专利名称：间歇性跛行治疗药的制作方法
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本发明涉及到间歇性跛行治疗药，更确切的说，本发明特别涉及到闭塞性动脉硬化症或闭塞性血管炎等外周循环障碍引起的间歇性跛行的治疗药。
间歇性跛行是由一定距离的步行运动引起的下肢肌肉的倦怠感与疼痛导致步行持续困难，但休息数分钟可使症状缓和并可再度步行，且这种情况反复的状态。
作为其原因之一，例如闭塞性动脉硬化症、闭塞性血栓血管炎、主动脉炎综合症、贝切特氏病、胶原病等的血管性疾病引起的外周动脉闭塞症。由于这些外周循环障碍，相对减少了肌肉运动时必要的血液量(组织氧饱和度低下)，积累乳酸等代谢产物并刺激感觉神经末梢，进而由于疼痛导致步行持续困难。
作为间歇性跛行的治疗药，一直使用的是具有红血球变形能改善作用的己酮可可碱，及作为抗血小板药、血管扩张药的西洛他唑(71界、美国心脏学会1998、讲演题号58)，但效果并不是十分令人满意。
作为该原因，例如存在药剂的评价方法、诊断方法及药剂的效力等方面的课题。以前的评价方法通过是患者主观叙述的步行距离的长短来进行，这具有缺乏客观性及重现性的缺点。另外作为诊断方法，有利用多普勒(ドプラ)法测定足关节部血压与上腕部血压的比值的方法，但这一值是静息时的值，作为运动时产生的间歇性跛行症状的诊断方法并不理想。
另一方面，用间歇性跛行患者进行的研究表明，近年来在临床现场进行间歇性跛行的药效评价及重症度评价采用的氧合血红蛋白恢复时间与组织氧饱和度的恢复时间之间具有极其良好的相关性(小见山高士等，Therapeutic Research，vol.17，No.4，213-215，1996)。
本发明又以提供在制备间歇性跛行治疗药方面有用的药剂为目的。
本发明又以提供间歇性跛行的治疗方法为目的。
本发明人等制成了临床上与间歇性跛行的症状十分相近的动物模型的同时，实施了评价方法及评价设备的改良，并且用此进行了悉心研究的结果，发现特开平8-3135号公报记载的血清素拮抗药或已知为抗血小板药的特定的哌啶衍生物，相比于现在已知的间歇性跛行治疗药显示出极高的效果，进而完成了本发明。
即，本发明为含有通式(1)表示的哌啶衍生物或其盐作为有效成分的间歇性跛行治疗药。 (式中，n表示2或3的整数，Y表示氢原子或卤素原子，X表示甲酰基、乙酰基或氢原子)。
本发明又提供上述通式(1)表示的哌啶衍生物或其盐在制备间歇性治疗药中的使用。
本发明又提供间歇性跛行的治疗方法，其特征为对间歇性跛行患者施用含有上述通式(1)表示的哌啶衍生物或其盐作为有效成分的间歇性治疗药的使用。
此外，本发明的化合物在外周循环损伤导致间歇性跛行时，尤其在闭塞性动脉硬化症导致该外周循环损伤时特别有效。并且，本发明的通式(1)涉及的化合物中，n为2、Y为氢原子、X为甲酰基的化合物特别有效。
实施本发明的最佳方案本发明的通式(1)表示的哌啶衍生物为已知的化合物，例如可通过特开平8-3135号公报记载的方法来制备。举一个例子，包含在通式(1)中，在本发明的化合物中特别有用的，用通式(2)表示的1-甲酰基-N-(2-(4-(5H-二苯并[a，d]环庚烯-5-亚基)-1-哌啶基))乙基异哌啶甲酰胺可通过下述步骤合成二-叔丁基二碳酸酯与2-氨基乙基溴化物溴氢酸盐在碳酸氢钠存在下进行反应，得到N-叔丁氧基羰基-2-溴乙胺。随后这一化合物与4-(5H-二苯并[a，d]环庚烯-5-亚基)哌啶在三乙胺等碱存在下进行缩合，得到4-(5H-二苯并[a，d]环庚烯-5-亚基)-1-(2-叔丁氧基羰基氨基)乙基)哌啶。进而得到的化合物通过4M盐酸/二噁烷等制备成脱去叔丁氧基羰基的化合物，并与1-甲酰基异哌啶甲酸通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺等缩合剂进行缩合，最后可得到目的化合物。 通过这种制备方法得到的化合物以游离体或其盐的形式提纯出。提纯可通过萃取、浓缩、蒸馏、如特开平9-176119号公报记载的结晶化、各种色谱等来进行。
本发明的通式(1)中，n优选2，Y优选氢原子。再有，X优选甲酰基。其中，本发明特别优选n为2、Y为氢原子、X为甲酰基的上述通式(2)表示的化合物。
此外，作为本发明的哌啶衍生物的药学上可允许的盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、乳酸、水杨酸、扁桃酸、柠檬酸、草酸、马来酸、富马酸、酒石酸、丹宁酸、苹果酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸等有机酸的酸附加盐。
本发明的哌啶衍生物或其药学上可允许的盐作为间歇性跛行的治疗药使用时，其剂型如片剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、糖衣剂、乳化剂、胶囊剂、溶液剂、注射剂、栓剂等。这些制剂可用通常制剂化过程中使用的载体和赋形剂、其他制剂辅剂按常规方法制备。
使用时的施用途径可以是口服途径、非口服途径任意一种，施用量随患者的年龄、体重、状况及施用方法而不同。通常，成人的每天施用量，口服施用时0.01～500mg，优选0.1mg～50mg；非口服施用时1μg～100mg，优选0.01～10mg。此外，本发明的化合物作为间歇性跛行治疗药使用时，特别是通过口服施用，可以有效地利用本剂。参考例1兔间歇性跛行模型的制备雄性新西兰白兔(New Zealand White Rabbit)用含1％胆固醇的RC4食物(东方酵母(オリエンタル酵母))喂食4周(100g/天/只)的组(高胆固醇食物组8只)和用普通RC4食物(东方酵母)喂食的组(普通食物组6只)在氯胺酮+甲苯噻嗪麻醉下，成仰卧位并切开腹股沟(蹊)部后，露出右大腿动脉，插入7cm的fogarty气球导管，在右髂骨动脉内膨胀成直径5mm的同时实施三次牵引气胀损伤，然后结扎右大腿动脉。手术后3天，在氯胺酮+甲苯噻嗪麻醉下，成仰卧位并切开两侧的臀部及下肢后面。在两腓肠肌内侧部直接安装近红外分光装置的探针(プロ一プ)，作为运动负荷，在两侧的座骨神经施加了1Hz、2分钟的电刺激。
运动负荷后静息状态下，用全波长型近红外装置测定运动中下降的组织氧饱和度恢复的过程，并得出两足的组织氧饱和度的恢复时间。作为全波长型近红外装置，使用几乎可同时测定两侧腓肠肌的组织氧饱和度的、经改良的全波长型近红外分光装置(MCPD-2000，大塜电子)，近红外的收发后间距离为5mm。恢复时间的定义为，求得运动负荷结束后的组织氧饱和度(运动后最小组织氧饱和度)与运动恢复后的组织氧饱和度(运动后最大组织氧饱和度)的中间值——1/2恢复组织氧饱和度(1/2StO2)后，运动负荷结束时到1/2StO2的时间。
图1表示损伤足的组织氧饱和度和正常足的组织氧饱和度的恢复过程的典型例。
表1表示高胆固醇食物组中气胀损伤及结扎的右足(损伤足)和未处置的左足(正常足)各自的恢复时间的结果，及普通食物组中气胀损伤及结扎足(损伤足)的恢复时间的结果。
表1组别 例数(只)组织氧饱和度的恢复时间(分)普通食物组 损伤足 6 1.9±0.55高胆固醇食物组 损伤足 8 3.8±0.46高胆固醇食物组 健康足 8 0.26±0.06由表1也可以明确的是，上述记载的高胆固醇食物组及普通食物组的损伤足的组织氧饱和度的恢复时间与正常足的恢复时间相比均明显变长，因此在本模型中，通过采用这一评价方法可定量地且客观地测定组织内的氧动态。
再者，比较高胆固醇食物组与普通食物组的损伤足的恢复时间，可知高胆固醇食物组的恢复时间明显地延长了。这可能是由于喂食高胆固醇食物导致动脉硬化，并因此引起循环受阻，进而恢复时间相比于普通食物组加长。由此，可认为喂食高胆固醇食物的模型是更好反映临床上间歇性跛行的客观动物模型，并在以下药剂的评价中使用了高胆固醇食物组的模型。
从手术后第二天到近红外分光测定日，将通式(2)表示的1-甲酰基-N-(2-(4-(5H-二苯并[a，d]环庚烯-5-亚基)-1-哌啶基))乙基异哌啶甲酰胺用水溶解成3mg/kg，每天一次进行口服施用。对照组每天一次口服施用蒸馏水。手术后3天，用近红外分光装置测定运动后组织氧饱和度的恢复时间。结果如表2所示。
表2组别 例数(只) 组织氧饱和度的恢复时间(分)对照组8 3.8±0.46通式(2)的化合物 9 2.0±0.40(3mg/kg)比较例1用己酮可可碱300mg/kg替代通式(2)表示的化合物，与实施例1进行相同处理并测定。结果如表3所示。
表3组别 例数(只) 组织氧饱和度的恢复时间(分)对照组6 3.8±1.28己酮可可碱8 7.1±1.65(300mg/kg)比较例2用西洛他唑100mg/kg替代通式(2)表示的化合物，与实施例2进行相同处理并测定。结果如表4所示。
表4组别 例数(只) 组织氧饱和度的恢复时间(分)对照组6 2.8±0.97西洛他唑 6 3.5±0.52(100mg/kg)比较例3用盐酸沙格雷酯(J.Med.Chem.，33，1818(1990))100mg/kg替代通式(2)表示的化合物，与实施例2进行相同处理并测定。结果如表5所示。
表5组别 例数(只) 组织氧饱和度的恢复时间(分)对照组 73.9±1.08盐酸沙格雷酯 63.4±1.33(300mg/kg)如表2、3、4和5所示，本发明的药剂有效缩短了喂食高胆固醇食物的兔的损伤足损伤3天后的运动后组织氧饱和度的恢复时间，并改善了下肢肌肉内氧动态。与此相比，作为间歇性跛行治疗药使用的己酮可可碱，在300mg/kg用量时，也没有显示出恢复时间的缩短。另外，与己酮可可碱相比显出更为优异的治疗效果的西洛他唑，在100mg/kg的用量时，没有显示出与己酮可可碱相比缩短了恢复时间的恢复时间的缩短效果。再者，被认为是间歇性跛行有效治疗药的盐酸沙格雷酯，在300mg/kg用量时，也没有显示出恢复时间的缩短。另外，所有动物均没有出现下肢的亏血坏死。
由实验结果可以明确，对于临床上表现为间歇性跛行的本动物模型，本发明的药剂可改善运动后下肢肌肉内的氧动态，并具有间歇性跛行的治疗作用。参考例2大鼠间歇性跛行模型的制备将Corcico等的模型(Corcico N.Cardiovasc.Drugs Ther.7241-251(1993))进行改良，并使雄性SD大鼠在大鼠踏旋器(夏目制作所)上，以10m/min的速度行走，每隔3分钟以5m/min阶段性地提高行走速度，测定大鼠的到不能行走为止的时间(最大行走时间)，并测定各个体的行走能力。次日，将这些大鼠用戊巴比妥(pentobarbital)进行麻醉，在左右的大腿动脉注射3.5mg/ml的月桂酸钠溶液(SIGMA；溶解于0.5％的葡萄糖水溶液)100μl/leg，诱发间歇性跛行。
注射月桂酸后1天、3天、7天、14天、21天，用上述方法测定的最大行走时间。结果如表6所示。
表6测定日 例数最大步行时间(秒)月桂酸施用前 5 1122±83月桂酸施用后1天 5 416±67月桂酸施用后3天 5 581±156月桂酸施用后7天 5 726±103月桂酸施用后14天 3 806±95月桂酸施用后21天 3 968±58由表6可以明确的是，与月桂酸注射前的行走能力相比，月桂酸注射后的最大行走时间、即最大步行距离明显降低。这是由基于内皮损伤的血栓形成等导致的外周循环阻塞诱发，并且由其组织形态恰似于临床上闭塞性血栓血管炎，及有效减少了最大步行距离等方面来讲，这一模型更为客观地反映了临床上的间歇性跛行。本模型制备中，给大腿动脉注射6mg/ml的月桂酸溶液100μl/leg时，由注射一周后引发了下肢坏死及脱落这一点来讲，本模型为再现间歇性跛行的有用的模型。
另外，月桂酸注射后的最大步行时间、即最大步行距离在注射后1天后变为最短，随着时间虽可逐渐改善，但注射21天后却没有完全改善。再者，注射1天后，几乎没有看到下肢的亏血坏死，但发现有足的脱力现象，且这种脱力现象也可逐渐改善。
表7月桂酸施用后最大步行时间随时间的变化组别 例数 1天后 3天后 7天后(只)对照组 5 100 132±18177±18通式(2)的化合物 5 100 189±10256±7(3mg/kg/天)己酮可可碱 5 100 178±22189±19(60mg/kg/天)表7(续)月桂酸施用后最大步行时间随时间的变化组别 14天后 21天后对照组 198±25 215±34通式(2)的化合物252±24 317±40(3mg/kg/天)己酮可可碱 211±64 249±13(60mg/kg/天)
表8下肢病变指数随时间的变化1天后 3天后 7天后 14天后 21天后对照组 4.03.83.8 3.8 3.4己酮可可碱 4.03.73.7 3.3 2.5(60mg/kg/天)通式(2)的化合物4.03.22.2 1.7 1.5(3mg/kg/天)如表7所示，与对照组相比，施用3mg/kg的本发明的药剂、通式(2)表示的哌啶衍生物的盐酸盐的组，在注射7天后，有效地增加了月桂酸注射后减少的最大步行时间。而施用己酮可可碱的组，在60mg/kg的用量时，虽也表现出增加倾向，但其作用并不十分有效。再者，如表7所示，与对照组相比，对于下肢的病变，施用3mg/kg的本发明的药剂、通式(2)表示的哌啶衍生物的盐酸盐的组也表现出了改善作用。而施用己酮可可碱的组，虽表现出改善效果，但其作用并不十分明显。
由此实验结果可以明确，以本发明涉及的哌啶衍生物的盐酸盐作为有效成分的药剂可改善下肢的病变，及可改善最大步行时间、即最大步行距离，并具有间歇性跛行的治疗作用。进而也可以明确，效果虽不十分明显、但迄今为止临床上作为间歇性跛行治疗药一直使用的己酮可可碱也可表现出最大步行时间的增加倾向，但与其作用相比，本发明的药剂显示出更为优异的改善效果，因此可以期待本发明的药剂在临床上会有更好的效果。
以本发明涉及的哌啶衍生物的盐酸盐作为有效成分的药剂，在间歇性跛行和随被认为是其病因的动脉硬化的进展(胆固醇在内腔中的蓄积，血栓形成)而带来的闭塞性动脉硬化症、闭塞性血栓血管炎等外周循环障碍方面，可以期待具有间歇性跛行的治疗及预防效果。
权利要求
1.一种间歇性跛行治疗药，它以下述通式(1)表示的哌啶衍生物或其药学上可允许的盐作为有效成分， 式中，n表示2或3的整数，Y表示氢原子或卤素原子，X表示甲酰基、乙酰基或氢原子。
2.根据权利要求1记载的间歇性跛行治疗药，其中，通式(1)中的n为2。
3.根据权利要求1记载的间歇性跛行治疗药，其中，通式(1)中的Y为氢原子。
4.根据权利要求1记载的间歇性跛行治疗药，其中，通式(1)中的X为甲酰基。
5.根据权利要求1记载的间歇性跛行治疗药，其中，通式(1)中的n为2，Y为氢原子，X为甲酰基。
6.根据权利要求1记载的间歇性跛行治疗药，其特征在于间歇性跛行是由外周循环损伤导致的。
7.根据权利要求6记载的间歇性跛行治疗药，其特征在于外周循环损伤是由闭塞性动脉硬化症导致的。
8.下述通式(1)表示的哌啶衍生物或其药学上可允许的盐在制备间歇性跛行治疗药中的应用， 式中，n表示2或3的整数，Y表示氢原子或卤素原子，X表示甲酰基、乙酰基或氢原子。
9.根据权利要求8记载的应用，其中，通式(1)中的n为2。
10.根据权利要求8记载的应用，其中，通式(1)中的Y为氢原子。
11.根据权利要求8记载的应用，其中，通式(1)中的X为甲酰基。
12.根据权利要求8记载的应用，其中，通式(1)中的n为2，Y为氢原子，X为甲酰基。
13.根据权利要求8记载的应用，其特征在于间歇性跛行是由外周循环损伤导致的。
14.根据权利要求13记载的应用，其特征在于外周循环损伤是由闭塞性动脉硬化症导致的。
全文摘要
本发明提供以通式(1)表示的1－甲酰基－N－(2－(4－(5H－二苯并[a，d]环庚烯－5－亚基)－1－哌啶基))乙基异哌啶甲酰胺，或其类似物或它们的药学上可允许的盐作为有效成分的间歇性跛行治疗药(式中，n表示2或3的整数，Y表示氢原子或卤素原子，X表示甲酰基、乙酰基或氢原子。)。
文档编号A61P21/00GK1407892SQ00806843
公开日2003年4月2日 申请日期2000年2月24日 优先权日1999年2月26日
发明者小见山高士, 木原秀晃, 广濑健, 吉元良太, 重松宏 申请人:味之素株式会社