量接种至液体厌氧发酵培养基中，15°C厌氧发酵24h，得到厌氧发酵产物；（5)细胞自溶：将 木瓜蛋白酶按酿酒酵母菌体干重1 %的量加入厌氧发酵产物中，55°C自溶36小时，得到酵 母细胞自溶物，经喷雾干燥处理，得到酵母代谢物及胞内物；
[0022] 步骤二、米曲霉代谢物的制备：（1)将米曲霉菌接种到PDA斜面培养基中，30°C静 止培养3-5天，得到复活的米曲霉菌种；（2)将复活的米曲霉菌种接种至PDA平板培养基 中，30°C静止培养3-5天，得一级种子；（3)将一级种子液用生理盐水洗脱，放入装有玻璃搅 拌珠的三角瓶中，200r/min的振荡20min，过滤，取滤液，调节孢子浓度为IxlO 8个/ml，得 到孢子悬浮液；(4)将孢子悬浮液以2~4%的量接种至液体培养基中，30°C培养48h，得到 米曲霉菌液；（5)将米曲霉菌液按14%接种量接种于固体发酵培养基中，30°C培养5天，经 40°C干燥后粉碎，得到米曲霉代谢物；
[0023] 步骤三、瘤胃调控微生态饲料添加剂的制备：将步骤一中的酵母代谢物及胞内物、 步骤二中的米曲霉代谢物按质量比20:1混合均匀，得到瘤胃调控微生态饲料添加剂。
[0024] 步骤一中所述的厌氧发酵液体培养基由如下按质量分数计的成分组成：20%糖 蜜、0. 05%氯化钠、0. 05%氯化钙、0. 05%硫酸镁、0. 2%蛋白胨、0. 05%氯化钾、0. 1 %磷酸 氢二钾、0. 1%硫酸铵，余量为水，pH7. 5。
[0025] 相对于现有技术，本发明的有益效果为：
[0026] (1)本发明采用单一菌种工业发酵技术生产特定抗应激性代谢物组，该制备方法 稳定，有效解决了活菌制剂和酶制剂容易失活、不稳定的缺陷，极大地拓宽了产品的使用范 围；采用两个单菌种发酵代谢物组复配技术，进一步拓宽产品的功能性，并有利于实现不同 动物和生理（幼龄、围产等）阶段的针对性产品的开发。
[0027] (2)制备得到的瘤胃调控微生态饲料添加剂品质优良，稳定性好，经动物饲养试验 证明其功效性强，作为营养均衡的饲料添加剂，可提高动物生产性能和饲料转化率。本发明 的瘤胃调控微生态饲料添加剂不是活菌制剂，而是经高密度发酵后由活菌产生的抗特定性 应激的代谢产物，易储存，不会随保存时间的延长活性降低，确保了产品有效成分的含量。
[0028] (3)本发明的制备工艺简单，发酵周期短，大大降低了杂菌污染程度，提高了有效 代谢的含量。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合具体的实施例对本发明作进一步的详细说明：
[0030] 实施例1
[0031] 所述的瘤胃调控微生态饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
[0032] 步骤一、酵母代谢物及胞内物的制备：（1)将酿酒酵母菌种接种到Yro斜面培养基 中，28°C静止培养48小时，得到复活的酿酒酵母菌种；（2)将复活的酿酒酵母菌种接种至液 体YPD培养基中，培养得一级种子液；（3)将一级种子液以4%的量接种至有氧发酵培养基， 30°C有氧发酵24h，得二级种子液；(4)液体厌氧发酵：将二级种子液以20%的接种量接种 至液体厌氧发酵培养基中，15°C厌氧发酵24h，得到厌氧发酵产物；（5)细胞自溶：将木瓜蛋 白酶按酿酒酵母菌体干重1 %的量加入厌氧发酵产物中，55°C自溶36小时，得到酵母细胞 自溶物，经喷雾干燥处理，得到酵母代谢物及胞内物；
[0033] 步骤二、米曲霉代谢物的制备：（1)将米曲霉菌接种到PDA斜面培养基中，30°C静 止培养3天，得到复活的米曲霉菌种；（2)将复活的米曲霉菌种接种至PDA平板培养基中， 30°C静止培养3天，得一级种子；(3)将一级种子液用生理盐水洗脱，放入装有玻璃搅拌珠 的三角瓶中，200r/min的振荡20min，过滤，取滤液，调节孢子浓度为IxlO 8个/ml，得到孢 子悬浮液；(4)将孢子悬浮液以2%的量接种至液体培养基中，30°C培养48h，得到米曲霉菌 液；（5)将米曲霉菌液按14%接种量接种于固体发酵培养基中，30°C培养5天，经40°C干燥 后粉碎，得到米曲霉代谢物；
[0034] 步骤三、瘤胃调控微生态饲料添加剂的制备：将步骤一中的酵母代谢物及胞内物、 步骤二中的米曲霉代谢物按质量比20:1混合均匀，得到瘤胃调控微生态饲料添加剂。
[0035] 步骤一中所述的厌氧发酵液体培养基由如下按质量分数计的成分组成：20%糖 蜜、0. 05%氯化钠、0. 05%氯化钙、0. 05%硫酸镁、0. 2%蛋白胨、0. 05%氯化钾、0. 1 %磷酸 氢二钾、0. 1 %硫酸铵，余量为水，pH 7. 5。
[0036] 步骤二中所述的固体发酵培养基由如下按质量分数计的成分组成：麸皮10g，尿 素0. 6 %，磷酸氢二钾0. 20 %，硫酸镁0. 05 %，硫酸亚铁0. 05 %，氯化钠0. 05 %，培养条件为 接种量14 %，培养时间5天，料水比为5:6，温度30°C。
[0037] 实施例2
[0038] 所述的瘤胃调控微生态饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
[0039] 步骤一、酵母代谢物及胞内物的制备：同实施例1的步骤一；
[0040] 步骤二、米曲霉代谢物的制备：同实施例1的步骤二；
[0041] 步骤三、瘤胃调控微生态饲料添加剂的制备：将步骤一中的酵母代谢物及胞内物、 步骤二中的米曲霉代谢物按质量比15:1混合均匀，得到瘤胃调控微生态饲料添加剂。
[0042] 实施例3
[0043] 所述的瘤胃调控微生态饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
[0044] 步骤一、酵母代谢物及胞内物的制备：同实施例1的步骤一；
[0045] 步骤二、米曲霉代谢物的制备：同实施例1的步骤二；
[0046] 步骤三、瘤胃调控微生态饲料添加剂的制备：将步骤一中的酵母代谢物及胞内物、 步骤二中的米曲霉代谢物按质量比25:1混合均匀，得到瘤胃调控微生态饲料添加剂。
[0047] 产品功效验证
[0048] 1、试验动物
[0049] 选取4只体况良好的绵羊（18月龄），安装永久性瘤胃瘘管，用于瘤胃液的采集。 精粗比设定为40:60,青干草（羊草）自由采食；每天饲喂二次分别在早8:00、17:00,精料 补充料分别在早晚添加；保证充足、清洁饮水，并保持饮水槽的清洁。
[0050] 2、试验日粮与试验设计
[0051] 试验设定精粗比为5:5即0. 15g精料+0. 15g羊草，共6个处理组，每个处理4个 重复
[0052] 3、瘤胃液体外批次培养方法
[0053] 3. 1、体外批次培养装置
[0054] 批次培养装置自行设计，主体恒温水浴摇床，水浴温度和振荡频率可调；用蓝盖瓶 (容积为250ml)作培养瓶。
[0055] 3. 2、缓冲液配制
[0056] 缓冲试剂和常量元素溶液--A液：称取Κ2ΗΡ04382· 5mg，KH2P04292mg， (NH4) 2S04480mg，NaCl 200mg，MgSO4 ·7Η20 IOOmg 和 Na2C034000mg。将上述试剂混合后加入 蒸馏水定容至1000ml。该溶液在使用前一天配制待用。
[0057] PFNNINGS 微量元素溶液--B 液：准确称取 EDTA 500mg，FeSO4 · 7H20200mg， MnCl2 · 4H20 200mg，ZnSO4 · 7H20 10mg，H3B0330mg，CoCl2 · 6H2020mg，CuCl2 · 2H201mg， NiCl2WH2O 2mg和NaMo043mg。将上述试剂混合后加蒸馏水定容至1000ml。持续通入C0218 个小时后，盖严瓶口，置于冰箱备用。
[0058] 还原剂溶液--C液：称取25g Na2S ·9Η20置于100mL容量瓶中加80ml蒸馏水溶 解后定容至100mL，持续充入C0220min后，盖严瓶口，置于冰箱备用。
[0059] 缓冲液制备：于培养前Ih准确量取988ml A液，IOml B液，2ml C液，充分混合，通 CO2至无色然后将其分装于培养瓶内（每个培养瓶加50ml)，持续通入CO 2气体lOmin，盖严 瓶盖，并置于恒温水浴中预热至39°C待用。