一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品的制作方法
【专利摘要】本发明涉及医用食品领域，公开了一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，每100g中包含：鳕鱼皮胶原蛋白肽粉3?5g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉7?9g，乳清蛋白粉5?6g，大豆蛋白粉4.5?5.5g，MCT脂肪10?12g，鱼油5.2?5.6g，碳水化合物54?56g，以及其他维生素和微量元素等多种营养成分。本发明为医疗食品，适用于颌面外科病人；创伤、代谢应激病人、烧伤病人；持续性腹膜透析病人等。能够辅助治疗创面修复。
【专利说明】
一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品
技术领域
[0001]本发明涉及医用食品领域，尤其涉及一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品。
【背景技术】
[0002]每年，都有很多人被烧伤，导致创伤烧伤的原因繁多，在医院治疗后，需要进行后期的持续修复。后期修复情况对病人身心造成巨大影响。
[0003]目前，一般对于烧伤后后期修复，一般是通过外敷的药来进行修复，很少通过医用食品来进行辅助治疗。目前市场上关于创伤后期修复的食品，也都是保健品，无法作为医用食品使用;保健食品营养配比还不够合理，无需医嘱，只是盲目地进行营养摄入，不能起到辅助医疗作用。却并不能有效用于创伤修复。因此，目前市场上缺少用于创伤修复辅助治疗的医用食品。医用食品不同于药品、普通食品、保健食品以及膳食补充剂。食品法典委员会(CAC)对医用食品进行了定义:即需要特殊膳食管理的病人在医生的指导下进行服用的一类具有特殊膳食用途的食品，属于特殊膳食的一类。美国FDA对医用食品提出三个必备要素:满足特殊的营养需要;在营养医师的指导下服用;适用于需要特殊膳食管理的人群。我国尚未对医用食品定义。
【发明内容】
[0004]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品。本发明为医疗食品，适用于颂面外科病人;创伤、代谢应激病人、烧伤病人;持续性腹膜透析病人等。能够辅助治疗创面修复。
[0005]本发明的具体技术方案为:一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，每10g中包含以下物质:
鳕鱼皮胶原蛋白肽粉3_5g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉7_9g，乳清蛋白粉5_6g，大豆蛋白粉
4.5-5.5g，MCT脂肪 10-12g，鱼油5.2-5.6g，碳水化合物54_56g，叶酸68_72yg，生物素7.4-
7.6yg，胆碱 98_102mg，泛酸 3.80-3.82mg，甘氨酸 566_568mg，精氨酸 376_380mg，脯氨酸446-45011^，丙氨酸410-41211^，异黄酮7.4-7.611^，红枣提取物0.19-0.218，山楂提取物0.09-
0.IIg，L-肉碱48-52mg，卵磷脂98_102mg，山梨酸钾48_52mg，聚山梨酸脂-80 18_22mg，维生素A 1200-1300IU，维生素D3 98-102IU，维生素E 10-12IU，维生素C 45.4-45.8mg，维生素BI 0.56-0.5811^，维生素82 0.65_0.6711^，维生素86 0.7_0.8mg，维生素K 28_32yg，维生素B12 2.26-2.30yg，以及含有微量元素的多种无机盐。
[0006]其中所有所述无机盐中微量元素的含量如下:钙380-382mg，磷298-302mg，镁156-158mg，锌3.80-3.82mg，铜224_226mg，锰0.56-0.58mg，钠254_256g，钾440_448mg，氟0.9-
1.Img，碘37-38yg，铬7_8yg，钼12-13yg，砸 I.35-1.40yg。
[0007]本发明的创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品适用于颂面外科病人;创伤、代谢应激病人、烧伤病人;持续性腹膜透析病人等。用于术前营养补充、肠道净化、接受手术后应激的营养支持，消化道特殊外科疾病时(愈合不全、消化道瘘和短肠综合症等)的营养支持或肠外营养过渡。严重创伤，消耗性疾病或手术后营养不良的营养补充和支持。各类创伤病人，肝胆疾患、肠瘘病人不能接受整蛋白质肠内营养支持。
[0008]本品中以鳕鱼皮胶原蛋白肽粉、鱿鱼皮胶原蛋白肽粉和乳清蛋白粉为主要原料，具有较高的消化吸收性，维生素和微量元素协同作用，明显提高抗氧化应激效果。
[0009]添加有锌和红枣、山楂提取物，能够刺激食欲。精氨酸有助于减轻应激性胆固醇升高和胸腺损害。本品组分容易消化吸收，能够满足病人的能量需求和增加蛋白质需要量。较低色氨酸及高支链氨基酸组成的氮源，能减少氮丢失。
[0010]作为优选，上述创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，每10g中包含以下物质: 鳕鱼皮胶原蛋白肽粉4g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉Sg，乳清蛋白粉5.5g，大豆蛋白粉5g，MCT
脂肪llg，鱼油5.4g，碳水化合物55g，叶酸70yg，生物素7.5yg，胆碱lOOmg，泛酸3.81mg，甘氨酸567mg，精氨酸378mg，脯氨酸448mg，丙氨酸41 Img，异黄酮7.5mg，红率提取物0.2g，山楂提取物0.Ig，L-肉碱50mg，卵磷脂10mg，山梨酸钾50mg，聚山梨酸脂-80 20mg，维生素A1250IU，维生素D3 100IU，维生素E 11IU，维生素C 45.68mg，维生素BI 0.57mg，维生素B20.66mg，维生素B6 0.75mg，维生素K 30yg，维生素B12 2.28yg，以及含有微量元素的多种无机盐。
[0011]其中所有所述无机盐中微量元素的含量如下:钙381mg，磷300mg，镁157mg，锌3.8111^，铜22511^，锰0.5711^，钠2558，钾44411^，氟111^，碘37.548，铬7.548，钼12.548，砸
I.375ug0
[0012]作为优选，所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200_1000Da区间内占比90%以上;所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200-800Da以内占比90%以上。
[0013]水产动物的胶原蛋白肽在某个分子量区间内具有较好的增强创面修复的效果，但是不同水产动物的胶原蛋白肽最佳分子量区间大为不同，本
【申请人】在经过大量实验以及创造性研究后，发现将分子量在200-1000Da区间的鳕鱼胶原蛋白与分子量在200-800Da鱿鱼皮胶原蛋白肽进行特定比例的复配后，能够产生协同作用，对辅助创伤修复具有很好的效果O
[0014]作为优选，所述碳水化合物选自麦芽糊精、木薯淀粉、玉米淀粉、藕粉中的至少两种。
[0015]作为优选，所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备方法如下:
a、原料解冻清洗:对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为2_5h;完全解冻后将鱼皮洗净。原料应该保持新鲜、清洁、无异味。
[0016]b、原料预处理:将鱼皮添加到5-10倍浓度为3_5wt%的氢氧化钠溶液中，在20-30°C下脱脂4_6h，然后取鱼皮用水洗净。
[0017]C、蒸煮熬胶:将鱼皮在90-100 °C下进行蒸煮熬胶8_12h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
[0018]d、酶解:将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解;其中中性蛋白酶的浓度为0.05-0.25wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的2-4倍，酶解温度为30-45°C，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为30-60min。
[0019]e、炭脱、板框过滤:向酶解液中添加质量为酶解液1-2#%的活性炭，并将酶解液加热到70-80°C，脱色30-50min;将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
[0020]f、分离纯化:将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水;鼓气速率为3-5L/min，注水速率为0.1-0.3L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为8-10:1，澄清液温度保持在25-35°C ;待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1-2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50-70min后利用磁场使磁性亲和微球聚集;分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在75-85°C下储存备用。
[0021]板框过滤后澄清液中的不溶性杂质基本分离完毕，基本只存在溶解性杂质以及重金属离子等。对澄清液进行泡沫分离纯化，由于蛋白物质具有一定的表面活性，能够在液体气泡后聚集在泡沫表面，收集泡沫液，能够将蛋白物质与其他物质进行分离。在泡沫分离过程中，由于泡沫分离柱中水分的不断变少，使得液体中蛋白物质的浓度升高，导致浓度超过临界胶束浓度，从而容易将其他可溶性杂质附带在泡沫表面，影响分离效果，进行注水能够有效维持液体中蛋白浓度。用离子交换器能够对泡沫液中的一同附着的重金属进行分离，再用磁性亲和微球对泡沫液中的目标蛋白物质进行亲和吸附，使得胶原蛋白肽的纯度更尚O
[0022]g、浓缩:将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5-6，浓缩后浓缩液在50-60 0C下储存。
[0023]h、膜过滤:将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌;其中膜过滤温度小于45°C，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
[0024]1、多肽分级:采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的胶原蛋白肽。
[0025]j、喷雾干燥:对胶原蛋白肽进行喷雾干燥，制得胶原蛋白肽粉;喷雾温度为80-90°C，喷雾干燥后水产胶原蛋白肽粉的含水率小于等于5wt%。
[0026]本发明制备的鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉，纯度高，得率高，分子量分布区间小，在目标分子量区间内的胶原蛋白肽含量尚。
[0027]作为优选，在鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用纳滤膜截留分子量在SOODa以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-800Da之间的胶原蛋白肽;在鳕鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用超滤膜截留分子量在100Da以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-1000Da之间的胶原蛋白肽。
[0028]作为优选，所述磁性亲和微球由以下方法制得:将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比2-3:1: 2:0.5:3-5:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A;向混合液A中添加混合液A质量4-6%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B;对混合液B进行超声波分散，同时向混合液B中匀速滴加混合液B质量40-60%的乳化液，得到混合液C;先后向混合液C中添加混合液C质量0.1-0.2%的98wt%的戊二醛和混合液C质量0.5_1倍的2.5-
3.5￥丨％的氯化钙溶液，充分搅拌，静置1-2h，生成磁性微球;利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥;将磁性微球浸泡在水中溶胀15-25min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在35-45°C下活化40-80min，磁性微球与活化液的固液比为
0.5-1.0g/mL;活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比1.5-2.5:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积1.5-2.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4 °C下静置12_18h。生成磁性未和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
[0029]本发明的磁性微球，以四氧化三铁磁粉为磁核，以海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖为磁核的主要包衣材料，以正庚烷为致孔剂，添加戊二醛和氯化钙溶液后，交联成型，具有多孔性，比表面积大，吸附容量大，分散性佳，粒径均一性好。
[0030]作为优选，所述乳化液为体积占比为30-40%的司盘-80无水乙醇混合液，乳化液在10-20min内滴加完毕。
[0031]作为优选，所述活化液由lmol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比4-6:1:0.5-0.7组成。
[0032]作为优选，所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉在制备过程中，在多肽分级之后、喷雾干燥之前，将目标分子量的胶原蛋白肽稀释10-30倍，向稀释液中添加含钙无机盐，在35-45 0C下螯合10-20min，接着向稀释液中添加含砸无机盐，在35-45 °C下螯合10-20min;其中含钙无机盐、含砸无机盐的质量分别为稀释液质量的0.1-0.2%。
[0033]对胶原蛋白肽表面进行修饰，能够使其含有微量元素，与微量元素螯合后，吸收性好。
[0034]与现有技术对比，本发明的有益效果是:本发明为医疗食品，适用于颂面外科病人;创伤、代谢应激病人、烧伤病人;持续性腹膜透析病人等。能够辅助治疗创面修复。
【具体实施方式】
[0035]下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
[0036]实施例1
一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，每10g中包含以下物质:
鳕鱼皮胶原蛋白肽粉4g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉Sg，乳清蛋白粉5.5g，大豆蛋白粉5g，MCT脂肪llg，鱼油5.4g，麦芽糊精25g，木薯淀粉10g，玉米淀粉10g，藕粉10g，叶酸70yg，生物素7.5yg，胆碱100mg，泛酸3.81mg，甘氨酸567mg，精氨酸378mg，脯氨酸448mg，丙氨酸411mg，异黄酮7.5mg，红率提取物0.2g，山楂提取物0.lg,L-肉碱50mg，卵磷脂10mg，山梨酸钾50mg，聚山梨酸脂-80 20mg，维生素A 1250IU，维生素D3 100IU，维生素E 11IU，维生素C45.68mg，维生素BI 0.57mg，维生素B2 0.66mg，维生素B6 0.75mg，维生素K 30yg，维生素B12 2.28yg，以及含有微量元素的多种无机盐。
[0037]其中所有所述无机盐中微量元素的含量如下:钙381mg，磷300mg，镁157mg，锌3.8111^，铜22511^，锰0.5711^，钠2558，钾44411^，氟111^，碘37.548，铬7.548，钼12.548，砸1.375yg0
[0038]所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200_1000Da区间内占比90%以上;所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200-800Da以内占比90%以上。
[0039]所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备方法如下:
a、原料解冻清洗:对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为3.5h;完全解冻后将鱼皮洗净。
[0040]b、原料预处理:将鱼皮添加到7.5倍浓度为4wt%的氢氧化钠溶液中，在25°C下脱脂5h，然后取鱼皮用水洗净。
[0041 ] c、蒸煮熬胶:将鱼皮在95 °C下进行蒸煮熬胶1h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
[0042]d、酶解:将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解;其中中性蛋白酶的浓度为0.15wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的3倍，酶解温度为38°C，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为45min。
[0043]e、炭脱、板框过滤:向酶解液中添加质量为酶解液1.5被％的活性炭，并将酶解液加热到75 °C，脱色40min;将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
[0044]f、分离纯化:将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水;鼓气速率为4L/min，注水速率为0.2L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为9:1，澄清液温度保持在30°C ;待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1-2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50-70min后利用磁场使磁性亲和微球聚集;分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在80 °C下储存备用。
[0045]g、浓缩:将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5.5，浓缩后浓缩液在55 °C下储存。
[0046]h、膜过滤:将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌;其中膜过滤温度小于45°C，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
[0047]1、多肽分级:采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的胶原蛋白肽。
[0048]j、喷雾干燥:对胶原蛋白肽进行喷雾干燥，制得水产胶原蛋白肽粉;喷雾温度为80-90°C，喷雾干燥后水产胶原蛋白肽粉的含水率小于等于5wt%。
[0049]在鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用纳滤膜截留分子量在SOODa以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-800Da之间的胶原蛋白肽;在鳕鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用超滤膜截留分子量在100Da以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-1000Da之间的胶原蛋白肽。
[0050]所述磁性亲和微球由以下方法制得:将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比2.5:1: 2:0.5:4:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A;向混合液A中添加混合液A质量5%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B;对混合液B进行超声波分散，同时向混合液B中匀速滴加混合液B质量50%的乳化液，乳化液在15min内滴加完毕，得到混合液C;先后向混合液C中添加混合液C质量0.15%的98被％的戊二醛和混合液C质量0.75倍的3wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置1.5h，生成磁性微球;利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥;将磁性微球浸泡在水中溶胀20min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在400C下活化60min，磁性微球与活化液的固液比为0.75g/mL;活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比2:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积2倍的3被％的1_乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4 °C下静置15h。生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
[0051]其中，所述乳化液为体积占比为35%的司盘-80无水乙醇混合液。所述活化液由lmol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比5:1:0.6组成。
[0052]实施例2
一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，每10g中包含以下物质:
鳕鱼皮胶原蛋白肽粉3g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉9g，乳清蛋白粉6g，大豆蛋白粉5.5g，MCT脂肪10g，鱼油5.6g，麦芽糊精34g，木薯淀粉10g，藕粉10g，叶酸68yg，生物素7.4yg，胆碱98mg，泛酸3.80mg，甘氨酸566mg，精氨酸376mg，脯氨酸446mg，丙氨酸410mg，异黄酮7.4mg，红率提取物0.19g，山楂提取物0.09g，L-肉碱48mg，卵磷脂98mg，山梨酸钾48mg，聚山梨酸脂-80 18mg;，维生素A 1200IU，维生素D3 98IU，维生素E 10IU，维生素C 45.4mg，维生素BI
0.56mg，维生素B2 0.65mg，维生素B6 0.7mg，维生素K 28yg，维生素B12 2.26yg，以及含有微量元素的多种无机盐。
[0053]其中所有所述无机盐中微量元素的含量如下:钙380mg，磷298mg，镁156mg，锌3.80mg，铜224mg，锰0.56mg，钠254g，钾440mg，氟0.9mg，碘37yg，铬7yg，钼12yg，砸 I.35yg。
[0054]所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200_1000Da区间内占比90%以上;所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200-800Da以内占比90%以上。
[0055]所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备方法如下:
a、原料解冻清洗:对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为2h;完全解冻后将鱼皮洗净。
[0056]b、原料预处理:将鱼皮添加到5倍浓度为5wt%的氢氧化钠溶液中，在20°C下脱脂6h，然后取鱼皮用水洗净。
[0057]c、蒸煮熬胶:将鱼皮在90 °C下进行蒸煮熬胶12h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
[0058]d、酶解:将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解;其中中性蛋白酶的浓度为0.05wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的4倍，酶解温度为300C，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为60min。
[0059]e、炭脱、板框过滤:向酶解液中添加质量为酶解液1的%的活性炭，并将酶解液加热到70 V，脱色50min;将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
[0060]f、分离纯化:将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水;鼓气速率为3L/min，注水速率为0.1L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为8:1，澄清液温度保持在25°C ;待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50min后利用磁场使磁性亲和微球聚集;分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在75 °C下储存备用。
[0061 ] g、浓缩:将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5，浓缩后浓缩液在50 0C下储存。
[0062]h、膜过滤:将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌;其中膜过滤温度小于45°C，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
[0063]1、多肽分级:采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的胶原蛋白肽。将目标分子量的胶原蛋白肽稀释20倍，向稀释液中添加含钙无机盐，在40 °C下螯合15min，接着向稀释液中添加含砸无机盐，在40 °C下螯合15min;其中含钙无机盐、含砸无机盐的质量分别为稀释液质量的0.15%。
[0064]j、喷雾干燥:对胶原蛋白肽进行喷雾干燥，制得水产胶原蛋白肽粉;喷雾温度为80-90°C，喷雾干燥后水产胶原蛋白肽粉的含水率小于等于5wt%。
[0065]在鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用纳滤膜截留分子量在SOODa以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-800Da之间的胶原蛋白肽;在鳕鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用超滤膜截留分子量在100Da以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-1000Da之间的胶原蛋白肽。
[0066]所述磁性亲和微球由以下方法制得:将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比2:1:2:0.5:3:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A;向混合液A中添加混合液A质量4%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B;对混合液B进行超声波分散，同时向混合液B中匀速滴加混合液B质量40%的乳化液，乳化液在I Omin内滴加完毕，得到混合液C;先后向混合液C中添加混合液C质量0.1%的98wt%的戊二醛和混合液C质量0.5倍的
3.5wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置Ih，生成磁性微球;利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥;将磁性微球浸泡在水中溶胀15min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在35 °C下活化SOmin，磁性微球与活化液的固液比为0.5g/mL;活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比1.5:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积1.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4 0C下静置12h ο生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
[0067]其中，所述乳化液为体积占比为30%的司盘-80无水乙醇混合液。所述活化液由lmol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比4:1:0.5组成。
[0068]实施例3
一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，每10g中包含以下物质:
鳕鱼皮胶原蛋白肽粉5g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉7g，乳清蛋白粉5g，大豆蛋白粉4.5g，MCT脂肪12g，鱼油5.2g，麦芽糊精36g，木薯淀粉10g，玉米淀粉10g，叶酸72yg，生物素7.6yg，胆碱102mg，泛酸3.82mg，甘氨酸568mg，精氨酸380mg，脯氨酸450mg，丙氨酸412mg，异黄酮7.61^，红枣提取物0.218，山楂提取物0.118儿-肉碱5211^，卵磷脂10211^，山梨酸钾5211^，聚山梨酸脂-80 22mg;，维生素A 1300IU，维生素D3 102IU，维生素E 12IU，维生素C 45.8mg，维生素BI 0.58mg，维生素B2 0.67mg，维生素B6 0.8mg，维生素K 32yg，维生素B12 2.30yg,以及含有微量元素的多种无机盐。
[0069]其中所有所述无机盐中微量元素的含量如下:钙382mg，磷302mg，镁158mg，锌
3.82mg，铜226mg，锰0.58mg，钠256g，钾448mg，氟I.Img，碘38yg，铬8yg，钼13yg，砸 I.40yg。
[0070]所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200_1000Da区间内占比90%以上;所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200-800Da以内占比90%以上。
[0071]所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备方法如下:a、原料解冻清洗:对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为5h;完全解冻后将鱼皮洗净。
[0072]b、原料预处理:将鱼皮添加到10倍浓度为3的％的氢氧化钠溶液中，在300C下脱脂4h，然后取鱼皮用水洗净。
[0073]c、蒸煮熬胶:将鱼皮在100 °C下进行蒸煮熬胶Sh，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min。
[0074]d、酶解:将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解;其中中性蛋白酶的浓度为0.25wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的倍，酶解温度为45°C，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为30min。
[0075]e、炭脱、板框过滤:向酶解液中添加质量为酶解液2的%的活性炭，并将酶解液加热到80 V，脱色30min;将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液。
[0076]f、分离纯化:将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水;鼓气速率为5L/min，注水速率为0.3L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为10:1，澄清液温度保持在35°C ;待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附70min后利用磁场使磁性亲和微球聚集;分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在85 °C下储存备用。
[0077]g、浓缩:将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在6，浓缩后浓缩液在60°C下储存。
[0078]h、膜过滤:将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌;其中膜过滤温度小于45°C，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa。
[0079]1、多肽分级:采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的胶原蛋白肽。将目标分子量的胶原蛋白肽稀释30倍，向稀释液中添加含钙无机盐，在45 °C下螯合I Omin，接着向稀释液中添加含砸无机盐，在45 °C下螯合1min;其中含钙无机盐、含砸无机盐的质量分别为稀释液质量的0.2%。
[0080]j、喷雾干燥:对胶原蛋白肽进行喷雾干燥，制得水产胶原蛋白肽粉;喷雾温度为80-90°C，喷雾干燥后水产胶原蛋白肽粉的含水率小于等于5wt%。
[0081]在鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用纳滤膜截留分子量在SOODa以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-800Da之间的胶原蛋白肽;在鳕鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用超滤膜截留分子量在100Da以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-1000Da之间的胶原蛋白肽。
[0082]所述磁性亲和微球由以下方法制得:将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比3:1:2:0.5: 5:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A;向混合液A中添加混合液A质量6%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B;对混合液B进行超声波分散，同时向混合液B中匀速滴加混合液B质量60%的乳化液，乳化液在20min内滴加完毕，得到混合液C;先后向混合液C中添加混合液C质量0.2%的98wt%的戊二醛和混合液C质量I倍的2.5wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置2h，生成磁性微球;利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥;将磁性微球浸泡在水中溶胀25min，然后取出磁性微球并添加到活化液中在450C下活化40min，磁性微球与活化液的固液比为1.0g/mL;活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比2.5:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积2.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4 0C下静置18h。生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。
[0083]其中，所述乳化液为体积占比为40%的司盘-80无水乙醇混合液。所述活化液由lmol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比6:1:0.7组成。
[0084]本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备;本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0085]以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。
【主权项】
1.一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于每10g中包含以下物质: 鳕鱼皮胶原蛋白肽粉3-5g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉7-9g，乳清蛋白粉5-6g，大豆蛋白粉4.5-5.5g，MCT脂肪 10-12g，鱼油5.2-5.6g，碳水化合物54_56g，叶酸68_72yg，生物素7.4-7.6yg，胆碱 98_102mg，泛酸 3.80-3.82mg，甘氨酸 566_568mg，精氨酸 376_380mg，脯氨酸446-45011^，丙氨酸410-41211^，异黄酮7.4-7.611^，红枣提取物0.19-0.218，山楂提取物0.09-0.IIg，L-肉碱48-52mg，卵磷脂98_102mg，山梨酸钾48_52mg，聚山梨酸脂-80 18_22mg;，维生素A 1200-1300IU，维生素D3 98-102IU，维生素E 10-12IU，维生素C 45.4_45.8mg，维生素BI 0.56-0.5811^，维生素82 0.65_0.6711^，维生素86 0.7_0.8mg，维生素 K 28_32yg，维生素B12 2.26-2.30yg，以及含有微量元素的多种无机盐； 其中所有所述无机盐中微量元素的含量如下:钙380-382mg，磷298-302mg，镁156-158mg，锌3.80-3.82mg，铜224_226mg，锰0.56-0.58mg，钠254_256g，钾440_448mg，氟0.9-1.Img，碘37-38yg，铬7_8yg，钼12-13yg，砸 I.35-1.40yg。2.如权利要求1所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，每10g中包含以下物质: 鳕鱼皮胶原蛋白肽粉4g，鱿鱼皮胶原蛋白肽粉Sg，乳清蛋白粉5.5g，大豆蛋白粉5g，MCT脂肪llg，鱼油5.4g，碳水化合物55g，叶酸70yg，生物素7.5yg，胆碱lOOmg，泛酸3.81mg，甘氨酸567mg，精氨酸378mg，脯氨酸448mg，丙氨酸41 Img，异黄酮7.5mg，红率提取物0.2g，山楂提取物0.Ig，L-肉碱50mg，卵磷脂10mg，山梨酸钾50mg，聚山梨酸脂-80 20mg，维生素A1250IU，维生素D3 100IU，维生素E 11IU，维生素C 45.68mg，维生素BI 0.57mg，维生素B20.66mg，维生素B6 0.75mg，维生素K 30yg，维生素B12 2.28yg，以及含有微量元素的多种无机盐； 其中所有所述无机盐中微量元素的含量如下:钙38111^，磷30011^，镁15711^，锌3.8111^，铜225mg，锰0.57mg，钠255g，钾444mg，氟Img，碘37.5yg，铬7.5yg，钼12.5yg，砸 I.375yg。3.如权利要求1或2所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200-1000Da区间内占比90%以上;所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉中，分子量在200-800Da以内占比90%以上。4.如权利要求1所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，所述碳水化合物选自麦芽糊精、木薯淀粉、玉米淀粉、藕粉中的至少两种。5.如权利要求1所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备方法如下: a、原料解冻清洗:对鱼皮进行流水解冻，解冻时间为2-5h;完全解冻后将鱼皮洗净； b、原料预处理:将鱼皮添加到5-10倍浓度为3-5wt%的氢氧化钠溶液中，在20-30°C下脱脂4-6h，然后取鱼皮用水洗净； c、蒸煮熬胶:将鱼皮在90-100°C下进行蒸煮熬胶8-12h，取生成的鱼皮胶，并对鱼皮胶通过离心处理与油脂分离，离心速率为1000r/min; d、酶解:将鱼皮胶添加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解;其中中性蛋白酶的浓度为0.05-0.25wt%，酶解液质量为鱼皮胶质量的2-4倍，酶解温度为30_45°C，酶解液pH至控制在6-8，酶解时间为30-60min ； e、炭脱、板框过滤:向酶解液中添加质量为酶解液1_2的%的活性炭，并将酶解液加热到70-80°C，脱色30-50min;将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液； f、分离纯化:将澄清液转移至泡沫分离柱中进行鼓气起泡，并收集泡沫液，，在鼓气的同时向泡沫分离柱中注水;鼓气速率为3-5L/min，注水速率为0.1-0.3L/min，泡沫分离柱中液体的装载高度与泡沫分离柱内径比为8-10:1，澄清液温度保持在25-35°C ;待收集的泡沫液灭泡后，用离子交换器对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1-2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50-70min后利用磁场使磁性亲和微球聚集;分离出磁性亲和微球后，用pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，再次利用磁场分离出磁性亲和微球后，得到洗脱液，将洗脱液在75-85°C下储存备用； g、浓缩:将洗脱液先后输入双效浓缩锅和四效浓缩锅中进行浓缩，制得浓缩液，所述浓缩液的折光度控制在5-6，浓缩后浓缩液在50-60 0C下储存； h、膜过滤:将浓缩液通过二级0.22微米膜过滤器进行除杂除菌；其中膜过滤温度小于450C，一级过滤压力小于0.25MPa，二级过滤压力小于0.4MPa ； 1、多肽分级:采用超滤膜或纳滤膜对膜过滤后的浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的胶原蛋白肽； j、喷雾干燥:对胶原蛋白肽进行喷雾干燥，制得胶原蛋白肽粉;喷雾温度为80-90°C，喷雾干燥后水产胶原蛋白肽粉的含水率小于等于5wt%。6.如权利要求5所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，在鱿鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用纳滤膜截留分子量在SOODa以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-800Da之间的胶原蛋白肽;在鳕鱼皮胶原蛋白肽粉的制备过程中，在进行多肽分级时，先用超滤膜截留分子量在100Da以上的胶原蛋白肽，再用纳滤膜截留分子量在200Da以上的胶原蛋白肽，得到分子量在200-1000Da之间的胶原蛋白肽。7.如权利要求5所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，所述磁性亲和微球由以下方法制得:将海藻酸钠、聚乙二醇、壳聚糖、正庚烷、乙酸、水按质量比2-3:1:2:0.5:3-5:100混合溶解，搅拌均匀后制得混合液A;向混合液A中添加混合液A质量4-6%的四氧化三铁磁粉并分散均匀，得到混合液B;对混合液B进行超声波分散，同时向混合液B中匀速滴加混合液B质量40-60%的乳化液，得到混合液C;先后向混合液C中添加混合液C质量0.1-0.2%的98wt%的戊二醛和混合液C质量0.5-1倍的2.5-3.5wt%的氯化钙溶液，充分搅拌，静置l_2h，生成磁性微球;利用磁场对液体中磁性微球进行聚集，取出磁性微球后进行清洗、干燥;将磁性微球浸泡在水中溶胀15-25mi η，然后取出磁性微球并添加到活化液中在35-45 °C下活化40-80min，磁性微球与活化液的固液比为0.5-1.0g/mL;活化后取出磁性微球并洗净，将磁性微球与肝素按质量比1.5-2.5:1进行混合，得到悬浮液，将悬浮液pH值调节至4-5，然后向悬浮液中添加悬浮液体积1.5-2.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺，在4 0C下静置12-18h;生成磁性亲和微球，最后从悬浮液中取出磁性亲和微球，洗净、干燥，备用。8.如权利要求7所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，所述乳化液为体积占比为30-40%的司盘-80无水乙醇混合液，乳化液在10-20min内滴加完毕。9.如权利要求7所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，所述活化液由lmol/L的氢氧化钠溶液、二甲基亚砜和环氧氯丙烷按体积比4-6:1:0.5-0.7组成。10.如权利要求5所述的一种创伤修复通用型水产胶原蛋白肽食品，其特征在于，所述鳕鱼皮胶原蛋白肽粉和所述鱿鱼皮胶原蛋白肽粉在制备过程中，在多肽分级之后、喷雾干燥之前，将目标分子量的胶原蛋白肽稀释10-30倍，向稀释液中添加含钙无机盐，在35-45°C下螯合10-20min，接着向稀释液中添加含砸无机盐，在35-45 °C下螯合10_20min ；其中含钙无机盐、含砸无机盐的质量分别为稀释液质量的0.1-0.2%。
【文档编号】C07K1/22GK105982331SQ201610314068
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2016年5月13日
【发明人】杨会成, 廖妙飞, 李瑞雪, 相兴伟, 郑斌, 付万冬, 郑平安, 洪瑶, 周宇芳
【申请人】浙江省海洋开发研究院