专利名称：含疏水氨基酸的干燥组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及减少和/或防止糖类和氨基酸合用所导致的着色的方法。具体而言，本发明提供了(在氨基酸与糖类一同使用的情况下)与糖类结合时具有抗着色效果的氨基酸。本发明还提供了防止因使用氨基酸而导致的着色的方法。
本发明还涉及稳定含药理活性蛋白性物质的干燥组合物的方法。具体而言，本发明涉及其中加入了糖类和氨基酸的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物。
但众所周知，当这些用作药理活性蛋白性物质的稳定剂的糖类与氨基酸一起使用时，因Maillard反应等而导致着色。因此，含糖类和氨基酸的药物组合物的缺陷在于随时间推移而着色。
本发明的一个目的是提供具有抗着色效果的氨基酸，用于减少和/或防止糖类和氨基酸合用所导致的着色。具体而言，本发明提供了抗着色剂，其含有氨基酸作为必需成分，适用于防止含糖类干燥组合物随时间变化而着色。本发明也提供了防止着色的方法，其中使用了所述的氨基酸。
本发明的另一目的是提供一种氨基酸，其可作为稳定剂用于含糖类干燥组合物，特别是含糖类蛋白性干燥组合物。更具体而言，本发明提供了含糖类和氨基酸的干燥组合物。
换言之，本发明首先涉及使用疏水氨基酸防止糖类和氨基酸合用所导致的着色，具体包括如下实施方式。
1.抗着色剂第1项.一种抗着色剂，其含有适用于防止含糖类干燥组合物着色的疏水氨基酸作为必需成分。
第2项.根据第1项的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于2。
第3项.根据第1项的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于3.8。
第4项.根据第1项的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数为3.8-4.5。
第5项.根据第1项的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸是选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的至少一种氨基酸。
第6项.根据第1项的抗着色剂，其中相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，所述疏水氨基酸含量为0.1重量份-200重量份。
第7项.根据第1项的抗着色剂，其中所述糖类是选自还原糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40的至少一种。
第8项.根据第1项的抗着色剂，其中相对于每100wt.％干燥组合物总重，所述疏水氨基酸的浓度为0.1wt.％-70wt.％。
第9项.根据第1项的抗着色剂，其中所述干燥组合物是冻干的组合物，其包含药理活性蛋白性物质作为活性成分。
第10项.根据第1项的抗着色剂，其中所述药理活性蛋白性物质是选自抗病毒多肽、免疫调节性多肽和补血性多肽的至少一种物质。
第11项.根据第1项的抗着色剂，其中所述药理活性蛋白性物质是干扰素。
2.防止着色的方法第12项.一种防止含糖类干燥组合物着色的方法，包括将疏水氨基酸加入所述含糖类干燥组合物中。
第13项.根据第12项的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于2。
第14项.根据第12项的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于3.8。
第15项.根据第12项的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数为3.8-4.5。
第16项.根据第12项的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸是选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的至少一种氨基酸。
第17项.根据第12项的防止着色的方法，其中相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，所述疏水氨基酸含量为0.1重量份-200重量份。
第18项.根据第12项的防止着色的方法，其中所述糖类是选自还原糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40的至少一种。
第19项.根据第12项的防止着色的方法，其中相对于每100wt.％干燥组合物总重，所述疏水氨基酸的浓度为0.1wt.％-70wt.％。
第20项.根据第12项的防止着色的方法，其中所述干燥组合物是冻干的组合物，其包含药理活性蛋白性物质作为活性成分。
第21项.根据第20项的防止着色的方法，其中所述药理活性蛋白性物质是选自抗病毒多肽、免疫调节性多肽和补血性多肽的至少一种物质。
第22项.根据第12项的防止着色的方法，其中所述药理活性蛋白性物质是干扰素。
3.疏水氨基酸的应用第23项.疏水氨基酸在防止含糖类干燥组合物着色中的应用。
第24项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于2。
第25项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于3.8。
第26项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数为3.8-4.5。
第27项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述疏水氨基酸是选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的至少一种氨基酸。
第28项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，所述疏水氨基酸含量为0.1重量份-200重量份。
第29项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述糖类是选自还原糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40的至少一种。
第30项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中相对于每100wt.％干燥组合物总重，所述疏水氨基酸的浓度为0.1wt.％-70wt.％。
第31项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述干燥组合物是冻干的组合物，其包含药理活性蛋白性物质作为活性成分。
第32项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述药理活性蛋白性物质是选自抗病毒多肽、免疫调节性多肽和补血性多肽的至少一种物质。
第33项.根据第23项的疏水氨基酸的应用，其中所述药理活性蛋白性物质是干扰素。
本发明可有效减少或防止含糖类干燥组合物，特别是含糖类和药理活性蛋白性物质的组合物随时间变化而着色。由此，本发明可提供具有优异稳定性的干燥组合物。
其次，本发明涉及以稳定方式含有药理活性蛋白性物质的干燥组合物，所述稳定方式包括防止着色。
4.干燥组合物第34项.含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中加入了糖类和疏水氨基酸作为稳定剂。
第35项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于2。
第36项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于3.8。
第37项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数为3.8-4.5。
第38项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸是选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的至少一种氨基酸。
第39项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，所述疏水氨基酸含量为0.1重量份-200重量份。
第40项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述糖类是选自还原糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40的至少一种。
第41项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中相对于每100wt.％干燥组合物总重，所述疏水氨基酸的浓度为0.1wt.％-70wt.％。
第42项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其是冻干的组合物。
第43项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述药理活性蛋白性物质是选自抗病毒多肽、免疫调节性多肽和补血性多肽的至少一种物质。
第44项.根据第34项的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述药理活性蛋白性物质是干扰素。
通过使糖类和疏水氨基酸组合，本发明可提供干燥组合物，该干燥组合物含药理活性蛋白性物质作为活性成分，其即便在干燥(冻干等)完成后和在保存过程中仍处于稳定状态。发明的最佳实施方式本发明的抗着色剂包括疏水氨基酸作为必需成分。本发明的抗着色剂可有效防止随时间推移而着色，尤其是在使用含糖类干燥组合物的情况下。
用于本发明的疏水氨基酸是那些亲水性指数(Hydropathy index)是大约2或更大的氨基酸(Jack Kyte和Russel F.Doolittel，“显示蛋白亲水性的简单方法”(A Simple Method for Displaying the HydropathicCharacter of a Protein.)J.Mol.Biol.157(1982)105-132)。任何具有上述特性的氨基酸均可用于本发明，无论其是否是构成蛋白的氨基酸。所述疏水氨基酸可优选其亲水性指数是大约2.8或更大的氨基酸如缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸；更优选亲水性指数是大约3.8或更大的氨基酸；最优选亲水性指数是大约3.8-大约4.5的氨基酸如缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
用于本发明的疏水氨基酸类可以是二肽、三肽、盐或酰胺形式。疏水氨基酸二肽的例子是亮氨酰-缬氨酸、异亮氨酰-缬氨酸、异亮氨酰-亮氨酸、亮氨酰-甘氨酸等。疏水氨基酸三肽的例子是异亮氨酰-亮氨酰-缬氨酸、亮氨酰-甘氨酰-甘氨酸等。疏水氨基酸盐的例子包括疏水氨基酸与钠、钾等碱金属构成的盐或与钙、镁等碱土金属构成的盐；疏水氨基酸与磷酸、盐酸、氢溴酸等无机酸或与磺酸等有机酸构成的加成盐。更具体的疏水氨基酸盐的例子是L-亮氨酰胺盐酸盐、L-异亮氨酰-β-萘基酰胺氢溴酸盐、L-缬氨酸-β-萘基酰胺等。
这些疏水氨基酸(包括那些盐或酰胺形式)可单独使用或以任意组合使用。
本发明的抗着色剂靶向糖类，普遍已知所述糖类在与氨基酸组合时因Maillard反应而随时间推移导致着色。具体而言，被靶向的糖类包括普遍已知用作干燥药物组合物，特别是含药理活性蛋白性物质的药物组合物的稳定剂的那些糖类。更具体而言，包括葡萄糖、果糖、麦芽糖等还原糖；蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40等。这些糖类可单独或以任意组合加入干燥组合物中。在这些糖类中，优选蔗糖和麦芽糖。
干燥组合物中糖类含量根据所含糖类的类型而变化，不能一概而论。但相对于每100wt.％干燥组合物，糖类的一般用量是10wt.％-90wt.％，有时为20wt.％-80wt.％，还有时为40wt.％-80wt.％。上述比率适宜在所用糖类为蔗糖时应用。
干燥组合物中疏水氨基酸含量根据干燥组合物中所含糖类的类型而变化，不能一概而论。但相对于每100wt.％干燥组合物，疏水氨基酸的一般含量是约0.1wt.％-约70wt.％，优选为约0.25wt.％-约60wt.％，更优选为约0.5wt.％-约50wt.％，更更优选为约1wt.％-约50wt.％。
对干燥组合物中所含的疏水氨基酸与糖类之比没有限制。但氨基酸用量，相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，一般为约0.1重量份-约200重量份，优选为约0.2重量份-约100重量份，更优选为约1重量份-约100重量份。
其中可使用本发明抗着色剂的干燥组合物包括含药理活性蛋白性物质作为活性成分的组合物。
对使用的药理活性蛋白性物质没有限制，只要其是药理上有效的蛋白或肽(包括多肽)即可。药理活性蛋白性物质的例子是酶、血红蛋白、免疫球蛋白、激素、血液凝集因子等蛋白；抗病毒多肽(如干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ等)、免疫调节性多肽(如白介素-1，2，3，4，5，6，7，8等)、补血性多肽(如促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)等多肽等等。蛋白和肽可单独或以任意组合包含在干燥组合物中。在这些药理活性蛋白性物质中，优选干扰素。
上述蛋白和肽包括那些天然存在、由重组DNA技术产生或化学合成的蛋白和肽。
对药理活性蛋白性物质与干燥组合物的比例没有限制。药理活性蛋白性物质用量根据所用类型而变化；但其浓度的具体例子为，相对于每100wt.％干燥组合物，一般是不大于20wt.％，有时为0.00001wt.％-10wt.％，有时为0.0001wt.％-10wt.％，有时为0.001wt.％-10wt.％，有时为0.001wt.％-5wt.％。
其中使用本发明抗着色剂的干燥组合物可进一步包含人血清白蛋白、极性氨基酸或其盐(如亲水性指数不大于0的氨基酸或其盐)、无机盐、明胶、表面活性剂、缓冲液等。
本发明抗着色剂的用法不受限制，只要将它们用于上述干燥组合物即可。优选在制备干燥组合物(干燥产品)之前(即，干燥前)将抗着色剂加入含糖类和/或药理活性蛋白性物质的溶液中，或者将抗着色剂与糖类和/或药理活性蛋白性物质一起混入溶液中。
对抗着色剂与干燥组合物的比例没有限制。但相对于每100wt.％干燥组合物，疏水氨基酸一般是约0.1wt.％-约70wt.％，优选为约0.25wt.％-约60wt.％，更优选为约0.5wt.％-约50wt.％，更更优选为约1wt.％-约50wt.％。
相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，疏水氨基酸的含量一般为约0.1重量份-约200重量份，优选为约0.2重量份-约100重量份，更优选为约1重量份-约100重量份。
本发明涉及防止含糖类干燥组合物着色的方法，包括使用疏水氨基酸。疏水氨基酸、糖类、干燥组合物的具体例子以及疏水氨基酸的用法如上所述。
此外，本发明还提供了疏水氨基酸作为稳定剂的用途。疏水氨基酸在与糖类组合时适宜用作稳定剂，并且特别有效地用作含药理活性蛋白性物质的干燥组合物的稳定剂。
本发明还涉及含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中使用了由疏水氨基酸和糖类组成的稳定剂。
对本发明中所用糖类没有限制，可包括普遍用作干燥药物组合物、特别是含药理活性蛋白性物质的干燥组合物的稳定剂或起该稳定剂作用的糖类。具体例子是蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖等二糖；甘露醇、木糖醇等糖醇；右旋糖40、右旋糖70；硫酸软骨素等多糖。这些糖类可单独或以任意组合加入干燥组合物中。在这些糖类中，优选蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖等二糖，更优选蔗糖。
对被靶向的干燥组合物中的糖类含量没有限制，但是，相对于每100wt.％干燥组合物，一般可以是约10wt.％-约90wt.％，有时为约20wt.％-约80wt.％，还有时为约40wt.％-约80wt.％。上述比率适宜在使用蔗糖等二糖时应用。
对干燥组合物中疏水氨基酸含量没有限制，但是，相对于每100wt.％干燥组合物，一般是约0.1wt.％-约70wt.％，优选为约0.25wt.％-约60wt.％，更优选为约0.5wt.％-约50wt.％，更更优选为约1wt.％-约50wt.％。干燥组合物中所含的疏水氨基酸与糖类之比如下，相对于每100重量份糖类，疏水氨基酸一般为约0.1重量份-约200重量份，优选为约0.2重量份-约100重量份，更优选为约1重量份-约100重量份。
表1
着色评价- 没有观察到着色± 观察到微量着色+ 观察到少量着色++ 观察到大量着色+++ 观察到深度着色表2
如表1所示，蔗糖与甘氨酸合用以及蔗糖与盐酸精氨酸合用造成冻干组合物随时间推移而产生着色。蔗糖与亲水性指数为3.8或更大的疏水氨基酸合用可防止冻干组合物着色。此外，如表2所示，与单独使用蔗糖的稳定性相比，在合用蔗糖和亲水性指数(HP指数)为3.8或更大的疏水氨基酸时，IFN-α稳定性得以改善。
表3
着色评价- 没有观察到着色± 观察到微量着色+ 观察到少量着色++ 观察到大量着色+++观察到深度着色如表3所示，麦芽糖与甘氨酸合用以及麦芽糖与盐酸精氨酸合用造成冻干组合物随时间推移而产生着色。麦芽糖与亲水性指数为3.8或更大的疏水氨基酸合用可防止冻干组合物着色。
表4
如表4所示，与单独使用海藻糖时的稳定性相比，在海藻糖和亲水性指数(HP指数)为3.8或更大的疏水氨基酸合用时，IFN-α稳定性得以改善。
表5
着色评价- 没有观察到着色± 观察到微量着色+ 观察到少量着色++ 观察到大量着色+++观察到深度着色如表5所示，蔗糖与甘氨酸合用以及蔗糖与盐酸精氨酸合用造成冻干组合物随时间推移而产生着色。蔗糖与亲水性指数为3.8或更大的疏水氨基酸合用可显著防止冻干组合物着色。
除了用0.25ml促红细胞生成素母液(效价2×107IU/ml)代替0.25ml IFN-α母液(效价2×107IU/ml)外，以与实施例10-12相同的方式获得冻干组合物。将所得冻干的组合物在70℃下静置，随时间推移观察其着色程度。结果显示，如同实施例10-12，蔗糖与亲水性指数为3.8或更大的疏水氨基酸合用可防止冻干组合物着色。
表6
着色评价- 没有观察到着色± 观察到微量着色
+ 观察到少量着色++观察到大量着色+++ 观察到深度着色如表6所示，含蔗糖与甘氨酸的冻干组合物随时间推移而产生着色。但除蔗糖和甘氨酸外还使用亲水性指数为3.8或更大的疏水氨基酸可显著防止冻干组合物着色。
工业实用性本发明的抗着色剂可显著减少和/或防止因糖类和氨基酸合用所导致的干燥组合物着色。该抗着色剂对于防止含糖类和药理活性蛋白性物质的干燥组合物着色是特别有用的。基于另一观点，所述抗着色剂还可用作含糖类和药理活性蛋白性物质的干燥组合物的稳定剂。因此，本发明提供了含药理活性蛋白性物质和抗着色剂或稳定剂的干燥组合物，即，其中加入了糖类和氨基酸的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，该组合物具有优异的稳定性，根据随时间推移所观察到的，其显著防止着色并防止活性降低。
权利要求
1.一种抗着色剂，其含有适用于防止含糖类干燥组合物着色的疏水氨基酸作为必需成分。
2.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于2。
3.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于3.8。
4.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数为3.8-4.5。
5.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述疏水氨基酸是选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的至少一种氨基酸。
6.根据权利要求1的抗着色剂，其中相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，所述疏水氨基酸含量为0.1重量份-200重量份。
7.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述糖类是选自还原糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40的至少一种。
8.根据权利要求1的抗着色剂，其中相对于每100wt.％干燥组合物总重，所述疏水氨基酸的浓度为0.1wt.％-70wt.％。
9.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述干燥组合物是冻干的组合物，其包含药理活性蛋白性物质作为活性成分。
10.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述药理活性蛋白性物质是选自抗病毒多肽、免疫调节性多肽和补血性多肽的至少一种物质。
11.根据权利要求1的抗着色剂，其中所述药理活性蛋白性物质是干扰素。
12.防止含糖类干燥组合物着色的方法，包括将疏水氨基酸加入所述含糖类干燥组合物中。
13.根据权利要求12的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于2。
14.根据权利要求12的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于3.8。
15.根据权利要求12的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数在3.8-4.5范围内。
16.根据权利要求12的防止着色的方法，其中所述疏水氨基酸是选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的至少一种氨基酸。
17.根据权利要求12的防止着色的方法，其中相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，所述疏水氨基酸的用量为0.1重量份-200重量份。
18.根据权利要求12的防止着色的方法，其中所述糖类是选自还原糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40的至少一种。
19.根据权利要求12的防止着色的方法，其中相对于每100wt.％干燥组合物总重，所述疏水氨基酸的浓度为0.1wt.％-70wt.％。
20.根据权利要求12的防止着色的方法，其中所述干燥组合物是冻干的组合物，其包含药理活性蛋白性物质作为活性成分。
21.根据权利要求20的防止着色的方法，其中所述药理活性蛋白性物质是选自抗病毒多肽、免疫调节性多肽和补血性多肽的至少一种物质。
22.根据权利要求12的防止着色的方法，其中所述药理活性蛋白性物质是干扰素。
23.含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中加入了糖类和疏水氨基酸作为稳定剂。
24.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于2。
25.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数不小于3.8。
26.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸的亲水性指数在3.8-4.5的范围内。
27.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述疏水氨基酸是选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的至少一种氨基酸。
28.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中相对于干燥组合物中所含的每100重量份糖类，所述疏水氨基酸含量为0.1重量份-200重量份。
29.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述糖类是选自还原糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇和右旋糖40的至少一种。
30.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中相对于每100wt.％干燥组合物总重，所述疏水氨基酸的浓度为0.1wt.％-70wt.％。
31.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其是冻干的组合物。
32.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述药理活性蛋白性物质是选自抗病毒多肽、免疫调节性多肽和补血性多肽的至少一种物质。
33.根据权利要求23的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物，其中所述药理活性蛋白性物质是干扰素。
34.疏水氨基酸在防止含糖类干燥组合物着色中的应用。
全文摘要
本发明提供了可用于减少或防止糖类和氨基酸合用所致着色的氨基酸，以及可作为稳定剂用于含药理活性蛋白性物质的干燥组合物的氨基酸。本发明还提供了着色抑制剂，其含有疏水氨基酸作为必需成分，适用于防止含糖类干燥组合物着色，提供了其特征在于使用疏水氨基酸防止含糖类干燥组合物着色的方法，还提供了进一步包含糖类及疏水氨基酸稳定剂的含药理活性蛋白性物质的干燥组合物。
文档编号A61K9/19GK1413241SQ00817722
公开日2003年4月23日 申请日期2000年12月22日 优先权日1999年12月24日
发明者山下亲正, 小富正昭 申请人:大塚制药株式会社