婴儿的生长促进的制作方法

婴儿的生长促进
1.本申请是申请日为2013年04月17日，申请号为201380032170.1，发明名称为“婴儿的生长促进”的申请的分案申请。
发明领域
2.本发明涉及用于促进婴儿生长的组合物和方法，具体地涉及用于早产婴儿及小于胎龄(small for gestational age,sga)婴儿的胰岛素补充物及包含其的配方食品，其有效促进新生儿的生长。
3.发明背景
4.由于其营养和免疫优势，母乳喂养(breastfeeding)被公认为支持婴儿的健康生长和发育的天然且可取的方式(espghan committee on nutrition:agostoni c.等人breast
‑
feeding:a commentary by the espghan committee on nutrition.j pediatr gastroenterol nutr 2009.49:112
‑
25)。母乳提供了用于婴儿的营养需求的最合适的饮食。它还给婴儿提供了针对广泛的感染相关疾病的免疫保护(shulman r.j.pediatr res 1990.28:171
‑
5)，并且其还被发现在某些认知发育领域中提供了长期的益处。还公知的是，人乳的组成在婴儿分娩后的最初几周期间变化。人乳在出生后第一个5天期间称为初乳，出生后的6～14天期间称为过渡乳，且其后称为成熟乳。在哺乳的每个阶段，相应的人乳的组成差异显著。例如，初乳和过渡乳具有比成熟乳低的热量密度，以及更高的蛋白质和更低的碳水化合物浓度。在三种定义的人乳的组中，维生素和矿物质以及激素浓度也不同。然而，母乳喂养并不总是可能的，尤其是当婴儿早产或具有低出生体重时。
5.在婴儿配方食品领域中存在市售可得的或另外已知的许多不同的婴儿营养配方食品。这些婴儿配方食品包括一系列的营养成分以满足婴儿生长的营养需求，并且通常包括脂质、碳水化合物、蛋白质、维生素、矿物质以及有助于最佳的婴儿生长和发育的其它营养成分。虽然努力使市售婴儿配方食品在组成上与成熟的人乳相似，但是通常由于加工配方食品的条件，它们是不一致的。市售婴儿配方食品缺少的组分之一为胰岛素，已知胰岛素在成熟乳中以其活性形式存在。
6.对泌乳母畜(dam)和哺乳大鼠的观察显示哺乳动物乳汁胰岛素有生物活性；且不成熟的肠上皮细胞(enterocyte)具有对胰岛素的提高的响应(buts j.p.等，j pediatr gastroenterol nutr 1997，25:230
‑
2)。胰岛素刺激肠上皮细胞(intestinal epithelial cell)的增殖，并且当将猪胰岛素添加到施用于新生小猪的饲料中时可提高回肠乳糖酶活性(shehadeh n.等，pediatr diabetes 2001.2:175
‑
177；corps a.n.和brown k.d.j endocrinol 1987.113:285
‑
90)。此外，乳携带(milk
‑
borne)的胰岛素影响胰腺的成熟，并诱导大鼠中胰淀粉酶的形成(kinouchi t.等，jpgn 2000.30:515
‑
521)。先前已经证明人乳胰岛素浓度与牛乳(16.32
±
5.98μu/ml)相比显著更高(60.23
±
41.05μu/ml)，并且在婴儿配方食品中几乎检测不到胰岛素。在分娩后3至30天取得的人母乳中，胰岛素值的范围在6.45至305.65μu/ml之间。在另外的研究中，进一步评价了母乳中的人胰岛素浓度是否受胎龄或产后年龄(postnatal age)的影响。在产后第3天和第10天分析了母乳的胰岛素水平。
产后第3天或第10天的人乳胰岛素(hmi)浓度不受分娩时胎龄以及母亲年龄、种族来源、分娩方式、妊娠期体重增加或母亲的身体质量指数(bmi)的影响。hmi浓度在产后第3天和第10天之间减少，但是该减少仅对足月分娩(37
‑
41胎龄组)的母亲是显著的。因此，早产婴儿经受与足月婴儿相似浓度的胰岛素(shahadeh n等，2003.arch dis child fetal neonatal ed 88:f214
–
f216)。人初乳包含更高的胰岛素浓度，多达约600μu/ml(read l c.等，1984.pediatr res 18(2):133
‑
139)。
7.肠内胰岛素施用可有益于减小早产婴儿的喂养不耐受(shulman r j.arch dis child fetal neonatal ed.2002.86:f131
‑
f133)，并且可抑制小鼠中自身免疫性糖尿病的形成(schatz d.a.等，cleve clin j med 1996.63:270
‑
4)。口服施用的胰岛素通常在肠内不被吸收(larkin m.lancet 1997.349:1676)，并且观察到的效果可能为局部的并且限于哺乳期(shehadeh n.等，2001,同上)。然而，在非哺乳小鼠中口服胰岛素补充提高了胰岛素血清水平，并且对血清脂质水平具有有益的效果，表明口服摄取的胰岛素在该群体中的全身性效果。这与在成年大鼠中的胰岛素的细胞间(而非细胞旁)肠运输的观察结果一致。
8.虽然未观察到关于口服胰岛素的长期负面影响，以高达4u/kg/天的浓度对4至28天龄的早产婴儿口服胰岛素的施用，提高了乳糖酶活性并且可有益于减小喂养不耐受而不会引起低血糖或其它副作用(shulman 2002，同上)。对在不成熟肠的哺乳大鼠模型中施用的胰岛素对粘膜质量参数以及对刷状缘膜(bbm)水解酶的表达的影响的分析还显示了，以比预计的乳携带的胰岛素的每日摄取量高～10倍的药理范围给予的口服胰岛素的安全性，显示了口服胰岛素补充的安全性(buts j p等，1997.j pediatr gastroenterol nutr 25:230
‑
2)。此外，该研究显示胰岛素能够超前地提高肠bbm酶，特别是当在其合适的媒介物(大鼠乳汁)中给予时。
9.本发明的发明人的美国专利号6,365,177和6,399,090公开了呈粉末或溶液形式的婴儿配方食品，包含营养组分和胰岛素补充物。胰岛素浓度在10至1000μu/ml溶液(特别地30
‑
100μu/ml溶液)或83
‑
7,500μu/克粉末(特别地250
‑
750μu/克粉末)的范围内，并且当喂给婴儿时，婴儿形成糖尿病的几率减小。
10.美国申请公开号20070248652和20060147494公开了用于封装活性成分包括胰岛素的方法，以及包含所述活性成分的配方食品，所述配方食品用于改善人和非人生物体的健康状况和生长表现。
11.美国专利号8,026,211公开了用于通过口服和/或肠内施用治疗有效量的胰岛素提高肠功能、特别是罹患肠功能失常或营养不良的受试者中的肠功能的方法。
12.小于2,500g的婴儿出生体重被认为是低出生体重(lbw)，并且处于新生儿严重健康问题、长期残疾以及甚至死亡的增加的风险中。某些lbw婴儿可被进一步分类为出生时小于1,500g的非常低出生体重(vlbw)婴儿以及出生时小于1000g的极低出生体重(elbw)婴儿。lbw新生儿的比率在世界各地显示出差异。例如，世界卫生组织(who)预计2000年在欠发达地区16.5％的出生人数为lbw。相反，2005年美国每12个婴儿中约1个(8.3％)为出生lbw。lbw婴儿的比率在不断提高，特别是在较发达地区例如美国，人们认为主要由人工受孕的多胎妊娠的早产的增加而引起。
13.除了矮小的父母的遗传背景，低出生体重的主要原因为早产，即从末次月经期的第一天起34个整周之前出生的婴儿；以及胎儿生长受限，即可能是足月的但体重不足的婴
儿，也称为小于胎龄婴儿(sga)或足月小样儿(small
‑
for
‑
date baby)。小于胎龄婴儿(sga)被定义为低于胎龄的性别特异的群体参考平均值2个标准差(sd)的出生体重和/或体长。sga可以是宫内发育迟缓(iugr)、早产或两者的结果。
14.正常妊娠的最后几周的特征为胚胎的快速生长。因此，早产婴儿在通常以快速的子宫内生长为特征的期间被暴露于子宫外生活。为了存活，婴儿的能量消耗从生长促进作用转变为存活策略，并且该低生长速率导致对包括身体组成、胰岛素敏感性、血压等的特征的持续的整体后遗症(persistent ensemble of squealae)。
15.国际(pct)申请公开号wo 1998/044917公开了用于促进早产婴儿的生长的方法，包括施用某些长链多不饱和脂肪酸。优选的是，向婴儿施用包括二十二碳六烯酸和花生四烯酸的组合的配方食品。
16.国际(pct)申请公开号wo 2012/052060公开了用于通过肠内施用重组人胆盐刺激脂肪酶(rhbssl)促进人类婴儿、特别是体重不足或早产人类婴儿的生长速度的方法。
17.国际(pct)申请公开号wo 2012/150245公开了包括atp
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敏感性钾(k
‑
atp)通道拮抗剂的药物组合物以及用于治疗早产婴儿和/或小于胎龄婴儿的高血糖症和/或促进其生长的方法。
18.对能够有助于早产婴儿克服在出生后的最初几个月期间的生长迟缓并减少对小于胎龄婴儿的长期的不良健康影响的程度或发生的喂养用配方食品(feed formulae)存在未被满足的需要。
19.发明概述
20.本发明涉及胰岛素用于促进低出生体重婴儿包括早产婴儿和小于胎龄(sga)婴儿的生长和成熟的用途。
21.本发明部分基于以下的意外发现：在从出生起的最初1
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4个月用富含胰岛素的配方食品喂养早产婴儿和/或sga婴儿导致体重、体长和头围超过预期生长速率地增加。此外，本发明如今公开了以类似人初乳或母乳胰岛素浓度范围的胰岛素显著促进胃肠道的成熟，导致将婴儿转变为非肠胃外的、完全肠内喂养所需要的时间减少，并使低出生体重的婴儿能够从医院更早地离开。本发明首次证明了在关键的最初1至6个月的生长期间对早产婴儿或另外体重不足的出生婴儿口服施用胰岛素促进了婴儿的生长。
22.因此，根据一个方面，本发明提供了用于提高低出生体重的人类婴儿的生长速率的方法，包括在新出生时向婴儿口服施用胰岛素(administering insulin orally to the infant when newborn)，从而提高婴儿的生长速率超过预期速率。
23.根据某些实施方式，低出生体重婴儿选自由早产人类婴儿和小于胎龄(sga)人类婴儿组成的组。
24.根据典型的实施方式，提高生长速率包括早产婴儿或sga婴儿的婴儿体重、体长和头围中至少一项超过预期的测量结果(measure)。
25.根据其它实施方式，生长、体长和头围中至少一项的测量结果在至少一个月、两个月、三个月或四个月的婴儿年龄时获得。根据其它实施方式，测量结果在至少三个月龄时获得。根据某些典型的实施方式，测量结果在六个月龄时获得。根据一些实施方式，获得多个这样的超过预期的测量结果。
26.根据另外的实施方式，提高生长速率包括早产婴儿或sga婴儿的胃肠成熟的超过
预期的测量结果。根据某些实施方式，根据实现完全肠内喂养所需的天数来设置婴儿胃肠成熟的测量结果。根据这些实施方式，与预期的天数相比，根据本发明的教导对低出生婴儿施用胰岛素减少了实现完全肠内喂养所需的天数。
27.根据另外的实施方式，与预期的住院时间相比，根据本发明的教导对低出生婴儿施用胰岛素减少了婴儿的住院时间。
28.根据本发明的教导，胰岛素可直接地、在组合物内和/或在婴儿配方食品内被施用。本领域已知的任何肠内施用方法都可根据本发明的教导被使用。根据某些典型的实施方式，胰岛素或包含胰岛素的组合物与婴儿配方食品混合以形成富含胰岛素的配方食品。根据某些具体的实施方式，将胰岛素封装在封装材料中。封装材料通常选自由多糖、奶粉、乳清蛋白质、脂质、阿拉伯树胶和微晶纤维素组成的组。本领域熟知的其它封装材料也包含在本发明的范围内。
29.根据一个实施方式，将胰岛素在麦芽糊精(md)的基质中微胶囊化以形成胰岛素补充物。根据其它实施方式，基质还包括抗氧化剂，典型地维生素c。该基质在保存活性方面为封装的胰岛素提供了长期稳定性以及对暴露于高温(超过42℃)的耐受性。
30.如本领域已知的任何婴儿配方食品都可被用作用于制备富含胰岛素的配方食品的基础配方食品。通常，婴儿配方食品呈干粉形式，在使用前在水中复原以形成液体配方食品。
31.根据某些实施方式，胰岛素以50microiu/ml(μiu/ml)至600microiu/ml(μiu/ml)的浓度范围作为富含胰岛素的液体配方食品施用。根据一些实施方式，富含胰岛素的配方食品包括50μiu/ml至400μiu/ml浓度范围的胰岛素。根据其它实施方式，富含胰岛素的配方食品包含75μiu/ml至125μiu/ml浓度范围的胰岛素。根据某些典型的实施方式，富含胰岛素的配方食品包含100μiu/ml的胰岛素。根据其它典型的实施方式，富含胰岛素的配方食品包含400μiu/ml的胰岛素。根据某些典型的实施方式，胰岛素有生物活性。
32.与迄今已知促进早产婴儿胃肠成熟的胰岛素浓度相比，本文公开的胰岛素浓度范围显著更低(多达4个数量级)。
33.因此，根据某些实施方式，本发明提供了用于提高低出生体重婴儿的胃肠成熟的速率的方法，包括在新出生时向婴儿口服施用包含50μiu/ml至600μiu/ml浓度的胰岛素的液体组合物。
34.根据某些典型的实施方式，胃肠成熟的提高的成熟导致实现婴儿的完全肠内喂养所需的天数的减少。根据另外的实施方式，胃肠成熟的提高的成熟导致受试者住院次数(the number of the subject hospitalization)的减少。
35.根据某些实施方式，胰岛素为选自由人胰岛素和牛胰岛素组成的组的哺乳动物胰岛素。根据某些典型的实施方式，胰岛素为人胰岛素。根据这些实施方式，人胰岛素为重组人胰岛素或半合成人胰岛素。
36.可通过正常喂养或当这不可能时通过鼻胃管施用本发明的胰岛素或富含胰岛素的配方食品。
37.本发明的方法针对在生命的最初几周或几个月，通常在生命的至少第一个月、或在生命的至少最初两个月并且包括多达生命的约3个月、多达生命的4个月、多达生命的5个月以及多达生命的6个月或更长的新生婴儿。明确理解的是，根据本发明的教导施用胰岛素
或富含胰岛素配方食品的持续时间可模仿母乳喂养的持续时间，即只要母亲和孩子共同期望人工喂养(bottle feeding)。
38.根据某些实施方式，在生命的最初几周或几个月，胰岛素以与母乳喂养的婴儿相似的平均每日喂养体积作为富含胰岛素的液体配方食品施用。根据某些实施方式，富含胰岛素的配方食品与母乳喂养一起施用。根据其他实施方式，富含胰岛素的配方食品作为单独的营养施用。根据又另外的实施方式，富含胰岛素的配方食品与肠胃外喂养一起施用。根据又另外的实施方式，富含胰岛素的配方食品与另外的食物结合施用。
39.本申请提供了以下内容：
40.1).一种用于提高低出生体重的人类婴儿的生长速率的方法，包括在新出生时向婴儿口服施用胰岛素，从而提高所述婴儿的生长速率超过预期生长速率。
41.2).如1)所述的方法，其中所述低出生体重婴儿选自由早产人类婴儿和小于胎龄(sga)人类婴儿组成的组。
42.3).如1)所述的方法，其中提高生长速率包括所述低出生体重婴儿的婴儿体重、身高和头围中至少一项超过预期的测量结果。
43.4).如3)所述的方法，其中在婴儿至少1个月龄时获得所述测量结果。
44.5).如4)所述的方法，其中在婴儿至少3个月龄时获得所述测量结果。
45.6).如5)所述的方法，其中在6个月龄时获得所述测量结果。
46.7).如3)所述的方法，其中获得多个超过预期的测量结果。
47.8).如1)所述的方法，其中将所述胰岛素封装在封装基质中。
48.9).如8)所述的方法，其中所述封装基质包括选自由多糖、奶粉、乳清蛋白质、脂质、阿拉伯树胶或微晶纤维素组成的组的封装材料。
49.10).如9)所述的方法，其中所述封装材料为麦芽糊精，且其中所述基质还包括抗氧化剂。
50.11).如1)或8)所述的方法，其中将所述胰岛素与婴儿配方食品混合以形成富含胰岛素的配方食品。
51.12).如11)所述的方法，其中所述富含胰岛素的配方食品包括50μiu/ml至600μiu/ml浓度范围的胰岛素。
52.13).如12)所述的方法，其中所述富含胰岛素的配方食品包括50μiu/ml至400μiu/ml浓度范围的胰岛素。
53.14).如13)所述的方法，其中所述富含胰岛素的配方食品包括75μiu/ml至125μiu/ml浓度范围的胰岛素。
54.15).如12)
‑
14)中任一项所述的方法，其中提高生长速率包括所述低出生体重婴儿的胃肠成熟的超过预期的测量结果。
55.16).如15)所述的方法，其中通过实现完全肠内喂养所需的天数设置所述婴儿胃肠成熟的测量结果。
56.17).如16)所述的方法，其中与预期的天数相比，实现完全肠内喂养所需的天数被减少。
57.18).如1)所述的方法，其中提高生长速率导致所述婴儿的住院时间与预期的住院时间相比减小。
58.19).如1)所述的方法，其中所述胰岛素有生物活性。
59.20).如1)所述的方法，其中所述胰岛素为选自由人胰岛素和牛胰岛素组成的组的哺乳动物胰岛素。
60.21).如20)所述的方法，其中所述胰岛素为人胰岛素。
61.22).如21)所述的方法，其中所述人胰岛素选自由重组人胰岛素和半合成人胰岛素组成的组。
62.23).如1)或11)所述的方法，其中经由选自正常喂养和鼻胃管的途径施用所述胰岛素。
63.24).如23)所述的方法，其中在妊娠后的至少第一个月期间直至妊娠后六个月期间施用所述胰岛素。
64.25).如24)所述的方法，其中在妊娠后第一个月期间施用所述胰岛素。
65.26).如24)所述的方法，其中在妊娠后6个月期间施用所述胰岛素。
66.本发明的其它目的、特征和优点将从下面的描述和附图变得清楚。
67.附图简述
68.图1显示了与出生时预期的体重平均值相比，观察到的体重平均值。
69.(*)
‑
平均观察值和预期值之间的差异。效果不显著。
70.(**)
‑
平均观察值和预期值之间的差异在p<0.001的水平上显著。
71.图2显示了与出生时预期的体长平均值相比，观察到的体长平均值。
72.(*)
‑
平均观察值和预期值之间的差异。效果不显著。
73.(**)
‑
平均观察值和预期值之间的差异在p<0.025的水平上显著。
74.发明详述
75.在详细阐明本发明的至少一个实施方式之前，应理解本发明不限于将其应用于下面描述中列出的或实施例例证的详细内容。本发明可以有其它实施方式或可以以各种方式实施或进行。同样，应理解本文采用的短语和术语是用于描述的目的，并且不应视为限制。
76.本发明首次公开了当在婴儿的最初几周或几个月施用富含胰岛素的配方食品时，50
‑
600μiu/ml婴儿配方食品浓度范围的胰岛素促进低出生体重婴儿包括小于胎龄(sga)婴儿和早产婴儿的生长。
77.迄今公开的向婴儿和/或早产婴儿口服施用胰岛素的影响包括健康和非健康婴儿中肠功能的提高、早产婴儿中喂养不耐受的减小以及在生命的后期形成糖尿病风险的减小。本发明公开了向低出生体重婴儿施用胰岛素的另外的且意外的结果。低出生体重婴儿正常生长的主要障碍之一在于他们在生命的最初几周和几个月的缓慢发育，其对各种生长参数具有长期影响。如今显示了给予低出生体重婴儿在胰岛素浓度方面模仿初乳和/或乳汁的配方食品，显著促进他们在这一关键阶段的生长，并因此可防止出生时的低体重的长期有害影响。本发明还显示了这些胰岛素浓度在促进低出生体重婴儿胃肠道成熟方面高度有效，迄今仅用显著更高的胰岛素浓度才显示的一种现象。
78.定义
79.如本文使用的，关于婴儿的术语“低出生体重”是指称重小于2,500g的出生婴儿，并包括具有小于1,500g的非常低出生体重的出生婴儿以及具有低于1000g的极低出生体重的出生婴儿。该术语还包括早产婴儿和小于胎龄(sga)婴儿。
80.如本文使用的，术语“早产婴儿”是指在妊娠34周或以下时出生的婴儿。如本文使用的，该术语包括在小于胎龄(sga)时出生的早产婴儿以及适于胎龄(aga)出生的早产婴儿。
81.术语“小于胎龄(sga)”是指具有小于胎龄平均值至少2个标准差的出生体重和/或体长的婴儿。
82.如本文使用的，术语“胰岛素”是指多肽激素，其由胰岛天然分泌，并在碳水化合物和脂肪的代谢特别是葡萄糖向糖原的转化的调节中起作用。胰岛素可以是天然胰岛素(纯化的或合成的或重组的)或其类似物。根据某些实施方式，术语胰岛素是指哺乳动物胰岛素。根据某些典型的实施方式，术语胰岛素是指有生物活性的重组人胰岛素及其类似物。
83.如本文使用的，术语“iu”(国际单位)是指约45.5μg纯的结晶胰岛素(精确地1/22mg)的生物当量。
84.术语“提高”或“增强”(例如体重)是指与其预期值相比，在本发明的包括婴儿的体重、身高、头围和胃肠成熟的检查测量中至少0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、5％、10％、15％、20％的提高。还应明确理解的是，根据某些实施方式，通过将低出生体重婴儿转变为完全肠内喂养所需的天数的减少来测量胃肠成熟的促进。如本文使用的，术语“完全肠内喂养”是指以约130
‑
170、典型地约140
‑
160ml/kg/天的量的肠内喂养。根据其它某些实施方式，根据胃残余物的体积评价胃肠成熟的促进(先前的膳食留在婴儿胃中的残余物)。胃残余物的体积与胃肠成熟呈负相关。
85.如本文使用的，根据某些实施方式，关于体重、身高和头围的术语“预期的测量值”是指根据婴儿的性别、胎龄和出生体重(bw)的百分位从疾病控制和预防中心(cdc)的生长参考表(http://www.cdc.gov/growthcharts)获得的预期值。根据其它实施方式，关于体重、身高和头围的术语“预期的测量值”是指根据世界卫生组织(who)生长标准(who multicentre growth reference study group；who child growth standards:methods and development.length/height
‑
for
‑
age,weight
‑
for
‑
age,weight
‑
for
‑
length,weight
‑
for
‑
height and body mass index
‑
for
‑
age:methods and development.geneva:world health organization,2006.可从http://www.who.int/childgrowth/standards/technical_report/en/index.html获得；de onis m,garza c,onyango aw等编辑，who child growth standards.acta paediatr suppl 2006；450:1
‑
101)的预期值。
86.根据一个方面，本发明提供了用于提高低出生体重的人类婴儿的生长速率的方法，包括在新出生时对婴儿口服施用胰岛素从而提高婴儿生长速率超过预期速率。
87.根据某些实施方式，在形成富含胰岛素的液体配方食品的液体配方食品中施用胰岛素。根据一些实施方式，富含胰岛素的配方食品包括50μiu/ml至600μiu/ml浓度范围的胰岛素。根据一些实施方式，富含胰岛素的配方食品包括50μiu/ml至500μiu/ml浓度范围的胰岛素。根据另外的实施方式，富含胰岛素的配方食品包括50μiu/ml至400μiu/ml浓度范围的胰岛素。根据其它实施方式，富含胰岛素的配方食品包括75μiu/ml至125μiu/ml浓度范围的胰岛素。根据某些典型的实施方式，富含胰岛素的配方食品包括100μiu/ml的胰岛素。根据其它典型的实施方式，富含胰岛素的配方食品包括400μiu/ml的胰岛素。根据某些典型的实施方式，胰岛素有生物活性。
88.根据某些实施方式，胰岛素为选自由人胰岛素和牛胰岛素组成的组的哺乳动物胰
岛素。根据某些典型的实施方式，胰岛素为人胰岛素。根据这些实施方式，胰岛素为重组或半合成的人胰岛素。
89.发现足月分娩后人初乳中的胰岛素浓度在约400μu/ml至600μuml的范围内(ontsouka c e等，2004，somestic.animal endocrinol 16:155
‑
175；read 1984,同上)。发现足月分娩后乳汁中的胰岛素浓度更低，平均为约60μiu/ml。无论胎龄多长，在早产婴儿的母乳中测量到相似的值(shehadeh n.等，2003.同上；shehadeh n.等，2006j pediatr gastroenterol nutr43:276
‑
281)。
90.已表明胰岛素为数种哺乳动物物种包括人和猪的初乳中存在的营养因子之一。它在人和猪初乳中的浓度比血清中高3
‑
30倍(人血清浓度在7
‑
24μiu/ml的范围内)，并与初乳营养活性的降低平行减小。shulman(1990，同上)证明新出生的小型猪中回肠(intestine ileal)质量和乳糖酶活性响应于口服施用85mu/ml的胰岛素而提高。回肠质量的增加是显著的，足以影响总的小肠质量，其被发现相比未处理的组，在用胰岛素处理的组中更高。在该研究和其它研究中，显示以检查的浓度口服摄取胰岛素未影响血糖或胰岛素水平，表明胰岛素未被全身性吸收至任何显著的程度。shulman(2002，同上)显示以4u/ml的高浓度向早产人类婴儿肠内施用胰岛素提高了胃肠的功能，如通过提高的乳糖酶活性所测量的。
91.如本领域已知的用于向婴儿口服递送化合物的任何方法都可根据本发明的教导被使用。根据某些实施方式，在富含胰岛素的半固体婴儿配方食品中施用胰岛素。根据其它实施方式，胰岛素作为富含胰岛素的液体婴儿配方食品被施用。根据一些实施方式，在生命的最初几周和几个月期间以与母乳喂养婴儿相似的平均每天喂养体积施用婴儿配方食品。
92.施用于新出生至6个月龄的婴儿的最佳配方食品量的计算基于如在接受母乳作为唯一营养的健康婴儿中观察到的能量和蛋白质消耗。假定配方食品的能量含量为60
‑
75kcal/100ml(根据eu允许的最小蛋白含量)，建议的配方食品的消耗为115至215ml/kg/天(report of the scientific committee on food on the revision of essential requirements of infant formulae and follow
‑
on formulae，2003年5月)。
93.如下文实施例部分中显示的，与先前的结果一致，在对参与研究的所有婴儿多达6个月的追踪中未观察到不良事件。向婴儿配方食品中加入胰岛素未引起低血糖症，并且未刺激抗胰岛素抗体的产生。
94.根据典型的实施方式，提高生长速率包括在6个月龄时早产婴儿和/或sga婴儿的婴儿体重、身高和头围中至少一项超过预期的测量结果。根据一些实施方式，实现多个这样的超过预期的测量结果。
95.相对于根据cdc生长表的预期生长，喂养胰岛素的婴儿显示在体重、体长和头围方面的增加的生长。相对于在6个月时的预期生长，最强的影响为对体重(18.1％)，然后是头围(17.6％)，且然后是体长(8.1％)。
96.将下文展示的研究数据与取自公开的表的预期值相比较。这些表中展示的数据可与现场测量的生长速率不同，特别是由于群体差异(cdc表参照美国群体，而本研究在以色列进行)。此外，取自cdc公开的表的预期生长并不是关于妊娠期和多数出生特定的。因此，从对照研究获得的数据可提供根据本发明的教导的胰岛素施用的甚至更显著的效果。
97.意外地，本发明还显示了类似于人初乳或人乳中的胰岛素浓度的多达400μu/ml范围内的低胰岛素浓度在促进早产婴儿和sga婴儿的胃肠道成熟方面高度有效，迄今用显著
更高的胰岛素浓度才显示的一种现象(例如shulman 2002，同上)。
98.如下文实施例部分中展示的，以400μu/ml的浓度施用胰岛素导致将治疗的早产婴儿转变为完全肠内喂养所需的天数的减少。该结果具有重要意义，因为它使得早产婴儿能够从重症监护室提早离开并甚至从医院离开至家庭护理，并因此减小污染的风险。从经济的角度来说，婴儿的提早离开也具有意义，显著地减少了涉及早产婴儿或另外的低出生婴儿的住院费用。
99.在目前可得的婴儿配方食品中几乎检测不到胰岛素(shehadeh n.2001.acta paediatr.90:93
‑
95)。婴儿配方食品通常从牛乳制备，其中胰岛素浓度与其在人乳中的浓度相比是低的(通常小于三分之一)。此外，配方食品生产中涉及的严格条件导致胰岛素特别是有生物活性的胰岛素的损耗。
100.因此，根据某些目前典型的实施方式，将胰岛素封装在封装材料内，为胰岛素提供稳定性。如本文使用的，术语“胰岛素稳定性”是指保持胰岛素最初活性的至少60％、70％、80％、85％、90％、95％或100％。本领域已知封装胰岛素的方法。分配给本发明的申请人的国际专利申请公开号wo 2004/112494和wo 2005/115473中提供了这样的方法的实例。
101.例如，在食品和制药工业中，微胶囊被用于稳定核心材料(core material)，以控制核心材料释放的时间设定和速率以及将多组分制剂的活性组分或不相容组分分开并防止多组分制剂的活性组分或不相容组分之间的化学反应。因此，微胶囊使得保护敏感的生物活性剂以确保免于活性丧失并掩盖或保持味道和香味是可能的。封装可被用于针对以下有害因素的任一项或相似的有害因素保持生物活性成分诸如生长促进剂的生物活性：不利的温度、压力、湿度、ph、渗透浓度、离子浓度、化学降解、金属的存在、表面活性剂和螯合剂、放射物(包括但不限于uv、ir、可见光)、酶促降解和微生物降解及其组合。
102.封装的生物活性成分的释放可在消化道中自发地发生，或可以是环境事件的结果。
103.根据某些实施方式，包围或包含胰岛素的保护层被特定设计以降解或响应暴露的环境条件的变化经历控释。环境条件的变化可以为时间、温度、水分含量、压力或ph、离子强度、酶促活性或其组合。根据其它实施方式，胰岛素被封装在材料中，所述材料被设计以保护胰岛素在婴儿的消化系统中不被消化并且仅响应ph的升高释放胰岛素。还可用另外的封装材料封装胰岛素，所述封装材料被设计保护核心免受升高的温度。本领域技术人员将认识到，触发释放活性化合物的环境顺序不严格，并且依赖于制造的环境条件、整合到食品产品中的环境条件、整合到食品产品中后存储的环境条件、在胃肠系统内期望的递送位置、期望的时间设定和生理活性。
104.影响胰岛素在生物可降解基质中的捕获并从而影响其最初装载、随后的释放或其组合的任何因素都可被使用。除了其他的以外，这样的因素可包括最初的溶剂浓度、它的分子大小和极性、去除溶剂的温度和压力、生物可降解基质的数均分子量(molecular weight number(mwn)average)以及其多分散指数。当所述生物可降解基质为聚合物时，也可考虑胰岛素的大小和极性、单体比例及沿共聚物链的分布、或其组合。此外，生物可降解聚合物的每种单体内的d/l比将影响释放比率。术语d/l比是指影响方向(d
‑
右旋，l
‑
左旋)的单体分子的比，其中当观察单一光学活性单体例如乳酸时，正交偏光镜(a cross
‑
polarized lens)将被旋转。由于大多数哺乳动物具有d型特定的酶，所述比将影响生物可降解的生物
聚合物的消化比率，影响其分子量并因此影响其粘度，从而影响捕获的胰岛素的释放速率。
105.各种材料可用作封装材料，如以上引用的wo 2004/112494和wo 2005/115473中描述的。根据某些目前优选的实施方式，胰岛素在麦芽糊精(md)和维生素c的基质中微胶囊化，如wo 2005/115473中描述的。
106.封装的胰岛素可与如本领域已知的任何婴儿配方食品混合。封装还可以以下面的方式保护胰岛素：当包括封装的胰岛素的液体配方食品被sga婴儿消耗时，胰岛素在其通过新生儿胃肠道或胃时至少被部分地保护，使得充足量的胰岛素仍是有活性的，以如本文描述的发挥其促进生长的活性。
107.展示以下的实施例以为了更充分说明本发明的一些实施方式。然而，它们不应以任何方式被解释为限制本发明的宽范围。本领域技术人员可容易地想到本文公开的原理的许多变化和修改，而不偏离本发明的范围。
实施例
108.实施例1：临床研究：胰岛素对低出生体重婴儿的生长参数的影响
109.研究群体
110.检查了富含胰岛素的配方食品对低出生体重足月婴儿的影响。参与该研究的入选标准包括：健康婴儿34
‑
42周妊娠(“称为出生婴儿”)；超过1,650g、通常在1750克和2500克之间的出生体重；没有主要的先天畸形或任何其它的疾病迹象；240小时以下的实足年龄；在研究阶段母亲不愿意母乳喂养婴儿并签署知情同意书。在登记前具有疑似感染的高指数的婴儿、具有孕妇糖尿病的婴儿和直至研究的第1天给予药物的婴儿被排除。
111.将关于体重、体长和头围的观察结果与根据婴儿的性别、胎龄和出生体重(bw)的百分位从cdc生长参考表(同上)获得的预期值相比较。内插法或外推法被用于确定每名婴儿的百分位和期望增益。预期值对出生时的百分位测量是特定的。使用用于以色列人的公开表，根据性别、胎龄和多胎性(multiplicity)(单胎或双胞胎)计算每个bw的百分位(dolberg s.等，imaj,7,2005,311
‑
314)。没有关于体长和头围的百分位可用的此类数据。因此，假定每名婴儿的bw百分位适用于其它两项生长测量的每一项。
112.根据赫尔辛基关于涉及人受试者的生物医学研究的宣言的指南(南非1996版)并根据gcp ich指南进行研究。
113.研究设计
114.阶段i，在以色列rabin medical center和laniado hospital进行多中心、非随机化、开放标签、单组研究以评价富含胰岛素的配方食品对低出生体重婴儿的安全性。在该研究中还检查了富含胰岛素的配方食品对足月出生(妊娠至少34周)的低出生体重婴儿的可能的影响。满足研究标准的符合条件的婴儿的父母在签署知情同意书(icf)后被邀请参与该研究。从研究的第1天起，婴儿接受富含胰岛素的婴儿配方食品(materna,maabarot,israel)。他们在最初4个月被喂养配方食品而没有加入辅食喂养。记录了婴儿的性别、家庭出身、出生时的胎龄、母体用药、母亲的年龄、家族慢性病和婴儿注册时的状况。
115.在观察期间未改变婴儿在托儿所中的标准护理。在研究的第1天和第2天以及在第1、4、8、12、16和24周，要求婴儿的父母到新生儿病房随访检查。在研究期间，记录了婴儿的体重、体长、头围、血糖水平、血细胞计数、血脂、血液化学、血液氨基酸、胰岛素抗体和血清
水平，以及测量并评价了食物消耗、呕吐、反胃和大便频率。
116.评价了富含胰岛素的配方食品的对生长的关于体重、体长和头围中的增加的可能影响。假定最大的影响应在6个月龄时记录到(最后的随访)，将显著性检验应用于在6个月时的观察到的生长和预期生长之间的差异。此外，为了考虑在治疗期间(最初4个月)以及治疗后(接下来的2个月)的生长差异，将相似的检验应用于最初4个月期间的生长。
117.如果出现任何严重的不良事件或婴儿临床状况的任何恶化，那么婴儿则从研究中退出。针对可能的副作用以及功效测量随访他们直到6个月龄。没有观察到严重的不良事件。计划于2005年在以色列进行用于研究富含胰岛素的婴儿食品对低体重婴儿的生长的影响的多中心、双盲、随机化研究(由schneider hospital的sirota教授领导)。由于低的招募率(仅8名早产婴儿)，所以终止了研究。然而，在用富含胰岛素的配方食品喂养婴儿期间，没有记录到不良事件(包括没有低血糖症)。
118.研究的产品insumeal为干粉，其由与materna ltd.制造的premium 1
‑
婴儿配方食品混合的胰岛素(hm(ge)，生物合成的人胰岛素，用于注射的溶液。100iu/ml的浓度，由novo nordisk制造)组成，所述胰岛素在麦芽糊精18(md药物级别，玉米淀粉多糖，由cargill ltd.制造)和维生素c(药物级别)的基质中微胶囊化。微胶囊加工使能够保护胰岛素的生物活性直至它在婴儿配方食品中的浸入和消耗。将insumeal添加到60ml的温开水中，且然后配方食品则具有90μu胰岛素/ml配方食品的浓度；模仿母乳中代表性的生理胰岛素水平。
119.数据
120.从仅10名满足入选标准的11名婴儿获得下文表1
‑
4中展示的数据。一名(28号)的出生体重为1,550克，而设定入选的最小值为1,750克。将该名婴儿从推理分析中排除。
121.此外，将另一名婴儿(22号)从涉及头围的推理分析中排除。如以下解释的该排除是基于出生时测量的头围最可能是异常值的事实。
122.表中展示了对这些婴儿进行的测量，但是从相关的推理分析(平均值、置信区间和显著性检验)中排除。表1展示了对招募至该研究的所有婴儿的生长测量(体重、体长和头围)。
123.表1
‑
按照年龄的生长测量
124.125.分析方法
126.在最初6个月期间，根据z分数(校正胎龄)设定关于功效的主要终点为生长。然而，在最初4个月期间以及在4至6个月的阶段期间还评价了治疗效果的z分数变化。
127.在正态分布下，z值表示标准偏差(sd)单位中的距离(例如体重离平均值的距离)。然而，婴儿体重的实际分布具有比正态分布更长的左尾。为了校正与低百分位相关的z值，cdc公开了使能够计算正确z值的公式和参数(l、m、s)(kuczmarski r j等，2000.cdc growth charts for the united states:methods and development.national center for health statistics.vital health stat 11(246).2002)。这些公开的值与足月新生儿相关。虽然估计的z值作为预测测量并不适用，但它们有助于比较关于体重增加的两组处理。
128.根据性别和针对短的妊娠期校正的年龄评价每名婴儿的z分数。这些参数在用于实足年龄的整月的cdc表中展示。因此，对年龄做数周范围内的校正。例如，使用cdc表中展示的关于年龄在5
‑
5.99个月的足月婴儿的参数评价妊娠38周后出生的6个月(实足)龄的婴儿的z值。表2展示了每名婴儿的通过实足年龄校正的z分数。在表的底部展示了每个年龄的z的平均值及其95％的置信区间(ci)。第28号婴儿由于其不满足关于出生体重的入选标准，从全部测量的平均值和ci中被排除。第22号婴儿关于头围的平均值和ci被排除。第22号的排除与出生时头围的极大z分数(z＝1.82)相关。z值看起来为异常值，因为其远大于其它10名婴儿的z值(
‑
0.98至
‑
3.42)的范围。其相对于普通人群也极其罕见，因为普通人群中仅3.4％被预期在出生时具有该头围或更大的头围。
129.将统计分析应用于假定t分布的z分数。然而，为了便于解释，生长测量还被展示为百分位(表3)。
130.表2
‑
根据针对短的妊娠期校正的z分数的生长测量，根据实足年龄的月数分组
[0131][0132]
表3
‑
根据针对短的妊娠期校正的百分位的生长测量，根据实足年龄的月数分组
[0133][0134]
评价了根据年龄分组的(出生、4个月和6个月)的三次测量的每一个的z分数的平均值和95％置信区间(ci)。
[0135]
在预期每名婴儿的自然生长保持相同的百分位，即预期z分数在生长过程中是稳定的原假设下进行分析。因此，补充喂养的效果被评价为6个月时的z分数和出生时的z分数之间的差异。评价了z分数差异的平均值(和95％的ci)，并使用双尾t检验在5％的水平检验显著性。其它两个阶段的每一个期间的生长被相似地评价，并通过z分数配对差异检验显著性。表4展示了三次测量的每一个的z分数的平均值差异及其95％置信区间。
[0136]
表4：根据每个阶段的z分数(针对妊娠期校正)的生长的显著性值、平均值和95％置信区间.
[0137]
阶段(月)体重p体长p头围p0至41.68(1.01；2.35)<0.00010.75(
‑
0.35；1.86)0.1580.71(
‑
0.21；1.62)0.1150至61.68(1.17；2.18)<0.00011.22(0.64；1.80)0.0010.98(0.04；1.92)0.0434至6
‑
0.01(
‑
0.68；0.67)ns0.47(
‑
0.57；1.51)ns0.27(
‑
0.02；0.56)0.064
[0138]
结果
[0139]
副作用
[0140]
在任一名婴儿中都未观察到任何主要的副作用，包括低血糖症或胰岛素抗体。血液学测试包括全部血球数和白细胞都是正常的。普通化学包括血糖水平、白蛋白、球蛋白、sgot、ggt、alp、na、k、ca、ua、肌酸酐、淀粉酶、氨基酸、抗胰岛素抗体和脂质谱，全部都在正常范围内。评价了应激性和睡眠史、变态反应或胃肠感染，且没有记录到异常。在一名婴儿中观察到关于甘油三酯(328mg/dl)的单次可能的次要副作用。
[0141]
体重
[0142]
分析的全部10名婴儿的体重大于预期。在6个月龄时，观察值和预期值(以kg计)之间的差异的平均值和95％置信限为0.67(0.37；0.96)。结果在p<0.001水平上高度显著，(图1)。
[0143]
关于在最初4个月的体重增加的结果显示，10名婴儿中的6名的生长大于预期。在4个月时的观察到的净增加和预期净增加(以kg计)之间的差异的平均值和95％置信区间为0.23(
‑
0.12；0.59)。在4个月时的效果不显著(图1)。
[0144]
体长
[0145]
11名婴儿中的10名被包含在体长比较中。在6个月龄时，观察到的体长生长与预期体长生长(以cm计)之间的配对差异的平均值和95％置信限为：1.33(0.21；2.45)，p<0.025(图2)。
[0146]
头围
[0147]
11名婴儿中的10名被包含在头围比较中。在6个月龄时，观察到的头围生长与预期头围生长(以cm计)之间的差异的平均值和95％置信限为：0.85(
‑
0.65；2.35)。差异不显著。
[0148]
为了考虑结果受针对胎龄的过度校正的年龄的严重影响的可能性，还对假定足月妊娠的数据应用分析。表5展示了每个生长测量的z分数。表6展示了在每个阶段的z分数变化的显著性以及变化的平均值和95％的ci。对于体重和头围6个月的生长，结果高度显著(p<0.001)。在6个月期间，平均体重从百分位1.0移至百分位25.8；在该期间，头围的平均生长为从百分位1.7至百分位7.8。体长的变化，虽然不十分显著(p<0.11)，但是从4.9提高到9.2百分位。
[0149]
因此，结果清楚地表明低的婴儿的提高的生长与年龄的过度校正不相关。
[0150]
表5
‑
根据未针对短的妊娠期校正的z分数的生长测量，根据实足年龄的月数分组
[0151][0152]
*从平均值和ci评价中排除。
[0153]
**从关于头围的平均值和ci评价中排除。
[0154]
表6
‑
在每个阶段根据z分数(未针对妊娠期校正)的生长的显著性值、平均值和95％置信区间.
[0155] 体重p体长p头围p4
‑
00.62(0.16；1.08)0.014
‑
0.43(
‑
1.48；0.62)ns0.08(
‑
0.34；0.50)ns6
‑
00.77(0.40；1.13)0.0010.33(
‑
0.09；0.75)0.1090.68(0.48；0.89)＜0.0001
6
‑
40.15(0.47；0.78)ns0.76(
‑
0.32；1.84)ns0.61(0.30；0.91)0.002
[0156]
综上所述，6个月期间的生长对于3次测量的每一次都是显著的。婴儿在6个月期间的体重的生长的平均数从1.0移动至25.8百分位。体长的平均生长为从4.9至33.4百分位。头围的平均生长为从1.7至23.4百分位。
[0157]
实施例2：临床研究：胰岛素对低出生体重早产婴儿的生长参数的影响
[0158]
进行了多中心、双臂(two arms)、随机、双盲安慰剂对照研究，以评价富含胰岛素的婴儿配方食品对早产婴儿的影响。在该研究中，婴儿群体还包括具有极低出生体重的婴儿(入选标准包括称重超过750克的婴儿)。以模仿初乳浓度(以400μu/ml)的浓度范围给予胰岛素。研究的首要目的为确定补充到基础早产婴儿口服配方食品的胰岛素是否提高了胃肠成熟。通过早产婴儿实现完全肠内喂养(150
‑
160ml/kg/天)的能力评价胃肠成熟。
[0159]
研究设计
[0160]
满足下文描述的研究标准的符合条件的早产婴儿的父母在签署知情同意书(icf)后被邀请参与该研究。婴儿以与其父母选择不参与该研究的早产婴儿相同的方式在新生儿医院病房中住院。将婴儿随机分配到两个治疗组中的一个：研究产品—insumeal
tm
作为测试组和安慰剂补充物作为对照组。父母、治疗婴儿的医疗队和研究监查者对治疗方案不知情。从研究的第1天起，测试组中的婴儿接受与即开即用(rtf)早产婴儿materna配方食品混合的insumeal
tm
添加物，且对照组接受与相同的rtf早产婴儿materna配方食品混合的安慰剂补充物。
[0161]
记录婴儿的性别、家庭出身、出生时的胎龄、母体用药、母亲年龄、家族慢性病，以及注册时婴儿的状况、体重、体长和头围。
[0162]
在研究期间，从研究起点至第28天或如果在第28天前实现则至退出日，每天评价婴儿的体重、食物摄入、食物消耗、血糖水平、接受的全胃肠外营养(tpn)、胃残留物和大便数据(频率和粘滞度)、呕吐和反胃。在研究的第28天或退出日，以及在第3个月的随访时，抽取2.5ml的血液以进一步评价血糖水平、全部血球数、脂质谱、血液一般化学、血液氨基酸和抗胰岛素抗体。在1、7、14、21和28天以及在3和6个月的访视时测量婴儿体长和头围。还完成了体格检查。
[0163]
该研究中登记了年龄多达7天龄、在妊娠26
‑
33周之间出生、称重超过750克的33名早产婴儿，所述早产婴儿无怀疑感染的高指数，显示稳定的状况。
[0164]
通过区组设计进行随机化。每个位点(site)接受大小为4的随机选择的区组，其中，将连续的婴儿id号分配给两组中的任一组(insumeal/安慰剂)。完成四个婴儿区组的登记之后，所述位点接受另外的区组。
[0165]
一名受试者由于健康并发症而退出；分析中包括32名受试者，15名男性和17名女性，年龄在1
‑
7天龄之间。
[0166]
入选标准
[0167]
必须满足以下标准才能被包括在本研究中：
[0168]
1.妊娠26
‑
33周之后出生的早产婴儿。匹配孕期和早期产前超声之间(
±
2周)的胎龄。
[0169]
2.出生体重≥750克。
[0170]
3.出生后年龄≤7天。
[0171]
4.登记时吸入氧气分数≤0.60。
[0172]
5.婴儿处于心血管稳定状态。
[0173]
6.研究第1天后未母乳喂养。
[0174]
7.在分娩中未给予婴儿任何心脏和胸部按压或任何复苏药物。
[0175]
8.父母或法定监护人签署的知情同意书
[0176]
排除标准
[0177]
将满足以下标准的一项或多项的婴儿从研究中排除：
[0178]
1.早产婴儿年龄<26或>33周妊娠期。匹配孕期和早期产前超声之间(
±
2周)的胎龄。
[0179]
2.出生体重<750克。
[0180]
3.出生后年龄>7天。
[0181]
4.登记时吸入氧气分数>0.60。
[0182]
5.婴儿处于心血管不稳定状态。
[0183]
6.研究第1天后母乳喂养。
[0184]
7.主要的先天畸形
‑
在登记前婴儿诊断患有遗传代谢或内分泌紊乱(包括登记后诊断的紊乱但是已知为先天性的)。
[0185]
8.登记前怀疑感染的高指数。
[0186]
完全的口服喂养。
[0187]
9.形成坏死性小肠结肠炎的婴儿或婴儿被怀疑患有坏死性小肠结肠炎。
[0188]
10.孕妇糖尿病。
[0189]
11.用胰岛素治疗婴儿
[0190]
12.npo，进入研究时以任何理由禁止口服任何东西。
[0191]
13.分娩过程中给予婴儿心脏和胸部按压或任何复苏药物。
[0192]
14.参与另一项临床研究。
[0193]
试验产品
[0194]
研究的产品包括insumeal
tm
和安慰剂。insumeal
tm
是旨在与90ml rtf早产婴儿配方食品(制造商：德国雀巢，进口商：以色列materna laboratories)混合的基于胰岛素的添加物。将insumeal
tm
加到配方食品中之后，该配方食品则具有400μu胰岛素/ml配方食品的浓度；模仿母乳中的胰岛素水平。
[0195]
insumeal
tm
添加物包括三种组分：
[0196]
(a)人胰岛素，由通过两个二硫键连接的两条多肽链组成的大的蛋白质(5,800道尔顿)。胰岛素是在哺乳动物乳汁中以钠克/毫升的浓度存在的天然的促进健康的组分。当以治疗剂量被诊断患有糖尿病的个体注射时，胰岛素还被分类为肽激素。
[0197]
(b)麦芽糊精，其为由淀粉的部分水解产生的多糖的混合物。麦芽糊精通常被用作婴儿配方食品中的组分，并且在液体中速溶。
[0198]
(c)维生素c或l抗坏血酸是人类必需的营养物质。在活的生物体中，由于其保护人体抗氧化应激，抗坏血酸盐为抗氧化剂，并且是数个关键酶促反应的辅因子。在insumeal
tm
制剂中，维生素c用作胰岛素氧化的指示剂。
[0199]
安慰剂由麦芽糊精和维生素c组成。
[0200]
仅根据研究规定和喂养方案使用insumeal
tm
。将在研究的第1天开始配方食品的施用，并持续直至接下来的28天或如果在第28天前实现则直至退出日。
[0201]
将insumeal
tm
保存在室温并远离儿童。insumeal
tm
不具有禁忌症。
[0202]
产品施用
[0203]
就在每一餐之前，由新生儿重症监护室(nicu)的护士将为每名婴儿标记的研究小袋的内容物(insumeal/安慰剂)添加到90ml玻璃瓶中的rtf早产婴儿materna配方食品中。添加之后，关闭瓶子，并摇匀以确保添加物完全溶解。婴儿每餐接受新的90ml的玻璃瓶+添加物。使用标准的喂养瓶和奶嘴。婴儿结束用餐之后，将剩余的配方食品保留在玻璃瓶中24个小时仅用于实验室用途。如果发现婴儿稳定并且良好，则丢弃瓶子，否则通知发起人并收集瓶子用于检查。
[0204]
喂养方案
[0205]
从出生开始，早产婴儿接受肠胃外营养(pn)。在新生儿达到完全肠内喂养(150cc/kg/天)前可停止pn。对于喂养婴儿的最初的连续3天(可在研究前)，他接受至少10ml/kg/天的早产配方食品或人乳。在研究中，婴儿接受如上述的研究产品或安慰剂。当新生儿成功地吸收喂养物时，将每日喂养物增加10
‑
25ml/kg/天，以完成140
‑
160ml/kg/天的完全喂养直到研究的第28天或直到退出日(如果在第28天之前解除)。以下表7总结了喂养方案的详细说明：
[0206]
表7：喂养方案的详细说明
[0207][0208]
*并不是nicu中的全部婴儿都从第1天起获得脂肪。
[0209]
统计方法
[0210]
所有测量的变量及衍生的参数都通过描述性统计制成表。在汇总表中展示了分类变量，包括研究组和总体的样本量、绝对频率和相对频率。在汇总表中展示了连续变量，包括研究组和总体的样本量、算数平均值、标准偏差、中位数、最小值和最大值。
[0211]
以下统计检验被用于该研究中展示的数据的分析：
[0212]
将配对t检验应用于检验每个研究组中定量变量从基线变化的统计学显著性。
[0213]
将双样本t检验和非参数wilcoxon秩和检验应用于检验研究组之间定量参数的差异。
[0214]
将卡方检验应用于检验研究组之间分类变量的频率的差异的统计学显著性。
[0215]
计算从第1天起的绝对和相对体重变化的曲线下面积(auc)。
[0216]
应用的全部检测都是双尾的，并且认为5％或更小的p值是统计学显著的。使用
版本9.1分析数据(sas institute，cary north carolina)。
[0217]
结果
[0218]
人口统计数据
[0219]
以下表8
‑
9中提供了受试者的人口统计和基线体重的分布。34名受试者中，46.9％为男性(对照和治疗组中分别为53.3％和41.2％)；在两个研究组中研究的第一天的平均年龄为约5天(范围1
‑
7天)；治疗组和安慰剂组中出生时的平均体重分别为1470.7和1464.3克。没有观察到组之间统计学显著的差异(p
‑
值＝0.9570)。对照和治疗组中平均处理天数分别为24.7和25.5。没有观察到研究组之间统计学显著的差异(p
‑
值＝0.5887)。
[0220]
表8：人口统计数据
[0221][0222][0223]
表9：出生体重
[0224]
出生体重(克)对照insumeal
tm
受试者数目1517平均值1464.31470.7标准偏差370.6299.7最小值920.0850.0中位数1620.01474.0最大值1960.01980.0
[0225]
胰岛素对体重的影响
[0226]
a.在婴儿28天龄时胰岛素对体重的影响
[0227]
表10中展示了体重相对于第一天(第1天)时的体重的变化的平均结果。结果证明与接受安慰剂的组相比，接受insumeal
tm
的组从第1天至第28天的体重的更大增加。
[0228]
表10：通过访视全部婴儿的体重变化
[0229][0230]
从具有小于1,300克的出生体重的婴儿的亚组分析获得了相似的结果(表11)。在此，与接受安慰剂的组相比，接受insumeal
tm
的组中从第1天至第28天体重的更大增加甚至更明显。
[0231]
表11：通过访视具有<1300克的出生体重的婴儿的体重变化
[0232]
[0233]
b.在婴儿3个月龄时胰岛素对体重的影响
[0234]
对照组和检验组关于在最初3个月期间增加的体重之间的差异基于z3－z0的差额，其中z0为出生时的z值，且z3为3个月时的z值。评价每个年龄和增加的体重的平均值和95％置信限(cl)。在表12中展示了这些数据。insumeal
tm
组中平均增加为安慰剂组的约两倍(0.76对0.32的sd)。两个处理组之间的差异在p＝0.077水平上不显著。
[0235]
表12
‑
每个组中出生和三个月龄时(体重)的z值的平均值和95％
[0236][0237]
这些结果支持以上实施例1中展示的发现结果，显示在生命的关键的最初几个月期间用富含胰岛素的配方食品喂养低出生体重婴儿包括早产婴儿促进了婴儿的体重增加，导致其后正常的发育。
[0238]
胰岛素对胃肠成熟的影响
[0239]
本研究另外的目的为检查口服施用的胰岛素对早产、低出生体重婴儿的胃肠成熟的影响。胃肠成熟的测量为实现完全肠内喂养所需的天数，所述完全肠内喂养被定义为以至少150ml/kg/天的体积口服消耗婴儿配方食品。与安慰剂组的7.9天相比，接受胰岛素的组实现完全肠内喂养的平均天数为6.4(表13)。结果显示与对照组相比，治疗组中达到完全肠内喂养所需的时间的减少的趋势，但是无统计学显著性(p
‑
值＝0.2085)。
[0240]
表13：全部婴儿实现完全肠内喂养(>＝150ml/kg/天)的天数
[0241]
天数对照insumeal
tm
受试者数目1517平均值7.96.4标准偏差3.53.2最小值4.01.0中位数7.06.0最大值17.011.0
[0242]
出生体重<1300克的婴儿(表14)和通过性别分组展示的婴儿(数据未显示)的亚组分析显示与对所有婴儿进行的分析的相似的结果。
[0243]
表14：具有出生体重<1300克的婴儿实现完全肠内喂养(>＝150ml/kg/天)的天数
[0244]
天数对照insumeal
tm
受试者数目65平均值8.88.0标准偏差4.23.9最小值6.02.0最大值17.011.0
[0245]
通过需要住院直至早产婴儿可退出的天数进一步评价婴儿成熟和生长。与接受安慰剂处理的组的33.6天相比，在接受胰岛素的组中观察到至退出的天数(days to discharge)减小的趋势：28.8天(表15)。差异未达到统计学显著性(p
‑
值＝0.2192)。
[0246]
表15：全部婴儿至退出的天数
[0247]
至退出的天数对照insumeal
tm
受试者数目1517平均值33.628.8标准偏差12.68.8最小值14.016.0中位数32.028.0最大值54.050.0
[0248]
然而，对具有出生体重<1300克的婴儿的亚组分析显示至退出的天数中的统计学显著差异：接受胰岛素的组35.8天且接受安慰剂的组47.0天(表16；p值＝0.0447)。
[0249]
表16：出生体重<1300克的婴儿至退出的天数
[0250]
至退出的天数对照insumeal
tm
受试者数目65平均值47.035.8标准偏差5.110.4最小值39.028.0中位数48.029.0最大值54.050.0
[0251]
以上展示的结果清楚地显示了以模仿人初乳和人乳的浓度范围给予胰岛素对低出生体重婴儿的生长速率的有益效果。特别地，在低出生体重婴儿的最初1至6个月期间的生长促进导致发育差距的提前终止，提前达到正常出生体重婴儿的生长速率，从而避免通常与低出生体重相关的长期并发症。未观察到由胰岛素施用引起的有害作用。
[0252]
具体实施方式的上述说明将如此充分地揭露本发明的一般性质，以至于其他人通过应用现有知识可容易地为各种应用修改和/或调整此类具体实施方式，而不需要过多的试验并且不偏离一般概念，并因此，这样的调整和修改应该并且预期被包含在公开的实施方式的含义及等价的范围内。应理解的是，本文采用的短语和术语用于描述而非限制的目的。用于实施各种公开的功能的工具、材料和步骤可采用各种替换形式而不偏离本发明。