促进代谢的功效以及增加人体白细胞数量、提高人体免疫力等作用。树莓，又称覆盆子，果实柔嫩多汁，风味独特，被誉为“黄金水果”。树莓中主要的功能性物质为超氧化物歧化酶(sod)、花青素、鞣化酸、树莓酮等，能有效清除体内自由基，具有调节免疫功能、抗辐射损伤、抗氧化、改善记忆功能、抗癌、抗肿瘤、抗衰老等功能。上述雪莲蛹虫草组合物，将雪莲培养物、雨生红球藻、蛹虫草、人参和树莓科学组合，并合理控制各组分的含量，使各组分的作用相互增强，表现出了明显的协同作用，可有效提高机体的运动能力和生殖能力，抑制脂褐素堆积，延长实验动物的寿命，达到抗衰老的目的，而且各组分之间相辅相成，具有营养互补的作用，可满足人体对营养需求的多样性和平衡性。此外，通过进一步合理控制雪莲蛹虫草组合物中各组分的含量，在进一步发挥其抗衰老作用的同时，确保其质量的稳定性，提高其在人体的吸收度。本申请还提供了上述雪莲蛹虫草组合物的制备方法，具体技术方案如下：上述雪莲蛹虫草组合物的制备方法，包括以下步骤：按配方提供所述雪莲培养物、雨生红球藻、蛹虫草、人参和树莓；将所述雪莲培养物、雨生红球藻、蛹虫草、人参和树莓粉碎、过筛，混合得到所述雪莲蛹虫草组合物。具体的，将上述雪莲培养物、雨生红球藻、蛹虫草、人参和树莓粉碎、过40目筛，混合得到均一度较高的雪莲蛹虫草组合物粉质，可有效保持各组分的活性且提高其在人体的吸收度。上述雪莲蛹虫草组合物的制备方法工艺简单易控，适合规模化生产。本申请还提供上述雪莲蛹虫草组合物的应用，具体技术方案如下：上述雪莲蛹虫草组合物在制备抗衰老制剂中的应用。将上述雪莲蛹虫草组合物用作制备抗衰老制剂，雪莲培养物、雨生红球藻、蛹虫草、人参和树莓合用，可有效抑制体内活性氧水平及抑制体内脂褐素堆积，提高机体的运动能力和生殖能力，延长实验动物的寿命，达到抗衰老的目的。本申请还提供一种雪莲蛹虫草制品，具体技术方案如下：一种雪莲蛹虫草制品，由上述雪莲蛹虫草组合物及辅料制备而成。在其中一个实施例中，以质量百分含量计，所述雪莲蛹虫草制品由15％～25％的雪莲蛹虫草组合物及75％～85％的辅料制备而成。在其中一个实施例中，所述辅料包括甜味剂和酸味剂。在其中一个实施例中，所述甜味剂包括异麦芽酮糖醇、赤藓糖醇和甜菊糖苷；所述酸味剂为柠檬酸。上述雪莲蛹虫草制品，通过添加甜味剂、酸味剂等辅料，并合理控制雪莲蛹虫草组合物及辅料的添加量，可改善该制品的口感，使其酸甜适中，易于食用。此外，上述雪莲蛹虫草制品中的辅料还可以是水或者其他添加剂。在其中一个实施例中，以质量百分含量计，所述雪莲蛹虫草制品由以下原料制备而成：通过进一步合理控制雪莲蛹虫草制品中各原料的用量，可使其抗衰老作用更为优化，且更易被人体吸收，进一步满足人体对营养需求的多样性和平衡性，口感酸甜适中，符合大众口味，质量更为稳定，且安全无毒，可以长期服用。本申请还提供上述雪莲蛹虫草制品的制备方法，具体技术方案如下：上述雪莲蛹虫草制品的制备方法，包括以下步骤：将上述雪莲蛹虫草组合物和辅料混合，得到所述雪莲蛹虫草制品。上述雪莲蛹虫草制品的制备方法，工艺简单可控，可规模化生产。具体实施方式为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的
技术领域：
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。以下为具体实施例。实施例1本实施例中，雪莲蛹虫草制品中雪莲培养物的质量含量为0.8％、雨生红球藻的质量含量为0.8％、蛹虫草的质量含量为7.6％、人参的质量含量为2.8％、树莓的质量含量为8.0％、异麦芽酮糖醇的质量含量为15％、赤藓糖醇的质量含量为58％、甜菊糖苷的质量含量为2.9％、柠檬酸的质量含量为4.1％。对比例1本对比例中，雪莲制品中雪莲培养物的质量含量为0.8％、雨生红球藻的质量含量为0.8％、蓝莓的质量含量为7.6％、人参的质量含量为2.8％、树莓的质量含量为8.0％、异麦芽酮糖醇的质量含量为15％、赤藓糖醇的质量含量为58％、甜菊糖苷的质量含量为2.9％、柠檬酸的质量含量为4.1％。以下为对实施例1制得的雪莲蛹虫草制品和对比例1制得的雪莲制品进行的性能测试，具体测试方法和测试结果如下：测试方法：向涂有大肠杆菌op50的ngm培养板中加入不同浓度的制品溶液，再加入同步化的线虫，至线虫生长到l4期时构建氧化损伤后，继续培养，观察秀丽隐杆线虫的生存状态，包括观察秀丽隐杆线虫的寿命、运动能力、繁殖力(产卵数)、脂褐素含量和ros水平。其中，所选的秀丽隐杆线虫品系为野生型n2，给药方式为液体给药，即挑取秀丽隐杆线虫前30分钟，取100μl1mg/ml的制品溶液加到ngm培养板的大肠杆菌op50上。所选的氧化损伤模型采用百草枯处理。百草枯构建氧化损伤的具体方式为：挑取秀丽隐杆线虫前30分钟，取100μl1mg/ml百草枯加到ngm培养板的大肠杆菌op50上，挑取线虫培养，24小时后转移至不含百草枯的ngm平板上。1.ngm固体培养板的制备(1)ngm固体培养基的制备：称取3g氯化钠、17g琼脂糖、2.5g蛋白胨，ddh2o定容至1l，120℃，高压灭菌30分钟；冷却至50℃左右，超净台内加入无菌的1ml1m氯化钙溶液、1ml5mg/ml胆固醇乙醇溶液、1ml1m硫酸镁溶液、25ml1m的磷酸盐缓冲液，混匀，加入60mm培养板(每板10ml)，凝固后倒置备用。(2)op50大肠杆菌的活化和涂平板：称取1g胰蛋白胨、0.5g酵母提取物、1g氯化钠，定容至100ml，120℃，高压灭菌30分钟；降至室温后，接种大肠杆菌op0，震荡培养过夜；取200μl菌液加到ngm平板中，室温培养2-3天后使用。2.待测物质处理ngm平板(1)受试及对比样品溶液的制备受试样品溶液：用m9缓冲液将实施例1制得的雪莲蛹虫草制品配制成终浓度为1mg/ml的待测物，4℃保存，备用。对比样品溶液：用m9缓冲液将对比例1制得的雪莲制品配制成终浓度为1mg/ml的待测物，4℃保存，备用。m9缓冲液配方：称取3g磷酸氢二钠、1.5g磷酸二氢钾、2.5氯化纳、0.25g硫酸镁溶于500ml水中，121℃，灭菌。(2)待测物质处理平板接种或者转盘前半小时，分别取100μl的上述不同浓度的待测物，加到涂布有op50的ngm平板上，铺匀备用。3.实验分组及处理方法(1)实验分组如下表所示：实验分组试剂及剂量空白对照组(n2)百草枯0，受试样品溶液0，对比样品溶液0阴性对照组(pq)百草枯100μl1mg/ml，受试样品溶液0，对比样品溶液0对比样品试验组(d1)百草枯100μl1mg/ml，对比样品溶液100μl1mg/ml，受试样品溶液0受试样品实验组(s1)百草枯100μl1mg/ml，受试样品溶液100μl1mg/ml，对比样品溶液0(2)具体的处理步骤为：a.线虫同步化：用铂丝挑取10条健康培养3代以后的产卵期线虫至新的铺菌ngm平板或者涂有待测物的铺菌ngm平板上，产卵6小时后挑出，即得到同步化的线虫。b.百草枯处理：2天后即到成虫期，分别取100μl1mg/ml的百草枯涂于铺菌ngm平板或者涂有待测物的铺菌ngm平板上，半小时后，将各板线虫转盘至对应的平板上，20℃培养。24小时后，将各板线虫转盘至对应的平板，继续培养，每两天转盘一次，直至进行后续实验。4.秀丽隐杆线虫的寿命实验根据3中的方法处理线虫，每组3板，每板30条线虫。产卵时记为寿命d0，百草枯处理时为d2天，之后每两天记录线虫的存活数。线虫存活数只记录正常死亡的线虫数，剔除非正常死亡的线虫(包括爬至线虫边缘、爬入ngm培养基内)直至线虫全部死亡，停止计数，绘制秀丽隐杆线虫寿命曲线。5.秀丽隐杆线虫运动能力检测根据3中的方法处理线虫，培养至d6时体式显微镜下监测虫体每30s内身体做正弦运动次数，每组共统计10条线虫。6.秀丽隐杆线虫的繁殖力(产卵数)根据3中的方法处理线虫，接种于百草枯处理的铺菌的ngm平板上。每个ngm平板上挑取1条线虫，每组做3个重复。ngm平板20℃培养，24小时后，线虫转移至新的ngm平板上，并保留旧的培养板，之后每天转移平板，共进行5天。第二天对第一天的平板进行计数，第三天对第二天的平板进行计数，依次计数并相加，记录每条虫子的总产卵量。空白组与处理组比较，检测待测物处理对秀丽隐杆线虫繁殖力的影响。7.秀丽隐杆线虫的脂褐素含量根据3中的方法处理线虫，培养至d10时荧光显微镜观察线虫内脂褐素的含量。具体方法为：配制1％的琼脂糖凝胶，滴一滴在载玻片上，然后用盖玻片压平，待琼脂糖凝胶凝固后，小心去掉盖玻片。滴加20μl0.5mm的nan3溶液，挑取线虫至凝胶上，荧光显微镜下观察线虫内脂褐素的含量，并拍照。每组至少5条线虫。8.秀丽隐杆线虫的ros水平根据3中的方法处理线虫，培养至d10时荧光显微镜观察线虫内ros的水平。具体方法为：a.每组挑取10条线虫至1mlm9缓冲液中，并洗涤两次，去掉大肠杆菌；b.配制dcf-da的染色液，以dcf-da：m9缓冲液＝1：1000的比例配制dcf-da染色液；c.将线虫转移至dcf-da染色液中，室温避光孵育30分钟；d.弃染色液，并用m9缓冲液洗涤2次；e.配制1％的琼脂糖凝胶，滴一滴在载玻片上，然后用盖玻片压平，待琼脂糖凝胶凝固后，小心去掉盖玻片。滴加20μl0.5mm的nan3溶液，挑取线虫至凝胶上，荧光显微镜下观察线虫内ros的含量，并拍照。每组至少5条线虫。测试结果：(1)延长秀丽隐杆线虫的寿命配制铺有op50大肠杆菌的受试样品溶液(1mg/ml)和对比样品溶液(1mg/ml)ngm平板，同步化线虫，并培养至成虫期。1mg/ml百草枯处理各组ngm平板，挑取各组线虫至对应百草枯处理的平板，24小时后转移线虫至无百草枯的平板继续培养，每两天转移一次平板。每组3板，每板30条线虫。产卵时记为寿命d0，百草枯处理时为d2天，之后每两天记录线虫的存活数。线虫存活数只记录正常死亡的线虫数，剔除非正常死亡的线虫(包括爬至线虫边缘、爬入ngm培养基内)直至线虫全部死亡，停止计数，其结果见表1。表1待测物对秀丽隐杆线虫寿命的影响由表1可知，百草枯处理后的阴性对照组(pq)线虫的平均寿命为9.4d，与其相比，受试样品试验组(s1)线虫的平均寿命延长至12.4d，平均寿命提高31.9％，受试样品试验组(s1)的平均寿命显著高于阴性对照组(pq)(p＜0.01)，与空白对照组(n2)差异不显著(p＞0.05)。证明受试样品能够有效的延缓线虫衰老，延长寿命。而对比样品试验组(d1)的平均寿命虽高于阴性对照组，但显著低于空白对照组(p＜0.01)和受试样品处理组(p＜0.01)，说明对比样品虽然可以缓解百草枯带来的氧化损伤，并不能有效恢复百草枯处理的线虫的寿命，其延缓线虫衰老，延长寿命的作用有限。(2)恢复秀丽隐杆线虫的运动能力配制铺有op50大肠杆菌的受试样品溶液(1mg/ml)和对比样品溶液(1mg/ml)ngm平板，同步化线虫，并培养至成虫期。1mg/ml百草枯处理各组ngm平板，挑取各组线虫至对应百草枯处理的平板，24小时后转移线虫至无百草枯的平板继续培养，每两天转移一次平板。培养至d6时体式显微镜下监测虫体每30s内身体做正弦运动次数，每组共统计10条线虫，其结果见表2。表2待测物对秀丽隐杆线虫运动能力的影响由表2可知，百草枯处理后的阴性对照组(pq)中线虫在每30s内的正线运动次数降为7.2±2.39次，而受试样品试验组(s1)线虫每30s内的正弦运动为10.4±2.59次，与阴性对照组(pq)相比提高了44.4％，受试样品试验组(s1)线虫的运动能力显著高于阴性对照组(pq)(p＜0.05)，与空白对照组(n2)差异不显著(p＞0.05)。由此可见，受试样品可以有效恢复线虫的运动能力。而对比样品试验组(d1)的线虫每30s内的正线运动次数虽高于阴性对照组(pq)，但差异不显著(p＞0.05)，且显著低于空白对照组(n2)(p＜0.05)和受试样品试验组(s1)(p＜0.05)，说明对比样品并不能有效恢复百草枯处理的线虫的运动能力。(3)保护秀丽隐杆线虫的生殖能力配制铺有op50大肠杆菌的受试样品溶液(1mg/ml)和对比样品溶液(1mg/ml)ngm平板，同步化线虫，并培养至成虫期。1mg/ml百草枯处理各组ngm平板，挑取各组线虫至对应百草枯处理的平板。每个ngm平板上挑取1条线虫，每组做3个重复。ngm平板20℃培养，24小时后，线虫转移至新的ngm平板上，并保留旧的培养板，之后每天转移平板，共进行5天。第二天对第一天的平板进行计数，第三天对第二天的平板进行计数，依次计数并相加，记录每条虫子的总产卵量。空白组与处理组比较，检测受试样品处理对秀丽隐杆线虫繁殖力的影响，其结果见表3。表3待测物对秀丽隐杆线虫生殖能力的影响由表3可知，百草枯处理后的阴性对照组(pq)的线虫的产卵数降低至139±25个，而受试样品试验组(s1)的线虫的产卵数为227±25个，与阴性对照组(pq)相比提高了59.9％，受试样品试验组(s1)线虫的繁殖能力显著高于阴性对照组(pq)(p＜0.05)，与空白对照组(n2)差异不显著(p＞0.05)。由此可见，受试样品可以有效恢复线虫的繁殖力。而对比样品试验组(d1)线虫的产卵数虽高于阴性对照组(pq)，但差异不显著(p＞0.05)，且显著低于空白对照组(n2)(p＜0.05)和受试样品试验组(s1)(p＜0.05)，说明对比样品并不能有效恢复百草枯处理的线虫的繁殖力。(4)受试样品抑制秀丽隐杆线虫体内脂褐素的堆积配制铺有op50大肠杆菌的受试样品溶液(1mg/ml)和对比样品溶液(1mg/ml)ngm平板，同步化线虫，并培养至成虫期。1mg/ml百草枯处理各组ngm平板，挑取各组线虫至对应百草枯处理的平板，24小时后转移线虫至无百草枯的平板继续培养，每两天转移一次平板。培养至d10时荧光显微镜观察线虫内脂褐素的含量。具体方法为：配制1％的琼脂糖凝胶，滴一滴在载玻片上，然后用盖玻片压平，待琼脂糖凝胶凝固后，小心去掉盖玻片。滴加20μl0.5mm的nan3溶液，挑取线虫至凝胶上，荧光显微镜下观察线虫内脂褐素的含量，计算相对荧光强度，每组至少5条线虫，其结果见表4。表4待测物对秀丽隐杆线虫体内脂褐素的影响由表4可知，百草枯处理后的阴性对照组(pq)的线虫体内的脂褐素含量明显升高，约为空白对照组(n2)的3倍，而受试样品试验组(s1)的线虫体内的脂褐素含量则显著低于空白对照组(n2)(p＜0.01)。由此可见，受试样品可以有效降低线虫体内脂褐素的含量，即受试样品具有抗衰老的作用。而对比样品试验组(d1)线虫体内的脂褐素含量虽低于阴性对照组(pq)，但高于空白对照组(n2)和受试样品试验组(s1)，说明对比样品虽然能够缓解百草枯带来的损伤，但其抑制线虫体内脂褐素堆积的作用显著低于受试样品(p＜0.05)，对比样品的抗衰老作用有限。(5)受试样品抑制活性氧水平的升高配制铺有op50大肠杆菌的受试样品溶液(1mg/ml)和对比样品溶液(1mg/ml)ngm平板，同步化线虫，并培养至成虫期。1mg/ml百草枯处理各组ngm平板，挑取各组线虫至对应百草枯处理的平板，24小时后转移线虫至无百草枯的平板继续培养，每两天转移一次平板。培养至d10时荧光显微镜观察线虫内ros的水平。具体方法为：a.每组挑取10条线虫至1mlm9缓冲液中，并洗涤两次，去掉大肠杆菌；b.配制dcf-da的染色液，以dcf-da：m9缓冲液＝1：1000的比例配制dcf-da染色液；c.将线虫转移至dcf-da染色液中，室温避光孵育30分钟；d.弃染色液，并用m9缓冲液洗涤2次；e.配制1％的琼脂糖凝胶，滴一滴在载玻片上，然后用盖玻片压平，待琼脂糖凝胶凝固后，小心去掉盖玻片。滴加20μl0.5mm的nan3溶液，挑取线虫至凝胶上，荧光显微镜下观察线虫内ros的含量，并计算相对荧光强度，每组至少5条线虫，其结果见表5。表5待测物对秀丽隐杆线虫体内ros水平的影响由表5可知，百草枯处理后的阴性对照组(pq)的线虫体内的ros明显升高，约为空白对照组(n2)的3倍，而受试样品试验组(s1)和对比样品试验组(d1)的线虫体内的ros水平均有所降低，与阴性对照组(pq)比较具有显著性差异(p＜0.01)，与空白对照组(n2)比较无显著性差异(p＞0.05)，由此可见，用百草枯处理后的，线虫体内产生大量的ros，造成氧化应激损伤，而使用受试样品和对比样品进行处理均能降低线虫体内ros的水平，受试样品试验组(s1)线虫体内ros水平略高于对比样品试验组(d1)，但差异不显著(p＞0.05)。由上述试验结果可知，受试样品与对比样品均可以抑制线虫体内活性氧水平的升高，且差异不显著，但与对比样品比较，受试样品可以进一步提高线虫的运动能力、生殖能力、进一步抑制线虫体内脂褐素的堆积，可以显著缓线虫衰老，延长线虫寿命，且差异具有显著性(p＜0.05)。由此可见，雪莲蛹虫草组合物、制品将雪莲培养物、雨生红球藻、蛹虫草、人参和树莓合用，并合理控制各组分的含量，在满足人体对营养需求的多样性和平衡性的同时，使各组分之间相辅相成，相互增强各组分的功效，从而表现出明显的协同作用，可有效提高机体的运动能力和生殖能力，抑制脂褐素堆积，延长实验动物的寿命，达到抗衰老的目的。以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页12