专利名称：吴茱萸碱在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及吴茱萸碱在制药领域中的用途，尤其涉及在制备抗肿瘤药中的新用途。
背景技术：
吴茱萸碱(Evodiamine)已公开的化学结构式为 吴茱萸碱可由芸香科植物吴茱萸中提取制得。已知该化合物具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻之功能。可以用作厥阴头痛、寒疝腹痛、寒湿脚气、经行腹痛、脘腹胀痛、呕吐吞酸、五更泄泻，外治口疮、高血压症。
发明内容
本发明的目的在于提供吴茱萸碱的新的药物中的用途。
本发明涉及吴茱萸碱在制备抗肿瘤药中的应用。
本发明是通过如下方式实现的。首先是通过化学方法提取获得吴茱萸总碱，然后将其干粉分装胶囊或配以丙二醇聚乙二醇混合溶液制成针剂。具体技术方案是采用天然植物吴茱萸为原料，用乙醇回流提取得醇提部分(即浸膏状物)，用盐酸溶液提取醇浸膏，酸性水提取液加浓氨水沉淀，除去上清液，滤取沉淀物，将沉淀物用氨水制成匀浆状，加入氨水制成浆状，再加入氯仿提取，静置、分离。氯仿提取液，用无水硫酸钠脱水、过滤，以常压水浴回收氯仿，经干燥后得吴茱萸总碱。
吴茱萸碱再经硅胶干柱层析分离，以石油醚加乙酸乙酯、水进行洗脱，再以薄板层析检查不同流份，合并以吴茱萸碱标准品Rf值一致部分，浓缩，氯仿、甲醇重结晶，即得到吴茱萸碱。
经实验证明吴茱萸总碱和美吴茱萸碱均具有明显的抑瘤作用，而且吴茱萸碱为吴茱萸总碱的主要抗肿瘤有效成份。所以在制药过程中，从简化提取工艺出发，往往直接采用吴茱萸总碱制成抗肿瘤药物。
取吴茱萸总碱为原料，用乙醇喷洒制成软材，过筛，制成颗粒，再进行干燥，过筛，即可装入胶囊，成为吴茱萸总碱胶囊剂。
将吴茱萸总碱溶入丙二醇，聚乙二醇混合液中，进行充分搅拌加适量注射用水，滤至澄明，即可制得吴茱萸总碱注射剂。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用吴茱萸总碱，吴茱萸碱，吴茱萸次碱和吴茱萸内脂的抗肿瘤试验及结果来说明其吴茱萸总碱及吴茱萸碱的抗肿瘤作用，从而说明其在制备抗肿瘤药中的新用途。
方法采用4种小鼠移植性肿瘤，即肉瘤-180(S-180)、小鼠宫颈癌-14(U14)、肝癌腹水型(HepA)和艾氏腹水癌(EAC)。实验小鼠随机分为对照组，SC生理盐水10ml·kg-1，环磷酰胺(ip15mg·kg-1)，总碱(sc96、48和24mg·kg-1)，吴茱萸碱(sc40、20和10mg·kg-1)吴茱萸次碱(sc50、25mg.kg-1)及吴茱萸内酯(sc56、28mg.kg-1)；各实验药物sc体积为10ml.kg-1。选取移植肿瘤生长良好，腹部膨隆明显小的小鼠，腹部皮肤消毒，用一次性无菌采血器经腹壁刺入腹腔，抽取腹水，放入无菌烧杯中以生理盐水稀释成1∶3的癌细胞混悬液，于每只实验小鼠右腋下接种0.2ml，各组动物于接种肿瘤次日开始给药，每日1次，连续给药10天。给药结束次日，将动物称重后脱臼处死，剥离出皮下肿块称重，比较各组肿瘤生长情况，各组瘤重与对照组差异显著性用“t”检验测定。
各组动物体重、肿瘤重量及抑瘤率统计结果见表1-12。
表1总碱(sc)对小鼠S180瘤重的影响(X±S)剂量动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后(g)(％)对照组 - 1020.3±1.25 27.2±3.29 1.32±0.32环磷酰胺15 1019.7±1.42 25.2±1.14 0.75±0.32***51.5总碱高 96 1019.6±1.43 26.3±2.45 0.78±0.42***43.2总碱中 48 1019.7±1.25 26.9±2.51 0.78±0.42**40.9总碱低 24 1019.3±0.95 27.3±3.47 0.94±0.43*28.8注与对照组比较，*p＜0.05**p＜0.01；***p＜0.001
表2总碱(sc)对小鼠U14瘤重的影响(X±S)剂量动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前给药后 (g) (％)对 照 组 - 10 19.8±1.48 27.0±3.80 1.54±0.57环磷酰胺 15 10 20.1±1.45 25.0±1.56 0.69±0.27***55.2总碱高96 10 19.2±1.14 26.2±3.05 0.74±0.48**51.9总碱中48 10 20.0±1.56 27.2±3.12 0.84±0.38**45.5总碱低24 10 20.3±0.95 27.9±3.54 1.03±0.47*33.1注与对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01***p＜0.001表3总碱(sc)对小鼠HepA瘤重的影响(X±S)剂量动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g) (％)对 照 组 - 10 20.2±1.48 27.8±4.05 1.98±0.94环磷酰胺15 10 19.8±1.32 25.6±1.08 0.71±0.21***64.1总碱高 96 10 19.5±1.35 26.9±2.13 0.79±0.41**60.1总碱中 48 10 19.6±1.35 27.9±3.73 1.10±0.51*44.4总碱低 24 10 19.2±1.32 27.1±4.01 1.21±0.67*38.9注与对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001表4总碱(sc)对小鼠EAC瘤重的影响(X±S)剂量动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g) (％)对 照 组- 10 19.5±1.35 27.6±3.57 1.56±0.52环磷酰胺15 10 19.4±1.27 24.9±1.20 0.57±0.20***63.5总碱高 96 10 19.9±1.60 25.8±1.32 0.69±0.28***55.8总碱中 48 10 19.4±1.58 27.0±2.79 0.91±0.46**41.7总碱低 24 10 19.5±1.35 26.6±2.84 1.04±0.45*33.3注与对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.0 1；***p＜0.001
表5吴茱萸碱(sc)对小鼠S180瘤重的影响(X±S)剂量动物数动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g)(％)对 照 组 - 1020.5±1.08 28.2±3.33 1.79±0.7环磷酰胺 15 1020.3±1.42 24.8±1.40 0.67±0.16***62.6吴茱萸碱 40 1020.0±1.33 25.7±1.64 0.71±0.19***60.3吴茱萸碱 20 1019.9±1.60 25.5±3.03 0.92±0.37**48.6吴茱萸碱 10 1019.9±1.45 26.7±1.89 1.16±0.49*35.2注与对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001表6吴茱萸碱(sc)对小鼠U14瘤重的影响(X±S)剂量动物数动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g)(％)对 照 组 - 1019.9±1.37 27.6±3.89 1.58±0.54环磷酰胺 15 1020.1±1.60 25.2±1.32 0.53±0.09***66.5吴茱萸碱 40 1019.8±1.14 25.0±1.81 0.68±0.36***57.0吴茱萸碱 20 1019.8±1.40 26.0±2.06 0.85±0.46**46.2吴茱萸碱 10 1020.0±1.49 26.2±2.78 1.01±0.46*36.1注与对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001表7吴茱萸碱(sc)对小鼠HepA瘤重的影响(X±S)剂量动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g)(％)对 照 组 - 1020.5±1.35 27.5±3.17 1.69±0.60环磷酰胺 15 1019.5±1.18 24.8±1.23 0.60±0.18***64.5吴茱萸碱 40 1019.8±1.23 26.4±1.96 0.81±0.52**52.1吴茱萸碱 20 1019.8±1.14 25.9±2.92 0.99±0.45**41.4吴茱萸碱 10 1019.9±1.52 26.8±3.68 1.12±0.57*33.7注与对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001
表8吴茱萸碱(sc)对小鼠EAC瘤重的影响(X±S)剂量动物数动物体重(g)瘤重抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g) (％)对 照 组- 1019.8±1.22 27.3±2.31 1.54±0.40环磷酰胺15 1019.9±1.37 25.5±1.08 0.67±0.26***65.5吴茱萸碱40 1019.9±1.52 27.3±3.40 0.84±0.35***45.6吴茱萸碱20 1019.6±1.43 26.0±1.89 0.93±0.52**39.6吴茱萸碱10 1020.0±1.49 26.4±3.63 1.04±0.45*32.5注与对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.0 1；***p＜0.001表9吴茱萸次碱、内酯(sc)对小鼠S180瘤重的影响(X±S)剂量 动物数 动物体重(g)瘤重抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g)(％)对 照 组- 1019.9±1.45 28.1±3.60 1.44±0.60环磷酰胺15 1020.0±1.49 25.4±1.35 0.59±0.15***59.0吴茱萸次碱 50 1019.9±1.45 27.0±1.94 1.08±0.37*31.9吴茱萸次碱 25 1020.1±1.37 25.9±1.73 1.04±0.24#27.8吴茱萸内酯 56 1019.5±1.35 25.6±1.17 1.14±0.21#28.5吴茱萸内酯 28 1019.6±1.08 26.5±1.43 1.09±0.29#24.3注与对照组比较，#p＞0.05*p＜0.05***p＜0.001表10吴茱萸次碱、内酯(sc)对小鼠U14瘤重的影响(X±S)剂量 动物数 动物体重(g)瘤重抑瘤率组 别mg.kg-1(n) 给药前 给药后 (g)(％)对 照 组- 1019.9±1.45 26.7±2.41 1.51±0.48环磷酰胺15 1020.0±1.65 25.5±1.65 0.77±0.26**49.0吴茱萸次碱 50 1019.6±0.21 25.8±1.99 1.06±0.28*29.8吴茱萸次碱 25 1020.0±1.99 26.4±1.90 1.16±0.30#23.2吴茱萸内酯 56 1019.8±1.32 26.1±2.08 1.08±0.39*28.5吴茱萸内酯 28 1019.5±1.65 26.8±2.97 1.22±0.#19.2注与对照组比较，#p＞0.05*p＜0.05；**p＜0.01
表11吴茱萸次碱、内酯(sc)对小鼠HepA瘤重的影响(X±S)剂量 动物数动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n)给药前给药后 (g) (％)对照组- 10 19.5±1.35 26.3±1.95 1.38±0.56环磷酰胺 1510 20.0±1.49 24.8±1.23 0.63±0.13***56.5吴茱萸次碱5010 19.6±1.43 26.2±2.20 1.08±0.19#21.7吴茱萸次碱2510 20.1±1.37 26.9±2.73 1.12±0.36#18.8吴茱萸内酯5610 19.4±1.35 26.3±2.58 1.15±0.30#16.7吴茱萸内酯2810 20.2±1.48 25.7±1.34 1.23±0.29#10.9注与对照组比较，#p＞0.05；***p＜0.001表12吴茱萸次碱、内酯(sc)对小鼠EAC瘤重的影响(X±S)剂量动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率组 别mg.kg-1(n)给药前给药后 (g) (％)对 照 组 - 10 19.5±1.35 26.8±2.20 1.37±0.59环磷酰胺15 10 19.8±1.55 25.1±1.79 0.66±0.19***51.8吴茱萸次碱 50 10 20.5±1.18 25.8±1.48 1.05±0.24#23.4吴茱萸次碱 25 10 20.1±1.45 26.8±2.82 1.12±0.38#18.2吴茱萸内酯 56 10 19.7±1.42 26.0±2.00 1.15±0.23#16.2吴茱萸内酯 28 10 20.0±1.16 25.1±1.37 1.17±0.29#14.6注与对照组比较，#p＞0.05；***p＜0.001
上述实验研究结论表明总碱和吴茱萸碱具有明显的抗肿瘤作用，用总碱和吴茱萸碱制成抗肿瘤药物，将对各种肿瘤病症起到显著的抑制、治疗作用。
上述结果表明，本发明的优点在于对已知的化合物吴茱萸碱发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域，以吴茱萸碱作为有效成份的总碱制成抗肿瘤药物具有较强的抑瘤功能和抗肿瘤作用，而将吴茱萸碱制备成抗肿瘤药物时，其制药工艺简单，便于操作，其药物剂型也可多样，即可做成注射剂，也可做成口服片剂、胶囊剂型等，用药方便。
具体实施例首先提取吴茱萸总碱为制剂的原料。取吴茱萸原料药，用7倍量浓度为80％的乙醇回流提取两次，将乙醇回收，得醇提部分(浸膏状物)，再以2％的HCL溶液提取醇浸膏两次，用氨水碱化提取液静置、过滤、沉淀，除去上清液，将沉淀物加入10％的氨水制成匀浆状，以氯仿提取，利用自动搅拌机搅拌30分钟后静止。合并氯仿液，分离出浆状物，将氯仿提取液用无水硫酸钠脱水，过滤，除去硫酸钠，留下氯仿液，通过常压水浴方式回收氯仿，回收的氯仿留做再用，留下余物干燥后，即为吴茱萸总碱。若拟以吴茱萸碱为原料，则需再进行以下步骤。
吴茱萸总碱加入200倍量的硅胶装干柱，用石油醚、乙酸乙酯和水(其比例为10∶5∶1)进行洗脱，再以TLC检查不同流份，合并与吴茱萸碱标准品Rf值一致部分，浓缩，氯仿甲醇重结晶最后提取得吴茱萸碱。
吴茱萸总碱胶囊剂的制备处方吴茱萸总碱210g，制成胶囊1000粒制法取吴茱萸总碱原料药210g，用适量95％乙醇喷洒制成软材，过筛，制成颗粒，80℃以下条件干燥，过筛，装入零号胶囊中，分装即得。
吴茱萸总碱注射剂的制备处方吴茱萸总碱50g，丙二醇250g，聚乙二醇250g，加注射用水4000ml，制成2000支。
制法精密称取50.0g吴茱萸总碱，丙二醇和聚乙二醇各250g，先将丙二醇和聚乙二醇混合均匀，在水溶上加热至80℃，将50g吴茱萸总碱加入丙二醇，聚乙二醇混合液中，充分搅拌，使药液完全溶解，再将预热好的注射用水(80℃)缓慢地加到药液中，用起声波处理5分钟，放置到室温。用G4漏斗抽滤。灌封到2ml安瓶中。灭菌。分装、打字即可完成吴茱萸总碱注射剂的制备。
权利要求
吴茱萸碱在抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及吴茱萸碱在制药领域中的新用途。特别是在制备抗肿瘤药中的新用途。上述物质具有明显的抗肿瘤作用，对肉瘤S
文档编号A61P35/00GK1426783SQ0113886
公开日2003年7月2日 申请日期2001年12月18日 优先权日2001年12月18日
发明者王本祥, 赵全成, 王丽娟, 杨冬华, 陈声武, 王岩 申请人:吉林天药科技股份有限公司