一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽及其制备方法与流程

本发明属于食品加工
技术领域：
，具体涉及一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽及其制备方法。
背景技术：
：免疫力是指能维护人体内环境的稳定性，并且抵抗外来入侵的能力，是一种人体自身的防御机制。外界环境中充满了各种各样的细菌、病毒或真菌等，如果免疫力低下的人可能会受到这些致病微生物的侵袭，临床上表现为生病或者身体不舒服，从而影响了人的整个身体机能，甚至还会引发重大疾病。而且现代医学表明，人类大部分的疾病都与自身免疫系统有关，所以需要提高免疫力。众所周知，增强免疫力实质上是人体识别和排除“异己”的生理反应，人体内执行这一功能的是免疫系统，目前增强免疫力的方法有很多，比如市面上有专门针对增强免疫力的保健品，但是传统的这类保健品为了强调色香味，或多或少会加入一些色素、防腐剂或者香精等化学合成物质，导致保健品中有效成分不能完全被人体吸收，进而影响保健品的效果。cn110584125a公开了一种小分子活性胶原蛋白肽粉剂及其制备方法。该粉剂原料主要包括牦牛骨胶原蛋白肽、大豆肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白水解物、维生素c和食用香精。其中牛骨胶原蛋白肽是由耗牛骨制备而成，主要步骤包括先是对耗牛骨进行除杂，然后进行粉碎、过筛，再加入酶溶液和缓冲溶液进行酶解，最后将酶解产物进行固液分离得到胶原蛋白液，再进行浓缩、干燥得到粉末状牦牛骨胶原蛋白肽。大豆肽的制备方法主要包括先将大豆蛋白粉加水搅拌得到大豆蛋白液，然后加入蛋白酶进行酶解，灭酶处理后进行超滤分离，最后干燥得到粉末状大豆肽，最后将上述各原料混合包装得到胶原蛋白肽粉剂成品，对成品吸收率测试可达98％，但是该专利声称制备一种小分子活性胶原蛋白肽粉剂，实际并没有表明小分子量占比，且没有证明吸收率的相关测试实验。cn108785660a公开了一种具有提高免疫力作用的牛骨胶原蛋白肽及其制备方法。该牛骨胶原蛋白肽的原料主要包括牛骨胶原蛋白肽粉、灵芝草、白花蛇舌草、辽五味、人参、蚤休、降香、三白草、夏枯球、枳椇子、余甘子、败酱草、胆南星、白茅根、冬虫夏草、芫根、鸡血藤、芡实、半枝莲、大金钱草。另外如果口服制剂为散剂，所加辅料包括丙烯酸树脂ⅳ、低取代羟丙基纤维素、三硅酸镁等，如果口服制剂为胶囊剂，所加辅料包括玉米阮、香兰素、波拉克林钾等。该专利中原料组分较多，成本高，制备方法复杂，且加入较多化学添加剂，如果长期食用，可能会对身体有不良影响。cn107518413a公开了一种增强免疫力的蛋白低聚肽组合物，其原料主要包括蛋白低聚肽、人参提取物、维生素c、矿物元素锌、矿物元素硒，所用的辅料包括甜味剂。其中蛋白低聚肽为大豆蛋白低聚肽，由大豆蛋白通过酶解或酸水解的方式制备获得。原料中除了使用辅料之外，还添加余量的香精和防腐剂，由蛋白低聚肽组合物制备成蛋白低聚肽固体饮料。对于这种饮料进行效果测试，可以发现蛋白低聚肽组合物具有增强免疫力的保健效果。但是该原料中加入了众多化学添加剂，且对于老年人的保健效果平均有效率约为80％，保健效果有待提高。为了研究出增强免疫力效果较优的产品，研究人员进行了大量探索，目前的产品仍存在成分单一，导致功能效果差，或者产品分子量大，导致人体吸收效果差，或者产品的口味或气味存在缺陷，因此，亟需提供一种不仅能增强免疫力，又能解决上述缺陷的产品。技术实现要素：针对上述
背景技术：
指出的不足，本发明的目的在于提供了一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽及其制备方法，制备的这种复合骨低聚肽分子量较低，解决了现有技术中存在的成分单一等问题，具有增强机体免疫力的效果。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下原料：畜骨低聚肽和海洋骨低聚肽。进一步地，所述的复合骨低聚肽包括以下重量份的原料：畜骨低聚肽15-65份和海洋骨低聚肽5-20份。进一步地，所述的畜骨低聚肽和海洋骨低聚肽的重量比为1-3:1，优选地，所述的畜骨低聚肽和海洋骨低聚肽的重量比为2:1。进一步地，所述的畜骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：将畜骨进行除杂，粉碎，得到粉碎的畜骨；(2)过滤：将步骤(1)得到的粉碎的畜骨与水混合，调节ph，加热，然后冷却，过滤，得到滤液；(3)脱脂：将步骤(2)得到的滤液进行脱脂处理，浓缩，得到物料1；(4)酶解：将步骤(3)得到的物料1调节ph，加入碱性蛋白酶，进行酶解，然后加入自制蛋白酶，进行酶解，再加入复合蛋白酶、风味蛋白酶复合酶，进行酶解，最后升温，然后保温，得到物料2；(5)干燥：将木糖加入至将步骤(4)得到的物料2中，搅拌，然后喷雾干燥，得到畜骨低聚肽。进一步地，步骤(1)中所述的畜骨为牛骨、牦牛骨、骆驼骨中的一种或多种。进一步地，步骤(1)中所述的粉碎的畜骨的直径为3-5cm的块状。进一步地，步骤(2)中所述的粉碎的畜骨与水的重量比为1:5，ph为7.0-8.0；加热的温度为120-140℃，时间为2-4h；冷却至温度为60-80℃，过滤是过80-100目的滤布。进一步地，步骤(3)中所述的物料1的脂肪含量<2％，固形物的含量为20-40％。进一步地，步骤(4)中所述的物料1调节ph至8.0-9.0，加入碱性蛋白酶，进行酶解的温度为50-55℃，时间为2-4h；所述的加入自制蛋白酶，进行酶解的温度为50-55℃，时间为1-3h；所述的加入复合蛋白酶、风味蛋白酶复合酶，进行酶解的温度为50-55℃，时间为3-5h；所述的升温至温度为80-100℃，保温的时间为5-10min。进一步地，步骤(5)中所述的木糖的加入量为物料2重量的0.5-1％，搅拌的温度为80-90℃，时间为1-2h；喷雾干燥的温度为160/90℃。进一步地，所述的海洋骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：s1：原料预处理：将鱼骨进行除杂，磨碎，得到鱼骨颗粒；s2：过滤：将步骤s1得到的鱼骨颗粒与水混合，调节ph，加热，然后冷却，过滤，得到滤液；s3：酶解：将步骤s2得到的滤液调节ph，加入自制蛋白酶，进行酶解，再加入风味蛋白酶，进行酶解，最后升温，然后保温，得到物料3；s4：混合搅拌：将硅藻土加入至将步骤s3得到的物料3中，搅拌，过滤得到滤液a，然后再加入活性炭，搅拌，过滤得到滤液b；s5：浓缩、干燥：将葡萄糖加入至步骤s4得到的滤液b中，搅拌，真空浓缩，最后喷雾干燥，得到海洋骨低聚肽。进一步地，步骤s1中所述的鱼骨为鳕鱼骨、三文鱼骨、金枪鱼骨中的一种或多种。进一步地，步骤s1中所述的鱼骨颗粒的直径为0.1-0.5cm的颗粒。进一步地，步骤s2中所述的鱼骨颗粒与水的重量比为1:7，ph为7.0-8.0；加热的温度为100-120℃，时间为1-3h；冷却至温度为60-80℃，过滤是过80-100目的滤布。进一步地，步骤s3中所述的滤液调节ph至6.0-7.0，加入自制蛋白酶，进行酶解的温度为50-55℃，时间为1-3h；所述的加入风味蛋白酶，进行酶解的温度为50-55℃，时间为3-5h；所述的升温至温度为80-100℃，保温的时间为5-10min。进一步地，步骤(4)和步骤s3中所述的自制蛋白酶的制备方法为：麸皮与水的重量比为1:1.0-1.5，培养温度25-30℃，米曲霉:黑曲霉重量比为1-3:1，接种量为0.3-0.9％，培养60-80h，然后加入1-2倍去离子水，40℃搅拌提取1h，然后4℃离心，过滤得到蛋白酶提取液，然后冷冻干燥即可得到自制蛋白酶。进一步地，步骤s4中所述的硅藻土的加入量为物料3重量的3-5％，搅拌的温度为60-80℃，时间为0.5-1h；所述的活性炭的加入量为滤液a重量的2-6％，搅拌的温度为60-80℃，时间为0.5-1h。进一步地，步骤s5中所述的葡萄糖的加入量为滤液b重量的1-3％，搅拌的温度为80-90℃，时间为1-2h；所述的真空浓缩至固形物的含量为20-40％；喷雾干燥的温度为160/90℃。本发明还提供了上述复合骨低聚肽的制备方法，包括如下步骤：将畜骨低聚肽和海洋骨低聚肽称重，混合，包装，即得到复合骨低聚肽。与现有技术相比，本发明的有益效果为：(1)本申请制备的复合骨低聚肽的分子量小，其中低聚肽的分子量<1000da的占总量的90％以上，吸收好，确保能被人体大部分吸收，从而达到增强免疫力的效果。(2)本申请制备的复合骨低聚肽其营养更全面，效果更佳，产品的复配使用具有协同作用，其增强免疫力的效果远大于单剂的效果叠加，极其适合免疫力低下的人长期服用，即增强免疫力效果更好。(3)本申请制备的产品口感好，无苦味和不良气味，制备的畜骨低聚肽的蛋白含量>80％，肽基氮>75％，分子量<1000da占比95％以上，制备的海洋骨低聚肽的分子量<1000da占比达90％以上。附图说明图1实施例3中制备的牛骨低聚肽的分子量分布图谱。图2实施例3中制备的鳕鱼骨低聚肽的分子量分布图谱。图3实施例3中制备的复合骨低聚肽和对照品大鼠灌胃后血浆中hyp含量变化。具体实施方式为了更好地理解本发明，下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述，其中实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，不构成对本发明保护范围的限制。原料来源：复合蛋白酶购自诺维信公司；风味蛋白酶购自诺维信公司；sd雄性大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司；自制蛋白酶的制备方法为：麸皮与水的重量比为1:1.0-1.5，培养温度25-30℃，米曲霉:黑曲霉的重量比为1-3:1，接种量为0.3-0.9％，培养60-80h，然后加入1-2倍去离子水，40℃搅拌提取1h，然后4℃离心，过滤得到蛋白酶提取液，然后冷冻干燥即可得到自制蛋白酶；其余原料均为普通市售产品，因此不需要对其来源做具体限定。实施例1一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下重量份的原料：牛骨低聚肽15份和鳕鱼骨低聚肽20份。其中，牛骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：将牛骨进行除杂，粉碎，得到直径为3-5cm的块状牛骨；(2)过滤：将步骤(1)得到的块状牛骨与水按重量比为1:5混合，调节ph为7.0-8.0，在温度为120℃下加热4h，然后冷却至温度为60℃，过80-100目的滤布，得到滤液；(3)脱脂：将步骤(2)得到的滤液进行脱脂处理，浓缩，得到脂肪含量<2％，固形物的含量为40％的物料1；(4)酶解：将步骤(3)得到的物料1调节ph至8.0-9.0，加入碱性蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为4h；然后加入自制蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为3h；再加入复合蛋白酶、风味蛋白酶复合酶，进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为5h；最后升温至温度为80℃，保温的时间为10min，得到物料2；(5)干燥：将重量为物料2重量的1％的木糖加入至将步骤(4)得到的物料2中，在温度为90℃下搅拌2h，然后在160/90℃下进行喷雾干燥，得到牛骨低聚肽。其中，鳕鱼骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：s1：原料预处理：将鳕鱼骨进行除杂，磨碎，得到直径为0.1-0.5cm的鳕鱼骨颗粒；s2：过滤：将步骤s1得到的鳕鱼骨颗粒与水按重量比为1:7混合，调节ph为7.0-8.0，在温度为100℃下加热3h，然后冷却至温度为60℃，过80-100目的滤布，得到滤液；s3：酶解：将步骤s2得到的滤液调节ph至6.0-7.0，加入自制蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为55℃，时间为1h；再加入风味蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为55℃，时间为3h；最后升温至温度为100℃，然后保温5min，得到物料3；s4：混合搅拌：将重量为物料3重量的5％硅藻土加入至将步骤s3得到的物料3中，在温度为80℃搅拌0.5h，过滤得到滤液a，然后再加入重量为滤液a重量的6％活性炭，在温度为80℃搅拌0.5h，过滤得到滤液b；s5：浓缩、干燥：将重量为滤液b重量的3％葡萄糖加入至步骤s4得到的滤液b中，在温度为80℃搅拌2h，真空浓缩至固形物的含量为40％，最后在160/90℃下进行喷雾干燥，得到鳕鱼骨低聚肽。实施例2一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下重量份的原料：牛骨低聚肽65份和鳕鱼骨低聚肽5份。其中，牛骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：将牛骨进行除杂，粉碎，得到直径为3-5cm的块状牛骨；(2)过滤：将步骤(1)得到的块状牛骨与水按重量比为1:5混合，调节ph为7.0-8.0，在温度为140℃下加热2h，然后冷却至温度为80℃，过80-100目的滤布，得到滤液；(3)脱脂：将步骤(2)得到的滤液进行脱脂处理，浓缩，得到脂肪含量<2％，固形物的含量为20％的物料1；(4)酶解：将步骤(3)得到的物料1调节ph至8.0-9.0，加入碱性蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为55℃，时间为2h；然后加入自制蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为55℃，时间为1h；再加入复合蛋白酶、风味蛋白酶复合酶，进行酶解，酶解的温度为55℃，时间为3h；最后升温至温度为100℃，保温的时间为5min，得到物料2；(5)干燥：将重量为物料2重量的0.5％的木糖加入至将步骤(4)得到的物料2中，在温度为80℃下搅拌1h，然后在温度为160/90℃下进行喷雾干燥，得到牛骨低聚肽。其中，鳕鱼骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：s1：原料预处理：将鳕鱼骨进行除杂，磨碎，得到直径为0.1-0.5cm的鳕鱼骨颗粒；s2：过滤：将步骤s1得到的鳕鱼骨颗粒与水按重量比为1:7混合，调节ph为7.0-8.0，在温度为120℃下加热1h，然后冷却至温度为80℃，过80-100目的滤布，得到滤液；s3：酶解：将步骤s2得到的滤液调节ph至6.0-7.0，加入自制蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为3h；再加入风味蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为5h；最后升温至温度为80℃，然后保温10min，得到物料3；s4：混合搅拌：将重量为物料3重量的3％硅藻土加入至将步骤s3得到的物料3中，在温度为60℃搅拌1h，过滤得到滤液a，然后再加入重量为滤液a重量的2％活性炭，在温度为60℃搅拌1h，过滤得到滤液b；s5：浓缩、干燥：将重量为滤液b重量的1％葡萄糖加入至步骤s4得到的滤液b中，在温度为90℃搅拌1h，真空浓缩至固形物的含量为20％，最后在温度为160/90℃下进行喷雾干燥，得到鳕鱼骨低聚肽。实施例3一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下重量份的原料：牛骨低聚肽30份和鳕鱼骨低聚肽15份。其中，牛骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：将牛骨进行除杂，粉碎，得到直径为3-5cm的块状牛骨；(2)过滤：将步骤(1)得到的块状牛骨与水按重量比为1:5混合，调节ph为7.0-8.0，在温度为130℃下加热3h，然后冷却至温度为70℃，过80-100目的滤布，得到滤液；(3)脱脂：将步骤(2)得到的滤液进行脱脂处理，浓缩，得到脂肪含量<2％，固形物的含量为30％的物料1；(4)酶解：将步骤(3)得到的物料1调节ph至8.0-9.0，加入碱性蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为52℃，时间为3h；然后加入自制蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为52℃，时间为2h；再加入复合蛋白酶、风味蛋白酶复合酶，进行酶解，酶解的温度为52℃，时间为4h；最后升温至温度为90℃，保温的时间为8min，得到物料2；(5)干燥：将重量为物料2重量的0.8％的木糖加入至将步骤(4)得到的物料2中，在温度为85℃下搅拌2h，然后在温度为160/90℃下进行喷雾干燥，得到牛骨低聚肽。其中，鳕鱼骨低聚肽的制备方法，包括以下步骤：s1：原料预处理：将鳕鱼骨进行除杂，磨碎，得到直径为0.1-0.5cm的鳕鱼骨颗粒；s2：过滤：将步骤s1得到的鳕鱼骨颗粒与水按重量比为1:7混合，调节ph为7.0-8.0，在温度为110℃下加热2h，然后冷却至温度为70℃，过80-100目的滤布，得到滤液；s3：酶解：将步骤s2得到的滤液调节ph至6.0-7.0，加入自制蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为53℃，时间为2h；再加入风味蛋白酶，进行酶解，酶解的温度为53℃，时间为4h；最后升温至温度为90℃，然后保温8min，得到物料3；s4：混合搅拌：将重量为物料3重量的4％硅藻土加入至将步骤s3得到的物料3中，在温度为70℃搅拌1h，过滤得到滤液a，然后再加入重量为滤液a重量的4％活性炭，在温度为70℃搅拌1h，过滤得到滤液b；s5：浓缩、干燥：将重量为滤液b重量的2％葡萄糖加入至步骤s4得到的滤液b中，在温度为85℃搅拌1.5h，真空浓缩至固形物的含量为30％，最后在温度为160/90℃下进行喷雾干燥，得到鳕鱼骨低聚肽。对比例1与实施例3的区别在于，一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下重量份的原料：牛骨低聚肽10份和鳕鱼骨低聚肽40份。其他原料及含量和制备方法均与实施例3相同。对比例2与实施例3的区别在于，一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下重量份的原料：牛骨低聚肽70份和鳕鱼骨低聚肽3份。其他原料及含量和制备方法均与实施例3相同。对比例3与实施例3的区别在于，一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下原料：牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽，其中，牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽的重量比为0.8:1(牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽总重量与实施例1相同)。其他原料及含量和制备方法均与实施例3相同。对比例4与实施例3的区别在于，一种能够增强免疫力的复合骨低聚肽，包括以下原料：牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽，其中，牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽的重量比为4:1(牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽总重量与实施例1相同)。其他原料及含量和制备方法均与实施例3相同。对比例5与实施例3的区别在于，在牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽的制备方法中，将自制蛋白酶替换为碱性蛋白酶。其他原料及含量和制备方法均与实施例3相同。对比例6专利cn110584125a中的实施例1。测试实验：1、对实施例1-3、对比例1-5制备的复合低聚肽和对比例6制备的胶原蛋白肽粉剂进行感官性能测试，测试结果如表1所示。表1：实例口感、气味实施例1口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味实施例2口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味实施例3口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味对比例1口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味对比例2口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味对比例3口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味对比例4口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味对比例5口感醇厚、无牛膻味、无鱼腥味对比例6微弱牛膻味、微弱鱼腥味由本申请制备方法制备的复合骨低聚肽，其口感醇厚，气味无牛膻味、无鱼腥味，相比对比例6(现有技术)制备的胶原蛋白肽粉剂，无论从口感还是气味来说，其感官状态都优于对比例6。2、对实施例3制备的牛骨低聚肽和鳕鱼骨低聚肽分别测试其分子量的大小及分布，按照具体的测试标准gbt22729-2008进行测试，测试结果如图1-2和表2-3所示。测试仪器：gpcuv-vis检测器。表2牛骨低聚肽分子量分布表3鳕鱼骨低聚肽分子量分布由图1的牛骨低聚肽分子量分布图谱总结该牛骨低聚肽分子量的分布范围为表2，通过图1和表2看出，本发明实施例3制备的牛骨低聚肽分子量<1000da占比97.77％，由图2的鳕鱼骨低聚肽分子量分布图谱总结该鳕鱼骨低聚肽分子量的分布范围为表3，通过图2和表3看出，本发明实施例3制备的鳕鱼骨低聚肽分子量<1000da占比94.95％，综上，本发明实施例3制备的复合骨低聚肽的平均分子量<1000da占比90％以上。另外，为了证明复合低聚肽的分子量的吸收效果，实验借助sd雄性大鼠，实验前大鼠禁食不禁水24h，取浓度为50mg/ml的pro溶液进行灌胃，抽取大鼠血液，对照大鼠用蒸馏水灌胃，将实施例3制备的复合骨低聚肽样品配制为50mg/ml的溶液灌胃，并测试血浆中hyp的变化。测试结果如图3所示。由图3可知，用制备的复合骨低聚肽样品进行灌胃后血浆中hyp含量先迅速升高，后随着时间的延长其含量逐渐降低，4h后接近对照组的血浆hyp含量，其吸收过程较快。而复合骨低聚肽的平均分子量<1000da占比90％以上，可见产品分子量小，其吸收性能越高。3、动物实验测试对象为spf级balb/c小鼠，由广东医学院实验动物中心提供，随机分为10组，每组10只，将上述实施例1-3和对比例1-6制备的产品进行喂食，并设置对照组，对照组服用无菌纯净水，每天喂食3次，每次100mg，连续服用30天，抽取小鼠血液，检测血清中溶血素的含量，并在抽血之后每组分别进行cona诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验，进行小鼠迟发性变态反应实验，具体检测结果见表4。表4：由表4可知，实施例1-3制备的复合骨低聚肽可以显著增强小鼠的免疫力，而对比例中的增强小鼠免疫力的效果都比实施例低，对比例1-4的设置至少有一个因素不在本发明要求保护的范围内，因此突出了本发明要求保护的范围的意义，对比例5是用商品酶代替本申请的自制酶，对比发现其效果比实施例低；对比例6是现有技术制备的目标产物，对比发现，其效果不如本申请制备的产品，因此本发明制备的复合骨低聚肽具有增强免疫力的效果。以上所揭露的仅为本发明的一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。当前第1页12