专利名称：内环境稳定维持剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有生物体的内环境稳定维持作用的药品、食品、饮料或者饲料。
另外，本发明涉及风味得到改善的岩藻依聚糖和海藻类提取物、含有该岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的食品、饮料、调味料、饲料、化妆品或者药品及其它们的制造方法。
背景技术：
海藻类中有褐藻类、绿藻类、红藻类等。其中褐藻类中的海带、裙带菜属、海蕴属、羊栖菜等大多是味道良好，对健康也良好的海藻，自古以来一直作为人类的食物而大量地利用。由于这些褐藻类即使以每日相当的量摄取，也没有出现可观的障碍，作为食品的安全性极其高。另外，褐藻类在中国作为癌症的治疗药剂而使用，许多研究者一直在尝试要从褐藻类鉴定显示抗癌作用的物质。在褐藻类的热水提取物中存在的岩藻依聚糖是含有硫酸化岩藻糖的硫酸化多糖的一种。天然的岩藻依聚糖是分子量在数十万或者以上，因为兼有亲水性高的硫酸基和疏水性高的甲基等相反性质的化学结构，所以易于吸附海藻中含有的各种成分，是纯化非常困难的物质。近年来，作为岩藻依聚糖的生理功能，由于明确了抗癌作用、细胞程序死亡诱发作用、血压降低作用、抗变应原作用等，其实用性在提高，期待作为药物和健康食品的用途的开发。另外，岩藻依聚糖由于作为食品、饮料、饲料、化妆品或者药物的有效成分能充分发挥它们的生理功能，所以希望简单且高效地开发高纯度的岩藻依聚糖的制备方法。
另外，海藻类一般大多用作食品或调味料的汤。例如，轻轻洗涤作为食用的根海带，放入水中，提取约12小时后，作为海带提取物产出的海带水使用，或者为了制造海带汤，用温水煮，制备富合作为美味的谷氨酸的汤。海藻类含有氨基酸、矿物质类和粘多糖，提取这些成分，可利用到食品或调味料中。但是，海藻类中含有苦味成分，用水或温水提取并溶出到液体部分。除此之外，海藻类中还有特有的香味成分，再有煮出时着色成分进一步增加。由于粘多糖、矿物质类、碘成分以及海藻臭向提取液移动，从而提取出苦味或碘过度提取，无论海藻类的提取在冷水和温水中，还是作为食料使用，海藻臭都是不优选的，难于作为食品或调味料使用。摄取粘多糖或矿物质类对现代人的健康是重要的，优选饮用海水饮料，但从嗜好方面来看，减少苦味是重要的，特别希望防止了海藻臭的食品、饮料和调味料的开发。
尽管苦味、涩味和过度的着色成分的除去广泛使用一般使用的化学反应的离子交换树脂或物理吸附的活性碳处理等并显示出效果，但这些方法也过度除去海藻类本来的香味成分，着色的色彩也发生变化。因此，成为和自制的海藻类水提取物或熬出的汁的香味相差悬殊的品质、风味。其结果，不能得到保留简单的自制感的真正的海藻类提取液，也没有公开利用它的食品、饮料、调味料或者饲料。
发明的公开本发明在于发现岩藻依聚糖的新的生理作用，其目的在于提供利用了岩藻依聚糖、其降解物或它们的盐的，具有生物体的内环境稳定维持作用的生物体的内环境稳定维持剂、食品、饮料或者饲料。
另外，本发明的目的在于提供着色少、苦味或碘含量减少、具有新鲜感的风味得到改善的岩藻依聚糖和海藻类提取物、含有该岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的食品、饮料、调味料、饲料、化妆品或药品及它们有效的制造方法。
即，本发明的要点涉及(1)一种生物体的内环境稳定维持剂，其特征在于含有选自岩藻依聚糖、其降解物及它们的盐的1种以上的物质作为有效成分，(2)一种生物体的内环境稳定维持用的食品、饮料或饲料，其特征在于含有1种以上选自岩藻依聚糖、其降解物及它们的盐的物质，(3)在还原性物质的存在下提取海藻类得到的岩藻依聚糖，(4)在还原性物质的存在下提取海藻类得到的海藻类提取物，(5)一种食品、饮料、调味料或饲料，其特征在于含有前述(3)记载的岩藻依聚糖和/或前述(4)记载的海藻类提取物，(6)一种化妆品，其特征在于含有前述(3)记载的岩藻依聚糖和/或前述(4)记载的海藻类提取物，(7)一种药物，其特征在于含有前述(3)记载的岩藻依聚糖和/或前述(4)记载的海藻类提取物，
(8)一种岩藻依聚糖的制造方法，其特征在于包括在还原性物质的存在下提取海藻类的步骤，(9)一种海藻类提取物的制造方法，其特征在于包括在还原性物质的存在下提取海藻类的步骤，(10)一种食品、饮料、调味料或饲料的制造方法，其特征在于包括前述(8)中记载的步骤和/或前述(9)中记载的步骤，(11)一种化妆品的制造方法，其特征在于包括前述(8)中记载的步骤和/或前述(9)中记载的步骤，和(12)一种药物的制造方法，其特征在于包括前述(8)中记载的步骤和/或前述(9)中记载的步骤。
附图的简要说明
图1是显示伽高迈(ガゴメ)海带由来的岩藻依聚糖在DEAE-Cellulofine A-800柱上的洗脱曲线的图。
图2是显示食用岩藻依聚糖后的大鼠的血糖值上升抑制作用的图。
图3是显示食用岩藻依聚糖后的大鼠的血中中性脂肪值上升抑制作用的图。
实施发明的最佳方式本发明的第1种方案是提供生物体的内环境稳定维持剂、生物体的内环境稳定维持用的食品、饮料和饲料，其一大特征在于含有选自岩藻依聚糖、其降解物及它们的盐的1种以上的物质作为有效成分。本发明所需的效果的显现是基于通过本发明者们发现的该有效成分发挥的生物体的内环境稳定维持作用。
在本说明书中，所谓生物体的内环境稳定维持作用是指为了维持生物体，将生命维持的功能维持在一定状态下，特别是维持肝功能的平衡作用和维持血液的平衡作用。关于这些作用在后面有详细描述。维持包括保持一定的状态的意思，除此之外，还包括进行调节以保持一定的状态的意思。
在本发明中，所谓的作为有效成分使用的岩藻依聚糖是含有硫酸化岩藻糖作为构成成分的含有硫酸化岩藻糖的多糖，只要具有生物体的内环境稳定维持作用即可，对此没有特别的限制。例如，藻类，例如伽高迈海带、托罗罗海带(トロロ海带)、裙带菜属、鹅掌菜、爱胜蚓属、海带属、巨藻、レツソニアニグレセンス、海蕴属、冲绳岛海蕴属、墨角藻、岩衣藻等海带目、索藻目、岩藻目等褐藻类的海藻由于大量含有具有生物体的内环境稳定维持作用的岩藻依聚糖，因此，作为原料是优选的。另外，作为原料，也可以使用棘皮动物，例如既可以使用海参、海胆、海星等，也可以优选使用海参、海胆、海星等由来的岩藻依聚糖。其中，海带目的海藻大量含有具有优良生物体的内环境稳定维持作用的岩藻依聚糖，作为原料是更优选的。因此，作为本发明的有效成分使用的岩藻依聚糖优选是海藻由来的或棘皮动物由来的，更优选是褐藻类由来的岩藻依聚糖。
这些岩藻依聚糖的制备可使用公知的方法进行，可在本发明中使用粗制备产物、纯化物或者分为几个分子种类的岩藻依聚糖。
例如，从伽高迈海带制备岩藻依聚糖，该岩藻依聚糖可分离为含有葡糖醛酸的岩藻依聚糖(以下称为U-岩藻依聚糖)和不含葡糖醛酸的岩藻依聚糖(以下称为F-岩藻依聚糖)，作为本发明的有效成分可分别使用这些岩藻依聚糖。另外，可从伽高迈海带制备硫酸化岩藻半乳聚糖(以下称为G-岩藻依聚糖)并使用。
U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖例如可从伽高迈海带制备岩藻依聚糖后，用阴离子交换树脂、表面活性剂等分离。伽高迈海带由来的U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖的存在比为约1∶2，U-岩藻依聚糖含有岩藻糖、甘露糖、半乳糖、葡糖醛酸等，硫酸含量为约20％，F-岩藻依聚糖含有岩藻糖和半乳糖，硫酸含量为约50％，两物质的分子量都以约20万为中心分布(第18次糖专题论文集摘要集，第159页，1996年)。
例如可将从伽高迈海带制备的岩藻依聚糖溶液应用于DEAE-Cellulofine A-800柱后，通过使用含有NaCl的缓冲液的浓度梯度法洗脱，分离U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖。图1中显示一个例子。即，图1是表示U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖的分离图，图中，前面的峰是U-岩藻依聚糖，后面的峰是F-岩藻依聚糖。
另外，例如海蕴属由来的岩藻依聚糖，冲绳岛海蕴属由来的岩藻依聚糖，裙带菜属由来的岩藻依聚糖，裙带菜(ワカメメカブ)由来的岩藻依聚糖、墨角藻由来的岩藻依聚糖也可分别用公知的方法制备，并在本发明中使用。
作为含有岩藻依聚糖的海参，有例如特开平4-91027号公报中记载的海参，也可用该公报中记载的方法从海参制备岩藻依聚糖。另外，也可以使用市售的岩藻依聚糖。另外，上述岩藻依聚糖也可以根据需要适当硫酸化而使用，硫酸化的方法可以根据公知的方法。
在本发明中，可通过使用酶学方法、化学方法、物理方法等公知的方法降解岩藻依聚糖，以生物体的内环境稳定维持作用为指标选择所需的降解物，得到作为有效成分使用的岩藻依聚糖的降解物(以下有时称为本发明的降解物)。
作为在本发明中使用的岩藻依聚糖的降解物的制备方法，例如有酸降解法，可通过酸降解该岩藻依聚糖，制备具有生物体的内环境稳定维持作用的降解物。
在本发明中使用的岩藻依聚糖的酸降解条件只要是生成具有生物体的内环境稳定维持作用的降解物的条件即可，对此没有特别的限制。例如，将岩藻依聚糖溶解或悬浮于酸性水溶液等中，通过进行酸降解反应生成本发明的降解物。另外，可通过在反应时加热，缩短生成本发明降解物所需的时间。作为可以在岩藻依聚糖酸降解中使用的酸没有特别的限制，可列举盐酸、硫酸、硝酸等无机酸，柠檬酸，甲酸，乙酸，乳酸，抗坏血酸等有机酸，或阳离子交换树脂、阳离子交换纤维、阳离子交换膜等固体酸。
对于酸的浓度也没有特别的限制，可在优选0.0001～5当量，更优选0.01～1当量左右的浓度使用。另外，对于反应温度也没有特别的限制，可设定在优选0～200℃，更优选20～130℃。
另外，对于反应时间也没有特别的限制，可设定在优选数秒～数天。酸的种类和浓度、反应温度和反应时间可根据本发明的降解物的生成量、降解物的聚合度进行适当选择。例如，在制备本发明的降解物时，可使用柠檬酸、乳酸、苹果酸等有机酸，在酸浓度数10mM～数M，加热温度50～110℃，优选70～95℃，加热时间在数分～24小时的范围进行适当选择，可制造本发明的降解物。作为岩藻依聚糖的酸降解物可列举伽高迈海带由来的岩藻依聚糖的酸降解物，该降解物也可作为具有生物体的内环境稳定维持作用的食物纤维使用。
本发明的降解物可将生物体的内环境稳定维持作用作为指标进行分级，例如，可将酸降解物用凝胶过滤法、分子量分级膜等分级法进行分子量分级。
作为凝胶过滤法的例子，可使用Cellulofine GCL-300(生化学工业社制)，制备例如分子量超过25000，分子量25000～超过10000，分子量10000～超过5000，分子量5000以下等任意分子量组分；可使用Cellulofine GCL-25(生化学工业社制)，将分子量5000以下的组分制备成例如分子量5000～超过3000，分子量3000～超过2000，分子量2000～超过1000，分子量1000～超过500，分子量500以下等任意分子量组分。
另外，可使用超滤膜在工业上对本发明的降解物进行分子量分级。例如，通过使用Daicel社制的FE10-FUS0382，可制备分子量30000以下的组分，使用相同公司制的FE-FUS-T653，可制备分子量6000以下的组分。另外，可使用纳米膜得到分子量500以下的组分，通过将这些凝胶过滤法、分子量分级法组合，可制备任意分子量的组分。
在本发明中可使用的具有生物体的内环境稳定维持作用的岩藻依聚糖的降解物，可列举式(I)～(IV)所示化合物，这些化合物可使用国际公开97/26896、99/41288和00/50464号公报中记载的方法制备。另外，作为本发明的降解物，也可列举国际公开97/26896、99/41288和00/50464号公报中记载的岩藻依聚糖的降解物。
(式中，R式OH或OSO3H)
(式中，R式OH或OSO3H) (式中，R式OH或OSO3H)
(式中，R式OH或OSO3H)另外，作为式(I)所示的化合物的例子，可列举下述式(V)所示的化合物，作为式(II)所示的化合物的例子，可列举下述式(VI)和式(VII)所示的化合物，作为式(III)所示的化合物的例子，可列举下述式(VIII)所示的化合物。
通过将例如前述F-岩藻依聚糖用交替单孢菌属SN-1009(FERMBP-5747)产生的末端型硫酸化多糖降解酶(F-岩藻依聚糖特异性降解酶)降解，纯化得到的降解物，可得到式(I)所示的化合物。关于该化合物中硫酸基的含量、部位，可从其降解物中纯化任意物质。另外，当该降解物中含有式(I)所示化合物的聚合物时，可根据需要进行分离、纯化。
通过将例如前述U-岩藻依聚糖用黄杆菌属SA-0082(FERM BP-5402)产生的内硫酸化多糖降解酶(U-岩藻依聚糖特异性降解酶)降解，纯化得到的降解物，可得到式(II)、式(III)所示的化合物。关于该化合物中硫酸基的含量、部位，可从其降解物中纯化任意物质。另外，当该降解物中含有式(II)或式(III)所示化合物作为基本骨架结构的聚合物时，可根据需要进行分离、纯化。
另外，可将伽高迈海带由来的岩藻依聚糖用交替单孢菌属SN-1009(FERM BP-5747)产生的F-岩藻依聚糖特异性降解酶和用黄杆菌属SA-0082(FERM BP-5402)产生的U-岩藻依聚糖特异性降解酶降解，纯化得到的降解物，可制备前述G-岩藻依聚糖。
前述黄杆菌属SA-0082(FERM BP-5402)也产生特异性降解该G-岩藻依聚糖的末端型硫酸化多糖降解酶(G-岩藻依聚糖特异性降解酶)。通过使该G-岩藻依聚糖特异性降解酶和G-岩藻依聚糖作用，可制备该G-岩藻依聚糖的降解物，根据需要纯化降解物，可从该降解物中制备可作为本发明中的有效成分使用的降解物。式(IV)所示化合物是它的例子。另外，当该降解物中含有式(IV)所示化合物作为基本骨架结构的聚合物时，可根据需要进行分离、纯化。
关于上述各酶，记载在国际公开97/26896或00/50464号公报中。另外，对于上述F-岩藻依聚糖特异性降解酶、U-岩藻依聚糖特异性降解酶、G-岩藻依聚糖特异性降解酶，也可通过分别使用公知的方法，分离它们的遗传基因，制作重组体，来制备和使用酶。例如，关于F-岩藻依聚糖特异性降解酶和U-岩藻依聚糖特异性降解酶，也可用国际公开99/11797号公报中记载的方法，从重组体制备和使用。
前述岩藻依聚糖特定的分级物特别是F-岩藻依聚糖、U-岩藻依聚糖、G-岩藻依聚糖，是其基本结构起初就明确了的岩藻依聚糖分级物，使用对各分级物特异性作用的酶制备的各降解物，特别是其降解物的分级物例如上述式(I)～式(IV)等化合物，和岩藻依聚糖比较，分子量小且在所谓的具有和岩藻依聚糖同样的生理活性方面，和结构、组成、物性不明确的简单分离的岩藻依聚糖或者岩藻依聚糖含有物相比，特别优良。
作为在本发明中作为有效成分使用的岩藻依聚糖或其降解物的盐可列举例如碱金属盐、碱土金属盐、有机碱等盐。可列举例如和钠、钾、钙、镁、铵或者二乙醇胺、乙二胺等的盐。例如使用公知的方法，通过将存在于岩藻依聚糖中的硫酸基或者羧酸转化为盐，可以得到这些盐。作为这种盐，优选药理学上可以允许的盐。
进一步，关于本发明的第1种方案，可根据在下述的本发明的第2种方案的说明中详细记载的本发明的海藻类提取物的制造方法得到，可以优选使用具有生物体的内环境稳定维持作用的岩藻依聚糖和其降解物以及它们的盐作为有效成分。该岩藻依聚糖由于是使用在还原性物质的存在下从所需的原料提取的高纯度且高收率的岩藻依聚糖的制造方法得到的物质，所以和通过现有的岩藻依聚糖的制造方法得到的岩藻依聚糖相比较，具有外观色浅，海藻臭也减少这样的性质，作为本发明方案中的有效成分是更有效的物质。对于该岩藻依聚糖的制造方法，作为原料，除了使用如前述的已知含有岩藻依聚糖的或者认为含有岩藻依聚糖的海藻类(优选褐藻类)之外，原料的处理条件或从原料提取所需物质的条件等和后述的海藻类提取物的制造方法相同。该岩藻依聚糖(以下有时称为还原提取的岩藻依聚糖)及其制造方法包括在本发明中。
另外，本发明的有效成分的生物体的内环境稳定维持作用的显现可通过记载在下述实施例中的方法评价。关于肝功能的内环境稳定维持作用，例如可通过记载在实施例1～4的方法评价。另外，关于血液的内环境稳定维持作用，可通过记载在实施例5-6的方法评价。
本发明的第1种方案中，作为药物的生物体的体平衡维持剂，包含通过前述有效成分的生物体的内环境稳定维持作用来预防或治疗因生物体的内环境稳定的失调产生的疾病或病态(或者需要生物体的内环境稳定维持的疾病或病态)的药物等，包括基于该作用发挥药理效果的全部的药物。其中，该有效成分在肝功能的内环境稳定维持作用和血液的内环境稳定维持作用中优良，在本发明的方案中，优选提供作为肝功能障碍的治疗剂或者预防剂的或者作为血液的内环境稳定维持剂的生物体的内环境稳定维持剂。
所谓本发明的有效成分具有的肝功能的内环境稳定维持作用具体地是指肝功能障碍的治疗或预防，因此，本发明的内环境稳定维持剂对由肝功能的内环境稳定的失调产生的疾病或病态，特别是对肝功能障碍的治疗或预防是有效的。
作为成为肝功能障碍的治疗剂或者预防剂的本发明的内环境稳定维持剂(以下有时称为本发明的肝功能障碍的治疗剂或预防剂)的治疗或预防的目标的肝功能障碍，对此没有特别的限制，可列举例如急性肝炎、暴发性肝炎、酒精性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌等，优选可列举伴随着肝纤维化的疾病即慢性肝炎、酒精性肝炎或者肝硬化。进一步，作为伴随着肝纤维化的疾病，也包括经由这些障碍发病的肝癌。
肝纤维化是导致在慢性肝炎、酒精性肝炎、肝硬化中见到的肝脏中的胶原等结缔组织增生和蓄积的病态。因此，通过抑制肝纤维化，可进行前述疾病的治疗或预防。另一方面，慢性肝炎、肝硬化一旦恶化，向肝癌发展的危险率增加。从该事实，抑制肝纤维化在肝癌的治疗或预防上是极其有用的。
另外，作为这些肝功能障碍的原因因子，没有特别的限制，有病毒、自体免疫、药物、酒精、营养障碍、先天性代谢异常、循环障碍等原因因子，对于这些中的任意一种引起的肝功能障碍，都可以使用本发明的内环境稳定维持剂。另外，如后述的实施例3和实施例4所示，本发明的有效成分对于酒精性肝功能障碍也特别有用。
另一方面，具有本发明的有效成分的血液的内环境稳定维持作用是指例如抑制生活习惯病(特别是糖尿病、肥胖病、高血脂)引起的血糖值或血中中性脂肪值的上升，或者降低上述的血糖值或血中中性脂肪值等作用，即血糖值上升抑制作用或血中中性脂肪值上升抑制作用等。另外，抑制包括调节的意思。本发明的有效成分，特别是作为血液的内环境稳定维持作用而具体记载的前述作用优良，因此，本发明可以提供具有该作用的生物体的内环境稳定维持剂。根据该内环境稳定维持剂，可以抑制血糖值或血中中性脂肪值的上升，或者降低上升的血糖值或血中中性脂肪值，可进行生活习惯病特别是糖尿病、肥胖症、高血脂症的预防或治疗。另外，本发明的有效成分具有抑制在饮食后中的血糖值和血中中性脂肪值的上升的作用，因此，本发明可以提供作为饮食后的血液的内环境稳定维持剂的生物体的内环境稳定维持剂。该内环境稳定维持剂对于受饮食限制的糖尿病患者、肥胖症患者、高血脂症患者的治疗或预防是非常有用的。另外，本说明书中，作为中性脂肪，可列举单甘酯、甘油二酯和甘油三酯等。
下面对于本发明的内环境稳定维持剂的制造方法进行说明。本发明的生物体的内环境稳定维持剂将选自岩藻依聚糖、其降解物及其它们的盐的一种以上的物质作为有效成分，可将其和公知的药用载体组合进行制剂化。该制剂的制造一般是将本发明的有效成分与药学上允许的液状或固体载体混合，且根据需要，加入溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等，制成片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂、胶囊等固体制剂，常用的液剂、悬浮剂、乳剂等液体制剂。另外，也可在其使用前通过添加适当的载体，不形成液体，而得到干燥品或外用剂。
药用载体可根据本发明的内环境稳定维持剂的给药方式和剂型进行选择。口服制剂，可利用例如淀粉、乳糖、白糖、甘露糖醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等。另外，制备口服制剂时，可进一步混合粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂、着色剂、香料等。
另一方面，非口服制剂，可按照常规方法，将本发明的有效成分溶解或悬浮于作为稀释剂的注射用蒸馏水、生理盐水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等中，根据需要加入灭菌剂、稳定剂、等渗化试剂、无痛化试剂等制备。
作为外用剂，包括经皮给药用的固体、半固体或者液状的制剂。另外也包括栓剂。例如也可形成乳剂、洗剂等乳化剂、外用酊剂等液状制剂、油性软膏、亲水性软膏等软膏剂、薄膜剂、绷带剂、湿敷剂等经皮给药用的贴付剂等。
本发明的内环境稳定维持剂可适当用制药领域中公知的方法制造。考虑该内环境稳定维持剂的有效成分的含有量、给药方式、给药方法等，使用该制剂，只要是优选在后述的给药量范围内施用该有效成分的量即可，对此没有特别的限制。
本发明的内环境稳定维持剂可根据剂型以适当的给药途径给药。对给药方法没有特别的限制，可内用、外用和注射使用。注射剂可通过例如静脉内、肌肉内、皮下、皮内等给药，外用剂中也包括栓剂等。
本发明的生物体的内环境稳定维持剂的给药量，可根据其剂型、给药方法、使用目的和适用该药的患者的年龄、体重、症状等适当设定，是可变的，一般制剂中所含的有效成分的量优选成人每日0.1～2000mg/kg。当然，由于给药量可根据各种条件变动，有时比上述给药量少就足够了，有时需要超过上述范围。本发明的内环境稳定维持剂可直接原样给药，除此之外，也可将其添加到任意的饮食品中日常摄取。也可将岩藻依聚糖、其降解物和/或它们的盐作为生物体的内环境稳定维持用饮食品的原料使用。
另外，作为本发明的有效成分使用的岩藻依聚糖、其降解物和/或它们的盐通过该生物体的内环境稳定维持作用，对于和生物体的内环境稳定维持有关的例如抑制肝功能障碍的产生、血糖值上升或者血中中性脂肪值上升的机理的研究或者肝功能改善剂、血糖值上升抑制剂、血中中性脂肪值上升抑制剂的筛选上也是非常有用的。
另外，作为本发明的其它方案，可以提供将本发明的前述有效成分对个体给药的生物体的内环境稳定维持的方法。该方法对于肝功能障碍的治疗或预防或血液的内环境稳定维持特别有用。作为个体给药的岩藻依聚糖，优选藻类由来或棘皮动物由来的物质，作为藻类，优选褐藻类。另外，特别优选用前述还原提取的岩藻依聚糖给药。另外，所谓个体是指哺乳动物，其中优选人。
该方法可以通过例如将前述有效成分优选作为本发明的内环境稳定维持剂对可能需要生物内环境稳定维持的或者对有该需要的人给药来进行。有效成分的给药方法、给药量可以依照用于该有效成分给药的本发明的内环境稳定维持剂的给药方法、给药量等。另外，在本方案中，也可以使用后述的食品、饮料或者饮料。
接着，对含有本发明的有效成分形成的本发明的食品、饮料或饲料(下面有时称为本发明的生物体的内环境稳定维持用食品、饮料或饲料)进行说明。本发明的食品、饮料或饲料，通过有效成分具有的生物体的内环境稳定维持作用，在对该有效成分显示出敏感性的生物体的内环境稳定维中是有效的，因此，对需要内环境稳定维持的疾病的改善、预防是及其有效的。本发明可以提供具有和前述内环境稳定维持剂一样的作用和效果的食品、饮料或饲料。优选的方案也和前述内环境稳定维持剂一样。
另外，本发明的食品、饮料或饲料中所说的“含有”包括含有、添加、稀释的意思。含有是指食品、饮料或饲料中含有在本发明中使用的有效成分的状态，添加是指向食品、饮料或饲料的原料中添加在本发明中使用的有效成分的状态，稀释是指在本发明使用的有效成分中添加食品、饮料或饲料的原料状态。
对本发明的生物体的内环境稳定维持用的食品或饮料的制造方法没有特别的限制，可以列举采用调理、加工和一般使用的食品或饮料的制造方法的制造，在制造的食品或饮料中可以含有、添加和/或稀释具有生物体的内环境稳定维持作用的岩藻依聚糖、其降解物和/或它们的盐作为优选成分。
对本发明的生物体的内环境稳定维持用食品或饮料没有特别的限制，可列举例如谷物加工品(小麦粉加工品、淀粉类加工品、预混合加工品、面条类、通心面类、面包类、馅类、荞麦面类、麸、米粉、粉条、包装饼等)，油脂加工品(可塑性油脂、油炸食品油、色拉油、蛋黄酱类、调味品等)，大豆加工品(豆腐、豆浆、发酵大豆等)，肉类加工品(火腿、熏猪肉、压制火腿、香肠等)，水产制品(冷冻磨碎的鱼肉、鱼糕、烤鱼卷、鱼肉山芋方形蒸饼、油炸鱼丸子、汆鱼丸子、筋、鱼肉火腿、香肠、木鱼、鱼子加工品、水产罐头、用条料煮的鱼、贝一类的小菜等)，乳制品(原料奶、乳酪、酸奶、黄油、干酪、炼乳、粉乳、冰淇凌等)，蔬菜、果实加工品(糊类、酱类、腌制物类、果汁饮料、蔬菜饮料、混合饮料等)，糖果类(巧克力、饼干类、带馅面包、蛋糕、米粉点心、米饼类等)，酒精饮料(日本酒、中国酒、葡萄酒、威士忌酒、日本烧酒、伏特加酒、白兰地酒、杜松子酒、朗姆酒、啤酒、清凉酒精饮料、果汁酒、利口酒等)，嗜好饮料(绿茶、红茶、乌龙茶、咖啡、清凉饮料、乳酸饮料等)，调味料(酱油、沙司，醋、甜米酒等)，罐装·瓶装·袋装食品(牛肉饭、釜饭、红豆饭、咖哩饭、其它各种调理好的食品)，半干或浓缩食品(猪肝酱、涂抹食品、荞麦面·面条的汁、浓缩汤类)，干燥食品(方便面、速食咖哩饭、速溶咖啡、果汁粉、汤粉、速食酱汁、调理好的食品、调理好的饮料、调理好的汤等)，冷冻食品(日本火锅、鸡蛋羹、烤鳗鱼、汉堡牛肉饼、烧麦、饺子、各种冰棍、水果鸡尾酒等)，固体食品，液体食品(汤等)，香料等农业·林业加工品，畜牧业加工品，水产加工品等。
对本发明的食品或饮料中的本发明的有效成分的含量没有特别的限制，可以从其感观和作用显现的观点来适当选择，例如，每100重量份食品，优选为0.0001重量份以上，更优选为0.001～10重量份，例如，每100重量份饮料，优选为0.0001重量份以上，更优选为0.001～10重量份。
另外，本发明可以提供含有、添加和/或稀释本发明的有效成分形成的生物用饲料。作为本发明的其它方案，还提供了生物的饲养方法，其特征在于将前述有效成分对生物给药。进一步，作为本发明的其它方案，提供了生物饲养用制剂，其特征在于含有前述有效成分。
在本发明中，生物是指例如养殖动物、宠物动物等，作为养殖动物可列举家畜、试验动物、家禽、鱼类、甲壳纲动物或贝类动物。作为饲料，可列举身体状态的维持和/或改善用饲料。作为生物饲养用制剂，可列举浸渍用制剂、饲料添加剂、饮料用添加剂。
根据本发明，在适用这些的前述所列举的生物中，基于具有本发明的有效成分的生物体的内环境稳定维持作用，可期待和本发明前述内环境稳定维持剂同样的效果。
在本发明的饲料中，在本发明中使用的前述有效成分通常对于对象生物1kg体重每天给与0.01～2000mg，例如可使用在人工混合饲料的原料中混合该有效成分制备的饲料，也可使用与人工混合饲料的粉末原料混合后，再添加到其它原料中混合制备的饲料。对于生物用饲料中的有效成分的含量没有特别的限制，可根据目的设定，优选在0.001～15重量％的比例是合适的。
作为人工混合饲料，可列举鱼粉、酪蛋白、鱿鱼肉等动物性原料，大豆粕、小麦粉、淀粉等植物性原料、饲料用酵母等微生物原料，鳕鱼肝油、鱿鱼肝油等动物性油脂，大豆油、菜籽油等植物性油脂，维生素类，矿物质类，氨基酸类，抗氧化剂等作为原料的人工混合饲料。另外，可列举鱼肉切碎物等鱼类用饲料。
对于本发明饲料的制造方法没有特别的限制，可根据一般的饲料制法，在所制造的饲料中含有、添加和/或稀释本发明的有效成分即可。
另外，本发明的有效成分可直接添加到池塘、水槽、贮水池或饲养领域的水、海水等中，或通过将对象生物浸渍给与。该浸渍方法在对象生物的饲料摄取量降低时特别有效。
对于水或海水中的本发明的有效成分的浓度没有特别的限制，可根据目的适当使用，优选0.00001～1重量％的比例是合适的。
另外，也可将含有本发明的有效成分的饮料作为饲养用饮料让对象生物摄取。对于该饮料中的本发明的有效成分的浓度没有特别的限制，可根据目的适当设定，优选0.0001～1重量％的比例是合适的。含有本发明的有效成分形成的生物饲养剂，例如浸渍剂、饲料添加剂、饮料添加剂可分别用公知的方法制作，该生物饲养剂中的有效成分的含量只要可得到本发明所希望的效果即可，对此没有特别的限制。
作为可适用于本发明前述饲料的生物，没有特别的限制，作为前述养殖生物可列举马、牛、猪、羊、山羊、骆驼、骆羊等家畜，小鼠、大鼠、天竺鼠、兔子等试验动物，鸡、鸭子、火鸡、鸵鸟等家禽，真鲷、条石鲷、牙鲆、蝶鱼、 鱼、黄尾笛鲷、黄条 金枪鱼、大甲鲹、香鱼、鲑鱼类，红鳍圆、鳗鲡、泥鳅、鲇鱼等鱼类，对虾、黑虎虾(ブラツクタイガ-)、对虾(タイシヨウエビ)、青蟹等甲壳类等，鲍、丽口螺属、扇贝、牡蛎等贝类，作为宠物动物可列举狗、猫等，可广泛用于陆地·水中的动物。
本发明提供的对生物给予本发明有效成分的生物饲养方法，例如可通过对对象生物给予前述饲料和/或生物用饲养剂以得到本发明所希望的效果来进行。
通过摄取本发明的饲料或者将对象生物浸渍在含有本发明的有效成分的液体中，可以良好维持、改善家畜、试验动物、家禽、鱼类、甲壳纲动物、贝类动物、宠物动物等的身体条件。
作为本发明的生物体的内环境稳定维持用食品、饮料或饲料，含有、添加和/或稀释具有作为有效成分的生物体的内环境稳定维持作用的岩藻依聚糖、其降解物和/或它们的盐，只要含有表达其作用所需的量即可，对其形状没有特别的限制，包括药片状、颗粒状、胶囊等经口服可摄取的形状。另外，本发明的有效成分作为同时具有生物体的内环境稳定维持作用和食物纤维功能的健康食品的原料、作为食品、饮料或饲料的制造原料是极其有用的。
进一步，作为本发明的一实施方案，提供了1种以上选自岩藻依聚糖、其降解物及其盐的物质在制造生物体的内环境稳定维持的药剂中的应用。
本发明的第2种方案提供了着色少、苦味和碘含量减少、具有新鲜感的风味改善的岩藻依聚糖和海藻类提取物、含有该岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的食品、饮料、调味料、饲料、化妆品或药物及其它们有效的制造方法。在本发明的方案中，在食品、饮料、调味料、饲料、化妆品或药物中使用的岩藻依聚糖和海藻提取物，可通过本发明提供的岩藻依聚糖或海藻类提取物的制造方法得到。该岩藻依聚糖和海藻类提取物减少或除去了成为海藻臭原因的成分、色素、蛋白质等，可以分别优选作为无臭或海藻臭减少了的岩藻依聚糖和海藻类提取物，或者作为无臭或海藻由来的绿褐色减少了的岩藻依聚糖和海藻类提取物来提供，作为原料，和其它成分混合使用时，即使高浓度使用，对风味等也没有影响并可利用其它成分的特征。另外，如后述，在本发明的岩藻依聚糖或海藻类提取物的制造方法中，使用蛋白酶时，显著降低或除去了可使所得本发明的岩藻依聚糖或海藻类提取物变应原反应的蛋白质，作为避免了变应原反应的食品、饮料、调味料、饲料、化妆品或药物的原料是特别有用的。进一步，本发明的岩藻依聚糖和海藻类提取物的碘含量被降低，由于一般认为碘的过度摄取对身体不好，所以作为食品、饮料、调味料、饲料、化妆品或药物的原料是特别有用的。另外，同样将该岩藻依聚糖和本发明的第1种方案中记载的岩藻依聚糖降解，作为岩藻依聚糖的降解物，可和该岩藻依聚糖一样使用。
另外，由于本发明的岩藻依聚糖和海藻类提取物的杂质少，所以再加工、和其它成分进行酶和/或化学反应时，由于可以减少或省去除去蛋白质或除去杂质引起的副产物，作为前体使用也优良。例如，优选针对酶或酸的水解生成寡糖以及化学合成使用。进一步，由于作为原料的杂质少，保存中成分之间难于产生化学变化，可以谋求成分品质的稳定化。
本发明的岩藻依聚糖或海藻提取物的颜色、蛋白质含量以及碘含量具体地按照后述实施例7或14记载的测定。作为颜色，波长在660nm的吸光度优选为0.001～0.03，更优选0.01～0.02。作为蛋白质含量，优选0.01～8g/100g，更优选0.1～7g/100g。作为碘含量优选0.1～5.5mg％(w/v)，更优选0.2～5mg％(w/v)。
另外，在本发明的方案中提供的岩藻依聚糖作为化合物本身提供，或者作为岩藻依聚糖组分，即部分含有岩藻依聚糖和其它成分的组合物提供。另外，在提到岩藻依聚糖、海藻类提取物以及其原料的量时，只要没有特别的规定，称为干燥重量。
进一步，本发明的岩藻依聚糖和海藻类提取物具有已知的各种生理作用，例如能显示出细胞程序死亡诱发作用、肝细胞增殖因子产生增强作用、细胞因子产生调节作用、养发作用、胆固醇降低作用、血液澄清作用、抗血液凝固作用、抗癌作用、抗艾滋病病毒作用以及抗肿瘤作用等。特别是该岩藻依聚糖和海藻类提取物的胆固醇降低作用、血液澄清作用、抗血液凝固作用、抗癌作用、抗艾滋病病毒作用以及抗肿瘤作用优良。
因此，含有这种本发明的岩藻依聚糖和/或海藻类提取物形成的本发明提供的食品、饮料、调味料、饲料、化妆品或药物(下面有时称为本发明的食品)在各种方面上对人的适用性是优良的，岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的各种作用，特别是基于胆固醇降低作用、血液澄清作用、抗血液凝固作用、抗癌作用、抗艾滋病病毒作用以及抗肿瘤作用，例如根据本发明的药物，可以期待对上述作用显示出敏感性的疾病的症状的改善或者缓和效果，或者期待该疾病的治疗或者预防效果。因此，作为本发明的药物，优选提供胆固醇降低用药物、血液澄清用药物、抗血液凝固用药物、抗癌用药物、抗艾滋病病毒用药物或者抗溃疡用药物。
在本发明的食品等中可使用前述的还原提取的岩藻依聚糖。另外，也可使用从本发明提供的海藻类提取物得到的岩藻依聚糖。另一方面，可在本发明的食品等中使用的该海藻类提取物是具体用如下所示的方法得到的，该海藻类提取物及其制造方法包括在本发明中。
本发明的海藻类提取物的制造方法的大的特征之一在于包括在还原性物质的存在下提取海藻类的步骤。
作为原料的海藻类，只要是藻类，无论什么都可以，可列举例如岩藻目、网地藻目、海带目、毛头藻目、黑顶藻目、马鞭藻目、网管藻目、萱藻目、索藻目、大花草目、水云目等褐藻类(Phaeophyta)；仙菜目、マサゴシバリ目、海索面目、杉藻目、隐丝藻目、红皮目、石花菜目等红藻类(Rhodophyta)；松藻目、绒枝藻目、石莼目、蕨藻目等绿藻类(Chlorophyta)等。特别优选褐藻类。在本发明中使用褐藻类时，可以得到含有作为功能性成分的岩藻依聚糖的海藻类提取物，进一步由该海藻类提取物可高纯度、高收率地得到还原提取的岩藻依聚糖。其中特别优选海带目的海带科以及翅藻科。作为海带科，可使用例如海带、リシリ海带、ホソメ海带、ミツイシ海带、伽高迈海带等。另外，作为翅藻科，可以用例如裙带菜属、ヒロメ、アオワカメ等。进一步，裙带菜属可以用叶状体和メカブ(孢子叶)的任意一种或两者都用。
在本发明的海藻类提取物的制造方法中，对提取前的原料的前处理方法没有特别的限制，可以根据常规的方法进行简单的水洗、焙炒、焙烤、蒸煮，也可进行后述的蛋白酶处理，或者将两者组合也可以。对前处理后的海藻类的形状没有特别的限定，可以粉状、片状、碎片、切成方块或者薄片、原样使用。
对用于本发明的还原性物质没有特别的限制，优选供使用的还原性物质，从对还原的效果和味道的影响看，优选使用选自抗坏血酸、抗坏血酸盐、异抗坏血酸、异抗坏血酸盐、半胱氨酸和谷胱甘肽的一种以上。在此，抗坏血酸盐和异抗坏血酸盐是钠、钾、钙等盐比较合适。对使用的还原性物质的量没有特别的限制，相对于100重量份用于提取的溶剂，优选0.005～1.0重量份，更优选0.01～0.1重量份。
另外，从生产率的观点看，优选在还原性物质的存在下，用温水或溶剂进行从海藻类提取海藻类的提取物，更优选在进一步预先对海藻类进行蛋白酶处理后，在还原性物质存在下，进行温水或溶剂提取，或者在还原性物质存在下，在蛋白酶处理海藻类的同时，进行温水或溶剂提取。另外，作为温水的温度，优选在后述的提取温度内。
对提取方法没有特别的限制，从操作性的观点看，优选公知的温水浸渍法、温水喷洒法或者温水循环法，也可以用超临界提取法进行提取。
对本发明的提取条件没有特别的限制，例如可以在前述提取方法中，按照公知的条件进行提取。
在优选的方案中，作为原料使用的海藻类(干燥物)的重量，从生产率的观点看，相对于100重量份用于提取的溶剂和该海藻类干燥物的总量，优选0.5以上～小于25重量份，从香味方面看，更优选1～10重量份。另外，在0.5～25重量份的范围提取后，也可通过浓缩得到的海藻类提取物，提高含有物的浓度来使用，或者也可以粉末化。进一步，可以通过稀释使用。对用于提取的溶剂没有特别的限制，只要是无毒且可饮用的就可以。例如，可以适当使用水或溶剂。作为溶剂，可以使用有机酸和无机酸，可列举例如乙醇或乙醇水溶液等。另外，可列举例如进行超临界提取时的二氧化碳。从操作的容易性来看，作为溶剂，可适当使用水。对用于提取的水没有特别的限制，优选供饮用的水，其中，优选脱盐水、蒸馏水，也可使用自来水。
提取温度，从提取效率的观点看，优选为30～130℃，更优选为75～130℃，特别优选为50～100℃。另外，从海藻类提取物的感观品质的观点看，进一步优选80℃～100℃。提取时间，从生产率的观点看，优选5分钟～32小时，更优选0.2～24小时，进一步优选0.5～5小时。此时的提取液的pH优选3～7。另外，提取后的pH保持在3-6前后，从香味方面来看，是优选的。对含有来自海藻类的提取物的提取液和提取残渣的固液分离的方法没有特别的限制，可以是通常的过滤、离心分离、或者也可以将原料放入笼状的金属丝网中，提取后，回收残渣。对于固液分离后的纯化，可通过在低温下(优选10℃以下，0℃以上)将在提取液中可溶化的高分子成分冷却，使用常规方法的柿漆和降低渣滓试剂将这些成分凝集、沉淀、过滤，可以得到澄清的液体。过滤优选使用1μmφ或0.45μmφ孔径大小的膜过滤器进行过滤比较好。
对于蛋白酶处理，即，进行作为原料的海藻类的蛋白酶的分解时所用的蛋白酶没有特别的限制，可使用动物、植物以及微生物起源的蛋白酶，作为动物起源的蛋白酶，可列举例如麋蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和凝乳酶，作为植物起源的蛋白酶，可列举例如木瓜蛋白酶和波萝蛋白酶，作为微生物起源的蛋白酶，可列举例如细菌、放线菌、曲霉菌、霉菌和担子菌由来的酸性、中性和碱性蛋白酶。另外，胶原酶、酯酶和明胶酶也包括在在此所谓的蛋白酶中。另外，也可以将羧肽酶、氨基肽酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶的至少一种以上和蛋白酶合并使用。
作为前处理对海藻类进行蛋白酶处理时，对蛋白质的使用量没有特别的限制，每100重量份海藻类干物质，优选0.01～10重量份，更优选0.05～5重量份。对于溶剂，只要是能够进行所需的酶反应就行，对此没有特别的限制，可优选使用水或乙醇水溶液(乙醇浓度为0～50容量％)。另外，对反应温度没有特别的限制，根据使用的酶，优选30～120℃，从操作上看，更优选50～100℃。反应时间可根据反应温度适当设定，优选0.1～32小时，更优选0.2～24小时。
另一方面，在提取过程中，添加蛋白酶，在进行蛋白酶处理的同时进行提取时，对蛋白酶的使用量没有特别的限制，每100重量份使用的海藻类干物质，优选为0.01～10重量份，更优选0.05～5重量份。
得到的海藻类提取物例如在120℃，灭菌加热20秒后，浓缩，直接或用水稀释后进一步无菌过滤，填充到容器中。此时既可以进行氮气充填，也可以在其后，在90℃加热杀菌1分钟后形成制品。
作为本发明的提取物的形状，没有特别的限制，可以是液状、干燥物等固形状、粉末状。
可进一步从本发明的海藻类提取物用公知的方法高收率地分离还原提取的岩藻依聚糖。从该海藻类提取物分离该岩藻依聚糖的分离方法，没有特别的限制，可以是公知的高分子成分的分离方法例如，在还原性物质存在下，对海藻类进行蛋白酶处理后，用热水或溶剂提取，用压滤机进行固液分离。用超滤机将液体部分浓缩、脱盐后，用硅藻土过滤。然后，用浓缩机浓缩滤液，用高压釜，在121℃进行灭菌15分钟。冷冻干燥该浓缩液，可得到本发明的还原提取的岩藻依聚糖。
进一步，用公知的方法，降解得到的岩藻依聚糖，可得到该岩藻依聚糖的降解物。可通过例如国际公开第97/26896号公报、国际公开第99/41288号公报、国际公开第00/50464号公报中记载的方法制备岩藻依聚糖的降解物，和本发明的海藻类提取物或岩藻依聚糖一样使用。这些岩藻依聚糖降解物也包括在本发明中。
在本发明的第2个方案中提供的食品、饮料、调味料、饲料和药物的制造方法及其使用方式没有特别的限制，分别按照例如前述本发明的第1个方案中记载的食品、饮料、饲料和内环境稳定维持剂就可以。另一方面，同样提供的化妆品具有作为有效成分含有的岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的公知的生理作用，例如提高皮肤的保湿性和弹性的作用、防止皮肤老化的作用、抗变应原作用等，根据该化妆品，可期待皱纹的改善·预防、皮肤弹性的提高·维持、皮肤肥厚的改善·预防等效果。该制造方法和使用方式没有特别的限制，可列举例如下面的方式。
在该化妆品中的本发明的岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的含量通常优选为0.0001～20重量％，更优选为0.001～5重量％，进一步优选为0.03～3重量％。
另外，作为其它成分，可根据需要，含有在化妆品领域中公知的各种成分。作为该成分，可列举例如吡咯烷酮羧酸盐等保湿剂、液体石蜡、凡士林等皮肤柔软剂、维生素E等维生素类、丙二醇单硬脂酸酯等表面活性剂、硬脂醇等乳化稳定剂、防腐剂、颜料、抗氧化剂、紫外线吸收剂等。只要是以在不抑制本发明所希望的效果的显现的范围内，且根据需要可以期待该成分的效果的量含有这些成分即可。
作为本发明的化妆品的形状，没有特别的限制，例如优选洗剂类、乳液类、膏霜类、面膜类，浴用剂，洗面剂，浴用皂、浴用洗涤剂或软膏等。
该化妆品可根据需要，使用本发明的岩藻依聚糖和/或海藻类提取物以及前述其它成分作为原料，根据化妆品领域中的公知方法适当地制造。另外，根据化妆品的形状使用，得到适当的、所希望的效果即可。例如洗剂时，例如对于人整个脸使用的情况，每次使用，作为前述优选成分的量，优选0.01～5g左右，由于可赋予肌肤紧绷或艳丽，因此可得到美肤效果。
进一步，本发明提供了本发明的食品等优选的制造方法。即，提供了食品、饮料、调味料或饲料的制造方法、化妆品的制造方法以及药物的制造方法(优选，胆固醇降低用药物、血液澄清用药物、抗血液凝固用药物、抗癌用药物、抗艾滋病病毒用药物或者抗溃疡用药物)，其特征在于包括在本发明的岩藻依聚糖的制造方法中，在还原性物质的存在下提取海藻类的步骤和/或在本发明的海藻类提取物的制造方法中，在还原性物质的存在下提取海藻类的步骤。该方法在食品、化妆品、药物等公知的制造步骤的任意一阶段，包含本发明的岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的制造步骤。通过从是前述食品等的原料，且作为有效成分起作用的岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的制造，连续进行作为最终制品形态的食品等的制造，可更有效地制造本发明的食品等。
另外，在本发明中使用的特别是具有生物体的内环境稳定维持作用的岩藻依聚糖、其降解物和/或它们的盐以及海藻类提取物对于大鼠即使以2g/kg口服单次给药，也没有发现死亡的例子。
下面，列举实施例，对本发明进行更具体地说明，但是本发明并不限于这些实施例。另外，如果没有特别说明，实施例中的％是重量％。
制造例1(1)将伽高迈海带充分干燥后，干燥物20kg用自由粉碎机(奈良机械制作所制)粉碎。
在自来水900升中溶解氯化钙二水合物(日本曹达社制)7.3kg，然后混合伽高迈海带粉碎物20kg。通过吹入水蒸气使液温由12℃升温至90℃加热40分钟，然后在搅拌下在90～95℃保温1小时，冷却，得到冷却物1100升。
用固液分离装置(West Farrier Separator社制CNA型)将冷却物进行固液分离，制备约900升的固液分离上清液。
将固液分离上清液360升用DAICEL社制的FE10-FC-FUS0382(分级分子量3万)浓缩至20升。加入自来水20升，然后再浓缩至20升，反复该操作5次，进行脱盐处理，得到伽高迈海带由来的提取液25升。
将该溶液1升进行冷冻干燥，得到伽高迈海带由来的岩藻依聚糖干燥物13g。
(2)将制造例1-(1)记载的岩藻依聚糖干燥物7g溶解于含有50mM氯化钠和10％乙醇的20mM咪唑缓冲液(pH8.0)700ml中，通过离心分离除去不溶物。将DEAE-Cellulofine A-800柱(φ11.4cm×48cm)用相同的缓冲液平衡化，将离心分离后的上清液加到柱子上，用同种缓冲液洗涤，用50mM到1.95M浓度梯度的氯化钠洗脱(1个级分250ml)。用苯酚硫酸法和咔唑硫酸法，求出总糖量和糖醛酸含量，洗脱依次得到级分43～49，级分50～55，级分56～67的组分。接着，将这些组份通过电透析脱盐后冷冻干燥，分别从级分43～49制备出组分I(340mg)，从级分50～55制备出组分II(870mg)，从级分56～67制备出组分III(2.64g)。
在图1中显示伽高迈海带由来的岩藻依聚糖的DEAE-Cellulofine A-800柱洗脱曲线。在图1中，纵轴是用咔唑硫酸法在530nm的吸光度(图中黑点)，用苯酚硫酸法在480nm的吸光度(图中白点)和电导率(mS/cm图中白色方块)，横轴是级分序号。图中前面的峰是U-岩藻依聚糖，后面的峰是F-岩藻依聚糖。
(3)从伽高迈海带制备含有硫酸化岩藻糖的多糖组分。即，将市售的干燥的ガゴメ海带2kg用装备有孔径1mm的滤网的切割磨机(增幸产业社制)粉碎，悬浮于20升80％乙醇中后，在25℃搅拌3小时，用滤纸过滤。将所得残渣悬浮于40升含有100mM氯化钠的30mM磷酸钠缓冲液(pH6.5)中，在95℃处理2小时后，用孔径106μm的不锈钢筛子过滤。向所得滤液中加入200g活性炭、4.5升乙醇、12000U的海藻酸裂解酶(Nagase生化学工业社制)，在25℃搅拌20小时后，离心分离。所得上清液通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机浓缩至4升后，通过离心分离除去不溶物，在5℃下放置24小时。通过离心分离除去生成的沉淀，用超滤机对所得上清液进行溶剂交换，作为100mM氯化钠溶液。在4℃将该溶液冷却后，用盐酸调pH为2.0，通过离心分离除去生成的沉淀。将所得上清液的pH用氢氧化钠调至8.0，浓缩至4升后，用超滤机溶剂交换为20mM氯化钠。通过离心分离除去该溶液中的不溶物后，冷冻干燥，得到伽高迈海带由来的岩藻依聚糖干燥物76g。
参考例2(1)将交替单胞菌属SN-1009(FERM BP-5747)接种于注入了含有葡萄糖0.25％，胨1.0％，酵母提取物0.05％的人工海水(JamarinLaboratory社制)pH8.2形成的培养基600ml并灭菌(120℃，20分钟)的2升三角烧瓶中，在25℃培养26小时作为种培养液。将含有胨1.0％，酵母提取物0.02％，下述制造例2-(2)中记载的岩藻依聚糖0.2％和消泡剂(信越化学工业社制KM70)0.01％的人工海水(pH8.0)形成的培养基20升放入容积30升的发酵缸中，在120℃杀菌20分钟。冷却后，将上述种培养液600ml接种，在24℃，每分钟10升的通气量和每分钟250转的搅拌速度下培养24小时。培养完成后，将培养液离心分离，得到菌体和培养上清液。将所得培养上清液通过装备有排除分子量1万的空心纤维的超滤机浓缩后，用85％的饱和硫酸铵盐析，通过离心分离收集生成的沉淀，用含有1/10浓度的人工海水的20mM Tris-盐酸缓冲液(pH8.2)进行充分透析，制备600ml对硫酸化多糖具有选择性作用的内硫酸化多糖降解酶(F-岩藻依聚糖特异性降解酶)液。
(2)将干燥的伽高迈海带2kg用装备有直径1mm的滤网的切割磨机(增幸产业社制)粉碎，将所得海带片悬浮于20升80％乙醇中，在25℃搅拌3小时，用滤纸过滤后，将残渣充分洗净。将所得残渣悬浮于加热至95℃的40升含50mM氯化钠的20mM磷酸钠缓冲液pH6.5中，间歇搅拌的同时在95℃维持2小时，萃取出硫酸化多糖。
将萃取液中的悬浮物过滤，制备滤液后，过滤残渣用3.5升100mM氯化钠洗净，进一步得到滤液。
将两滤液合并后，降温至30℃，添加3000U的海藻酸裂解酶(Nagase生化学工业社制)之后，加入乙醇4升，在25℃搅拌24小时。接着，进行离心分离，所得上清液通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机浓缩至4升后，进一步用含有10％乙醇的100mM氯化钠连续超滤至着色性物质不再被滤出。
非过滤液中生成的沉淀通过离心分离除去，将该上清液降温至5℃，用0.5N盐酸调至pH2.0后，用离心分离除去生成的蛋白质等沉淀，所得上清液迅速用1N氢氧化钠调至pH8.0。
接着，通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机进行超滤，用20mM氯化钠(pH8.0)完全置换溶剂后，再次调至pH8.0，离心分离后，进行冷冻干燥，制备出约95g的硫酸化多糖。
(3)将干燥的伽高迈海带2kg用装备有直径1mm的滤网的切割磨机粉碎，将所得海带片悬浮于20升80％乙醇中，在25℃搅拌3小时，用滤纸过滤后，将残渣充分洗净。将所得残渣悬浮于含有上述制造例2-(1)制备的F-岩藻依聚糖特异性降解酶液30ml、10％乙醇、100mM氯化钠、50mM氯化钙的20升50mM咪唑的缓冲液(pH8.2)中，在25℃搅拌48小时。将该悬浮液用网目直径32μm的不锈钢金属丝网过滤，残渣用含有50mM氯化钙的10％乙醇洗净。再将残渣悬浮于10升含50mM氯化钙的10％乙醇中，搅拌3小时后，用不锈钢金属丝网过滤，同样洗净。进一步将残渣在同样条件下悬浮后，搅拌16小时，用直径32μm的不锈钢金属丝网过滤，同样洗净。
收集如此得到的滤液和洗涤液，通过装备有排除分子量3000的空心纤维的超滤机超滤，分离为滤液和非滤液。将该滤液用旋转蒸发器浓缩至约3升后，离心分离得到上清液。所得上清液通过装备有排除分子量300的膜的电透析器脱盐，向该溶液中加入醋酸钙使之达到0.1M，通过离心分离除去生成的沉淀。将上清液加到预先用50mM的醋酸钙平衡化的DEAE-Cellulofine(树脂量4升)柱上，用50mM醋酸钙和50mM氯化钠充分洗净后，用50mM～800mM的氯化钠梯度洗脱。此时以分馏量每瓶500ml进行。用纤维素醋酸酯膜电泳法[AnalyticalBiochemistry第37卷，197～202页(1970)]分析分馏组分时，氯化钠浓度约0.4M时洗脱出的硫酸化多糖(级分63附近)是均一的。接着，首先将级分63的液体浓缩至150ml后，加入氯化钠使浓度达到4M，将其加到预先用4M的氯化钠平衡化的苯基-Cellulofine(树脂量200ml)柱上，用4M的氯化钠充分洗净。收集非吸附性的硫酸化糖组分，通过装备有排除分子量300的膜的电透析器脱盐，得到脱盐液505ml。将所得脱盐液中的40ml加到含有10％乙醇的0.2M氯化钠平衡化的Cellulofine GCL-900(4.1cm×87cm)柱上，进行凝胶过滤。以每个级分9.2ml进行收集。用苯酚硫酸法[Analytical Chemistry第28卷，350页(1956)]对全部级分进行总糖量分析。
结果，由于硫酸化糖形成一个峰，收集该峰的中央部分级分63～70，通过装备有排除分子量300的膜的电透析器脱盐后，冷冻干燥，得到112mg下式(V)所示化合物的干燥品。下面，将该化合物称为7-12SFd-F。
(4)将充分干燥的伽高迈海带用自由粉碎机(奈良机械制作所制)粉碎。粉碎的伽高迈海带在95℃用热水提取2小时后，用倾析器进行固液分离，接着用排除极限分子量3万的超滤膜浓缩，得到岩藻依聚糖提取液。
(5)将含有国际公开第99/11797号公报记载的末端型硫酸化多糖降解酶(F-岩藻依聚糖特异型降解酶)的大肠菌BL 21(DE3)/pEFDAII103的培养液用分级分子量1万的超滤膜浓缩，将所得浓缩液作为F-岩藻依聚糖特异性降解酶液。向含有50mM氯化钙和300mM氯化钠的25mM硼酸/氢氧化钠缓冲液(pH7.5)中，加入制造例2-(4)记载的岩藻依聚糖提取液和F-岩藻依聚糖特异性降解酶，在37℃反应19小时。
将反应液用排除极限分子量1万的超滤膜浓缩，接着用反渗透浓缩装置(东レ制)将滤液进一步浓缩。将所得浓缩液用电透析器(旭化成制)进行脱盐。
将所得脱盐液加到DE 52(ワットマン制)、DEAE-Cellulofine柱(アマシメムファルマシアバイオテク制)、聚乙烯亚胺凝胶柱(山善制)上，依次进行色谱分析。
将所得硫酸化多糖组分用电透析器脱盐，接着进行灭菌过滤、冷冻干燥，得到上述式(V)所示的化合物7-12SFd-F干燥样品。
(6)将用制造例1-(2)记载的方法制备的F-岩藻依聚糖98mg溶解于5mlDMSO中，在室温下添加哌啶硫酸980mg后，在80℃搅拌2小时。冷却反应液后，用截止分子量1000的透析膜透析2天。将所得透析内液供给到阳离子交换柱[アンバ-ライトIRA-120(Na+)]上后，通过减压干燥，制备出F-岩藻依聚糖高硫酸化体98mg。
(7)将用制造例2-(3)记载的方法制备的7-12SFd-F 34mg溶解于4ml DMSO中，之后，用和制造例2-(6)同样的操作，制备出7-12SFd-F的高硫酸化体。
制造例3(1)将干燥的伽高迈海带2kg用装备有孔径1mm的滤网的切割磨机(增幸产业社制)粉碎，将所得海带片悬浮于20升80％乙醇中，在25℃搅拌3小时，过滤后洗净。将所得残渣悬浮于含有50mM氯化钙、100mM氯化钠、10％乙醇和制造例2-(1)制备的交替单胞菌属SN-1009(FERM BP-5747)由来的F-岩藻依聚糖特异性降解酶1U的20升30mM咪唑缓冲液(pH8.2)中，在25℃搅拌2天。然后，用孔径32μm的不锈钢金属丝网过滤，洗净。将所得残渣悬浮于含有100mM氯化钠、10％乙醇和4g海藻酸裂解酶(Nagase生化学工业社制)的40升磷酸钠缓冲液(pH6.6)中，在25℃搅拌4天后，离心分离得到上清液。为除去所得上清液中含有的海藻酸低分子量产物，通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机浓缩至2升后，用含有10％乙醇的100mM氯化钠进行溶剂交换。向该溶液中加入等量的400mM醋酸钙搅拌后，离心分离，所得上清液用冰冷却的同时，用1N盐酸调至pH2.0。离心分离除去生成的沉淀，所得上清液用1N的氢氧化钠调至pH8.0。将该溶液超滤浓缩至1升后，用100mM氯化钠进行溶剂交换。通过离心分离除去此时生成的沉淀。为除去所得上清液中的疏水性物质，向上清液中加入氯化钠使之达到1M，将其加到用1M氯化钠平衡化的3升苯基Cellulofine柱(生化学工业制)中，收集流出的组分。将该组分用超滤机浓缩后，用20mM的氯化钠进行溶剂交换，冷冻干燥。冷冻干燥物的重量为29.3g。
(2)将上述冷冻干燥物15g溶解于含有400mM氯化钠和培养国际公开97/26896号说明书中记载的黄杆菌属SA-0082(FERM BP-5402)，从该培养物得到的内硫酸化多糖降解酶(U-岩藻依聚糖特异性降解酶)9U的1.5升50mM Tris-盐酸缓冲液中，在25℃反应6天后，用蒸发器浓缩至约300ml。将浓缩液放入排除分子量3500的透析管中彻底透析，将透析管内残存的液体加到用50mM氯化钠平衡化的4升DEAE-Cellulofine A-800柱中，用50mM氯化钠充分洗净后，用50～650mM的氯化钠进行浓度梯度洗脱。进一步将该柱用650mM的氯化钠充分洗脱。将洗脱出的组分中用650mM的氯化钠洗脱的组分作为硫酸化岩藻半乳聚糖组分收集，用排除分子量10万的超滤机浓缩后，用10mM的氯化钠进行溶剂置换，冷冻干燥，得到硫酸化岩藻半乳聚糖的冷冻干燥物0.85g。所得硫酸化岩藻半乳聚糖(G-岩藻依聚糖)的糖构成含有半乳糖和岩藻糖，其摩尔比为约2∶1。
制造例4使制造例3-(2)记载的U-岩藻依聚糖特异性降解酶和制造例1-(3)得到的伽高迈海带由来的岩藻依聚糖作用，进行降解物的制备。
即，混合2.5％岩藻依聚糖水溶液16ml、50mM磷酸缓冲(pH7.5)12ml、4M氯化钠4ml和32mU/ml前述U-岩藻依聚糖降解酶水溶液8ml，在25℃下反应48小时。
用CellulofineGCL-300(生化学工业社制)柱对反应液进行分子量分级，收集分子量2000以下的组分。用マイクロアシライザ-G3(旭化成社制)将该组分脱盐后，用DEAE-琼脂糖FF柱分离成3个组分，脱盐后，冷冻干燥，分别得到41mg、69mg和9.6纯化物。通过质量分析，它们的分子量分别是564、724、1128，NMR分析确认是下式(VI)、(VII)、(VIII)所示化合物。将它们分别称为3-1S、3-3S、6-2SFd-U。
制造例5将市售的裙带菜干燥物1kg用装备有孔径1mm的滤网的切割磨机破碎后，悬浮于10升80％的乙醇中，搅拌3小时后，用滤纸过滤，得到残渣。将残渣悬浮于含有50mM氯化钠的40mM磷酸缓冲液(PH6.5)20升中，在95℃处理2小时。将处理液冷却至37℃后，加入乙醇使之达到10％，加入市售的海藻酸裂解酶K(Nagase生化学工业社制)12000U后，在室温搅拌24小时。将所得处理液离心分离，将上清液通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机浓缩至2升后，通过离心分离除去生成的沉淀。将所得上清液冷却至5℃后，加入0.5N的盐酸调至PH2.0，之后搅拌30分钟，通过离心分离除去生成的沉淀。用0.5N的氢氧化钠将上清液的PH调至8.0，通过超滤将溶剂置换为20mM的氯化钠。将溶液的PH调至8.0后，离心分离，将所得上清液冷冻干燥，得到90.5g裙带菜由来的岩藻依聚糖。
制造例6将按照制造例1-(1)记载的方法制备的伽高迈海带由来的岩藻依聚糖2g溶解于100ml水中，用柠檬酸调至pH3后，在100℃处理3小时，制备该岩藻依聚糖的酸降解物。将该酸降解物用CellulofineGCL-300或Cellulofine GCL-25凝胶过滤，分级分子量，分级为分子量超过25000(A组分)，25000～超过10000(B组分)，10000～超过5000(C组分)，5000～超过2000(D组分)，2000～超过500(E组分)，500以下(F组分)。进一步将这些组分和酸降解物分别脱盐后进行冷冻干燥，制备酸降解物的各分级物和酸降解物。
制造例7将市售的盐藏海蕴属5kg与20升乙醇混合，用剪刀剪断。放置1晚后用滤纸过滤，将所得残渣悬浮于12.5升水中，在95℃维持2小时。将悬浮液用滤纸过滤后，添加含有350mM氯化钠的2.5％的氯化十六烷基吡啶鎓溶液2600ml，放置3天。废弃上清液部分，将沉淀部分离心分离，废弃上清液。向所得沉淀中加入2.5升350mM的氯化钠后，用匀化器匀化，离心分离。重复该洗涤操作3次。向所得沉淀中加入400ml的400mM氯化钠后，用匀化器匀化，加入乙醇使之达到80％，搅拌30分钟后用滤纸过滤。向所得残渣中加入500ml的饱和氯化钠80％乙醇溶液，之后，用匀化器匀化，加入饱和氯化钠乙醇溶液使之达到1升，搅拌30分钟后用滤纸过滤。反复该洗涤操作直到滤液在260nm的吸光度实质上达到0为止(通常为5次)。将所得残渣溶解于1.5升2M的氯化钠溶液中后，离心分离除去不溶物，使其流出预先用2M的氯化钠平衡化的100mlDEAE Cellulofine A-800柱。将流出的组分通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机浓缩至2升后，通过超滤将溶剂置换为2mM氯化钠。将该溶液离心分离，将所得上清液冷冻干燥，得到22.9g海蕴属由来的岩藻依聚糖。
制造例8将刺参属5kg解体，除去内脏，收集体壁。相对于体壁湿重200g加入500ml丙酮，用匀化器处理后过滤，将残渣用丙酮洗涤直到其上没有着色物质为止。将该残渣抽吸干燥，得到140g的干燥物。向该干燥物中加入0.4M的食盐水2.8升，在100℃维持1小时后，过滤，残渣用0.4M的食盐水充分洗净，得到萃取液3.7升。向该萃取液中加入5％十六烷基吡啶鎓氯化物直到不生成沉淀为止，通过离心分离收集生成的沉淀。将该沉淀悬浮于0.4M的食盐水中之后再次离心分离，向所得沉淀中加入1升4M食盐水，用匀化器处理后，搅拌的同时加入4升乙醇，搅拌1小时后，过滤，得到沉淀。对于该沉淀，重复所谓将其悬浮于80％乙醇中后过滤的步骤直到上清液在260nm的吸光度实质上为0。将所得沉淀悬浮于2升2M食盐水中，通过离心分离除去不溶物，上清液通过装备有排除分子量3万的膜的超滤装置超滤，完全脱盐后，冷冻干燥，得到海参由来的岩藻依聚糖3.7g。
制造例9将市售的盐藏冲绳岛海蕴属625g悬浮于4375ml 30mM磷酸钠缓冲液(pH6.0)中，用均化器以8000转/分处理5分钟后，在95℃维持1小时，通过离心分离得到上清液。向所得上清液中加入10g活性炭后搅拌30分钟，通过离心分离得到上清液。所得上清液通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机浓缩至2升后，用20mM氯化钠进行将溶剂置换，冷冻干燥，得到10.9g冲绳岛海蕴属由来的岩藻依聚糖组分的干燥物。
制造例10将粉碎的墨角藻(Fucus vesiculosus)的干燥物1kg悬浮于10升80％乙醇中，搅拌3小时后，用滤纸过滤，得到残渣。将残渣悬浮于含有100mM氯化钠的30mM磷酸缓冲液(PH6.0)30升中，在95℃维持2小时。将悬浮液冷却至37℃后，加入100g活性炭搅拌30分钟。加入市售的海藻酸裂解酶K 3000U后，加入乙醇使之达到10％，在室温搅拌24小时。将所得反应液离心分离，将上清液通过装备有排除分子量10万的空心纤维的超滤机浓缩至2升后，通过离心分离除去生成的沉淀。向该上清液中加入含有100mM氯化钠的30mM磷酸缓冲液(pH6.0)的同时进行超滤，除去色素。将所得非滤液冷却至5℃后，加入0.5N的盐酸调至PH2.0，之后搅拌30分钟，通过离心分离除去生成的沉淀。用0.5N的氢氧化钠将上清液的PH调至8.0，通过超滤将溶剂置换为20mM的氯化钠。将所得溶液的PH调至8.0后，离心分离，将所得上清液冷冻干燥，得到71g墨角藻由来的岩藻依聚糖。
实施例1 岩藻依聚糖的肝纤维化抑制效果通过对7周龄的雄性SD系大鼠每周2次以0.5ml/大鼠的量腹腔内给予猪血清(ギブコ社)10周，制作肝纤维模型。将制造例1-(1)记载的伽高迈海带由来的岩藻依聚糖的溶液用自来水调整到0.5％，从试验开始5周后，作为饮用水给予。对照组给予自来水。正常对照组同样给予生理食盐水来代替猪血清。
肝纤维化的评价以作为岩藻依聚糖主要构成的氨基酸的羟基脯氨酸量的增加为标准进行。即，测定摘出的肝组织的羟基脯氨酸量，用每克肝重量的浓度(μg/g肝)和全部肝脏的羟基脯氨酸量(mg/全部肝)来表示肝组织中羟基脯氨酸量。其结果，与对照组比较，在伽高迈海带由来的岩藻依聚糖给予组，肝组织中的羟基脯氨酸量显著减少。进一步，关于在对照组中的胶原的蓄积引起的肝重量的增加以及肝/体重比的上升，在伽高迈海带由来的岩藻依聚糖给予组也显著抑制了。这些结果示于表1和表2中。另外，观察摘出的肝组织时，与对照组的由于纤维化肝表面的光泽丧失，凹凸明显相反，在岩藻依聚糖给予组，和正常对照组一样，没有看见纤维化。
表1羟基脯氨酸量*nμg/g肝mg/全部肝对照组 10 702±9411.7±1.8岩藻依聚糖给予组10 336±31**4.9±0.5**正常对照组 4164±9 2.2±0.0*平均值±标准误差**p＜0.01 vs对照组表2n体重(g)肝重量(g)肝/体重比(％)对照组 10463±9 16.5±0.73.5±0.1岩藻依聚糖给予组 10461±1114.6±0.4*3.2±0.1**正常对照组 4 458±1413.2±0.62.9±0.1平均值±标准误差*p＜0.05 vs 对照组**p＜0.01 vs 对照组实施例2 7-12SFd-F的肝纤维化抑制效果通过对7周龄的雄性SD系大鼠每周2次以0.5ml/大鼠的量腹腔内给予猪血清(ギブコ社)8周，制作肝纤维模型。将制造例2-(4)制备的7-12SFd-F干燥样品用蒸馏水稀释，从试验开始4周后，以100或30mg/5ml/kg的用量，开始连日强制口服给药。对于对照组，同样给予蒸馏水。对于正常对照组，同样给予生理食盐水来代替猪血清。
肝纤维化的评价通过测定摘出的肝脏的羟基脯氨酸量进行，这些结果示于表3中。
其结果，通过给予8周的猪血清，向肝纤维化(向肝脏积蓄胶原)发展，肝组织中羟基脯氨酸量和相当于单位肝重量的浓度上升直至正常肝的约4倍。另一方面，从给予猪血清第4周开始，通过以100或30mg/5ml/kg的用量连日强制口服给药，肝组织中的羟基脯氨酸量和相当于单位肝重量的羟基脯氨酸的浓度大致维持在第4周时的值。
从以上结果可以看出，7-12SFd-F抑制了肝纤维化的发展。
另外，观察摘出的肝组织时，与对照组的由于纤维化肝表面的光泽丧失，凹凸明显相反，在7-12SFd-F给予组，肝纤维化明显受到了抑制。
表3羟基脯氨酸量*nμg/g肝mg/全部肝对照组(8周)11 286±404.83±0.71对照组(4周)8193±112.70±0.177-12SFD-F给予组100mg/kg 8199±433.11±0.7930mg/kg8199±343.08±0.53正常对照组 577±5 1.14±0.11*平均值±标准误差实施例3 岩藻依聚糖对酒精摄取肝障碍抑制效果购入5周龄的雄性CrjCD(SD)系大鼠(日本チメ-ルズ·リバ-社)，饲料使用液体饲料(日本クレア社制)。将制造例1-(1)记载的伽高迈海带由来的岩藻依聚糖溶解于自来水中，口服给药(给药量示于表4中)。对于对照组，给予自来水。将伽高迈海带由来的岩藻依聚糖给药开始日作为第0日，从第7天开始，向CE-2饲料中加入乙醇，以使其达到终浓度5％，作为酒精饮食摄取。
肝障碍抑制化的评价通过血清生化学检查进行。即，在第35天进行采血，肝素处理后，通过离心分离得到血浆，通过血清生化学检查，测定血中标记物(GOT、GPT、γGTP)。另外，摘出肝脏，用10％中性福尔马林缓冲液固定，石蜡包埋并进行苏木精嗜红染色，进行病理学的观察。GOT、GPT、γGTP的测定试剂分别使用S.TA-HR II GOT 7070、S.TA-HR II GPT 7070和L型ワコ-γGTP(全部为和光纯药工业社)测定试剂盒。另外，在第35天采血后进行绝食，在第36天用醚麻醉从下腹部大动脉进行采血，进行肝素处理。离心分离后，得到血清，通过血清生化学检查，测定血中标记物(HDL、LDL、VLDL)。HDL、LDL和VLDL的测定用电泳法进行。另外，试验期间，饲料摄取量和饮水量在各组间没有差别。
其结果，通过口服使用伽高迈海带由来的岩藻依聚糖，酒精引起的GOT、GPT和γGTP的上升受到抑制，且认为在血中胆固醇中所谓的有害胆固醇的VLDL的比例的增加受到抑制，认为是好的胆固醇的HDL的比例的减少受到抑制。进一步，从肝脏的病理也可以看出，肝细胞的损伤·坏死·弥漫性增殖显然受到抑制。这些结果示于表4中。
从以上结果可以看出，伽高迈海带由来的岩藻依聚糖抑制了酒精引起的肝障碍。
表4 伽高迈海带由来的岩藻依聚糖在大鼠中的酒精摄取肝障碍抑制效果标记物 伽高迈海带由来的岩藻依聚糖(mg/大鼠/天)00.5 5GOT(IU/L) 108±12 93±5.5 84±4.2GPT(IU/L) 63±8.5 51±6.4 37±6.7γGTP(IU/L) 1.7±0.391.4±0.16 1.0±0.35HDL(％) 60±1.8 62±2.3 70±7.4LDL(％) 21±2.0 23±3.6 15±6.5VLDL(％) 16±1.6 11±0.7513±2.8弥漫性肝细胞增殖 2/9 0/8 0/7弥漫性肝细胞坏死 2/9 0/8 1/7平均值±标准误差(P＜0.05 )实施例4 岩藻依聚糖的酒精摄取肝障碍抑制效果在直至第35天为止用和实施例3一样的方法进行饲养，绝食后，在第36天用醚麻醉从下腹部大动脉进行采血，进行肝素处理。离心分离后，得到血清，通过血清生化学检查，测定甘油三酯值。甘油三酯值的测定使用甘油三酯E-试验ワコ-(和光纯药工业社制)进行测定。另外，试验期间，饲料摄取量和饮水量在各组间没有差别。
其结果，甘油三酯值和对照组相比较，显示出强的降低倾向。该结果示于表5中。
从以上结果可以看出，抑制了伽高迈海带由来的岩藻依聚糖引起的肝障碍。
表5标记物伽高迈海带由来的岩藻依聚糖(mg/大鼠/天)0 0.5 5 50甘油三酯值25.5±3.5519.8±3.122.5±3.1415.1±1.86平均值±标准误差(P＜0.05)实施例5 岩藻依聚糖的血糖值上升抑制效果从日本チメ-ルズ·リバ-株式会社购入5周龄的雄性CrjCD(SD)系大鼠(SPF动物)。将制造例1-(1)记载的岩藻依聚糖溶于自来水中，制备岩藻依聚糖溶液，让大鼠自由摄取。此时，将岩藻依聚糖溶液的浓度设定为0.005％、0.05％、0.5％。另外，在对照组给予自来水。在饲养后第10天，使用从前一天开始绝食18-20小时的动物，仅口服使用液体饲料(葡萄糖2g/kg)。采血在饲料喂养前、喂养0.5、1、2和3小时后通过尾静脉进行，进行肝素处理。之后，通过离心分离得到血浆，测定血糖量。其结果示于图2中。另外，血糖量以葡萄糖给予前的对象大鼠的血糖量为100％算出。图2是表示岩藻依聚糖引起的食后大鼠的血糖值上升抑制作用的图，纵轴表示血糖量(％)，横轴表示经过时间(时间)。由此，发现了岩藻依聚糖口服给药引起的血糖值上升抑制作用。
另外，同样地，比较直至6小时为止的总血糖量时，岩藻依聚糖给予组与对照组比较，血糖值的上升明显受到抑制。
实施例6 岩藻依聚糖的血中中性脂肪值上升抑制效果用和实施例5同样的方法，在饲养第19日，口服使用添加橄榄油的液体饲料以使橄榄油达到5ml/kg，饲料给予前、1、2小时后采血，测定甘油三酯。其结果示于第3图中。另外，以添加橄榄油前的液体饲料的对照大鼠的甘油三酯量为100％，算出甘油三酯量。第3图是表示岩藻依聚糖引起的食用后大鼠的血中中性脂肪值上升抑制作用的图，纵轴表示甘油三酯量(％)，横轴表示经过的时间(时间)。由此，发现了岩藻依聚糖口服给药引起的血中中性脂肪值上升抑制作用。
另外，同样地，比较直至6小时为止的血中总甘油三酯量时，岩藻依聚糖给予组与对照组比较，血中总甘油三酯量的上升明显受到抑制。
实施例7向脱盐水970g中加入30g裙带菜(干燥品，破碎至通过5mmφ)，作为还原剂，添加抗坏血酸钠以使其达到0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.05％w/w、0.08％w/w、0.1％w/w、0.5％w/w、1.0％w/w。作为对照，不添加抗坏血酸钠。在95℃提取1小时，在间歇缓慢搅拌下进行。添加2％助滤剂(C矿)后，通过滤纸，进一步用0.45μmφ孔径大小的膜过滤器的过滤，进行固液分离，得到裙带菜提取液。
对于所得提取液，进行碘含量测定和感观评价。
其结果示于表6中。感观评价由10名感观评定员，分5个等级进行，用其平均值表示。
表6 裙带菜提取液的碘含量和感观评价
根据表6，添加还原剂，提取出的裙带菜提取液与没有添加还原剂的对照相比较，添加量从0.02％w/w至1.0％w/w海藻臭尤其得到减轻，苦味显著减少，后味轻松地得到改善。
根据感观评价的比较，对于香味、味道、颜色的综合评价，在抗坏血酸钠的添加从0.005％w/w到1.0％w/w的条件下，与对照3.3相反，为从2.8到2.2。另外，综合评价值显示为2.5以下的还原剂抗坏血酸钠的浓度是从0.01％w/w至1.0％w/w。从这些结果可以看出，优选的还原剂添加量是从0.005％w/w到1.0％w/w，进一步在感观上比较合适的是从0.01％w/w至0.1％w/w。关于颜色，和对照的绿褐色相比，都浅，或者是无色的。另外，通过加入还原剂，碘含量转移到提取液中的少，以没有添加还原剂为100％时，添加0.0 05％还原剂，则5％的碘转移，但还原剂在0.01％以上时，碘的转移减少了7％以上(表中，参照转移率)。该结果推测为和苦味的减少相关。
实施例8将裙带菜(干燥品，破碎至通过5mmφ)9g放入脱盐水201g中，作为还原剂，添加0.02％w/w抗坏血酸钠，将提取时间设定在1小时，在75、80、90、95、100、120和130℃的各种温度下进行提取。对于所得滤液，和实施例7同样处理，进行感观评价。其结果示于表7中。
表7 提取温度的研究提取温度 感观评价 评价(℃)香味味道色综合75 2.6 2.7 2.7 2.7海藻臭减少少许，浓厚感略不足80 2.4 2.2 2.9 2.5海藻臭显著减少，苦味减少，有浓厚感90 2.3 1.8 3.0 2.4包括海藻臭在内的全部臭味少，苦味减少，愉快，后味良好95 2.1 1.8 3.0 2.3包括海藻臭在内的全部臭味少，苦味减少，愉快，后味良好100 2.1 1.8 3.0 2.3同上120 2.1 2.2 3.1 2.5海藻臭少，略残存苦味130 2.4 2.4 3.3 2.7生成海藻臭以外的臭味，略残存苦味根据表7，裙带菜提取的温度从75-100℃，可以得到感观评价高的综合评价值。另外，超过100℃，感观评价的综合评价值降低，在130℃提取，综合评价值和75℃在同样水平。因此，可以看出，提取温度的范围优选75℃-130℃，从感观品质看，更优选为80℃-100℃。
实施例9将裙带菜(干燥品，破碎至通过5mmφ)9g放入脱盐水201g中，作为还原剂，添加0.02％w/w抗坏血酸钠，将提取温度设定在95℃，将提取时间设定为0.5、1、3、5小时。对于所得滤液，和实施例7同样处理，进行感观评价。其结果示于表8中。
表8 提取时间的研究提取时间 感观评价 评价(小时)香味味道颜色综合0.5 2.4 2.0 3.0 2.5 海藻臭少，美味良好，略残存苦味1 2.1 1.8 3.0 2.3 包括海藻臭在内的全部臭味少，苦味减少，愉快，后味良好3 2.11.8 3.2 2.4 同上5 2.52.5 3.2 2.7 略生成海藻臭以外的臭味，稍有粗糙的口感根据表8，在裙带菜提取时间上，显示出海藻臭少且香味良好、苦味稍残存的效果是提取0.5小时。另外，在提取1小时，感观评价的综合值最优，发现了如果进一步提取，则该值增加，即使提取5小时，海藻臭也减少的效果。因此，提取时间从0.5小时到5小时比较合适。
实施例10对于pH的影响进行研究。按照实施例9，用柠檬酸或碳酸氢钠将提取溶剂的pH调整至3.0、4.0、5.0、6.0和7.0，在95℃进行1小时提取。其结果，确认所得提取液的海藻臭全部减少。对于味道，由于添加的柠檬酸或碳酸氢钠产生影响，没有进行比较。因此，可以看出，提取时的pH从海藻臭的减少来看，pH3.0-7.0比较合适。
实施例11将裙带菜干燥品，破碎至通过5mmφ)0.6kg放入20升脱盐水中，相对于脱盐水，添加还原剂抗坏血酸钠以使其达到0.02％w/w。作为对照，不添加还原剂。一边搅拌，一边加热，在95℃保持1小时后，冷却至室温。过滤使用滤纸(ADVANTEC#327)，作为预涂，使用助滤剂(Silika#600S，20g)，作为主体过滤，使用助滤剂(Celite#545，45g)，根据常规方法进行后，用1μmφ孔径大小的膜过滤器过滤。得到滤液19.4升。在120℃进行杀菌60秒，将所得杀菌液减压浓缩(40℃，750mmHg)，得到2.6升(7.58倍)(22.7％)的浓缩液。将浓缩液的一部分(1升)冷冻干燥，得到9g粉末。该操作进行5次。所得浓缩液的分析值示于表9中。
表9 浓缩液的分析项目 本发明产品对照产品pH 5.35 5.36酸度(0.1N NaOHml/10ml) 0.24 0.23福尔马林状态(ホルモ-ル態)的氮109.4 110.0(mg％，w/v)全氮(mg％，w/v) 222.5 231.0直接还原糖(mg％，w/v)0.24 0.24全还原糖(mg％，w/v) 1.78 1.80岩藻依聚糖(％，w/v) 2.88 2NaCl 3.48 3.41碘 4.15 4.95稀释7.7倍的感观评价 海藻臭少，没有海藻臭强(蒸馏水与浓缩液的容量比为6.7∶1) 感到苦味，有新烈，苦味强鲜感根据表9，本发明的来自裙带菜的提取液的浓缩液与对照相比，一般的分析值显示出大致相同水准的值，但关于碘，含量是对照的84％，可得到减少15％以上的效果。在用蒸馏水稀释到7.7倍的液体的感观评价中，本发明产品与对照产品比较，在所谓的海藻臭少，有新鲜感，没有感到苦味的香味方面，可以得到显著的效果。
实施例12将伽高迈海带、海带和裙带菜叶状体(分别为干燥品，破碎至通过5mmφ)9g分别放入201g脱盐水中，作为还原剂，添加0.02％w/w抗坏血酸钠。将提取温度设定在95℃，以提取时间1小时进行提取。作为对照，在没有添加抗坏血酸钠的情况下进行同样的处理。对于所得滤液，和实施例7同样处理，进行感观评价。其结果示于表10中。
表10 感观评价香味 味道 颜色 综合 评价伽高迈海 本发明产品 2.8 2.7 3.1 2.9 海藻臭少，没有带苦味对照3.3 3.8 3.6 3.6 由海藻臭和苦味海带 本发明产2.7 2.5 2.7 2.6 海藻臭减少，美味鲜明对照3.4 3.2 3.3 3.3 残存海藻臭和略微的苦味裙带菜叶 本发明产品 2.4 2.4 2.9 2.6 海藻臭少，没有状体 苦味对照3.0 3.2 3.5 3.2 有海藻臭，有苦味根据表10，即使在伽高迈海带、海带和裙带菜叶状体中，和裙带菜一样，在还原物质的存在下进行提取时，由于海藻臭减少，苦味也可以除去，所以连香味在内得到改善，有新鲜感。本发明产品不依赖于海藻的种类，作为食料，是合乎喜好的比较合适的提取物。
实施例13向褐藻类的伽高迈海带4g(干燥品，破碎至通过5mmφ)加入含100mmol/升氯化钙的脱盐水中，作为还原剂，添加0.01％w/w、0.05％w/w、0.10％w/w、0.20％w/w或者0.50％w/w的抗坏血酸钠，在95℃提取2小时后，用2号滤纸(东洋滤纸)过滤。用通过半胱氨酸-硫酸法测定L-岩藻糖的方法，测定滤液中的岩藻依聚糖含量。作为对照，使用没有添加抗坏血酸钠的物质。其结果示于表11中。
表11 岩藻依聚糖含量抗坏血酸钠(％w/w)岩藻依聚糖浓度(mg/ml滤液)没有添加(对照) 0.89(100％)0.01 1.11(125％)0.05 1.33(149％)0.10 1.33(149％)0.20 1.44(161％)0.50 1.45(162％)
根据表11，抗坏血酸在0.01～0.50％w/w时，岩藻依聚糖的提取率提高，上升至对照的1.6倍，在还原剂抗坏血酸存在下，岩藻依聚糖提取效率提高了。
接着，研究和蛋白酶的组合。即，将褐藻类的伽高迈海带4g(干燥品，破碎至通过5mmφ)和作为蛋白酶的植物起源的木瓜蛋白酶(Nagase生化学工业)或者枯草菌起源的SP-15FG(Nagase生化学工业)各40mg，和含100mmol/升氯化钙的脱盐水100ml混合，用2小时从12℃徐徐升温至95℃，进行酶处理，之后，各添加还原剂抗坏血酸钠以使其达到0.10％w/w。作为对照，使用仅没添加酶的组合。将该滤液中的4ml用超滤膜(截止分子量10000)脱盐浓缩至0.1ml。向该脱盐浓缩液中添加脱盐水4ml，再浓缩至0.1ml，向浓缩液中加入脱盐水成为1ml。对于该液体，测定岩藻依聚糖含量和凯达尔氮含量。另外，从该测定结果，求出相当于原料伽高迈海带重量的岩藻依聚糖收率(％)(岩藻依聚糖收率(％)＝(浓缩液1ml中的岩藻依聚糖重量(g)×25)/原料伽高迈海带(g)×100)。其结果示于表12中表12 岩藻依聚糖含量、氮含量和岩藻依聚糖收率酶岩藻依聚糖含 全氮浊度*岩藻依聚糖收量(g/L) (mg/L) 660nm/cm池 率(％)对照 6.05 64.30.158 3.78蛋白酶8.42 47.80.089 5.26SP-15FG木瓜蛋白酶8.29 29.90.108 5.18*使用2号滤纸(东洋滤纸)过滤进行测定。
从表12可以确认，将蛋白酶处理和抗坏血酸钠的提取组合时，岩藻依聚糖的提取效率进一步提高，另外，伽高迈海带由来的蛋白质也低分子化(分子量10000以下)，可用超滤除去而减少，在木瓜蛋白酶的情况下，为对照的1/2以下。进一步，对照的提取液的浊度通过蛋白酶处理而澄清化。从这些结果，通过蛋白酶处理和根据抗坏血酸钠提取的岩藻依聚糖提取，可以提高收率和减少蛋白质，可以得到高纯度的岩藻依聚糖。
实施例14(1)在脱盐水中混合褐藻类的伽高迈海带40kg(干燥品，破碎至通过5mmφ)、氯化钙15kg、木瓜蛋白酶400g(Nagase生化学工业)、抗坏血酸钠1kg，形成1000升。对于酶处理和提取，用80分钟从15℃升温至60℃分钟，在60℃进行60分钟反应和提取。进一步，对于提取，用80分钟，从60℃升温至95℃，在95℃进行120分钟提取。之后，用24小时冷却至9℃，作为本发明提取处理物。测定该提取处理物的岩藻依聚糖含量，求出相当于原料伽高迈海带重量的岩藻依聚糖收率(％)(岩藻依聚糖收率(％)＝(提取处理物中的岩藻依聚糖重量(kg)/原料伽高迈海带(kg)×100)。另外，作为对照，不添加抗坏血酸钠和木瓜蛋白酶，同样进行处理。测定结果示于表13中。
表13 提取处理物中的岩藻依聚糖含量本发明提取处理物 对照提取处理物岩藻依聚糖重量(kg)2.07 1.81岩藻依聚糖收率(％)5.18 4.53(2)继续，用压滤对实施例14-(1)得到的本发明提取处理物进行固液分离，得到800升压滤液。接着，进行超滤处理和脱盐处理，浓缩至80升。使用用滤纸和硅藻土的过滤机对该浓缩液进行过滤，得到滤液77升。进一步用浓缩机(エバポ-ル，CEP-30S，加热温度90℃，品温40-45℃)浓缩，得到6.8升浓缩液，用高压釜在121℃灭菌15分钟。冷冻干燥该灭菌液，得到780g岩藻依聚糖。作为对照，不添加还原剂抗坏血酸钠和木瓜蛋白酶，进行同样的处理。本发明产品和对照的冷冻干燥产品以及它们的1％w/w水溶液(岩藻依聚糖溶液)的分析值分别示于表14和表15中。
表14 冷冻干燥品的分析值本发明产品对照水分(g/100g)0.4 0.9蛋白质a(g/100g)2.6 9.0脂质(g/100g)0.1 0.2灰分(g/100g)31.8 29.4a凯达尔氮×6.25(蛋白质系数)
表15 岩藻依聚糖溶液本发明产品对照岩藻依聚糖(mM) 21.4 20.0全糖(mM，岩藻糖换算)27.8 23.5硫酸基(mM) 34.2 28.5从表14可以确认，通过将蛋白酶处理和抗坏血酸钠提取组合，提高了岩藻依聚糖的提取效率。进一步从表14可以看出，本发明产品的蛋白质含量显著减少。另外，根据表15，用本发明的方法，可以得到高纯度的岩藻依聚糖。
另外，对于本发明的产品的外观的颜色进行研究时，本发明产品与对照的绿褐色相比，颜色浅，成为发白的绿褐色。即，可以看出，用蒸馏水调制本发明产品和对照产品以使岩藻依聚糖含量达到2g/L，测定其在660nm的吸光度时，本发明产品和对照分别是0.017和0.036，本发明产品的绿着色成分被降低了。
另外，对于本发明的海藻臭的程度进行研究时，本发明产品与对照比较，海藻臭减少了。即，用20℃蒸馏水调制所得对照以使其为0.5％w/w溶液，由5名感观评定人员求出显示出和其同等臭味强度的本发明产品的溶液浓度时，可以看出，本发明产品是2.6％，本发明产品与对照比较，海藻臭减少了。
实施例15使用实施例11的本发明和对照的裙带菜提取液的浓缩液，制备表16所示的配料表的裙带菜提取的饮料。
表16 裙带菜提取的饮料本发明产品对照产品(％) (％)还原剂处理的裙带菜提取液(浓缩)180没有还原剂处理的裙带菜提取液(浓缩)0 18海藻糖2.5 2.51/5苹果果汁 1.7 1.71/5柠檬果汁 0.13 0.1 3维生素C 0.04 0.04水残余 残余pH4.0 4.0酸度 0.1N NaOH/20ml 3.72 3.72白利糖度 5.5 5.5pH用柠檬酸调整将通过表16的配料得到的各个饮料填充到200ml容量的罐中，在115℃加热灭菌15分钟，制备罐头产品。和实施例7一样进行感观评价。由10名感观评定员，用5个等级(1是良好～5是差)，求出平均值。其结果示于表17中。
表17 感观评价本发明产品对照产品味道2.6 3.3香味2.4 3.4色调2.6 2.9综合2.5 3.2根据表17，使用本发明产品的裙带菜提取物的浓缩物的饮料和对照产品相比，由于没有海藻臭，没有苦味，所以甜味、酸味和美味的平衡良好，后味愉快，成为新的香味海藻饮料。对于对照品，裙带菜由来的海藻臭强烈，还在舌头上残留苦味，香味平衡不好，后味也差。另外，本发明产品和对照产品比较，色调也良好。
实施例16制备用裙带菜提取液的汤。对于裙带菜提取液(浓缩)，使用将实施例11的3％裙带菜提取液浓缩至7.58倍的提取液(相对于22.7％裙带菜提取液)，本发明产品使用经还原处理的提取液，对照使用没有处理的提取液。表18中显示出加入裙带菜提取液(浓缩)的汤的配料。根据该配料，制备汤，填充到200ml罐中，在120℃进行15分钟灭菌，制成罐头产品。和实施例7一样，进行感观评价。由10名感观评定员，用5个等级评价(1是良好～5是差)，求出平均值。其结果示于表19中。
表18 裙带菜(浓缩)汤的配料本发明产品 对照产品(％)(％)还原剂处理的裙带菜提取液(浓缩) 10 0没有还原剂处理的裙带菜提取液(浓缩) 0 10低强度琼脂* 0.250.25乳清矿物质 0.600.60猪肉提取物 0.130.13砂糖0.100.10胡椒0.0005 0.0005维生素C 0.020.02水 剩余部分剩余部分pH 5.0 5.0*伊那食品工业社制pH用柠檬酸或柠檬酸钠调整表19 感观评价汤 项目综合味道香味色调本发明产品 2.9 2.7 3.0 2.9对照产品3.6 3.7 3.3 3.5根据表19，本发明产品和对照产品比较，后味良好，得到愉快的味道，裙带菜提取液的香味与猪肉提取物良好溶合，形成仅用猪肉提取物不能尝到的新的味道，达成全部的香味平衡。对照产品残留海藻臭，和猪肉提取物的调和性不好，还稍残留苦味，存在打乱全部香味平衡的倾向。这样，从调理方面看，本发明的裙带菜提取物从其香味特性可以看出，作为调味料优良。另外，本发明产品与对照产品相比，色调也良好。
实施例17作为撒在饭上的粉状食品，混合鱼粉2.4kg，食盐0.5kg，谷氨酸钠0.3kg(共计3.2kg)，作为本发明产品和对照产品，上述每千克撒在饭上的粉状食品分别添加在实施例11得到的裙带菜提取物的冷冻干燥产品5g，以及在没有添加下，根据常规方法进行造粒。相对于这些分别造粒的产品约3.2kg，充分混合1.2kg芝麻并调制。将这些粉状食品撒在米饭上，和实施例7一样进行感观评价。其结果可以看出，本发明产品与对照相比，鱼粉和芝麻的香味与美味调和，具有作为隐藏味道的功能。对照产品稍残留海藻臭，打乱了鱼粉和芝麻的香味的平衡，另外，苦味在口中残留。可以看出，本发明产品综合起来提高了撒在饭上的粉状食品的品质。
实施例18作为撒在饭上的粉状食品，混合鱼粉2.4kg，食盐0.5kg，谷氨酸钠0.3kg(共计3.2kg)，作为本发明产品和对照产品，上述每千克撒在饭上的粉状食品分别添加在实施例11得到的裙带菜提取物的冷冻干燥产品5g，以及只在本发明的产品中添加1g在实施例14得到的伽高迈由来的岩藻依聚糖。将这些粉状食品撒在米饭上，和实施例7一样进行感观评价。其结果，本发明产品与对照相比，鱼粉和芝麻的香味与美味调和，与对照相比，在取得平衡的风味下，裙带菜风味格外显著。将两者组合时，进一步提高了撒在饭上的粉状食品的品质。
实施例19按照表20的配合，使用压片机，在压片时的压力3000kg/cm2下，按照常规方法制作药片。在本发明产品中，使用在实施例14得到的蛋白酶处理的还原提取的岩藻依聚糖，对照使用在实施例14得到的对照岩藻依聚糖。其结果，本发明产品含在口中时没有海带的臭味，所有味道的平衡提高，舌感光滑。
表20 配合表本发明产品对照产品对照岩藻依聚糖(mg)0 100本发明岩藻依聚糖(mg) 100 0糊精(mg) 100 100还原麦芽糖糖稀(mg)715 715乳糖(mg) 223 223可可脂粉末(mg)7878香料(mg) 1919蔗糖脂肪酸酯(mg) 6565保藏的生物材料(1)保藏机关的名称·地址独立行政法人产业技术综合研究所专利生物寄存中心日本国茨城县筑波市东1丁目1番地中央第6(邮政编号305-8566)(2)保藏的微生物(i)交替单胞菌属(Alteromonas)sP.SN-1009原寄存日1996年2月13日转移至国际保藏请求日1996年11月15日登记编号FERM BP-5747(ii)黄杆菌属(Flavobaeterium)sp.SA-0082原寄存日1995年3月29日转移至国际保藏请求日1996年2月15登记编号FERM BP-5402产业上的可利用性本发明提供了含有选自岩藻依聚糖、其降解物以及它们的盐的一种以上作为有效成分的生物体的内环境稳定维持剂。该药物通过前述有效成分发挥生物体的内环境稳定维持作用，作为肝功能障碍的治疗剂或预防剂、血液的内环境稳定维持剂是有效的。另外，本发明提供了利用具有前述有效成分的生物体的内环境稳定维持剂作用的食品、饮料或饲料。
进一步，本发明提供了作为海藻臭减少的食品等的原料有效的岩藻依聚糖和海藻类提取物，高纯度、高收率的岩藻依聚糖的制造方法以及海藻类提取物的制造方法，和含有这些岩藻依聚糖和/或海藻类提取物形成的食品、饮料、调味料、化妆品和药物。
权利要求
1.一种生物体的内环境稳定维持剂，其特征在于含有选自岩藻依聚糖、其降解物以及它们的盐的1种以上作为有效成分。
2.权利要求1所述的生物体的内环境稳定维持剂，是肝功能障碍的治疗剂或预防剂。
3.权利要求2所述的生物体的内环境稳定维持剂，肝功能障碍是伴随着肝纤维化的疾病。
4.权利要求1所述的生物体的内环境稳定维持剂，是血液的内环境稳定维持剂。
5.权利要求4所述的生物体的内环境稳定维持剂，具有血糖值上升抑制作用。
6.权利要求4所述的生物体的内环境稳定维持剂，具有血中中性脂肪上升抑制作用。
7.权利要求4～6任意一项所述的生物体的内环境稳定维持剂，具有饮食后的血液的内环境稳定维持作用。
8.一种生物体的内环境稳定维持作用的食品、饮料或饲料，其特征在于含有选自岩藻依聚糖、其降解物以及它们的盐的1种以上作为有效成分。
9.权利要求8所述的食品、饮料或饲料，是肝功能障碍的改善或预防用的食品、饮料或饲料。
10.权利要求9食品、饮料或饲料，肝功能障碍是伴随着肝纤维化的疾病。
11.权利要求8所述的食品、饮料或饲料，是血液的内环境稳定维持用的食品、饮料或饲料。
12.权利要求11所述的食品、饮料或饲料，具有血糖值上升抑制作用。
13.权利要求11所述的食品、饮料或饲料，具有血中中性脂肪上升抑制作用。
14.权利要求11～13任意一项所述的食品、饮料或饲料，具有饮食后的血液的内环境稳定维持作用。
15.在还原性物质存在下提取海藻类得到的岩藻依聚糖。
16.权利要求15所述的岩藻依聚糖，还原性物质是选自抗坏血酸、抗坏血酸盐、异抗坏血酸、异抗坏血酸盐、半胱氨酸和谷胱甘肽的1种以上的还原性物质。
17.权利要求15或16所述的岩藻依聚糖，使用温水或溶剂进行提取。
18.权利要求15～17任意一项所述的岩藻依聚糖，在30℃～130℃，进行5分钟～32小时提取。
19.权利要求15～18任意一项所述的岩藻依聚糖，海藻类是预先经蛋白酶处理过的，和/或在提取步骤中进行蛋白酶处理。
20.权利要求1～7任意一项所述的生物体的内环境稳定维持剂，岩藻依聚糖是权利要求15～19任意一项所述的岩藻依聚糖。
21.权利要求8～14任意一项所述的食品、饮料或饲料，岩藻依聚糖是权利要求15～19任意一项所述的岩藻依聚糖。
22.在还原性物质存在下提取海藻类得到的海藻类提取物。
23.权利要求22所述的海藻类提取物，含有岩藻依聚糖。
24.权利要求22或23所述的海藻类提取物，还原性物质是选自抗坏血酸、抗坏血酸盐、异抗坏血酸、异抗坏血酸盐、半胱氨酸和谷胱甘肽的1种以上的还原性物质。
25.权利要求22～24任意一项所述的海藻类提取物，使用温水或溶剂进行提取。
26.权利要求22～25任意一项所述的海藻类提取物，在30℃～130℃，进行5分钟～32小时提取。
27.权利要求22～26任意一项所述的海藻类提取物，海藻类是预先经蛋白酶处理过的，和/或在提取步骤中进行蛋白酶处理。
28.一种食品、饮料、调味料或饲料，其特征在于含有权利要求15～19任意一项所述的岩藻依聚糖和/或权利要求22～27任意一项所述的海藻类提取物形成的。
29.一种化妆品，其特征在于含有权利要求15～19任意一项所述的岩藻依聚糖和/或权利要求22～27任意一项所述的海藻类提取物形成的。
30.一种药物，其特征在于含有权利要求15～19任意一项所述的岩藻依聚糖和/或权利要求22～27任意一项所述的海藻类提取物作为有效成分形成的。
31.权利要求30所述的药物，是胆固醇降低用药物、血液澄清用药物、抗血凝固用药物、抗癌用药物、抗艾滋病病毒用药物或抗溃疡用药物。
32.一种岩藻依聚糖的制造方法，其特征在于包括在还原性物质的存在下提取海藻类的步骤。
33.权利要求32所述的岩藻依聚糖的制造方法，还原性物质是选自抗坏血酸、抗坏血酸盐、异抗坏血酸、异抗坏血酸盐、半胱氨酸和谷胱甘肽的1种以上的还原性物质。
34.权利要求32或33所述的岩藻依聚糖的制造方法，使用温水或溶剂进行提取。
35.权利要求32～34任意一项所述的岩藻依聚糖的制造方法，在30℃～130℃，进行5分钟～32小时提取。
36.权利要求32～35任意一项所述的岩藻依聚糖的制造方法，海藻类是预先经蛋白酶处理过的，和/或在提取步骤中进行蛋白酶处理。
37.一种海藻类提取物的制造方法，其特征在于包括在还原性物质的存在下提取海藻类的步骤。
38.权利要求37所述的海藻类提取物的制造方法，海藻类提取物含有岩藻依聚糖。
39.权利要求37或38所述的海藻类提取物的制造方法，还原性物质是选自抗坏血酸、抗坏血酸盐、异抗坏血酸、异抗坏血酸盐、半胱氨酸和谷胱甘肽的1种以上的还原性物质。
40.权利要求37～39任意一项所述海藻类提取物的制造方法，使用温水或溶剂进行提取。
41.权利要求37～40任意一项所述的海藻类提取物的制造方法，在30℃～130℃，进行5分钟～32小时提取。
42.权利要求37～41任意一项所述的岩藻依聚糖的制造方法，海藻类是预先经蛋白酶处理过的，和/或在提取步骤中进行蛋白酶处理。
43.一种食品、饮料、调味料或饲料的制造方法，其特征在于包括权利要求32～36任意一项所述的步骤和/或权利要求37～42任意一项所述的步骤。
44.一种化妆品的制造方法，其特征在于包括权利要求32～36任意一项所述的步骤和/或权利要求37～42任意一项所述的步骤。
45.一种药物的制造方法，其特征在于包括权利要求32～36任意一项所述的步骤和/或权利要求37～42任意一项所述的步骤。
46.权利要求45所述的药物的制造方法，药物是胆固醇降低用药物、血液澄清用药物、抗血凝固用药物、抗癌用药物、抗艾滋病病毒用药物或抗溃疡用药物。
47.权利要求15～19任意一项所述的岩藻依聚糖，无臭，或海藻臭减少。
48.权利要求15～19任意一项所述的岩藻依聚糖，无色或者海藻由来的绿褐色减少。
49.权利要求22～27任意一项所述的海藻类提取物，无臭，或海藻臭减少。
50.权利要求22～27任意一项所述的海藻类提取物，无色或者海藻由来的绿褐色减少。
全文摘要
本发明提供了利用岩藻依聚糖、其降解物或它们的盐的具有生物体的内环境稳定维持作用的生物体的内环境稳定维持剂、食品、饮料或饲料。本发明还提供了着色少、苦味或碘含量减少了的、具有新鲜感的风味得到改善的岩藻依聚糖及其海藻类提取物、含有该岩藻依聚糖和/或海藻类提取物的食品、饮料、调味料、化妆品或药物，以及有效制造它们的方法。
文档编号A61P1/04GK1592626SQ0181876
公开日2005年3月9日 申请日期2001年9月12日 优先权日2000年9月13日
发明者西山英治, 佐川裕章, 日野文嗣, 森原悦子, 酒井武, 大屋敷春夫, 加藤郁之进 申请人:宝生物工程株式会社