本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体涉及一种复合食用菌酵素及其制备方法。
背景技术：
松茸是一种纯天然的食用菌类，被誉为“菌中之王”，有特别的浓香，口感如鲍鱼，极润滑爽口。现代食品科学研究证明，松茸富含蛋白质，有18种氨基酸，14种人体必需微量元素、49种活性营养物质、5种不饱和脂肪酸，核酸衍生物，肽类物质等稀有元素，另含有双链松茸多糖、松茸多肽和松茸醇等3种珍贵的活性物质，能提高人体的自身免疫力，具强身、益肠胃、止痛、理气化痰、抗菌、抗病毒、抗真菌、抗炎等功效，有治疗糖尿病及抗癌等作用。
猴头菇因外形象猴子头而得名，它是鲜美无比的山珍，菌肉鲜嫩，香醇可口，有“素中荤”之称，是药食两用的一种真菌。具有提高机体免疫能力，抗疲劳，抗氧化，抗突变，降血脂，抗衰老，补益脾胃，充养气血的功效。现代临床试验表明，猴头菌适合食欲不佳，胃肠功能紊乱以及经常不能按时进餐，常吃快餐的职业人群，可用于防治胃溃疡、慢性胃炎，脾胃虚弱，气血不足所致的食少体倦、腹胀、腹痛等症，尤其适用于防止胃病复发，缓解因胃炎引起的腹部疼痛；对肝炎患者有辅助治疗，对消化道肿瘤患者大有裨益；对部分肿瘤患者，还有提高细胞免疫功能，缩小肿块，延长生存期的良好效果。
香菇是世界第二大食用菌，也是我国特产之一，在民间素有“山珍之王”之称。它是一种生长在木材上的真菌，为侧耳科植物香蕈的子实体，富含维生素b群、铁、钾、维生素d原、味道鲜美，香气沁人，营养丰富，是高蛋白、低脂肪、多糖、多种氨基酸和多种维生素的营养保健食品。现代医学和营养学研究表明，香菇中麦角甾醇含量很高，对防治佝偻病有效；香菇多糖能增强细胞免疫能力，可提高巨噬细胞的吞噬功能，还可促进t淋巴细胞的产生，并提高t淋巴细胞的杀伤活性，从而抑制癌细胞的生长，提高机体免疫功能。
黑木耳属担子菌纲，木耳目的食用真菌，腐生在枯死的树木枝干上，其状扁平，形如人耳，故名木耳，也称黑木耳。性平，具有很多药用功效。能益气强身，有活血效能，并可防治缺铁性贫血等；可养血驻颜，令人肌肤红润，容光焕发，能够疏通肠胃，润滑肠道，同时对高血压患者也有一定帮助。
羊肚菌是一种食用菌品种,因其菌盖表面凹凸不平、状如羊肚而得名。羊肚菌的营养相当丰富，据测定，羊肚菌含粗蛋白20％、粗脂肪26％、碳水化合物38.1％，还含有多种氨基酸，特别是谷氨酸含量高达1.76％。因此，有人认为是“十分好的蛋白质来源”，并有“素中之荤”的美称。
酵素是以蔬菜、水果、食用菌等为原料，适量加入发酵菌种，经过加糖、密封、保存的过程让其充分发酵，最终得到可以饮用的液体。酵素可以最大限度的保留原料中活性物质的含量，并且能增加新的活性有益物质，达到营养的最大化，有益人体健康，目前，尚未有将松茸，猴头菇，香菇和黑木耳混合发酵，生产活性酵素的报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种复合食用菌酵素及其制备方法。
一种复合食用菌酵素，所述复合食用菌酵素是由松茸，猴头菇，香菇，黑木耳和羊肚菌经微生物发酵，提纯得到的发酵汁。
所述微生物为枯草芽孢杆菌，乳酸菌，酵母菌中的一种或一种以上的混合菌。
所述发酵汁中还加入木奶果提取物。
木奶果是一种常绿乔木的果实，浆果状蒴果卵状或近圆球状，长2-2.5厘米，直径1.5-2厘米，黄色后变紫红色，不开裂，内有种子1-3颗；种子扁椭圆形或近圆形，长1-1.3厘米。花期3-4月，果期6-10月。木奶果作为药用具有止咳，平喘，解菌毒的功能，用于产后消瘦，香港脚，稻田皮炎。发明人发现其提取物加入本发明的复合食用菌酵素中，能去除酵素中的苦味。
所述木奶果提取物为新鲜木奶果的水提取物。
上述复合食用菌酵素的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取新鲜的松茸15-30份，猴头菇15-30份，香菇50-80份，黑木耳50-80份，羊肚菌10-20份，加入水200-400份，打浆，再加入水800-2000份，加入葡萄糖10-40份，磷酸二氢钾3-12份，混合均匀；
(2)将步骤(1)制备的混合物料置于高压容器中，121℃灭菌30-50min，待灭菌锅降温到50-70℃时取出；
(3)接入微生物菌液，将物料放入37℃摇床中，在100-200r/min条件下摇6-10d；
(4)将发酵好的物料用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣得到微生物酵素；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，20-40min，置于4℃下保存。
所述微生物菌液为枯草芽孢杆菌菌液，乳酸菌菌液，酵母菌菌液中的一种或一种以上的组合。
所述微生物菌液的接种量为接种物料的0.01％-0.5％，微生物菌液中活菌数为1-3x108cfu/ml。
上述复合食用菌酵素在制备饮料中的应用。
上述复合食用菌酵素在制备保健品食品中的应用。
本发明的有益效果：本发明以松茸，猴头菇，香菇，黑木耳和羊肚菌复合作为发酵培养基，经食品微生物发酵，制备酵素，制备的酵素产品营养价值高，含活性肽等对人体有益的生物活性物质和营养小分子物质，木奶果提取物能有效去除酵素中的苦味物质，使得酵素产品的口味更佳。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种复合食用菌酵素的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取新鲜的松茸20kg，猴头菇20kg，香菇70kg，黑木耳60kg，羊肚菌15kg，加入水300l，打浆，再加入水1500l，加入葡萄糖25kg，磷酸二氢钾6kg，混合均匀；
(2)将步骤(1)制备的混合物料置于高压容器中，121℃灭菌40min，待灭菌锅降温到60℃时取出；
(3)接入枯草芽孢杆菌菌液，将物料放入37℃摇床中，在150r/min条件下摇8d；所述枯草芽孢杆菌菌液的接种量为接种物料的0.2％，枯草芽孢杆菌菌液中活菌数为2x108cfu/ml；
(4)将发酵好的物料用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣得到微生物酵素；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，30min，置于4℃下保存。
实施例2
一种复合食用菌酵素的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取新鲜的松茸18kg，猴头菇22kg，香菇55kg，黑木耳56kg，羊肚菌12kg，加入水250l，打浆，再加入水880l，加入葡萄糖12kg，磷酸二氢钾4kg，混合均匀；
(2)将步骤(1)制备的混合物料置于高压容器中，121℃灭菌30min，待灭菌锅降温到55℃时取出；
(3)接入乳酸菌菌液，将物料放入37℃摇床中，在120r/min条件下摇6d；所述乳酸菌菌液的接种量为接种物料的0.05％，乳酸菌菌液中活菌数为3x108cfu/ml。
(4)将发酵好的物料用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣得到微生物酵素；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，25min，置于4℃下保存。
实施例3
一种复合食用菌酵素的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取新鲜的松茸28kg，猴头菇26kg，香菇70kg，黑木耳70kg，羊肚菌18kg，加入水350l，打浆，再加入水1800l，加入葡萄糖35kg，磷酸二氢钾10kg，混合均匀；
(2)将步骤(1)制备的混合物料置于高压容器中，121℃灭菌50min，待灭菌锅降温到65℃时取出；
(3)接入酵母菌菌液，将物料放入37℃摇床中，在200r/min条件下摇10d；所述酵母菌菌液的接种量为接种物料的0.4％，酵母菌菌液中活菌数为1x108cfu/ml。
(4)将发酵好的物料用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣得到微生物酵素；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，30min，置于4℃下保存。
实施例4
木奶果提取物的提取：取新鲜木奶果，加入1倍重量份数的水打浆，向浆液中加入6倍质量的水回流提取3次，合并滤液，活性炭脱色，蒸干制成木奶果提取物。
取实施例1制备的复合食用菌酵素，加入0.1倍质量的木奶果提取物，混合均匀，再用水稀释3倍，制成饮料。
实施例5
木奶果提取物的提取：取新鲜木奶果，加入1倍重量份数的乙醇，打浆，向浆液中加入6倍质量的乙醇回流提取3次，合并滤液，活性炭脱色，蒸干制成木奶果提取物。
取实施例1制备的复合食用菌酵素，加入0.1倍质量的木奶果提取物，混合均匀，再用水稀释3倍，制成饮料。
实验例1：
实验用icr小鼠购买自南京君科生物工程有限公司。实验共选取icr小鼠40只，雄性，体重20±0.2g。正式实验前，将小鼠饲养在动物实验室中3-5天，使其适应环境。饲养环境为：温度22-25℃，湿度40-50％，人工照明12h/d，通风良好，小鼠自由摄食与饮水，每隔2天对鼠笼垫料进行彻底更换，保持环境干燥、清洁。
实验共设4组，每组小鼠10只，分别为：阴性对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组。阴性对照组小鼠饲喂基础日粮，每日灌胃0.2ml蒸馏水；实施例1组小鼠饲喂基础日粮，每日灌胃0.2ml实施例1制备的复合食用菌酵素；实施例2组小鼠饲喂基础日粮，每日灌胃0.2ml实施例2制备的复合食用菌酵素；实施例3组小鼠饲喂基础日粮，每日灌胃0.2ml实施例3制备的复合食用菌酵素。小鼠自由摄食与饮水，每天上午8点钟分别对每组鼠笼内食物、水进行称重及称量，记录每天每组小鼠饮水、摄食情况。
连续灌胃5周，末次灌胃30min后在4组小鼠尾部分别绑上6％体重的铅皮，进行负重游泳实验。泳池规格为50cm×50cm×40cm，水深30cm，水温25℃，记录小鼠从入水至头部没入水中7s内不再浮出水面的时间，为力竭游泳时间。测试结果见表1：
表1
注：*代表与阴性对照组比较p<0.05。
由表1可以看出，实施例1-3组均能显著延长小鼠力竭游泳时间，证明本发明的复合食用菌酵素具有抗疲劳的功效。
实验例2：
取实施例1制备的复合食用菌酵素，分别稀释5倍，10倍，15倍，20倍，25倍，30倍，35倍，40倍，45倍，50倍，规定其苦味值分别为10，9，8，7，6，5，4，3，2，1。做好标准苦味值后，取待评定液3ml，置入口中，充分品尝后吐出。然后跟标准苦味值溶液进行反复比对，直至确定其苦味值，取五人以上评定的平均值确定苦味值。
实施例1制备的复合食用菌酵素和木奶果提取物按照质量比10：1混合均匀，分别稀释1倍，3倍，9倍，测其苦味值。测试结果见表2所示。
表2
注：*代表与未稀释组比较p<0.05。
由表2可以看出，加入木奶果提取物后组合物的苦味值明显降低，未稀释组的苦味值相当于未加木奶果提取物的酵素稀释30倍的苦味值，组合物稀释3倍，苦味未明显降低，证明稀释不能明显降低组合物的苦味。
实施例1制备的复合食用菌酵素和木奶果提取物按照质量比分别按照10：0.5(第一组)；10：1(第二组)；10：2(第三组)；10：3(第四组)；10：4(第五组)；10：5(第六组)的比例混合均匀；测其苦味值。测试结果见表3所示；
表3
注：*代表与第二组比较p<0.05。
由表3可以看出，木奶果提取物添加比例小于10％，苦味值较高，去除苦味效果不明显，添加比例大于10％,去除苦味效果明显，继续提高木奶果提取物，去除苦味增强效果不明显。
以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。