一种黄芪渣饲料添加剂及其制备方法和应用与流程

本发明属于畜禽养殖
技术领域：
，尤其涉及一种黄芪渣饲料添加剂及其制备方法和应用。
背景技术：
：随着国际上抗菌素的耐受形势越加严峻，食品安全问题频发，无抗养殖的呼声也越来越高。中药以其独特的优势被作为抗生素的替代品，具有加工简便、成本低廉等特点，又兼具防病保健、提高畜禽生产性能等功效。中药药渣的活性成分、蛋白质等营养元素往往包裹在细胞壁内，植物细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质、木质素等物质构成的致密结构，除草食动物外，其他动物不能消化吸收纤维素、半纤维素等物质。目前已有大量以药渣作为饲料原料或饲料添加剂药渣的应用研究，但是多数都是把药渣直接粉碎后按照相应比例加入到基础饲料中。对非草食动物而言，活性成分和营养元素并不能被很好地吸收。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种黄芪渣饲料添加剂及其制备方法和应用，能够使家禽有效利用黄芪药渣中所含的有效成分。为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：本发明提供了一种黄芪渣饲料添加剂，由包括黄芪药渣和混合酶的原料制备得到；所述黄芪药渣和混合酶的质量比为1:0.03～0.25；所述混合酶包括β-葡聚糖酶、木瓜蛋白酶、ɑ-淀粉酶和纤维素酶；所述混合酶中β-葡聚糖酶的酶活≥1300u/g，所述混合酶中木瓜蛋白酶的酶活≥1250u/g，所述混合酶中ɑ-淀粉酶的酶活≥35u/g，所述混合酶中纤维素酶的酶活≥3500u/g。优选的，所述黄芪药渣和混合酶的质量比为1:0.09。优选的，包括：将所述黄芪药渣、混合酶和水混合后，得到混合物，将所述混合物在45℃～55℃下酶解8～12h，得到酶解物，将所述酶解物烘干，得到黄芪渣饲料添加剂。优选的，所述黄芪药渣与水的体积比为1:6～10。优选的，所述酶解的温度为50℃。优选的，所述水的ph值为4.0～5.0。优选的，所述烘干的温度在80℃以上。本发明还提供了上述技术方案所述的黄芪渣饲料添加剂在畜禽养殖中的应用。优选的，所述黄芪渣饲料添加剂与基础日粮的质量比为0.03～0.08:1。优选的，所述黄芪渣饲料添加剂与基础日粮的质量比为0.05:1。本发明提供了一种黄芪渣饲料添加剂，由包括黄芪药渣和混合酶的原料制备得到；所述黄芪药渣和混合酶的质量比为1:0.03～0.25；所述混合酶包括β-葡聚糖酶、木瓜蛋白酶、ɑ-淀粉酶和纤维素酶；所述混合酶中β-葡聚糖酶的酶活≥1300u/g，所述混合酶中木瓜蛋白酶的酶活≥1250u/g，所述混合酶中ɑ-淀粉酶的酶活≥35u/g，所述混合酶中纤维素酶的酶活≥3500u/g。本发明提供的黄芪渣饲料添加剂中的混合酶能够将黄芪药渣中的半纤维素、纤维素和木质素等物质催化分解，促进黄芪药渣中活性成分的释放。附图说明图1为实施例1中的总糖含量测定标准曲线；图2为实施例1中的单糖测定标准曲线；图3为不同酶分解后多糖含量变化；图4为实施例2总糖含量测定标准曲线；图5为单糖含量测定标准曲线；图6为混合酶制剂酶解不同时间后黄芪药渣的糖含量变化；图7为添加不同量的混合酶水解后黄芪药渣的糖含量变化；图8为各组良凤花鸡体重随饲养天数增加的变化；图9为各组良凤花鸡体重增量；图10为各组良凤花鸡不同阶段的料重比；图11为各组良凤花鸡饲养过程中的死亡率；图12为黄芪渣饲料添加剂对吞噬指数的影响；图13为cona\lps刺激后淋巴细胞的增殖能力；图14为黄芪药渣饲料添加剂的制备工艺流程图。具体实施方式本发明提供了一种黄芪渣饲料添加剂，由包括黄芪药渣和混合酶的原料制备得到；所述黄芪药渣和混合酶的质量比为1:0.03～0.25；所述混合酶包括β-葡聚糖酶、木瓜蛋白酶、ɑ-淀粉酶和纤维素酶；所述混合酶中β-葡聚糖酶的酶活≥1300u/g，所述混合酶中木瓜蛋白酶的酶活≥1250u/g，所述混合酶中ɑ-淀粉酶的酶活≥35u/g，所述混合酶中纤维素酶的酶活≥3500u/g。本发明对所述黄芪药渣的来源没有特殊限定，在本发明具体实施方式中，所述黄芪药渣优选来源于广西中医药大学制药厂生产中成药“复方扶芳藤合剂”产生的废料，所述黄芪药渣的原药材黄芪批号为20160720，产地为甘肃。在本发明中，所述复方扶芳藤合剂的制备优选包括：将黄芪加水煎煮两次，每次2h，过滤后的滤渣为黄芪药渣。在本发明中，所述黄芪药渣优选经过烘干、粉碎后再使用，在本发明中，所述黄芪药渣的粒径优选为0.35mm。在本发明中，所述混合酶包括β-葡聚糖酶、木瓜蛋白酶、ɑ-淀粉酶和纤维素酶，所述混合酶中β-葡聚糖酶的酶活≥1300u/g，所述混合酶中木瓜蛋白酶的酶活≥1250u/g，所述混合酶中ɑ-淀粉酶的酶活≥35u/g，所述混合酶中纤维素酶的酶活≥3500u/g。在本发明中，所述混合酶购买于山东苏柯汉生物工程股份有限公司。在本发明中，所述混合酶能够将黄芪药渣中的半纤维素、纤维素和木质素等物质催化分解，促进黄芪药渣中活性成分的释放。在本发明中，所述黄芪药渣和混合酶的质量比1:0.03～0.25，具体为1:0.03、1:0.06、1:0.09、1:0.12和0.25。在本发明中，所述的黄芪渣饲料添加剂的制备方法，包括：将所述黄芪药渣、混合酶和水混合后，得到混合物，将所述混合物在45℃～55℃下酶解8～12h，得到酶解物，将所述酶解物烘干，得到黄芪渣饲料添加剂。在本发明中，所述黄芪药渣与水的体积比优选为1:6～10，具体为1:6、1:7、1:8、1:9和1:10。在本发明中，所述水的ph值优选为4.0～5.0，更优选为4.3～4.5。本发明优选使用盐酸溶液调节水的ph值。在本发明中，所述酶解的温度为45～55℃，优选为50℃，所述酶解的时间为8～12h。在本发明中，所述烘干的温度优选在80℃以上。本发明将酶解物烘干，得到的烘干物优选经过粉碎后，得到黄芪渣饲料添加剂，所述黄芪渣饲料添加剂的粒径优选为0.35mm。本发明还提供了上述技术方案所述的黄芪渣饲料添加剂在畜禽养殖中的应用。在本发明中，所述畜禽优选包括鸡、鸭和鹅等，所述鸡的品种优选包括良凤花鸡。在本发明中，所述黄芪渣饲料添加剂与基础日粮的质量比优选为0.03～0.08:1，更优选为0.05:1。本发明对所述基础日粮没有特殊限定，采用常规即可。在本发明中，所述基础日粮与黄芪渣饲料添加剂混合后，得到饲喂料，畜禽自由采食饲喂料。在本发明中，所述黄芪渣饲料添加剂和黄芪不含有黄曲酶毒素b1。下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。实施例1黄芪渣底料添加剂制备：药渣准备：黄芪药渣打粉，全部通过3号筛，得到粒径为0.35mm的黄芪药渣，保存于阴凉干燥处分批酶解。黄芪药渣来源于广西中医药大学制药厂生产中成药“复方扶芳藤合剂”产生的废料，黄芪药渣的原药材黄芪批号为20160720，产地为甘肃。复方扶芳藤合剂的制备包括：将黄芪加水煎煮两次，每次2h，过滤后的滤渣为黄芪药渣。添加酶：每次称取黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加6倍量纯水，混合酶组添加0.02％混合酶制剂，空白组不添加任何酶，ph调至4.5，放在恒温培养箱中50℃下酶解12h。酶解结束后将瓶子放入80℃水浴锅中灭活。酶解产物用烘箱烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，对黄芪渣饲料添加剂中的黄芪多糖进行检测，结果见表1和图1-3。混合酶制剂为β-葡聚糖酶、木瓜蛋白酶、ɑ-淀粉酶和纤维素酶，所述混合酶中β-葡聚糖酶的酶活≥1300u/g，所述混合酶中木瓜蛋白酶的酶活≥1250u/g，所述混合酶中ɑ-淀粉酶的酶活≥35u/g，所述混合酶中纤维素酶的酶活≥3500u/g。黄芪多糖的测定方法如下：可溶性糖提取：分别精密称取各组黄芪渣饲料添加剂0.5g，放入50ml锥形瓶，加15ml纯水，混匀，80℃水浴提取2h，5000rpm离心10min，收集上清液，沉淀物和三角瓶用纯水洗涤，离心取上清液。将剩余沉淀放入最初的三角瓶中重复操提取一次，合并两次水浴提取液，过滤，定容到100ml，待测。(1)总糖含量的测定标准曲线绘制：取干燥恒重的葡萄糖0.1g配制成0.1mg/ml标准品溶液。精密量取0.1mg/ml的葡萄糖标准品溶液0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml加入试管中，不足1.0ml用纯水补足至1.0ml，各管再加入6％苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速加入5.0ml浓硫酸摇匀，静置10min后在微沸水溶液中加热20min，取出自然冷却至室温，每组设计三个平行试验。在490nm处测定吸光度，以葡萄糖的浓度(mg/ml)为横坐标，以吸光度值(od值)为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理得线性回归方程。含量测定：取已定容样品0.1ml加0.9ml纯水，按上述方法测定样品在490nm处的吸光度，每个样品做五个重复，根据线性回归方程计算待测液中总糖浓度(mg)。再根据下式计算试样中总糖的含量。每组设计三个平行试验。式中：c为测定溶液中总糖的浓度(mg)；m为样品重量(g)；v为定容体积(ml)。(2)单糖含量的测定dns溶液的配制：a液：称取6.9g结晶苯酚溶于15.2ml10％naoh溶液，纯水稀释至69ml，再加入6.9g亚硫酸氢钠。b液：将255g酒石酸钾钠溶于300ml10％naoh溶液中，再加入880ml1％的3，5-二硝基水杨酸溶液。将a、b溶液混合即得黄色dns试剂，储于棕色瓶中放置7-10d后使用。标准曲线绘制：取干燥恒重的葡萄糖0.1g配制成1mg/ml标准品溶液。精密量取1mg/ml的葡萄糖标准品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6加入试管中，不足0.5ml用纯水补足至0.5ml，各管再分别准确加入dns试剂1.5ml，混匀，沸水浴加热5min取出自然冷却至室温，每组设计四个平行试验。在540nm处测定吸光度，以葡萄糖的浓度(mg/ml)为横坐标，以吸光度值(od值)为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理得线性回归方程。含量测定：取已定容样品0.5ml，按上述方法测定样品在540nm处的吸光度，每个样品做3个重复，根据线性回归方程计算待测液中单糖含量(mg)。单糖含量(％)＝式中：c为测定溶液中单的浓度(mg)；m为样品重量(g)；v为定容体积(ml)。(3)计算试样中多糖的含量。多糖含量(％)＝总糖含量(％)-单糖含量(％)表1混合酶分解后多糖含量变化(n＝3)所添加酶空白混合酶总糖含量(％)5.94±0.0715.70±0.08**单糖含量(％)1.59±0.024.40±0.09**多糖含量(％)4.35±0.0511.29±0.17**注：与空白对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。对比例1采用的酶为纤维素酶，购买于宁夏和氏璧生物技术有限公司，酶活为5万/g，添加量为0.02％，其余条件同实施例1，结果见表1和图1。表2不同酶分解后多糖含量变化(n＝3)所添加酶空白纤维素酶总糖含量(％)5.94±0.0717.33±0.41**单糖含量(％)1.59±0.026.89±0.21**多糖含量(％)4.35±0.0510.44±0.49**注：与空白对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。从实施例1和对比例1中可以得出，黄芪药渣经过混合酶制剂和纤维素酶水解后，总糖、单糖和多糖含量与空白组相比均有极显著提高。纤维素酶组总糖含量高于混合酶组，但是由于其中单糖含量占有较大比重，所以最终是混合酶组的多糖含量要高于纤维素酶组。实施例2取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.06％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解8h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图4-6和表3。实施例3取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.06％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解12h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图4-6和表3。对比例2取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.06％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解4h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图4-6和表3。对比例3取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.06％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解18h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图4-6和表3。对比例4取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.06％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解24h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图4-6和表3。表3混合酶制剂酶解解不同时间后黄芪药渣的糖含量变化(n＝3)酶解时间(h)总糖含量(％)单糖含量(％)多糖含量(％)015.81±0.173.04±0.0112.77±0.17417.64±0.09**5.24±0.01**12.39±0.10819.90±0.1**6.21±0.04**13.69±0.11*1219.27±0.1**6.09±0.00**13.18±0.09*1818.28±0.16**6.32±0.09**11.97±0.22*2417.69±0.08**6.72±0.01**10.97±0.08**注：与0h对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。根据实施例2～3和对比例2～4可以得出，黄芪药渣的总糖是随着酶解时间的增加先升高后下降，最高的是8h；单糖是随着酶解时间的增加先快速上升，到8h后变成缓慢增加；相对应的多糖先有所降低，然后在8h达到最高含量之后开始下降。反映出在酶解初期，4h时黄芪多糖的产生速度要慢于多糖分解成单糖的速度，在8h时多糖的产生速度超过分解速度并达到最高含量。实施例4取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.03％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解8h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图7和表4。实施例5取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.06％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解8h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图7和表4。实施例6取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.09％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解8h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图7和表4。实施例7取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.12％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解8h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图7和表4。实施例8取实施例1的黄芪药渣粉末10g，放入250ml锥形瓶，加8倍量纯水，ph调至4.5，添加0.25％的混合酶制剂(同实施例1)，加盖硅胶塞。放在恒温培养箱中50℃下酶解8h，酶解结束的瓶子放入80℃恒温水浴锅中灭活10min、烘干，得到黄芪渣饲料添加剂，测定黄芪渣饲料添加剂总糖含量的方法同实施例1，结果见图7和表4。表4添加不同量的混合酶水解后黄芪药渣的糖含量变化(n＝3)酶添加量(％)总糖含量(％)单糖含量(％)多糖含量(％)012.31±0.072.43±0.049.88±0.060.0320.78±0.02**5.40±0.06**15.38±0.07**0.0622.26±0.10**6.40±0.15**15.86±0.10**0.0923.96±0.11**6.91±0.06**17.05±0.05**0.1223.90±0.10**7.58±0.07**16.32±0.10**0.2523.92±0.22**7.93±0.09**15.99±0.28**注：与未添加酶的对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。从实施例4-8中可以得出，黄芪药渣总糖、单糖随着酶添加量的增加而升高，多糖则是随着酶解时间的增加先大幅度上升，添加0.09％酶制剂时，多糖含量最高，然后随着酶添加量的增加反而呈下降趋势。说明酶的添加量超过0.09％后，黄芪药渣多糖的产生速度要小于被分解成单糖的速度了。所以在酶解8h的条件下，添加0.09％的混合酶制剂最适合用于提高多糖含量。实施例9黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡生长性能和肉质的影响1实验方法1.1实验分组选用1日龄健康良凤花雏鸡240只，随机分为4组，每组60只，设3个重复，每个重复20只。i组(空白对照组)：既不注射环磷酰胺也不加饲料添加剂；ii组(模型组)：只注射环磷酰胺，不加饲料添加剂；iii组(环磷酰胺+添加剂组)：既注射环磷酰胺又加饲料添加剂；iv组(添加剂组)：不注射环磷酰胺，只加饲料添加剂；i组和ii组喂普通基础日粮，iii组、iv组从实验第一天开始在基础日粮中添加5％黄芪渣饲料添加剂；ii组、iii组雏鸡从第10d起，按80mg/kg剂量在左侧胸肌连续三天注射环磷酰胺建立免疫抑制模型；i组和iv组在相同位置注射等量生理盐水，连续注射三天。以组为单位散养，自由采食，共饲喂58d。1.2黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡生长性能的影响试验开始后详细记录鸡群情况，在喂药后第0d，7d，14d，21d，28d，35d，42d，49d，56d分别在上午9:00-11:00对试验鸡空腹称重，记录各每周的给料及剩余量。记录病死量。计算平均日采食量、平均日增重和料重比。计算公式如下：平均日采食量＝(配料总量-剩料量)/试验天数×每组鸡只数平均日增重＝(试验末平均体重-试验初平均体重)/试验天数料重比＝平均日采食量/平均日增重死亡率＝每组死亡鸡数/每组饲养鸡总数1.3黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡肉质的影响各组随机抽取5只鸡，取全胸肌肉，剔除骨头和筋膜。送由广西壮族自治区分析测试研究中心进行检测，结果见图8。2实验结果2.1黄芪药渣饲料添加剂对良凤花鸡生长性能的影响2.1.1各组良凤花鸡的生长曲线由图8的生长曲线可知，与空白对照组相比，整个饲养过程中经环磷酰胺造成免疫低下模型的ii、iii组差别并不明显，iv组(添加剂)的平均体重从第14d起高于其他组，越往后与其他组的差距越大；而在造模的初期即第14d到35d期间，模型组平均体重低于其他组，饲养后期逐渐变得接近。2.1.2各组鸡每周的平均体重增量由实验结果可知，第一周时，各组体重增量相近；第二周即造模之后ⅱ、ⅲ组的体重增量极显著低于对照组；第三周ⅱ组仍显著低于对照组；第五周后造模剂对体重增量的影响逐渐消失，ii组的体重增量在第5周与对照组持平，第7周后甚至超过了对照组；iv组(添加剂)从第三周后体重增量就一直高于对照组和其他实验组，到了第8周，与对照组有极显著差异。表5良凤花鸡每周增重均值(n＝60)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.1.3各组鸡每周的平均日采食量、平均日增重、料重比料重比是消耗的饲料量与同期增长的体重之间的一个比值，这个值越低则产生的效益越好。从实验数据可以看出，实验鸡在第一周(蛋黄消化期)时，各组的料重比最低且无差异；ⅱ组的料重比在第二、三、四和第八周时高于对照组，ⅲ组在第二、三和七时高于对照组，ⅳ组在第二、第六组高于对照组，在第三、七和第八组均低于对照组。结果表明，ⅲ组的料重比整体低于模型组，ⅳ组的料重比整体低于对照组；由此可见，黄芪药渣饲料添加剂能降低免疫低下及正常良凤花鸡的料重比。(此处统计的料重比为两个平均数的比值，样本量为单一数值故不具备做显著性差异和方差分析的条件。)表6各组鸡每周的平均日采食量、平均日增重、料重比(n＝60)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.1.4各组鸡饲养过程中的死亡率实验结果显示，添加黄芪药渣饲料添加剂后，良凤花鸡的死亡率明显减低；与对照组相比，ⅳ(添加剂)组死亡率降低了5％；与模型组相比，ⅲ(造模+添加剂)组死亡率也降低了5％；且ⅲ组的死亡率低于对照组。说明黄芪药渣饲料添加剂能有效降低正常良凤花鸡的死亡率；且能抵消由于免疫低下导致的死亡率增加现象，甚至降到比正常鸡的死亡率还低。(此处统计的死亡率为整个饲养过程的死亡率，样本量为单一数值故不具备做显著性差异和方差分析的条件。)表7各组良凤花鸡饲养过程中的死亡率2.2黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡肉质的影响2.2.1鸡胸肉中鲜味氨基酸的含量测定甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸是能影响肉质鲜味的氨基酸，表中数据显示，与对照组相比，各组氨基酸含量均没有显著差异；其中第ⅲ、ⅳ组的甘氨酸、丙氨酸、和天冬氨酸这三种氨基酸含量均高于对照组和模型组。说明黄芪药渣饲料添加剂对鸡肉中鲜味氨基酸的含量有一定的提高，但不显著。表8黄芪药渣饲料添加剂对鸡肉氨基酸含量的影响(n＝5)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.2.2鸡胸肉中蛋白质和脂肪含量测定数据表明，与对照组相比，各组鸡胸肉中的脂肪含量和蛋白质含量几乎没有差异。说明黄芪药渣饲料添加剂未能改善由肌间脂肪和蛋白质的含量。表9黄芪药渣饲料添加剂对鸡肉蛋白质和脂肪含量的影响(n＝5)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.2.3鸡胸肉中三种人体必需微量元素含量测定表中数据显示，各实验组的鸡肉中zn的含量几乎无差异，添加剂组ⅳ组se含量相对于空白组有所提高，说明黄芪药渣饲料添加剂能一定程度的提高鸡肉中微量元素se的含量。表10黄芪药渣饲料添加剂对鸡肉微量元素含量的影响(n＝5)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。实施例10黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡免疫功能、肝肾功能和糖脂代谢的影响1实验方法1.1实验饲养条件、实验分组均同实施例9。1.2黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡免疫功能的影响1.2.2碳廓清试验的测定在喂养结束后随机从各试验组中抽5只鸡。印度墨水提前用生理盐水进行3倍稀释，将稀释后的印度墨汁按照2ml·kg-1的剂量注入良凤花鸡一侧的翅静脉，注射后立即计时，在2min(t2)和10min(t10)后分别从对侧的翅静脉中吸取20μl血液加入到2ml的0.1％na2c03溶液中，分别测定t10和t2的溶液在600nm波长下的吸光度，结果记为od2和od10，以0.1％na2co3溶液做空白对照。然后将鸡处死，称取肝脏和脾脏重量，按如下公式计算碳廓清指数k值和吞噬指数a值。碳廓清指数k＝lg(od2)-lg(od10)/t10-t2＝lg(od2)-lg(od10)/8吞噬指数a＝体重/(肝脏重+脾脏重)×kl/31.2.3免疫器官功能的研究各组随机抽取10只鸡，空腹称重，放血致死后，取出脾脏和法氏囊。将取出的脾脏和法氏囊，置生理盐水中漂洗，用纸吸干后，在精密电子天平上称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数＝免疫器官重(g)/体重(kg)，然后放入10％福尔马林中保存，备用。1.2.4淋巴细胞转化率的测定1.2.4.1淋巴细胞的分离各组随机抽取3只鸡，用肝素抗凝管从翅静脉采取2ml的抗凝血。再用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，具体步骤如下：①.取新鲜抗凝全血，用等体积的全血及组织稀释液或者pbs稀释全血。②.在离心管中加入适量分离液，将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。③.室温，水平转子离心1000r·min-1，离心20min。④.离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。⑤.小心的吸取白膜层细胞到15ml洁净的离心管中，10mlpbs或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞250r·min-1，离心10min。⑥.弃上清，5ml的pbs或细胞清洗液重悬细胞，250r·min-1，离心10min。⑦.重复步骤⑥。⑧.弃上清，细胞重悬备用。1.2.4.2淋巴细胞增殖能力测定于96孔培养板中每孔加入100μl的淋巴细胞悬液，其中cona组每孔加50μl的cona溶液，lps组每孔加入50μl稀释后的lps溶液，对照组加入等体积的1640培养液。将其置于二氧化碳培养箱中培养，48h后每孔加入20μlmts，避光孵育1.5h，于490nm下检测其od值。按od值的大小评价反应体系中细胞增殖程度。1.3黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡肝肾功能、糖脂代谢的影响1.3.1肝肾功能和糖脂代谢的测定各组随机抽取10只鸡，用采血管进行翅静脉采血2ml，静置10min，以3000r·min-1离心10min，从上部血清吸出50μl至0.5ml的pe离心管内，-20℃冰箱保存，次日送检验机构分别测定肝功能、肾功能和糖脂代谢各项指标。2实验结果2.1黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡免疫功能的影响2.1.1碳廓清实验实验结果显示，吞噬指数a随着碳廓清指数k变化，添加了饲料添加剂的第ⅲ、ⅳ组的吞噬指数均高于对照组和模型组，但未表现出显著性差异。表11黄芪渣饲料添加剂对碳廓清指数和吞噬指数的影响(n＝6)组别碳廓清指数k吞噬指数aⅰ0.0121±0.00599.0706±2.2213ⅱ0.0066±0.00587.3916±3.0813ⅲ0.0203±0.007711.2337±1.3012ⅳ0.0159±0.003711.1410±2.2113注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.1.2免疫器官与对照组相比，各实验组脾脏指数均较低，且ⅳ组(添加剂组)最低；各实验组法氏囊指数均高于对照组，且ⅳ组(添加剂组)最高。综上所述，从脾脏指数和法氏囊指数这两个指标数据中无法判断黄芪药渣饲料添加剂是否具有提高良凤花鸡免疫器官指数的作用。表12黄芪渣饲料添加剂对免疫器官指数的影响(n＝10)组别脾脏指数法氏囊指数ⅰ2.201±0.6270.832±0.282ⅱ1.881±0.5560.855±0.198ⅲ1.866±0.2770.860±0.218ⅳ1.694±0.4720.875±0.208注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.1.3淋巴细胞转化率与对照组相比，cona刺激后ⅱ组的淋巴细胞的增殖能力略高于对照组，ⅲ组略低于对照组，ⅳ组高于其他各组。lps刺激后各组表现出的增殖能力普遍较cona刺激后的强，ⅱ组的淋巴细胞的增殖能力有所降低，ⅲ、ⅳ组有所升高，ⅳ组显著升高；由此说明，黄芪药渣饲料添加剂可部分提高经cona刺激后鸡淋巴细胞增值能力，能显著提高lps刺激后鸡淋巴细胞增值能力。表13cona\lps刺激后淋巴细胞的增殖能力(n＝3)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.2黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡糖脂代谢的影响良凤花鸡的糖脂代谢结果显示，与对照组相比，各实验组的血糖、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白均无显著性差异。其中，第ⅲ、ⅳ组的低密度脂蛋白胆固醇和极低密度脂蛋白的含量较空白组和模型组有所下降，表明黄芪药渣添加剂具有改善良凤花鸡的脂代谢的趋势。表14黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡糖脂代谢指标的影响(n＝10)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。2.2.1黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡肝肾功能的影响研究表明，部分中药对肝肾功能有损伤，黄芪药材本身对人类相对安全，但由于经过了酶解转化过程，且实验对象和药材用量的变化都有可能增加肝肾损伤的风险。故检测实验动物的肝肾功能是否受到影响是很重要的。肝功能指标检测结果显示，与对照组相比，各实验组的总蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比、总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶均没有显著性差异；其中第ⅱ、ⅲ组的谷草转氨酶相对于对照组略有降低，而第ⅳ组与对照组相近；说明黄芪药渣饲料添加剂并不影响鸡血清中肝功能各项指标包括谷草转氨酶的含量。肾功能指标检测结果显示，与对照组相比，各实验组的尿素、肌酐、尿酸均无显著性差异，且每个项目各组结果数值相近。说明黄芪药渣饲料添加剂对良凤花鸡的肾功能指标没有影响。综上所述，饲喂黄芪药渣饲料添加剂后，良凤花鸡的肝肾功能没有受到明显影响。表15黄芪药渣饲料添加剂对良凤花鸡肝功能指标的影响(n＝10)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。表16黄芪渣饲料添加剂对良凤花鸡肾功能指标的影响(n＝10)注：与对照组比较，*p<0.05，有显著性差异；**p<0.01，有极显著差异。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3