裂殖壶菌突变株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及海洋微生物应用技术领域，尤其设及一株裂殖壶菌突变株及其应用。
【背景技术】
[0002] 裂殖壶菌（Schizochyhium)是属于网粘菌口 (Xabyrinthulomycota)、网粘菌纲 (Labyrinthulomycetes)、破囊壶菌目（Thraustochytriales)、破囊壶菌科 (化raustochytriaceae)的一类类藻的海洋真菌。裂殖壶菌一般为单细胞、球形。裂殖壶菌 体内可大量积累对人体有用的活性物质，如油脂、DHA(二十二碳六締酸)等，是很好的油脂 和DHA生产的来源。
[0003] 但是现有的裂殖壶菌菌株的生长速度慢，造成其生物量产量低，阻碍了裂殖壶菌 的大规模产业化进程。
【发明内容】
[0004] 本发明提出一株裂殖壶菌突变株及其应用，W提高裂殖壶菌菌株的生长速度。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 本发明的第一方面提供了一株裂殖壶菌突变株(Schizochytrium Iimacinum)，保 藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（简称CGMCC)，地址为北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年10月22日，保藏编号为CGMCC No. 11534。
[0007] 本发明的第二方面提供了一种如上所述的裂殖壶菌突变株在生物质能源方面的 应用。
[000引本发明的第=方面提供了一种如上所述的裂殖壶菌突变株在饲料或巧料添加剂 方面的应用。
[0009] 本发明的第四方面提供了一种如上所述的裂殖壶菌突变株在保健和医药方面的 应用。
[0010] 本发明所提供的技术方案的有益效果至少包括：
[0011] 1、本发明所提供的裂殖壶菌突变株的生长速度比野生裂殖壶菌菌株的生长速度 快，并且性状稳定，从而可使裂殖壶菌菌株的生物量产量提高，促进裂殖壶菌的大规模产业 化进程。
[0012] 2、与野生裂殖壶菌菌株相比，本发明所提供的裂殖壶菌突变株的油脂或DHA含量 较高，因此特别适用于在生物质能源、饲料或巧料添加剂、保健和医药等领域中应用。
【附图说明】
[0013] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可W 根据运些附图获得其它的附图。
[0014] 图I为本发明实施例所提供的裂殖壶菌突变株与野生株的产量对比曲线一；
[0015] 图2为本发明实施例所提供的裂殖壶菌突变株与野生株的产量对比曲线二。
【具体实施方式】
[0016] 为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面将结合本发明实施 例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例 仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技 术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，均属于本发明保护的范 围。
[0017] 本实施例提供了一株裂殖壶菌突变株，分类命名为Schizochytrium limacinum， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（简称CGMCC)，地址为北京市朝阳 区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年10月22日，保藏编号为CGMCC No. 11534。
[0018] 本实施例所提供的裂殖壶菌突变株具有生长速度比野生裂殖壶菌菌株快的性状， 且此性状稳定，能够稳定遗传，从而提高了裂殖壶菌的生物量产量，有利于裂殖壶菌的大规 模产业化。
[0019] 本实施例中，可W裂殖壶菌野生株为研究对象，经ARTP(Atmc)Spheric and Room Temperature Plasma,常压室溫等离子体)诱变处理，采用高通量方式W生长速度为标准进 行多次反复筛选，培育得到裂殖壶菌突变株。该培育过程具体可为：
[0020] 取裂殖壶菌野生株生长旺盛、处于对数期的无菌菌液，浓缩菌液，使细胞浓度为1 X IO4~1 X 10"个/血;取5~200化该菌液，均匀涂布在进行诱变的探头处，通过ARTP诱变方 法对菌液进行诱变处理30~180s;将诱变后的菌液用生理盐水进行稀释，然后均匀涂布于 使用培养裂殖壶菌通用的配方配制的固体培养基表面，在10~条件下，静置暗培养 2地;将暗培养后的裂殖壶菌菌株涂布于多块平板上，之后将涂布好的平板放入溫度为10~ 34 °C的恒溫培养箱中静置培养3d，待菌落长出后，每块有效平板挑取5~8个较大菌落，并再 次保存至新的无菌异养固体平板上，获得诱变单菌落并编号;将单菌落挑入多孔板，在10~ 34°C条件下静置培养3d;调整相同接种量接入到新多孔板，采用高通量摇床设备，在培养溫 度控制在10~34°C，转速为2(K)巧m的条件下，W生长速度为标准进行多次反复筛选;选择生 长速度快，生物量产量高的裂殖壶菌菌株在=角瓶中进行多轮筛选评价，最终得到裂殖壶 菌突变株，本单位编号记为脚NlOl-I。
[0021] 上述培养方法中对裂殖壶菌菌株进行诱变处理所采用的ARTP诱变方法，是利用常 压室溫等离子体进行诱变的方法，常压室溫等离子体能在常压（Iatm)下产生溫度在25~40 r之间、具有高活性粒子的等离子体射流，该常压室溫等离子体中适量的活性粒子作用于 裂殖壶菌菌株，能使细胞壁或细胞膜的结构及通透性改变，并引起基因损伤，最终导致细胞 发生突变。相对于其它诱变方法，ARTP诱变方法具有高效、对人体无副作用、对外界环境的 污染小的优点。
[0022] 本实施例所提供的裂殖壶菌突变株具有生长速度快的优点。经检测，本实施例所 提供的裂殖壶菌突变株的生长速度至少比野生裂殖壶菌菌株的生长速度快15%。
[0023] 对本实施例所提供的裂殖壶菌突变株的生长速度进行检测可采用如下方法:将本 实施例所提供的裂殖壶菌突变株（W下简称突变株)和活化后的裂殖壶菌野生株（W下简称 野生株)分别接种在配制好的异养培养基中，W葡萄糖为碳源，W酵母提取物为氮源，在恒 溫培养箱中进行培养，W野生株为对照，培养过程中，培养溫度可控制在10~34°c，转速可 为2(K)rpm，培养基的pH值可调节在7~9之间，培养周期可为5d，培养所使用的反应器可为 1.化=角瓶。
[0024] 每天定时取30mL样品，离屯、后使用冷冻干燥法测定突变株藻粉和野生株藻粉的干 重值，并进行镜检观察。如图1所示，根据所测定的干重值，绘制出突变株和野生株的培养时 间-干重曲线，从曲线中能够得到：突变株的生长速度为5.51g/L/d，野生株的生长速度为 4.78g/L/d，突变株比野生株生长速度提高15.2% ;镜检观察的结果表明，整个培养时间突