专利名称：一种检测烟草特有氮亚硝胺的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测氮亚硝胺的方法。特别是涉及一种检测烟草特有氮亚硝胺的方法。
背景技术：
氮亚硝胺化合物是潜在的致癌物质，而烟草中存在着致癌的烟草特有氮亚硝胺，已是不争的事实。尽管在生理条件下氮亚硝胺通常是稳定的，但其通过体内代谢活化却具有强烈的致癌作用。为了降低烟草特有氮亚硝胺对消费者造成的伤害，控制烟草制品中的氮亚硝胺含量，将成为衡量烟草制品的一项重要指标。为此，20世纪90年代以来，国内外都对烟草中氮亚硝胺的检测展开了相应的研究。如“Improved Methodology for thequantitative assessment of Tobacco-Specific N-Nitrosaminesin Tobacco by Supercritical Fluid Extraction”(J AgricFood chem.，1995，43916-922)介绍了一种用添加10％甲醇的硅胶柱超临界流体萃取烟草中氮亚硝胺的方法，萃取液过用正己烷处理的硅胶柱。先用正己烷和二氯甲烷淋洗，再用含有2％的甲醇二氯甲烷洗脱氮亚硝胺，浓缩后再经GC-TEA分析检测。GC的分析条件如下色谱柱DB-5，进样量2μl，进样温度220℃，程序升温初温40℃，保持5分钟；升温每分钟30℃至140℃保持10分钟；升温每分钟1℃至145℃保持5分钟；升温每分钟20℃至180℃保持10分钟。由于该法纯粹采用硅胶柱，会使许多酸性物质随同氮亚硝胺同时洗脱，影响纯化效果。又如“Analysis of tobacco-Specific Nitrosamines in Tobacco andtobacco Smoke”(NITROSAMINES AND RELATED n-NITROSOCOMPOUNDS，1994，369-371)介绍了一种分析烟草和烟气中氮亚硝胺的方法，首先，用含有20mM维生素C的柠檬酸缓冲液pH4.5提取5-10克烟草，再以NpePicA作为内标，用二氯甲烷萃取烟草提取液，然后，部分二氯甲烷过65克氧化铝层析柱，用250ml二氯甲烷洗脱得VNA组分，最后，用250ml二氯甲烷∶丙酮＝4∶1的淋洗液，得氮亚硝胺组分，用于GC-TEA分析。该方法由于采用纯粹的氧化铝柱，因此，难以完全洗脱氮亚硝胺，影响回收率。
发明内容
本发明就是为了解决纯化效果不佳、回收率低等问题，提供一种可提高纯化效果和回收率，且操作简便的检测烟草特有氮亚硝胺的方法。
本发明的技术方案是这样实现的A、在清洁、干燥的层析柱内依次加入经活化的氧化铝、硅胶和无水硫酸钠；B、将浓缩的烟气萃取样品加入层析柱，用二氯甲烷淋洗；C、采用2％～5％的甲醇/二氯甲烷溶液淋洗层析柱，收集全部洗脱液、浓缩；D、采用GC-TEA进行分析，GC的分析条件为进样口温度225℃，进样量为1～2μl，载气采用恒流速氦气，初始温度设定为50℃，程序升温，直至达到260℃后，再保持10分钟；TEA的分析条件为氧气流速10～20ml/min，炉温400℃～600℃，气相接口200℃～300℃；E、根据积分仪得到的峰面积比进行定量分析，得到检测结果。
本发明的有益效果为由于在层析柱中依次加入了经活化的氧化铝、硅胶和无水硫酸钠，有效提高了纯化效果和回收率。这是因为硅胶可以吸附一些非目标物质，排除其对GC分离的干扰，还可延长毛细管色谱柱的使用寿命。而碱性的氧化铝则可吸附酸性物质，达到纯化的目的。特别是将氧化铝层析和硅胶层析合二为一，减少了操作步骤，提高了回收率。本方法设定的GC-TEA分析条件，能够有效分离NNN、NAT、NAB、NNK四种检测对象，特别适用于烟气中烟草特有氮亚硝胺的精确定量
具体实施例方式
实施例一先将采集了20支9mg555卷烟烟气的滤片加入内标进行样品萃取，经浓缩至5ml后备用。在清洁、干燥的层析柱内依次加入经活化的氧化铝、硅胶和无水硫酸钠，并将浓缩的萃取样品加入层析柱。用二氯甲烷多次洗涤盛放浓缩样品的容器，洗涤液加入层析柱，再用适量的二氯甲烷进行淋洗。然后，采用浓度为2％～5％的甲醇/二氯甲烷溶液，淋洗层析柱，收集全部洗脱液，将其浓缩至1ml，供GC-TEA分析。分析的GC条件可设定为进样口温度225℃，进样量1～2μl，载气采用恒流速氦气，初始温度50℃，程序升温，直至达到260℃后，再保持10分钟。使得烟草特有氮亚硝胺中四种主要的物质NNN、NNK、NAB和NAT与内标有效分离，再通过TEA热能分析仪检测及定量各组分中的亚硝基含量。TEA的分析条件可设定为氧气流速10～20ml/min，炉温400℃～600℃，气相接口200℃～300℃。然后，根据积分仪得到的峰面积比进行定量分析，得到检测结果。由色谱图分析可知，信噪比较高，样品杂质很少，基本无干扰峰，样品纯化良好。目标峰在谱图上的位置分布均匀，内标峰与样品峰大小相近，分离度良好，峰形均对称尖锐。谱图峰形明显优于公开文献所报道的相关色谱图。此外，实验数据重复性良好。
实施例二以内标和NNN、NAB、NAT和NNK混合标样为测试对象，进行5组对照实验，采用的层析方法同上。层析柱内氧化铝、硅胶和无水硫酸钠的用量分别为10～30g，3～10g，3～10g，活化温度110℃，活化时间2小时。GC的分析条件为进样口温度225℃，进样量1μl，不分流。氦气的恒流速1/min，色谱柱可采用HP-5MS，也可采用DB-5或ULTRA-2毛细柱，柱前加1m保护柱。初始温度设定为50℃，保持2分钟，然后每分钟升温5℃～10℃，直至160℃～200℃，再保持5～10分钟，继续以每分钟升温5℃～10℃的速率至230℃，最后，每分钟升温30℃，直至达到260℃后，再保持10分钟。TEA的分析条件可设定为氧气流速10～20ml/min，炉温400℃～600℃，气相接口200℃～300℃。经检测，其重现性和准确度都较为理想，能够实现对烟气中烟草特有氮亚硝胺的精确定量。峰面积比与标样的回归系数优于0.999。在3倍噪声条件下，NNN、NAB和NAT检测下限优于10pg，NNK检测下限优于50pg。5组NNN、NNK、NAB和NAT含量的相对标准偏差(RSD％)分别为5.93、4.73、5.26、5.18；而其相应的回收率则分别是96.8％、96.5％、95.5％和93.2％。
权利要求
1.一种检测烟草特有氮亚硝胺的方法，其特征在于A、在清洁、干燥的层析柱内依次加入经活化的氧化铝、硅胶和无水硫酸钠；B、将浓缩的烟气萃取样品加入层析柱，用二氯甲烷淋洗；C、采用2％～5％的甲醇/二氯甲烷溶液淋洗层析柱，收集全部洗脱液、浓缩；D、采用GC-TEA进行分析，GC的分析条件为进样口温度225℃，进样量为1～2μl，载气采用恒流速氦气，初始温度设定为50℃，程序升温，直至达到260℃后，再保持10分钟；TEA的分析条件为氧气流速10～20ml/min，炉温400℃～600℃，气相接口200℃～300℃；E、根据积分仪得到的峰面积比进行定量分析，得到检测结果。
2.根据权利要求1所述的检测烟草特有氮亚硝胺的方法，其特征在于氧化铝、硅胶和无水硫酸钠的用量分别为10～30g，3～10g，3～10g，活化温度为110℃，活化时间2小时。
3.根据权利要求1、2所述的检测烟草特有氮亚硝胺的方法，其特征在于GC的分析条件为氦气的恒流速1～2.5ml/min，初始温度设定为50℃后，保持2分钟，然后每分钟升温5℃～10℃，直至160℃～200℃，再保持5～10分钟，继续以每分钟升温5℃～10℃的速率至230℃，最后，每分钟升温30℃，直至达到260℃后，再保持10分钟。
全文摘要
本发明揭示了一种检测烟草特有氮亚硝胺的方法。首先在清洁、干燥的层析柱内依次加入经活化的氧化铝、硅胶和无水硫酸钠,然后,将浓缩的萃取样品加入层析柱,用二氯甲烷淋洗。再采用2%～5%的甲醇/二氯甲烷溶液淋洗层析柱,收集全部洗脱液、浓缩。最后,采用GC－TEA进行分析,根据积分仪得到的峰面积比进行定量分析,得到检测结果。GC分析的条件可设定为:进样口温度225℃,进样量为1～2μl,载气采用恒流速氦气,初始温度设定为50℃,程序升温,直至达到260℃后,再保持10分钟。TEA的分析条件为:氧气流速10～20ml/min,炉温400℃～600℃,气相接口200℃～300℃。
文档编号A24B15/00GK1356069SQ0113927
公开日2002年7月3日 申请日期2001年12月28日 优先权日2001年12月28日
发明者金永明, 张怡春 申请人:上海烟草(集团)公司