专利名称：用αVβ6的拮抗剂治疗急性肺损伤和纤维化的制作方法
本工作部分由NIH资助号HL 47412和HL 53949支持。美国政府可能对本专利具有一定权利。
本发明的背景整联蛋白是由两个亚基α和β组成的异二聚体细胞粘附受体。整联蛋白αVβ6是主要由上皮细胞表达的纤连蛋白和肌键蛋白受体。虽然β6在胎儿发育，伤口愈合和一些上皮肿瘤中表达，但在健康成年灵长类组织中难以检测到β6mRNA和蛋白质。当β6亚基在结肠癌细胞系中表达时(它正常是不在其中表达的)，该亚基的表达将增强细胞的增殖能力。对于αVβ6整联蛋白增强增殖的活性，一段β6亚基特异的11个氨基酸的羧基末端区域是必需的(Agrez等，细胞生物学杂志(J.Cell.Biol.)127547-556(1994))。在II型小泡(aveolar)上皮细胞由于注射活菌造成损伤时，诱导β6的表达，并且在亚临床炎症病灶区以及来自肺或肾慢性或急性炎症病人的多种临床样品中观察到β6表达(Breuss等，细胞科学杂志(J.Cell.Sci.)1082241-2251(1995))。
Huang等(细胞生物学杂志(J.Cell.Biol.)133921-928(1996))披露在编码β6亚基的基因中的一种无效突变的鼠纯合体造成幼畜秃发，并伴有巨噬细胞浸润到皮肤，以及在肺导气管积累激活的淋巴细胞。
人们认为肺纤维化是由白细胞释放物破坏效应造成的常见疾病(参看例如，Marshall等，Int.J.Biochem.Cell Bio.29107-120(1997))。博来霉素诱导的肺损伤和肺纤维化相关于并可能依赖于淋巴细胞的募集和活化(Schrier，D.J.等，Am.J.Pathol.116270-278(1984))。治疗实质性肺损伤和肺纤维化的建议疗法中有一种是使用抗细胞因子治疗方法(Coker等，Thorax 52(2)294-296(1997))。
但是，目前急性肺损伤和肺纤维化的疗法大部分是不充份的(参看例如，King等，“未知病因的自发肺纤维化和其它间质肺病”，呼吸药物教材(Textbook of Respiratory Medicine.，Murray和Nodel编辑，W.B.Saunders，Philadelphia，PA.pp.1827-1839(1994)))。因而，存在着对治疗急性肺损伤和肺纤维化的疗法的需要。本发明目的在于这种需要及其它需要。
本发明的总结本发明的一个方面是治疗病人急性肺损伤的一种方法，包括对病人施用治疗剂量的αVβ6的拮抗剂。本发明亦提供了抑制肺迁移的方法，包括向病人施用治疗剂量的αVβ6的拮抗剂。本发明进一个方面是一种治疗病人纤维化的方法，包括向病人施用治疗剂量的αVβ6的拮抗剂。
本发明的又一个方面是一种由杂交瘤ATCC HB 12382产生的单克隆抗体。
本发明的再一个方面是杂交瘤ATCC HB 12382。
附图的简要描述
图1A是在博来霉素(blm)或盐水(sal)存在下表达β6整联蛋白亚基基因无效突变的小鼠和对照小鼠的肺羟脯氨酸含量的比较图。
图1B是低分辨率肺切片的三色(trichrome)染色照片，显示博来霉素处理30天后野生型(β6+/+)肺中形成胶原的胞外基质的密集积累而在β6-/1中则没有。
图2图示在博来霉素(blm)或盐水(sal)存在下野生型小鼠(β6+/+)与β6-/-小鼠相比肺水增加的比较。
图3图示使用博来霉素(blm)或盐水(sal)后野生型(β6+/+)和β6-/-小鼠的淋巴细胞的募集的比较。
本发明的详细描述本发明提供了治疗肺损伤的方法和组合物，肺损伤诸如但不限于由细菌性浓毒症，出血性休克，毒性吸入导致的肺损伤，以及博来霉素及其它药物诱导的肺损伤。此外，本发明的组合物可用于治疗上皮器官，诸如肺，肝，肾，膀胱和食管的纤维化。
可用作预防或治疗向具有或者可能会具有急性肺损伤或纤维化的病人提供这种组合物。例如，曾暴露于毒性吸入剂的病人在暴露后应进行处理，而接受博来霉素的病人可进行预防和/或治疗处理。虽然具有肺纤维化，一种渐进性疾病的病人可接受数月至数年的治疗剂量，但典型地，本发明的组合物是按天给药，至少1-5天。此处使用的“治疗剂量”是防止，缓解，降低或减轻病人症状严重程度的剂量。
本发明的一些实施方案中，提供了αVβ6的拮抗剂。这类拮抗剂包括但不限于特异性结合β6的抗体；特异性结合αVβ6配体的抗体；αVβ6的配体；反义核酸；以及肽；非肽，以及这类配体的肽模拟物类似物。
抗体可以是合成的，单克隆的或多克隆的，并可由本技术领域熟知的技术制备。在一个优选实施方案中，拮抗剂是一种特异性识别β6亚基胞质区的抗体(例如，参看Weinacker等，细胞生物学杂志(J.Cell.Bio.)2691-9(1994))。对于治疗应用，优选地是具有人恒定区和可变区的“人”单克隆抗体，以尽量减小病人对抗体的免疫反应。可通过免疫含有人免疫球蛋白基因的转基因动物产生这类抗体。参看Jakovobits等，Ann.NY Acad Sci 764525-535(1995)。在合成和半合成抗体方面，这类术语是为了覆盖但不限于抗体片段，同种型转换抗体，人源化抗体(例如，小鼠-人，人-小鼠，等等)，杂合体，其多种特异性的抗体，全合成类抗体分子，等等。
如下面所述，可以筛选具有阻碍配体和αVβ6结合的能力或其它特征，诸如体内保护免除博来霉素诱导的肺纤维化的能力的抗体。一个抗β6的单克隆抗体的实施例是10D5(ATCC保藏号HB 12382，1997年8月6日保藏)。
本发明的其它实施方案中，使用了以含有细胞粘着结构域精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)为基础的设计为αVβ6配体的肽，多肽，蛋白质，或肽类模拟物的拮抗剂。已经有设计为整联蛋白的配体的这类分子的实例，例如，Pierschbacher等，细胞生物化学杂志(J.Cell.Biochem.)56150-154(1994)；Ruoslahti，Ann.Rev.Cell.Dev.Biol.12697-715(1996)；Chorev等，Biopolymers37367-375(1995))；Pasqualini等，细胞生物学杂志(J.Cell.Biol.)1301189-1196(1995)；以及Smith等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)26932788-32795(1994))。
在本发明一些实施方案中，使用反义核酸分子作为αVβ6的拮抗剂。反义核酸分子是与核酸互补的寡核苷酸链，设计为能与特定核苷酸序列结合，从而抑制靶蛋白质的产生。在1991年7月11日存档的U.S.S.N.07/728,215中公布了β6整联蛋白亚基的核苷酸序列，此处以参考文献将其完整并入。这些药剂可单独使用或与其它拮抗剂组合使用。反义拮抗剂可通过反义寡核苷酸诸如RNA的形式提供(参看例如，Murayama等，Antisense Nucleic AcidDrug Dev.7109-114(1997))。反义基因亦可通过病毒载体提供，诸如，例如乙肝病毒(参看例如Ji等，J.Viral Hepat.4167-173(1997))；腺伴随病毒(参看例如，Xiao等，Brain Res.75676-83(1997))；或其它系统包括但不限于HVJ(仙台病毒)-脂质体基因传递系统(参看例如，Kaneda等，Ann.N.Y.Acad.Sci.811299-308(1997))；一种“肽载体”(参看，例如，Vidal等，CR Acad.SciIII 32)279-287(1997)；游离型或质粒载体中的基因(参看，例如，Cooper等，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)946450-6455(1997)，Yew等，人类基因治疗(Hum Gene Ther.)8575-584(1997))；在肽-DNA聚集物中的基因(参看，例如，Niidome等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)27215307-15312(1997))；“裸DNA”(参看，例如U.S.5,580,859和U.S.5,589,466)；以及脂载体系统(参看，例如，Lee等，Crit Rev Ther DrugCarrier Syst.14173-206(1997))。
可以通过本技术领域已知的或本申请中公布的多种技术，诸如在小鼠模型中防止博来霉素诱导的纤维化；抑制肿瘤细胞增殖(Agrez等，细胞生物学杂志(J.Cell.Bio)，127547-556(1994))；以及抑制细胞迁移和/或抑制细胞粘着(参看实验实施例部分)来筛选αVβ6的候选拮抗剂的功能。
在所有药物化学家所知的处方集中可发现本发明拮抗剂的多种适用剂型雷明顿药物科学(Remington′s Pharmaceutical Seiences.)(第15版，MackPublishing Company，Easton，Pennsyluania(1975))，特别是其中的Blaug，Seymour的第87章。这些剂型包括例如粉剂，糊剂，软膏剂，胶体，蜡，油，脂，无水吸收基质(anhydrous absorption bases)，水包油或油包水乳剂，聚乙二醇乳剂(多种分子量的聚乙二醇)，半固体凝胶，以及含聚乙二醇的半固体混合物。
有效治疗所需的活性成分的量依赖于不同的因素，包括给药方法，靶部位，病人生理状态，及使用的其它药物。因而，应当滴定治疗剂量以优化安全性和有效性。典型地，体外使用剂量可提供原位使用的活性成分的量的有效指导。治疗特定疾病的动物实验的有效量将为人体用量提供进一步的预测性指示。已经描述了多种考虑，例如，Goodman and Gilman′s thePharmacological Basis of Therapeutics，第7版(1985)，Maclnill an PublishingCompany，New York，以及Remington′s Pharmaceutical Sciences第18版(1990)，Mack Publishing Co，Easton Penn.其中讨论了用药方法，包括口服，静脉内，腹膜内，肌内，经皮的，鼻的，离子电渗疗法给药等等。
依据给药方法，本发明的组合物可通过多种单位剂量形式给药。例如，适于口服的单位剂量形式包括固体剂量形式诸如粉剂，片剂，丸剂，胶囊，和糖衣丸以及液体剂量形式诸如酏剂，糖浆和悬浮液。也可以无菌液体剂量形式将活性组分肠胃外用药。明胶胶囊含有活性组分以及作为无活成分的粉状载体，诸如葡萄糖，乳糖，蔗糖，甘露醇，淀粉，纤维素或纤维素衍生物，硬脂酸镁，硬脂酸，糖精钠，滑石粉，碳酸镁等等。其它可能为了提供所需颜色，味道，稳定性，缓冲能力，分散性或其它已知所需特征而加入的无活成分的例子有红色氧化铁，二氧化硅凝胶，月桂硫酸钠，二氧化钛，可食性白色墨水(white ink)等等。可使用类似的稀释剂制备压缩的片剂。片剂和胶囊均可制成缓释产品，从而在数小时内提供药物的缓释。压缩片剂可以是糖包被的或膜包被的，从而掩盖令人不快的味道并保护片剂不接受空气，或是肠包被的，从而在胃肠道中选择性降解。用于口服的液体剂量形式可含有颜色和调味剂使病人易于接受。
药物制剂中本发明组合物的浓度可变范围很大，即从低于重量的大约0.1％，通常在或至少大约2％多至20％以至50％或更高，并且浓度将主要由流体体积，粘度等来选择，并基于选择的特定用药方式而定。
本发明的组合物亦可通过脂质体用药。脂质体包括乳浊液，泡沫塑料，微团，不溶性单层，液晶，磷脂分散体，薄片层及类似物。在这些制备物中，本发明的组合物掺入到脂质体中进行药物传递，它可以是单独使用或与结合所需靶的分子诸如抗体或与其它治疗或免疫原性组合物共同使用。这样，可将填充或修饰了所需的本发明组分的脂质体全身给药，或定向至感兴趣组织，在该处脂质体递送选择的治疗/免疫原性肽组合物。
本发明中使用的脂质体是由标准的能形成小泡的脂类形成的，一般包括中性和带负电的磷脂和固醇，诸如胆固醇。通常通过考虑例如脂质体大小，酸不稳定性和脂质体在血流中的不稳定性来指导对脂类的选择。现有多种制备脂质体的方法，例如Szoka等，生物物理与生物工程年评(Ann.Rev.Biophys.Bioeng.)9467(1980)，美国专利4,235,871，4,501,728，4,837,028和5,019,369中所述，以参考文献并于此处。
含有本发明组合物的脂质体悬浮液可以静脉内，局部，表面用药，其剂量可依据包括用药方式，要传递的本发明组合物，和治疗的疾病的阶段等变化。
对于固体组合物，可使用传统的无毒固相载体，包括例如，药品级的甘露醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，滑石粉，纤维素，葡萄糖，蔗糖，碳酸镁，及其类似物。对于口服用药，药物学可接受的无毒性组合物是通过将正常应用的赋形剂，诸如前面列举的载体，与通常为10-95％的活性成分，即一种或多种本发明组合物，并且更优选地在25％-75％的浓度掺合后形成的。
对于气雾剂用药，本发明的组合物优选地以精细的形式与表面活性剂和推进物一起提供。本发明组合物的典型百分含量是重量的0.01％-20％，优选地1％-10％。表面活性剂当然必须是无毒的并优选地溶于推进物。这类药剂的代表是含有6至22个碳原子的脂肪酸，诸如己酸，辛酸，月桂酸，棕榈酸，硬脂酸，亚油酸，亚麻酸，olesteric acids和油酸与脂肪族多羟醇或其环酐的酯或部分酯。可以使用诸如混合的或天然甘油酯的混合酯。表面活性剂可占组合物重量的0.1％-20％，优选地0.25-5％。组合物的平衡通常是推进物。如果需要，亦可包括载体，例如用于鼻内给药时可包括卵磷脂。
本发明的构建物另外可用于储存型系统中给药，通过本技术领域熟知技术的一种胶囊形式，或一种移植物。类似地，可通过泵向目的组织传递构建体。
只要剂型中的活性药剂不因为剂型而失活并且该剂型是生理兼容的，依据本发明的任何上述剂型都适用于处理和治疗。
下面提供的实施例是为了说明本发明的特定方面而不是限制其主题。
实验实施例I.导言人们认为肺纤维化是由于白细胞释放物的破坏效应造成的常见疾病。虽然在纤维化发生中损伤了呼吸上皮细胞，但以前并未表明上皮细胞本身有助于此过程。我们检测了博来霉素，一种已知造成肺纤维化的药物，对完全限于上皮细胞表现单个整联蛋白亚基(β6)基因无效突变的小鼠的作用。β6-/-小鼠显著地受到保护，免除博来霉素诱导的纤维化。靶向此整联蛋白的疗法从而提供了治疗这种大部分未能治疗的疾病的新方法。
整联蛋白αVβ6只在上皮细胞上表达，主要是在器官形成和对损伤起反应时。β6-/-小鼠放大了对皮肤和气管损伤的炎症反应，但发育和繁殖正常(Huang，X.Z.等，细胞生物学杂志(J.Cell Biol.)133921-928(1996))。II.αVβ6整联蛋白亚基基因的失活保护小鼠免于博来霉素诱导的肺纤维化测定了年龄和性别匹配的129 SVEMS/ter种野生型(β6+/+)和β6-/-小鼠在气管内注射博来霉素(60μl盐中0.03单位(U))或盐载体(60μl)后的肺毒性。在处理15，30和60天后，通过检查肺形态和测定羟脯氨酸含量，胶原沉积的一种指标，评价了肺纤维化。在博来霉素处理30天的野生型小鼠中有显著的纤维化，并在60天有发展(图1A-1B)。与此相反，β6-/-小鼠肺形态在实验中几乎保持正常，只有小的纤维化斑；并且肺羟脯氨酸含量与盐处理动物中测得的量在任何时间点均无显著差别。这一发现不是仅对纯合129小鼠是独特的，因为在129与C57B 1/6杂交后代中获得类似结果。这些未料到的结果表明整联蛋白αVβ6的表达对于肺纤维化的诱导是必要的。
为了确定αVβ6在博来霉素诱导纤维化早期阶段中的作用，我们测定了使用博来霉素或盐1，5和15天后的肺水含量，它是由于增加了血管通透性造成肺水肿的一个标记。在野生型小鼠中，博来霉素处理后5天时肺水增至最高并保持增加至15天(图2)。对于肺纤维化，β6-/-小鼠大部分保护免于博来霉素的这种早期效应，表明上皮αVβ6在博来霉素诱导的血管渗漏前的作用。
我们以前报道了β6-/-小鼠证实在皮肤和气管中有扩大的单核细胞炎症反应(Huang，X.Z.等，细胞生物学杂志(J.Cell Biol.)133921-928(1996))。博来霉素诱导的肺损伤和肺纤维化相关于并可能依赖于淋巴细胞的募集和活化(Schrier，D.J.等，Am.J.Pathol.116270-278(1984))。为了确定β6-/-小鼠对博来霉素诱导的损伤和纤维化的抗性是否归因于变化的淋巴细胞恢复或活化，我们计数CD4+和CD8+淋巴细胞并通过测定盐或博来霉素处理5天和15天后小鼠肺中获取的细胞中白介素2-受体(CD25)的表达评价了淋巴细胞活性。与先前的报道一致，在β6-/-小鼠肺中有比野生型动物中更多的CD4+，CD8+和CD25+细胞。在野生型和β6-/-小鼠中，博来霉素诱导了表达CD4和CD8的淋巴细胞的数目大量增加，并且显著增加表达CD25的淋巴细胞百分含量。在野生型和β6-/-小鼠中肺淋巴细胞恢复和活化在使用博来霉素后5天最大，并在15天时开始下降。不限于任何一个理论，这些资料提示β6-/-小鼠中淋巴细胞的募集或活化失败不太可能起保护它们免于博来霉素的损害肺的效应。
整联蛋白与它们的基质配体调节多种重要的细胞功能包括增殖(Agrez，M等，细胞生物学杂志(J.Cell Biol.)127547-556(1994))，存活(Lukacs，N.W.等，欧洲免疫学杂志(Eur.J.Im Munol.)25245-251(1995))和细胞因子表达(Miyake，S.等，J.Exp.Med.177863-868(1993)以及金属蛋白酶(Werb，Z.等，细胞生物学杂志(J.Cell Biol.)109877-889(1989))。据报道β6亚基仅形成单一的整联蛋白异二聚体，αVβ6并且限于上皮细胞。与上皮损伤后快速诱导αVβ6的表达相平行，这种整联蛋白的至少两种配体(纤连蛋白和肌键蛋白)局部浓度增加。我们以前报道过，αVβ6的表达在皮肤和肺导气管中终止单核细胞炎症反应中起作用(Huang，X.Z.等，细胞生物学杂志J.Cell.Biol.133921-928(1996))。此处报道的结果显示，这种整联蛋白在对博来霉素起反应诱导肺损伤和肺纤维化中亦有着关键作用。
长期以来，人们认为呼吸上皮细胞主要是作为被动屏障成分，将其它肺细胞与吸入空气中可能的毒性组分分开。然而在此接触面上，这些细胞很好的定位可起始和调节对损伤的局部反应。最近的证据暗示呼吸上皮细胞具有合成和分泌一系列能起始和调节对损伤的反应的蛋白质，包括趋化因子(例如白介素-8，GROα，GROγ，RANTES，GMCSF，M2P-1α和MCP-1)，其它细胞因子(例如IL-6，IL-11，和IL15)以及生长因子(例如TGFβ)。不局限于任何一种理论，上皮αVβ6对肺损伤和肺纤维化可能有贡献的一种可能机制是调节一种或多种这些蛋白质的表达。
目前的肺纤维化疗法很大程度上是不适当的。本研究的结果表明，呼吸上皮细胞，以及上皮整联蛋白，αVβ6，在实质性肺损伤和肺纤维化的发病机理中起重要作用，并且特异设计的干扰这种整联蛋白功能的药物可用于治疗这些很大程度上不能治疗的肺病。III产生阻碍抗体A.产生单克隆抗体为了产生抗αVβ6的抗体，在福氏佐剂中用来自野生型鼠的角质化细胞或重组体分泌的人αVβ6免疫β6-/-(Weinacker等，生物化学杂志(J.Biol.Chem)2696940-6948(1994))。按照标准方法将收获的鼠脾细胞与SP210鼠myenoma细胞融合。使用β6-和模拟转染的SW480细胞通过流式细胞术筛选产生的上清。将发现的识别β6-转染但不识别模拟转染的SW480细胞的抗体用于进一步实验。
B.单克隆抗体的表征为了产生抗鼠αVβ6的抗体，在129/C57背景β6-/-小鼠中使用分泌的人αVβ6和鼠角质化细胞作为免疫原。筛查杂交瘤产生的上清，选择模拟和β-6转染SW480细胞的染色差别。产生的抗体CSβ6和10D5对SW480细胞表达的人β6和野生型角质化细胞的鼠β6均能染色。CSβ6通过(35S)-标记的鼠角质化细胞裂解液的免疫沉淀进一步表征。这种抗体沉淀来自β6+/+角质化细胞的与αVβ6相应分子量的异二聚体但不沉淀来自β6-/-角质化细胞的，表明这些抗体对整联蛋白αVβ6是特异的。
我们还通过用β6-转染的SW480细胞和鼠角质化细胞对纤连蛋白进行细胞粘着测定检测了CSβ6和10D5的阻碍活性。但是只有10D5在鼠细胞上表现阻碍活性。10D5抑制野生型角质化细胞在纤连蛋白上的迁移，与在β6-/-角质化细胞中的观察有相同的程度。
C.细胞粘着测定用玻连蛋白，纤连蛋白或胶原将96孔非组织培养处理的聚苯乙烯多孔微量滴定板(Linbro/Titertek，Flow Laboratories，Molean，VA)包被。将含有不同量基质的100μl溶液加至孔中并在37℃温育1小时。温育后，用PBS洗孔，然后在37℃下用含1％BSA的无血清DMEM阻断30分钟。对照孔用含1％BSA的DMEM填充。用迁移检测中相同方式收获细胞并重新悬浮于无血清KGM，然后在含或不含PMA的条件下加到蛋白质涂层的每个孔中。对于阻碍实验，铺板前在4℃将细胞与抗体温育5分钟。在10×g将板离心(上面朝上)5分钟，然后在34℃下潮湿的7％CO2温育1个小时。通过上面朝下48×g离心5分钟除去未粘着的细胞。用1％甲醛固定粘着的细胞并用0.5％结晶紫染色，然后用PBS洗孔。通过在MicroplateReader(Bio-Rad)中测量595nm处的吸收估计每孔中的相对细胞数量。
D.迁移检测用基质涂层的穿孔板(transwell plate)(8μm孔，Costar，Cambridge，MA)进行细胞迁移检测。在37℃PBS中用胶原(10μg/ml)，纤连蛋白(10μg/ml)或玻连蛋白(10μg/ml)包被膜的下表面1小时，并用1％BSA阻断。用胰蛋白酶/EDTA收获原代培养的角质化细胞并用大豆胰蛋白酶抑制剂灭活胰蛋白酶。将细胞悬浮于无血清KGM并以每孔3.6×104的密度将含或不含豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA，10μg/ml)的100μl培养基铺在上层室中。对于抑制实验，在PMA存在下将抗体加到上层和下层室中。温育6小时后，用2％低聚甲醛固定细胞并用1％甲醛中的0.5％结晶紫染色。除去上层室中的细胞并在10×载网高分辨放大(40×)下计数下表面细胞。计数多个视野并对每一研究条件取平均。IV.β6敲除小鼠具有降低的肺转移发病率将自发发生转移性乳腺癌的转基因鼠系(MMTV-mTAg小鼠)与β-6敲除小鼠杂交。缺少β6的子代出现快速生长的原发性乳房肿瘤，但与表达β6的同窝仔相比具有显著降低的发病率和肺转移瘤程度。免疫组织化学显示，β6在转移损伤边缘有强烈表达。这就提示在这种模型中β6-对最大转移是必需的。
由于β6敲除小鼠有慢性肺部炎症，降低的转移可能归因于干扰了转移生长的肺的炎症的存在。为提出此论点进行了两个实验1.将由原发性肿瘤衍生的表达β6的细胞系注射到野生型或β6敲除的共存小鼠中。在两组鼠中均快速出现肺转移瘤，暗示敲除鼠中炎症的存在不干扰肺中的瘤细胞生长。2.将来自β6敲除的或野生型小鼠的肿瘤的细胞系注射到共存的野生型小鼠。野生型细胞系无一例外造成肺部肿瘤，而敲除细胞系则不然。这一实验提示在这种系统中肿瘤细胞β6对最大转移是必需的。
此处引用的所有文献(包括书，论文，文章，专利，和专利申请)在所有目的上均完整并于此处。
虽然本发明是与特定实施方案相连来描述的，但应该理解能够进一步修改，并且本申请意图覆盖本发明的概括而言，依据本发明原理的任何变化，用途或修改，并且包括那些本发明相关的本技术领域已知或实际通用的，以及那些可用于前面陈述的关键特征的，以及落在本发明范围内和附录权利要求书范围内的本公开的偏离。
权利要求
1.治疗病人急性肺损伤的一种方法，包括向病人施用治疗剂量的αVβ6的拮抗剂。
2.权利要求1的方法，其中拮抗剂是一种特异性结合β6的抗体。
3.权利要求2的方法，其中抗体是一种单克隆抗体。
4.权利要求1的方法，其中拮抗剂含有氨基酸序列RGD。
5.权利要求1的方法，其中拮抗剂含有一种反义核酸分子。
6.权利要求1的方法，其中拮抗剂是治疗性用药。
7.权利要求1的方法，其中拮抗剂是预防用药。
8.治疗病人纤维化的一种方法，包括向病人施用治疗剂量的αVβ6的拮抗剂。
9.权利要求8的方法，其中纤维化是肺纤维化。
10.权利要求9的方法，此处肺纤维化是由急性肺损伤引起的。
11.权利要求8的方法，其中拮抗剂是一种特异结合β6的抗体。
12.权利要求11的方法，其中抗体是一种单克隆抗体。
13.权利要求8的方法，其中拮抗剂含有氨基酸序列RGD。
14.权利要求8的方法，其中拮抗剂含有反义核酸分子。
15.权利要求8的方法，其中拮抗剂是治疗性用药。
16.权利要求8的方法，其中拮抗剂是预防性用药。
17.由杂交瘤ATCC HB 12382产生的单克隆抗体。
18.杂交瘤ATCC HB 12382。
全文摘要
提供了治疗急性肺损伤和纤维化的包括αVβ6的拮抗剂的方法和组合物。
文档编号C12N15/09GK1267224SQ98807892
公开日2000年9月20日 申请日期1998年8月7日 优先权日1997年8月8日
发明者黄晓珠, 迪安·谢泼德, 罗伯特·派特拉 申请人:加利福尼亚大学董事会