专利名称：变性关节病治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及变性关节病的治疗和/或预防剂。
更详细地说，含有具有基质金属蛋白酶抑制活性的N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺，或其非毒性盐作为有效成分的变性关节病的治疗和/或预防剂。
MMP在生理状况下通过分解胶原、昆布氨酸、蛋白聚糖、纤连蛋白、弹性蛋白、明胶等作用于关节组织、骨组织、结缔组织等的生长和组织改造。但是，病态中各组织的破坏被认为是由于MMP调节功能的缺陨，MMP的表达或活性上升引起的。例如，有报道说MMP-1、2、3、8、9、13在变性关节病患者的软骨破坏部位高度表达，且这些MMP与软骨基质的分解密切相关。[医学进展，182，549-553(1997)；J.Clin.Invest.，84，678-685(1989)]。
另一方面，变性关节病(osteoarthritis；以下简称为OA)是占中老年关节病大半的疾病，由于关节软骨的退行性变性，引起弹性下降，磨损、裂隙等，软骨的骨化增殖或关节周围新骨形成被促进，最终关节软骨消失，骨在关节面中露出，呈现关节痛或关节液贮留等症状。作为易发病关节，有膝、胯股、脊髓、肘、肩、手指等。而且其原因不明的情况很多。作为其治疗的第一选择药物，使用非甾性镇痛剂、抗炎剂，另外，也进行同时具有提高关节的润滑功能和抗炎症作用的透明质酸制剂的关节注入疗法。但是，这些都不是彻底的对症疗法，没有确立根本的治疗方法。
作为在具有MMP抑制作用的化合物的适应症中列举了变性关节病的专利申请，有例如，GB2268934号说明书，EP606046号说明书。另外，有报道显示作为MMP抑制剂的CGS-27023A(2(R)-[N-(45-甲氧苯基磺酰基)-N-(3-吡啶基甲基)氨基]-3-甲基丁酰(butano)异羟肟酸·盐酸盐)在兔子OA模型中是有效的。[InflammRes 44，Supplement2，S117-S118，(1995)]。但是现在不存在具有MMP抑制作用的化合物的变性关节病的治疗和/或预防剂，将其作为进行开发的对象的具有MMP抑制活性的化合物是极其有限的。
在以上的状况下，本发明者们积极进行研究的结果，初次发现了N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺，或其非毒性盐对变性关节病是有效的，并完成了本发明。
即，本发明涉及含有式(I) 所示的N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺，或其非毒性盐作为有效成分的变性关节病的治疗和/或预防剂。
式(I)所示的N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺，作为具有MMP抑制作用的化合物，记载于WO99/19296号说明书的实施例71中。其MMP抑制活性，例如，对于MMP-2和MMP-3的IC50(nM)值分别是0.5和26。
在该说明书中记载了，含有式(I)所示化合物的氨基丁酸衍生物，由于具有MMP抑制作用，因此对于风湿病、关节骨炎、病骨吸收、骨质疏松症、牙周病、间质性肾炎、动脉硬化、肺气肿、肝硬化、角膜损伤、癌细胞的转移浸润或增殖疾病、自身免疫疾病(克罗恩氏病、斯耶格伦氏综合征)，白细胞系细胞的血管渗出或浸润引起的疾病、血管新生、多发性硬化症、主动脉瘤、子宫内膜病等有效。但是，式(I)所示的化合物没有记载对于变性关节病有效。
已知MMP和变性关节病(OA)有一些关系。但是，本发明者们使用作为实际OA病态模型进行评价的兔子外侧半月板部分切除模型对几种MMP抑制剂进行试验时，只有式(I)所示的化合物显示有效性。
发明的详细说明在本发明中使用的化合物，可以盐的形式使用。盐优选无毒的、水溶性的盐。
作为合适的盐，可列举碱金属(钾、钠等)的盐，碱土金属(钙、镁等)的盐，铵盐、药学上可接受的有机胺(四甲基铵、三乙胺、甲基胺、二甲基胺、环戊胺、苄基胺、苯乙胺、哌啶、单乙醇胺、二乙醇胺、三(羟甲基)胺、赖氨酸、精氨酸、N-甲基-D-葡糖胺等)的盐。
在本发明中使用的化合物或其非毒性盐可用公知的方法转化为水合物。
对兔子从颈背部皮下使用赛拉嗪2％注射液(0.05ml/kg)(拜尔)给药，对耳边缘静脉内使用戊巴比妥注射液(20mg/kg)(ダィナボット)给药实施麻醉。将右后肢膝关节周围的毛用推子剪掉，使用游标卡尺(ABSデジマチックキャリバCDC，Mitutoyo)，测量右后肢膝关节的宽度(相当于内外侧半月板的中央连接线)。之后，将右膝用蒸馏水5倍稀释的碘酊(东洋制药化成)消毒。根据需要，向切开部分中滴加利多卡因注射液2％(ASTRA Japan)，进行局部麻醉。
然后，使用No.10刀片(Blade；夏目制作所；D-13)，将右后肢膝外侧的上皮和关节囊相对于膝盖韧带90°切开，切离外侧侧副韧带，然后切离子骨韧带。此时，滴加保斯民(盐酸肾上腺素)(第一制药)用于止血。用肉眼确认外侧半月板后，将与半月板前方组织结合部分组织用钳子抓住，将半月板拉出到手前，将半月板中央1/3用No.15刀片(夏目制作所D-13)切除。之后，用生理食盐注射液(大塚制药工厂)将手术部分洗净，将滑膜和关节囊用4-0丝线的带灭菌针的缝合线(ァズゥエル)缝合。然后，肌肉层和外皮同样分别用4-0的丝线缝合线缝合。将外皮的缝合部分用碘酊消毒后，缝合外皮的缝合线结点用一种医用粘合剂ァロンァルファA“三共”(三共)固定。
手术后，为防止感染，从左后肢肌肉注射结晶青霉素G钾明治(5000U/动物)(明治制果)和硫酸链霉素明治(100mg/动物)(明治制果)。饲养直到手术后第7天解剖，其间使用被检化合物1天2次口服给药。
对耳边缘静脉内使用戊巴比妥注射液(40mg/kg)(ダィナボット)给药实施麻醉后，将右后肢膝关节周围的毛用推子剪掉，使用游标卡尺(ABSデジマチックキャリバ CDC，Mitutoyo)，测量右后肢膝关节的宽度(相当于内外侧半月板的中央连接线)。之后，将动物放血致死，采取右膝关节部分。之后，使用剪刀和解剖刀不损伤关节软骨地切开，采取大腿骨和胫骨头。将大腿骨和胫骨头在装入了10％中性缓冲福尔马林(和光纯药工业)的组织包中在室温保存。全部样品采取完成后，将大腿骨和胫骨头掩蔽化。之后，用实体显微镜进行侵蚀面积的计算测量。
统计处理方法是将载体组(vehicle)和式(I)所示化合物给药组的软骨浸蚀面积的比较进行Williams的多重比较(EXSAS，Ver5.00，ァム(有))。结果如
图1所示。产业上的可利用性[效果]本模型可诱导与人的变性关节病酷似的软骨破坏，一般被认为是作为OA模型。在该模型中，判定了通式(I)所示化合物显示高的有效性。因此，可判断通式(I)所示化合物对变性关节病是有效的。[毒性]本发明化合物的毒性是非常低的，可判断作为药物使用是十分安全的。例如，使用大鼠的单次口服给药的最低致死量是2000mg/kg。[作为药物的应用]在本发明中使用的，对于基质金属蛋白酶，例如，明胶酶、基质溶素或胶原酶等有抑制作用的N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺，或其非毒性盐，对包含人在内的动物，特别是在人中，在变性关节病的治疗和/或预防中是有效的。
本发明化合物、其非毒性盐、酸加成盐、或其水合物在用于上述目的时，通常，可以全身或局部，口服或非口服的形式给药。
给药量可根据年龄、体重、症状、治疗效果、给药方法、处理时间等不同，但是通常，对于每个成人，每次从1mg到1000mg的范围，1天1次至数次口服给药，或对于每个成人，每次从0.1mg到100mg的范围，1天1次至数次非口服给药(优选静脉给药)，或1天1小时到24小时静脉内连续给药。
当然，如前所述，给药量根据各种条件变动，有少于上述给药量就足够的情况，也有需要超过上述范围的情况。
给药本发明化合物时，可以用于口服给药的内服固形剂、内服液剂、和用于非口服给药的注射剂、外用剂、栓剂等使用。
在用于口服给药的内服固形剂中包括片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂等。胶囊剂中包括硬胶囊剂和软胶囊剂。
在这样的内服固形剂中，可直接使用一个或一个以上的活性物质，或与赋形剂(乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、微晶纤维素、淀粉等)，粘合剂(羟丙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、偏硅酸铝酸镁等)，崩解剂(纤维素羟基乙酸钙)、润滑剂(硬脂酸镁等)、稳定剂、溶解助剂(谷氨酸、天门冬氨酸等)混合，用常规方法制剂化后使用。另外，根据需要可用包衣剂(白糖、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸盐)包覆，或被覆2层以上。另外，也包括明胶等可吸收物质的胶囊。
用于口服给药的内服液剂包括药剂上允许的水剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂、酏剂等。在这样的液剂中，一个或一个以上的活性物质被溶解、悬浮或乳化在通常使用的稀释剂(纯化水、乙醇或其混合液等)中。进一步，该液剂可含有湿润剂、悬浊化剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、防腐剂、缓冲剂等。
作为用于非口服给药的注射剂，包含溶液、悬浮液、乳液和使用时溶解或悬浮于溶剂后使用的固形注射剂。注射剂可以将一个或一个以上的活性物质溶解、悬浮或乳化于溶剂中使用。作为溶剂，可使用例如，注射用蒸馏水、生理盐水、植物油、丙二醇、聚乙二醇、乙醇等醇类及其组合。另外，该注射剂可含有稳定剂、溶解助剂(谷氨酸、天门冬氨酸、聚山梨酯80(登记商标)等)、悬浊化剂、乳化剂、无痛化剂、缓冲剂、防腐剂等。这些可在最后工序中通过灭菌或无菌操作法制备。另外，无菌的固形剂，例如，制造冷冻干燥品，在其使用前无菌化或溶解在无菌的注射用蒸馏水或其他溶剂中后可使用。
作为用于非口服给药的其他制剂，包括含有一个或一个以上的活性物质，通过常规方法配方的外用液剂、软膏剂、涂布剂、吸入剂、喷雾剂、栓剂和阴道内给药的子宫托等。
喷雾剂，可含有通常使用的稀释剂以外的亚硫酸氢钠等的稳定剂和赋予等渗性的缓冲剂，例如氯化钠、柠檬酸钠或柠檬酸等的等渗剂。喷雾剂的制造方法，例如在美国专利第2,868,691号和第3,095,355号中有详细记载。[制剂例]制剂例1将以下各成分通过常规方法混合后打片，得到一片中含有50mg活性成分的片剂100片。·N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺 …5.0g·羧甲基纤维素钙(崩解剂) …0.2g·硬脂酸镁(润滑剂) …0.1g·微晶纤维素 …4.7g制剂例2将以下各成分通过常规方法混合，溶液用常规方法灭菌，每个安瓿填充5ml，用常规方法冷冻干燥，得到1安瓿中含有20mg活性成分的安瓿100瓶。·N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺 …2.0g·甘露糖醇 …20g·蒸馏水 …500ml
权利要求
1.含有式(I) 所示的N-羟基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺、或其非毒性盐作为有效成分的变性关节病治疗和/或预防剂。
全文摘要
具有抑制基质金属蛋白酶活性的，含有N－羟基－5－乙氧甲基氧－2(S)－甲基－4(S)－(4－苯氧苯甲酰基)氨基戊酰胺，或其非毒性盐作为有效成分的变性关节病治疗和/或预防剂。
文档编号A61P19/00GK1400895SQ01804855
公开日2003年3月5日 申请日期2001年2月9日 优先权日2000年2月10日
发明者前田佳蔵, 米富康雄, 小川公二 申请人:小野药品工业株式会社