一种具有缓解功能性便秘的杏仁粉产品的制作方法

1.本发明属于功能性食品技术领域，特别涉及一种具有缓解功能性便秘的杏仁粉产品。


背景技术：

2.随着饮食结构的改变及精神和社会压力的增大，便秘已成为困扰现代人的主要问题之一，严重影响着人们的生活质量。最近的调查显示，在亚洲，便秘的发病率为9.6％，在北美/欧洲/澳大利亚/新西兰，便秘的发病率为8.1％。在我国，如果使用罗马i/ii标准，便秘的发病率为1％-18％，如果使用罗马iii标准，便秘的发病率为5％-16％。大多数便秘的原因为饮食不正常，所以通过改变饮食结构来缓解便秘是一种安全又有效的方法。
3.杏仁是蔷薇科落叶乔木植物杏或山杏等果实的种仁，主要含有蛋白质、脂肪、糖、微量苦杏仁苷，脂肪的组成中主要是油酸和亚油酸。具有降血糖、预防心血管病、防癌、抗衰老和补钙等保健作用，在中医上，杏仁多用于滋润心肺，可治虚性咳嗽气喘、肠燥便秘，具有润肠通便的作用，但是，目前还没有实验或者临床证据证明杏仁具有缓解便秘的作用。
4.研究表明，通过口服益生菌，对肠道菌群结构进行平衡和调节，可带来显著的通便效果，这已成为近年来健康治疗功能性便秘大量采用的方法。renmeijiang等研究证明益生菌联合低聚糖粉治疗妊娠便秘疗效显著。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种具有缓解功能性便秘的杏仁粉产品，通过建立便秘小鼠模型评价杏仁粉、益生菌+杏仁粉的润肠通便功能，为杏仁粉和益生菌通便作用的研究评价提供参考依据，也为相关产品的开发和利用奠定基础。
6.本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
7.一种具有缓解功能性便秘的杏仁粉产品，所述杏仁粉产品的原料包括杏仁粉和益生菌菌粉，所述益生菌菌粉包括副干酪乳杆菌l9和/或动物双歧杆菌a6；
8.所述副干酪乳杆菌于2014年10月22日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmccno.9800；
9.所述动物双歧杆菌于2014年6月5日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmccno.9273。
10.进一步的，所述原料的添加量分别为：
11.益生菌菌粉4
×
10
8～12
cfu/g杏仁粉。
12.进一步的，所述益生菌菌粉为副干酪乳杆菌l9和动物双歧杆菌a6的混合菌粉，两者的细菌菌落总数比为1∶0.1～10。
13.进一步的，所述原料的添加量分别为：
14.副干酪乳杆菌菌粉a64
×
109cfu/g杏仁粉
15.动物双歧杆菌菌粉l94
×
109cfu/g杏仁粉。
16.本发明的另外两方面：
17.所述的杏仁粉产品在制备缓解功能性便秘食品中的应用；以及，
18.所述的杏仁粉产品在制备缓解功能性便秘药品中的应用。
19.本发明相比现有技术的有益效果为：
20.1、动物双歧杆菌a6是一株筛选自健康人肠道的优良益生菌株，该菌及其代谢产物能够促进人体消化酶的分泌和肠道的蠕动，促进食物的消化吸收，改善肠胃功能，达到良好的润肠通便作用；副干酪乳杆菌l9(lactobacillusparacaseil9)是一株从长寿老人粪便中分离得到的益生菌株。试验表明l9可以缓解小鼠便秘，改善小鼠肠炎症状，改善人体的肠道环境；
21.2、本发明的目的是评价杏仁粉和益生菌+杏仁粉的润肠通便作用，实验使用复方地芬诺酯建立balb/c小鼠便秘模型，灌胃7d后，便秘小鼠首次排便时间缩短，排便粒数和质量明显增加，粪便水分含量提高；连续15d灌胃受试样品，便秘小鼠小肠墨汁推进率也得到显著增加。结果表明，杏仁粉和益生菌+杏仁粉具有良好的润肠通便功能，杏仁粉具有剂量效应，低剂量缓解效果显著，高剂量无显著效果，益生菌+杏仁粉缓解便秘的效果优于杏仁粉。
22.下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
具体实施方式
23.实施例1
24.本实施例提供了一种具有缓解功能性便秘的杏仁粉产品，所述杏仁粉产品的原料包括杏仁粉和益生菌菌粉，所述益生菌菌粉为副干酪乳杆菌l9和动物双歧杆菌a6的混合菌粉；
25.所述副干酪乳杆菌于2014年10月22日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址：中国北京，保藏编号为cgmccno.9800；
26.所述动物双歧杆菌于2014年6月5日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址：中国北京，保藏编号为cgmccno.9273。
27.所述原料的添加量分别为：
28.副干酪乳杆菌菌粉a64
×
109cfu/g杏仁粉
29.动物双歧杆菌菌粉l94
×
109cfu/g杏仁粉。
30.杏仁粉由丰宁水星乳业有限责任公司提供。
31.实施例2
32.本实施例提供了一种具有缓解功能性便秘的杏仁粉产品，所述杏仁粉产品的原料包括杏仁粉和益生菌菌粉，所述益生菌菌粉为副干酪乳杆菌a6和动物双歧杆菌l9的混合菌粉；
33.所述副干酪乳杆菌于2014年10月22日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmccno.9800；
34.所述动物双歧杆菌于2014年6月5日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmccno.9273。
35.所述原料的添加量分别为：
36.副干酪乳杆菌菌粉l94
×
10
10
cfu/g杏仁粉
37.动物双歧杆菌菌粉a64
×
10
10
cfu/g杏仁粉。
38.杏仁粉由丰宁水星乳业有限责任公司提供。
39.为检测所述杏仁粉产品缓解功能性便秘的效果，进行如下动物实验：
40.实验动物：balb/c雄性小鼠，6～8周龄，体重18～22g，spf级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
41.复方地芬诺酯片(批号1109026)常州康普药业有限公司；活性炭粉巩义市嵩山滤材活性炭厂；阿拉伯树胶广东汕头市西陇化工厂；mrs培养基北京奥博星生物技术有限公司。
42.1、溶液的配制：
43.副干酪乳杆菌l9菌株菌悬液的配制：副干酪乳杆菌l9菌株，用mrs液体培养基好养37℃培养12h，4500r/min离心15min，菌体沉淀重悬于mrs液体培养基中，用生理盐水配成一定浓度的菌悬液。
44.动物双歧杆菌a6菌悬液的配制：动物双歧杆菌a6，用mrs液体培养基厌氧37℃培养12h，然后4500r/min离心15min，菌体沉淀重悬于mrs液体培养基中，用生理盐水配制一定浓度的菌悬液
45.杏仁粉溶液的配置：准确称取杏仁粉5g，加入去离子水里，定容到100ml，配成浓度为0.05g/ml的溶液，为杏仁粉低剂量；准确称取杏仁粉25g，加入去离子水里，定容到100ml，配成浓度为0.25g/ml的溶液，为杏仁粉中剂量；准确称取杏仁粉125g，加入去离子水里，定容到100ml，配成浓度为1.25g/ml的溶液，为杏仁粉高剂量；准确称取杏仁粉50g，加入去离子水里，定容到100ml，配成浓度为0.5g/ml的溶液，用于与菌液混合。
46.墨汁的配制：准确称取阿拉伯树胶10g，加水80ml，煮沸至溶液透明，称取活性碳(粉状)5g加至上述溶液中煮沸3次，待溶液凉后加水定容到100ml，于冰箱中4℃保存，用前摇匀。
47.复方地芬诺酯混悬液(0.05g/100ml及0.025g/100ml)的配制：复方地芬诺酯片，每片含复方地芬诺酯2.5mg，分别取20片(0.1g/100ml)、10片(0.05g/100ml)用研钵研碎呈粉末后加水至50ml，临用前配制。
48.2、实验动物分组及处理
49.实验分为空白组、模型组、杏仁粉高、中、低剂量组、杏仁粉中剂量+a6、杏仁粉中剂量+l9、杏仁粉中剂量+a6+l9，共十组。空白组和模型组小鼠灌胃质量分数9％生理盐水0.1ml/(kg
·
d)(均以体质量计，下同)；杏仁粉高、中、低剂量组小鼠分别灌胃0.05g/ml、0.25g/ml、1.25g/ml的杏仁粉0.1ml/(kg
·
d)；杏仁粉中剂量+a6组灌胃0.25g/ml杏仁粉溶液+4
×
109cfu/mla6菌液的混合溶液0.1ml/(kg
·
d)；杏仁粉中剂量+l9组灌胃0.25g/ml杏仁粉溶液+4
×
109cfu/mll9菌液的混合溶液0.1ml/(kg
·
d)；杏仁粉中剂量+a6+l9组灌胃0.25g/ml杏仁粉溶液+4
×
109cfu/ml的a6菌液+4
×
109cfu/ml的l9菌液的混合溶液0.1ml/(kg
·
d)，每天一次，实验期间自由进食，记录各组小鼠体质量变化。
50.3、小鼠排便实验
51.给受试样品7d后，各组小鼠禁食不禁水16h。模型组、杏仁粉高、中、低剂量组、杏仁
粉中剂量+a6组、杏仁粉中剂量+l9组、杏仁粉中剂量+a6+l9组小鼠灌胃给予复方地芬诺酯(10mg/kg)，空白组给予蒸馏水。各干预组的受试样品浓度的二倍与墨汁等体积混合，给予复方地芬诺酯0.5h后，空白组和模型组小鼠灌胃墨汁0.1ml/kg，其他干预组给予含受试样品的墨汁0.1ml/kg，动物均单笼饲养，正常饮水进食。从灌胃墨汁开始，记录每只动物首次排黑便时间、5h内排黑便粒数、质量。收集的粪便在105℃烘干至质量恒定，按式(1)计算粪便含水率。
52.粪便含水率/％＝(1-烘干后粪便质量/烘干后粪便质量)
×
100(1)。
53.4、小肠推进实验
54.给受试样品15d后，各组小鼠禁食不禁水16h。模型组、死菌组与活菌组小鼠灌胃给予复方地芬诺酯(5mg/kg)，空白组给予蒸馏水。给复方地芬诺酯0.5h后，各干预组分别给予含受试样品的墨汁0.1ml/kg)(样品剂量同3、小鼠排便实验)，对照组灌胃墨汁0.1ml/kg。25min后立即脱颈椎处死小鼠，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲肠部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按式(2)计算墨汁推进率。
55.墨汁推进率/％＝[墨汁推进长度(cm)/小肠总长度(cm)]
×
100(2)。
[0056]
5、数据处理
[0057]
墨汁推进率需进行数据转换，式中：a为墨汁推进率，结果用小数表示。在进行方差分析时，先使用方差分析程序做方差齐性检验，方差齐后，计算f值，f值＜f0.05，则各实验组平均数间不存在显著性差异；若f值≥f0.05，p≤0.05，表明各组均数之间存在显著性差异；用一个对照组同每个实验组数据进行秩和t检验。
[0058]
6、实验结果
[0059]
(1)小鼠体质量变化
[0060]
表1实验小鼠体重变化(n＝10)g
[0061][0062]
由表1可知，实验期间，小鼠体重逐渐增长，与空白对照组相比，模型组、杏仁粉以及杏仁粉+益生菌组小鼠体重无显著差异(p＞0.05)，表明实验过程中杏仁粉、动物双歧杆菌a6和副干酪乳杆菌l9对雄性小鼠的体重没有显著性影响，本研究是在小鼠生理常态条件下进行的。
[0063]
(2)小鼠排便实验结果
[0064]
2.1首次排黑便实验结果
[0065]
表2杏仁粉、a6和l9对便秘模型小鼠首次排黑便时间的影响(n＝10)
[0066][0067]
(注：
▲▲
.与空白组相比，有极显著性差异(p＜0.01)；**.与模型组相比，有极显著性差异 (p＜0.01)：*.与模型组相比，有显著性差异(p＜0.05))
[0068]
实验小鼠每天一次经口灌胃杏仁粉、动物双歧杆菌a6和副干酪乳杆菌l9，连续7d后测定对便秘模型小鼠首次排黑便时间影响，结果见表2。与空白组比较，模型组小鼠首次排黑便时间极显著降低(p＜0.01)，说明排便实验便秘小鼠模型成立，杏仁高剂量组和杏仁中剂量组的首次排黑便时间与模型组相比无显著差异(p ＞0.05)；杏仁低剂量组、杏仁中剂量+益生菌(a6或l9)组的首次黑便时间与模型组相比显著降低(p＜0.05)；杏仁中剂量+a6+l9组与模型组相比极显著降低(p ＜0.01)。
[0069]
2.25h内黑便质量、粒数和粪便含水量
[0070]
表3杏仁粉、a6和l9对便秘模型小鼠各排便指标的影响(n＝10)
[0071][0072]
(注：
▲▲
.与空白组相比，有极显著性差异(p＜0.01)；**.与模型组相比，有极显著性差异(p＜0.01)；*.与模型组相比，有显著性差异(p＜0.05))
[0073]
实验小鼠每天一次经口灌胃杏仁粉、动物双歧杆菌a6和副干酪乳杆菌l9，连续7d后测定对便秘模型小鼠5h内排黑便粒数、质量及粪便含水率的影响。由表 3可知，与空白组比较，模型组小鼠5h内黑便质量、粒数和粪便含水量均极显著升高(p＜0.01)，说明排便实验便秘小鼠模型成立。
[0074]
杏仁高、中剂量组的5h内黑便质量、粒数和粪便含水量均无显著差异(p＞ 0.05)；杏仁低剂量组的5h内黑便质量、粒数均极显著升高(p＜0.01)，粪便含水量无显著差异(p＞0.05)；杏仁中剂量+益生菌(a6或l9)组的5h内排黑便粒数、质量均显著升高(p＜0.05)，粪便含水率极显著升高(p＜0.01)；杏仁中剂量+a6+l9 组的5h内排黑便粒数、质量及粪便含水率均显著升高(p＜0.05)。
[0075]
2.3小肠推进实验结果
[0076]
表4杏仁粉、a6和l9对便秘小鼠小肠墨汁推进率的影响(n＝10)
[0077][0078]
(注：
▲▲
.与空白组相比，有极显著性差异(p＜0.01)；**.与模型组相比，有极显著性差异 (p＜0.01)；*.与模型组相比，有显著性差异(p＜0.05))
[0079]
小肠运动有3种方式，即张力收缩、分节运动和蠕动，主要以蠕动力推动肠内容物运动为主要方式。本实验经口灌胃给予小鼠止泻剂复方地芬诺酯是一种便秘模型造模常用药物，其作用主要是直接作用于肠道平滑肌，通过抑制肠黏膜感受器，消除局部肠黏膜蠕动反射而使肠道蠕动减慢，使肠内容物通过延迟，致使小鼠排便困难，与便秘临床症状相近。经灌胃建立小鼠小肠蠕动抑制模型后，再通过墨汁标记观察益生菌和杏仁粉对便秘小鼠肠道蠕动的影响。实验小鼠连续灌胃杏仁粉、动物双歧杆菌a6和副干酪乳杆菌l9菌液15d后，进行小肠推进实验。
[0080]
由表4可知，模型组墨汁推进率明显低于空白组(p＜0.01)，墨汁推进实验小鼠便秘模型造模成功。灌胃15d后，杏仁中剂量+l9组和杏仁中剂量+a6+l9组的小肠推进率与模型组相比，极显著增加(p＜0.01)，杏仁低剂量组和杏仁中剂量 +a6组的小肠推进率与模型组相比显著增加(p＜0.05)。杏仁高剂量组和杏仁中剂量组的小肠推进率与模型组相比没有显著差异(p＞0.05)。
[0081]
本试验通过灌胃复方地芬诺酯造成小鼠的便秘模型，以小鼠的首次排便时间、排便粒数和质量、粪便水分含量和墨汁推进率等指标评价杏仁粉、益生菌+杏仁粉对便秘模型小鼠的通便功能。综合实验数据可以看出，杏仁粉、益生菌+杏仁粉可以较好地改善便秘模型小鼠的排便能力，杏仁粉中剂量组+益生菌与益生菌中剂量相比缓解便秘的效果更显著，所以可以看出益生菌和杏仁粉缓解便秘的效果有协同、增效的作用；杏仁粉不同灌胃剂量组间还表现出了剂量效应，低剂组有显著缓解便秘的效果，中剂量组对于缓解便秘的效果不显著，高剂量组没有缓解便秘的作用，出现此种现象的原因可能是由于高脂高糖的饮食可能会导致便秘，说明虽然杏仁粉可以缓解便秘，但是每日的膳食量不能太多，否则可能会导致便秘。杏仁粉中剂量组每只鼠每天灌胃0.05g，对应得出人每日的膳食量为20g/d，所以对于人来说，杏仁粉每日的膳食量应小于20g/d，高于这个剂量且长期食用有可能不但不会缓解便秘，还可能会导致便秘。
[0082]
受试样品给药7d后，便秘小鼠首次排便时间缩短，排便粒数和质量明显增加，粪便水分含量提高；连续15d灌胃受试样品，便秘小鼠小肠墨汁推进率也得到显著增加。结果表明，杏仁粉和益生菌+杏仁粉具有良好的润肠通便功能，杏仁粉具有剂量效应，低剂量缓解效果显著，高剂量无显著效果，益生菌+杏仁粉缓解便秘的效果高于杏仁粉。