一种含蜂胶提取物的组合物及其制备方法和用途与流程

文档序号:17425945发布日期:2019-04-17 02:51阅读:256来源:国知局
本发明涉及食品领域,尤其涉及一种含蜂胶提取物的组合物及其制备方法和用途。
背景技术
:阿尔茨海默症是老年人中常见的一种原发性退行性脑部疾病,临床表现为智力下降、言语交流困难、情感障碍和行动障碍等,据统计,我国>65岁老年痴呆症年发病率约为24%,全球老年痴呆症患者总数约3560万例,且随着老年人口的快速增长,老年痴呆的发病也必然增加,严重影响老年人的身心健康,同时也增加社会和家庭的负担,阿尔茨海默症患者大幅剧增,成为老龄化社会一个突出的社会问题目前市场上针对老年人改善记忆的中药保健食品,或配方不合理、或提取方法不恰当,或剂型服用不方便,导致人体吸收效果不好,以致对记忆力的改善效果不明显。因此,亟待需研发一种组方配伍合理、活性成分含量较高的保健食品组合物。技术实现要素:(一)发明目的:本发明的目的旨在提供一种组方合理有效、以现代提取工艺为依托,具有增强记忆力、提高认知作用的保健食品组合物。一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15~25份、银杏叶提取物5~15份以及酸枣仁提取物5~15份。优选的,所述保健食品组合物由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16~24份、银杏叶提取物6~12份以及酸枣仁提取物6~12份。进一步优选的,所述保健食品组合物由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18~20份、银杏叶提取物8~10份以及酸枣仁提取物8~10份。如上所述的任一种保健食品组合物,还含有药学上可接受的载体。一种保健食品组合物的制备方法,按比例称取上述提取物,分别粉碎、过筛,混合均匀后,填充胶囊即得;其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30~50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5~10),所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3~5%,所述的复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为(2~8):1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为2~4小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量20~30倍的去离子水进行提取,重复1-3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4-10mpa、温度为100-200℃、时间为5-20min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在800-1500r/min条件下离心10-30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40~60℃、转速为400~600r/min、真空度为0.1~0.5mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;优选的,所述步骤(2)中,酶解温度为45℃,蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为6:1;所述酶解时间为3小时;优选的,所述步骤(3)中,去离子水质量为蜂胶颗粒质量的25倍,萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;优选的,所述步骤(4)中,离心转速为1400r/min,离心时间20min;浓缩温度为50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mp;其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30~50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5~10),所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5~1%,所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,二者质量比为(2~5):1;所述纤维素酶、果胶酶酶活力分别为45iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为1~3小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入银杏叶颗粒质量15~30倍的去离子水进行提取,重复1~3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为2~8mpa、温度为100~200℃、时间为5-20min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在800-1500r/min条件下离心10-30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40~60℃、转速为400~600r/min、真空度为0.1~0.5mpa条件下,浓缩至干,即得银杏叶提取物;优选的,所述步骤(2)中,酶解温度为45℃;银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8;复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%;所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,二者质量比为3:1;所述酶解时间为2小时;优选的,所述步骤(3)中,去离子水质量为银杏叶颗粒的20倍,重复萃取2次,萃取压力为4mpa、温度为180℃、时间为16min;优选的,所述步骤(4)中,离心转速为1400r/min、时间为20min;浓缩温度为50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mp;其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,放入萃取釜中,向萃取釜加入酸枣仁颗粒质量15~30倍的去离子水进行提取,重复1~3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为2~8mpa、温度为100~200℃、时间为5-20min;然后将所得萃取液在800-1500r/min条件下离心10-30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40~60℃、转速为400~600r/min、真空度为0.1~0.5mpa条件下,浓缩至干,即得酸枣仁提取物;优选的,所述去离子水质量为酸枣仁颗粒质量的20倍,萃取次数为2次,萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;离心转速为1400r/min、时间为15min;浓缩温度为50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mp。本发明还提供一种用途,上述任一种保健食品组合物用在制备预防老年痴呆膳食营养补充剂中。有益效果与现有技术相比,本发明体现的技术优点体现在以下几个方面:(1)本发明采用蜂胶、银杏叶、酸枣仁复配的组合物,通过实验筛选出最为合适的组合比例,达到了较好的延缓脑部衰老、增强记忆力的保健功效。蜂胶(propolis)是蜜蜂从植物芽孢或树干破皮伤处采集来的树脂(树胶),并混入蜜蜂上颚腺的分泌物,与蜂蜡、少量花粉等加工而成的一种具有芳香气味和黏性的胶状固体物质。蜂胶是蜜蜂用于维持整个群体健康的有效物质,一个5~6万只的蜂群一年只能生产蜂胶100—150g,因此被誉为“紫色黄金”。近年来的研究证明,蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质,使其具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、抗衰老、增强记忆力、免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能,对人体有着广泛的医疗、保健作用,是一种具有较高保健功能的产品。银杏叶为银杏科植物银杏ginkgobilobal.的干燥叶。其叶、根、果均可作药用,具有化湿止泻、益心敛肺等功效。其中叶的要用价值较高,具有抗氧化、改善心脑血管循环、延缓衰老、防治痴呆、提高机体免疫力等的多种保健和药用价值。酸枣仁为鼠李科植物酸枣(ziziphusjujubemill)的干燥成熟种子,主产于河北、陕西、辽宁、河南等地。酸枣仁是中医安神之要药,用于虚烦、失眠、心悸、体虚多汗诸症有显著疗效,而且具有补肝、宁心、敛汗、生津的作用,《神农本草经》将其列为上品,《本草纲目》将其列为本部类,《中药学》列为养心安神类药。现代医学研究也表明,酸枣仁有镇静催眠作用。本发明通过对数十种中药材进行组方和筛选,选出较为合适的上述三种药物进行组方,功效彼此增益,达到协同增效,具有良好的防治记忆力减退、安神健脑的功效。(1)本发明采用酶解辅助亚临界水萃取法提取蜂胶、银杏叶中的活性成分。首先,酶解方法温和,不使用过多的有机溶剂,提取效率较高,仅使用较少的酶就能达到破壁的作用,不引入过多杂质,环保清洁。另外,本发明筛选出最为恰当的复合酶组合物和比例,能够显著提高提取效率。其次,蜂胶、银杏叶中的主要活性成分为黄酮,酸枣仁中活性成分为皂苷,均属于极性较大的成分,现有技术中多采用溶剂提取法,使用大量的有机溶剂,提取效率低下且不环保;近年来,也有采用超临界co2萃取技术提取,但是面对极性成分,并未获得良好的收效。亚临界水萃取技术是近年来新兴的技术,亚临界水(sub-criticalwater,scw)也称之为高温水、超加热水、高压热水或热液态水,是指在一定压力下,将水加热到100℃以上临界温度以下的高温,水体仍然保持在液体状态。研究发现它成为很多传统氧化反应的一种可能的溶剂,这些反应包括碳碳键的形成、异构化、脱氢、水解、部分氧化以及氢和氚的交换反应等等。通过对亚临界水温度和压力的控制可以改变水的极性、表面张力和粘度。温度升高,极性降低,亚临界水对有机物的溶解能力大大增加。以亚临界水为环境友好型溶剂,可以改变萃取体系的相行为、加速溶剂化效应,变传统溶剂条件下的多相反应为单反应,增大扩散系数,较低传质和传热阻力,可以在更短时间内达到萃取平衡,缩短处理时间,还能通过亚临界体系的温度与压力来控制提取产物的分布,并且仅使用环保的水作为溶剂,对于工业扩大化生产具有十分显著的经济效益。具体实施方式为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了,下面结合具体实施方式,对本发明进一步详细说明。应该理解,这些描述只是示例性的,而并非要限制本发明的范围。显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。(一)实施例1、实施例1一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物19克、银杏叶提取物9克以及酸枣仁提取物9克;按比例称取上述各提取物,分别粉碎成颗粒、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为3小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量25倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1400r/min条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%,所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,二者质量比为3:1;所述纤维素酶、果胶酶酶活力分别为45iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为2小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入银杏叶颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4mpa、温度为180℃、时间为16min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1400r/min条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得银杏叶提取物;其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,放入萃取釜中,向萃取釜加入酸枣仁颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;然后将所得萃取液在1400r/min条件下离心15min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得酸枣仁提取物。2、实施例2一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18克、银杏叶提取物8克以及酸枣仁提取物8克;按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:5,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3%,所述所述复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为2:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为2小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复1次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4mpa、温度为100℃、时间为5min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在800r/min条件下离心10min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40℃、转速为400r/min、真空度为0.1mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:5,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5%,所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,二者质量比为2:1;所述纤维素酶、果胶酶酶活力分别为45iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为1小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入银杏叶颗粒质量15倍的去离子水进行提取,重复1次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为2mpa、温度为100℃、时间为5min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在800-1500r/min条件下离心10min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40℃、转速为400r/min、真空度为0.1mpa条件下,浓缩至干,即得银杏叶提取物;其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,放入萃取釜中,向萃取釜加入酸枣仁颗粒质量15倍的去离子水进行提取,重复1次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为2mpa、温度为100℃、时间为5min;然后将所得萃取液在800r/min条件下离心10min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40℃、转速为400r/min、真空度为0.1mpa条件下,浓缩至干,即得酸枣仁提取物。3、实施例3一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物20克、银杏叶提取物10克以及酸枣仁提取物10克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:10,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为5%,所述复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为8:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为4小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量30倍的去离子水进行提取,重复3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为10mpa、温度为180℃、时间为20min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1500r/min条件下离心30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在60℃、转速为600r/min、真空度为0.5mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(5)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(6)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:10,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为1%,所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,二者质量比为5:1;所述纤维素酶、果胶酶酶活力分别为45iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为3小时;(7)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入银杏叶颗粒质量30倍的去离子水进行提取,重复3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为8mpa、温度为180℃、时间为20min;(8)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1500r/min条件下离心30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在60℃、转速为600r/min、真空度为0.5mpa条件下,浓缩至干,即得银杏叶提取物;上述组合物中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,放入萃取釜中,向萃取釜加入酸枣仁颗粒质量30倍的去离子水进行提取,重复3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为8mpa、温度为180℃、时间为20min;然后将所得萃取液在1500r/min条件下离心30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在60℃、转速为600r/min、真空度为0.5mpa条件下,浓缩至干,即得酸枣仁提取物。4、实施例4一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16克、银杏叶提取物6克以及酸枣仁提取物6克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶、银杏叶、酸枣仁提取物的制备方法同实施例1。5、实施例5一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物24克、银杏叶提取物12克以及酸枣仁提取物12克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶、银杏叶、酸枣仁提取物的制备方法同实施例1。6、对比例1一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物20克、银杏叶提取物18克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得;其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为3小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量25倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1400r/min条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%,所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,二者质量比为3:1;所述纤维素酶、果胶酶酶活力分别为45iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为2小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入银杏叶颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4mpa、温度为180℃、时间为16min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1400r/min条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得银杏叶提取物。7、对比例2一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物20克、酸枣仁提取物18克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为3小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量25倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1400r/min条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,放入萃取釜中,向萃取釜加入酸枣仁颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;然后将所得萃取液在1400r/min条件下离心15min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得酸枣仁提取物。8、对比例3一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:枸杞提取物16克以及酸枣仁提取物20克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%,所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,二者质量比为3:1;所述纤维素酶、果胶酶酶活力分别为45iu/mg、60iu/mg,所述酶解时间为2小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入银杏叶颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4mpa、温度为180℃、时间为16min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在1400r/min条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得银杏叶提取物;其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,放入萃取釜中,向萃取釜加入酸枣仁颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为6mpa、温度为160℃、时间为12min;然后将所得萃取液在1400r/min条件下离心15min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在50℃、转速为500r/min、真空度为0.3mpa条件下,浓缩至干,即得酸枣仁提取物。技术效果测试(一)含量测定1材料与方法1.1试验材料:实施例1中蜂胶、枸杞、酸枣仁提取物以及实施例1-5以及对比例1-3组合物1.2主要试剂及仪器芦丁、葡萄糖、酸枣仁皂苷a对照品均购自中国药品生物制品检定所;其它设备、以及分析纯以及色谱纯级试剂均为市售。1.3总黄酮含量的测定标准曲线的绘制以及空白测定:精密吸取芦丁对照品使用溶液(0.2mg/m1)1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml,分别置于50ml容量瓶中。加无水乙醇至总体积为15ml,依次加入硝酸铝溶液(100mg/m1)1m1,醋酸钾溶液(9.8mg/m1g/l)1ml,摇匀,加水至刻度,摇匀。静置lh。用1cm比色杯于415nm处,以0.5ml30%乙醇溶液为空白,测定吸光度。以50ml中芦丁质量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线或按直线回归方程计算。线性工作范围0mg-1.2mg(50ml)。样品溶液的测定:精密称待测实施例1~4样品0.5g,置于50ml容量瓶中,加无水乙醇至总体积为15ml,依次加入硝酸铝溶液(100mg/m1)1m1,醋酸钾溶液(9.8mg/m1)1ml,摇匀,加水至刻度,摇匀。静置1h。以空白试液作参比,用1cm比色杯,在波长415二处测定试料溶液的吸光度。查标准曲线或通过回归方程计算,求出蜂胶中的黄酮类化合物含量(mg)。1.4总多糖含量测定准确称取100mg葡萄糖对照品,以去离子水溶解并定容至100ml,精确量取葡萄糖标准工作液(1mg/ml)0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,分别置于试管中,各加去离子水使成2ml,各管中葡萄糖的质量浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mg/ml。吸取上述各管中的葡萄糖溶液0.5ml至于干净试管中,加5%苯酚试剂1.0ml摇匀。迅速滴加浓硫酸5.0ml,并迅速摇匀。静置5min,沸水浴15min取出。流动水冷却至室温。另以0.5ml去离子水同样操作,作空白对照,在490nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度c为横坐标、吸光度a为纵坐标,制作标准曲线并得其回归方程为a=9.75c-1.09(r=0.9995)。多糖含量=(c1×v)/(m×d)×100%;式中:c1为样品溶液的质量浓度;v是样品溶液总体积;m为样品总质量;d为样品稀释倍数。样品溶液的制备:取实施例1中的枸杞提取物0.5g,加10ml无水乙醇定容,取0.5ml,在490nm波长处测定吸光度。1.5总皂苷含量测定色谱条件与系统适应性实验:色谱柱(色谱柱与设备均来自aglient公司,4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈-水(32∶68),柱温25℃,检测波长281nm,流速1ml·min-1,进样量10μl。酸枣仁皂苷a的理论塔板数均>5000,分离度均>1.5,拖尾因子均符合测定需求。对照品溶液的制备:分别取对照品酸枣仁皂苷a2.4mg置于10ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取各对照品溶液5.0ml置同一10ml量瓶中,摇匀,得混合对照品溶液。供试品溶液的制备:取实施例1制备的酸枣仁总皂苷提取物,加甲醇溶解并定容至10ml,摇匀,经0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。含量测定结果如下表1所示:表1实施例1-3中各提取物含量测定结果(质量百分数)组别总黄酮含量(%)总多糖含量(%)总皂苷含量(%)实施例166.059.948.8实施例263.855.945.2实施例365.258.547.5(二)药理实验活性测定1.主要实验材料与仪器阳性对照药盐酸为多奈哌齐片(卫材(中国)药业有限公司);治疗药物为实施例1-5获得的保健品组合物以及对比例6-8获得的保健品组合物,d-半乳糖、单胺氧化酶-b(maob)、超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)试剂盒以及其它常规设备均为市售。2.实验动物昆明种健康小鼠(雌雄各半,体重22~25g)由中国农业科学院蜜蜂研究所蜂产品室提供。3.方法将110只小鼠随机分为11组:正常组,模型组,阳性对照组,治疗组(实施例1~5以及对比例6~8),每组10只。正常组以普通饮食喂养,其余组小鼠腹腔注射d-半乳糖100mg·kg-1·d-1,连续6w,建立小鼠ad模型。同时,治疗组和对比例组每天分别灌胃药物100mg/kg,阳性对照组每天灌胃50mg/kg,模型组灌胃等体积的生理盐水。第43天断头处死小鼠,开颅取脑,称重,从断头至称重在5min内完成。根据公式计算脑指数,脑指数=(脑重/体重)×100%。按重量体积比(1:9)加生理盐水制成10%脑组织匀浆液,以3000r/min,离心10min,4℃,取上清液,用进行分析。4.统计学处理应用spss17.0统计软件进行方差分析及t检验,全部数据用x±s表示。5.实验结果5.1对脑指数的影响如表2所示模型组小鼠脑指数较低,与正常组比较,差异有显著性(p<0.05);阳性对照组以及实施例1~5实验组脑指数较高,与模型组比较差异显著(p<0.05),与正常组比较,无显著性差异;对比例1~3组脑指数介于二者中间,与实施例1~5实验组比较差异显著(p<0.05)。表2各组脑指数数值组别脑指数(%)正常组5.25±0.45模型组4.20±0.50阳性对照组5.26±0.35实施例15.24±0.60实施例25.10±0.35实施例35.16±0.25实施例45.18±0.33实施例55.20±0.40对比例64.80±0.26对比例74.75±0.63对比例84.72±0.235.2对脑中mao-b、sod、gsh-px的影响如表2所示,治疗组脑中mao-b的含量明显低于模型组,与正常组和阳性对照组持平,而模型组mao-b的含量显著高于正常组;对比例组略低于模型组,但是仍高于正常组。正常组脑中sod的含量明显高于模型组;治疗组中sod含量明显高于模型组,与正常组接近;对照组略高于模型组,低于治疗组和正常组。与正常组和模型组相比,各治疗组的gsh-px含量明显升高,且略高于正常组。表2提取物组合物对ad模型小鼠脑中mao-b、sod、gsh-px的影响组别剂量(mg/kg)mao-b(u·h-1·m-1)sod(u/mgprot)gsh-px(mmol)正常组-25.62±1.865.40±2.60200.1±136.1模型组-38.02±1.054.29±1.0195.6±62.4阳性对照组5024.99±2.045.42±1.26288.3±38.6实施例110025.10±1.455.50±0.50290.4±54.5实施例210024.88±1.805.22±1.23288.4±15.3实施例310024.68±3.05.32±0.2289.0±20.3实施例410024.95±2.115.40±0.48289.8±15.0实施例510025.00±2.115.25±2.10288.8±25.3对比例610032.33±1.244.60±1.26192.0±9.1对比例710031.90±4.204.48±0.45190.0±23.5对比例810031.43±1.204.57±0.65191.0±10.8由此可见,采用本发明方法提取的提取物,组方制备成组合物,具有显著的提高认知、治疗老年痴呆的作用,并且与提取物两两组合相比,蜂胶、枸杞、酸枣仁这三者组合,取得了较好的技术效果。应当理解的是,本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理,而不构成对本发明的限制。因此,在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。此外,本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。当前第1页12
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