一种解除霉菌毒素b1的饲料添加剂及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明涉及饲料制备方法领域，具体涉及一种解除霉菌毒素b1的饲料添加剂及其制备方法和应用。
背景技术：
2.饲料，是所有人饲养的动物的食物的总称，比较狭义地一般饲料主要指的是农业或牧业饲养的动物的食物。饲料包括大豆、豆粕、玉米、鱼粉、氨基酸、杂粕、乳清粉、油脂、肉骨粉、谷物、饲料添加剂等十余个品种的饲料原料。我国饲料工业是一个新兴产业，2016年全国商品饲料总产量达到20918万t，总产值8014亿元。按满足动物营养需要层面分类，饲料产品可分为全价配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料。饲料在生产加工过程或者存储过程中都有可能会发霉，在环境适宜的情况下产生大面积的污染，饲料污染后产生大量的霉菌毒素。
3.霉菌毒素主要是指霉菌在其所污染的食品中产生的有毒代谢产物，它们可通过饲料或食品进入人和动物体内，引起人和动物的急性或慢性毒性，损害机体的肝脏、肾脏、神经组织、造血组织及皮肤组织等。高温和干旱环境下的农作物很容易遭受霉菌孢子的侵害，一旦条件允许，霉菌孢子可产生霉菌毒素，霉菌毒素非常稳定，可耐高温，即使加热到340℃也不会将其分解和破坏，各种霉菌毒素的同时存在能加重霉菌毒素的毒性，霉菌毒素能够危害动物肝脏和肾脏，也会影响动物繁殖功能，危害不容小觑。黄曲霉毒素b1是常见的一种霉菌毒素(af)，主要由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生，由约20种结构相似的化学物质组成，其中以b1、b2、g1、g2及m1最为重要，国家法规规定饲料中这种毒素的含量不得超过20ppb，对动物危害极大。
技术实现要素：
4.为解决上述技术问题，本发明提供了一种解除霉菌毒素b1的饲料添加剂及其制备方法和应用，利用微生物菌剂，维生素混合物和蛋白添加剂制备得到饲料添加剂，所述饲料添加剂能够有效降低饲料中的霉菌毒素含量，对饲料起到解毒作用。
5.本发明的第一个目的是提供一种解除霉菌毒素b1的饲料添加剂，所述饲料添加剂包括微生物菌剂；
6.所述微生物菌剂由不动杆菌zjtk-006菌剂和萎缩芽孢杆菌ba10菌剂按照体积比1：2混合而成；
7.所述不动杆菌zjtk-006菌剂和所述萎缩芽孢杆菌ba10菌剂中的有效活菌数均为6
ⅹ
10
7-6
ⅹ
108cfu/ml。
8.进一步地，所述饲料添加剂由以下重量百分比的组分制成：微生物菌剂 4-6％，维生素混合物10％-16％，黄曲霉毒素b1分解酶2-4％，余量为蛋白添加剂。
9.进一步地，所述维生素混合物由维生素a、维生素b1、维生素b2、和维生素e按照质量比2：1：1：2-3组成。
10.进一步地，所述蛋白添加剂由鱼粉、豆粕粉和骨粉按照质量比6-8：5：3 组成。
11.本发明的第二个目的是提供了一种上述解除霉菌毒素b1的饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
12.s1，微生物菌剂制备：分别将不动杆菌zjtk-006和萎缩芽孢杆菌ba10 活化培养，发酵获得不动杆菌zjtk-006菌剂和萎缩芽孢杆菌ba10菌剂，然后将不动杆菌zjtk-006菌剂和萎缩芽孢杆菌ba10菌剂按照体积比1：2混合获得微生物菌剂；
13.s2，维生素混合物制备：将维生素a、维生素b1、维生素b2、和维生素 e按照质量比2：1：1：2-3混合后在15-20℃下均匀混合，获得维生素混合物；
14.s3，蛋白添加剂制备：将鱼粉、豆粕粉和骨粉按照质量比6-8：5：3搅拌混合均匀，获得蛋白添加剂；
15.s4，将黄曲霉毒素b1分解酶加入到微生物菌剂中，然后与维生素混合物和蛋白添加剂混合，然后将混合物造粒得到直径为8-12mm的颗粒，然后于 30-40℃下干燥至水分含量低于13％，获得饲料添加剂。
16.进一步地，s2中，所述维生素a、维生素b1、维生素b2、和维生素e的质量比为2：1：1：3。
17.进一步地，s3中，所述鱼粉、豆粕粉和骨粉的质量比为8：5：3。
18.进一步地，s1中，所述不动杆菌zjtk-006菌剂和所述萎缩芽孢杆菌ba10 菌剂中的有效活菌数均为6
ⅹ
108cfu/ml。
19.本发明的第三个目的是提供了上述饲料添加剂在养殖业中的应用，所述饲料添加剂能够降解黄曲霉毒素b1。
20.本发明还提供了所述的微生物菌剂在饲料制备中的应用，所述微生物菌剂能够降解黄曲霉毒素b1。
21.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
22.1、本发明制备得到的饲料添加剂能够有效降低饲料中的霉菌毒素含量，对饲料起到解毒作用，其中微生物菌剂能够改变黄曲霉毒素b1的分子结构，从而高效降低黄曲霉毒素b1的毒性。
23.2、本发明中通过微生物菌剂与维生素混合物、黄曲霉毒素b1分解酶、蛋白添加剂混合制备得到的饲料添加剂能够高效的降解受污染的饲料中的霉菌毒素b1，降解率高达75.82％。
具体实施方式
24.下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
25.一、一种解除霉菌毒素b1的饲料添加剂及其制备方法
26.实施例1
27.1、材料
28.(1)不动杆菌zjtk-006，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.3452；
29.(2)萎缩芽孢杆菌ba10，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.12053。
30.(3)所用培养基：
31.不动杆菌zjtk-006培养基配方：na2hpo 2.4g，kh2po 2.6g，nac1 0.328g， mgso4·
7h2o 0.5g，cacl2·
2h2o 0.013g，nh4c1 1.0g，葡萄糖2g，加蒸馏水溶解，补充蒸馏水定容至1000ml，ph 7.2-7.5(相应的固体培养基需加2％琼脂)；
32.萎缩芽孢杆菌ba10培养基配方：胰蛋白胨10.0g，酵母提取物5.0g，nacl 10.0g，蒸馏水1000ml(相应的固体培养基需加2％琼脂)。
33.2、解除霉菌毒素b1的饲料添加剂的制备方法
34.所述饲料添加剂由以下重量百分比的组分制成：微生物菌剂4％，维生素混合物16％，黄曲霉毒素b1分解酶2％，余量的蛋白添加剂(78％)。
35.s1，微生物菌剂制备：
36.不动杆菌zjtk-006菌剂制备：
37.首先，将不动杆菌zjtk-006菌株接种到相应的固体平板上，进行活化，然后在固体平板上划线转接3次后挑取单菌落，接种到相应的液体培养基中，于32℃，150rpm振荡培养48h，获得不动杆菌zjtk-006种子液，然后将不动杆菌zjtk-006种子液按照接种量体积分数为3％传代培养三次获得不动杆菌zjtk-006菌剂。
38.萎缩芽孢杆菌ba10菌剂制备：
39.将萎缩芽孢杆菌ba10菌株接种到相应的固体平板上，进行活化，然后在固体平板上划线转接3次后挑取单菌落，接种到相应的液体培养基中，于30℃， 200rpm振荡培养12h，获得萎缩芽孢杆菌ba10种子液，然后将萎缩芽孢杆菌 ba10种子液按照接种量体积分数为3％传代培养两次获得萎缩芽孢杆菌ba10 菌剂。
40.然后将不动杆菌zjtk-006菌剂和萎缩芽孢杆菌ba10菌剂按照体积比1： 2混合获得微生物菌剂；
41.所述不动杆菌zjtk-006菌剂和所述萎缩芽孢杆菌ba10菌剂中的有效活菌数均为6
ⅹ
108cfu/ml。
42.s2，维生素混合物制备：将维生素a、维生素b1、维生素b2、和维生素 e按照质量比2：1：1：3混合后在15℃下均匀混合，获得维生素混合物；
43.s3，蛋白添加剂制备：将鱼粉、豆粕粉和骨粉按照质量比8：5：3搅拌混合均匀，获得蛋白添加剂；
44.s4，将黄曲霉毒素b1分解酶加入到微生物菌剂中，然后与维生素混合物和蛋白添加剂混合，然后将混合物造粒得到直径为8-12mm的颗粒，然后于40℃下干燥至水分含量低于13％，获得饲料添加剂。
45.实施例2
46.本实施例与实施例1基本相同，区别在于：
47.所述饲料添加剂由以下重量百分比的组分制成：微生物菌剂6％，维生素混合物10％，黄曲霉毒素b1分解酶4％，余量的蛋白添加剂(80％)。
48.s2中，所述维生素a、维生素b1、维生素b2、和维生素e的混合质量比为2：1：1：2；
49.s3中，所述鱼粉、豆粕粉和骨粉的混合质量比6：5：3搅拌混合获得。
50.实施例3
51.本实施例与实施例1基本相同，区别在于：
52.所述饲料添加剂由以下重量百分比的组分制成：微生物菌剂5％，维生素混合物13％，黄曲霉毒素b1分解酶5％，余量的蛋白添加剂(77％)。
53.s2中，所述维生素a、维生素b1、维生素b2、和维生素e的混合质量比为2：1：1：2.5；
54.s3中，所述鱼粉、豆粕粉和骨粉的混合质量比7：5：3搅拌混合获得。
55.二、饲料添加剂对霉菌毒素b1的降解作用
56.1、微生物菌剂对霉菌毒素b1的降解率
57.取实施例1制备得到的微生物菌剂5ml，于4℃，8000rpm离心15min，弃上清，获得的菌体中加入无菌生理盐水洗涤2次，然后加入10μl黄曲霉毒素b1苯-乙晴溶液(黄曲霉毒素b1浓度为100μg/ml)，吹打均匀后于30℃， 180rpm条件下培养6h(实验组)，以等量无菌生理盐水中加入等量黄曲霉毒素b1为空白对照组，用afb1检测试剂盒检测afb1含量，按照下述公式计算黄曲霉毒素b1降解率。
58.afb1降解率(％)＝(空白对照afb1含量-实验组afb1含量)/空白对照 afb1含量x 100％
59.同理可以计算实施例2-3中制备得到的微生物菌剂对霉菌毒素b1的降解率。
60.2、饲料添加剂对霉菌毒素b1的降解作用
61.取新鲜无污染的小麦为基础饲料，平均分为四组，记为a、b、c、d，其中，四组中均按照60μg/kg加入afb1，然后分别在b、c、d三组中按重量百分比2％加入实施例1、实施例2和实施例3中制备得到的饲料添加剂，混合均匀，调节含水量为85％，然后于30℃下发酵50h，其中，a组为空白对照组，b、c、d均为实验组，处理完成后利用固相萃取法提取其中的黄曲霉毒素b1，利用高效液相色谱法测定黄曲霉毒素b1含量，并按照以下公式计算降解率：
62.afb1降解率＝(1-实验组中afb1含量/对照组中afb1含量)x 100％。
63.三、实验结果
64.1、微生物菌剂对霉菌毒素b1的降解率
65.表1本发明制备的微生物菌剂对霉菌毒素b1的降解效果
66.分组afb1降解率(％)实施例144.54％实施例242.97％实施例340.33％
67.表2本发明制备的饲料添加剂对霉菌毒素b1的降解效果
68.分组afb1降解率(％)实施例175.82％实施例268.79％实施例373.11％
69.由表1可知，本发明实施例1-3制备的微生物菌剂对浓度为100μg/ml的霉菌毒素b1处理6h后的降解率在40-45％之间，由表2可知，直接使用本发明实施例1-3制备得到的饲料
添加剂对基础饲料小麦发酵后，对霉菌毒素b1 效果达到68-76％，说明本发明中通过微生物菌剂与维生素混合物、黄曲霉毒素b1分解酶、蛋白添加剂混合制备得到的饲料添加剂能够高效的降解受污染的饲料中的霉菌毒素b1，对于饲料的制备意义重大。
70.尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
71.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。