专利名称：治疗球虫病的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的组合物、药用组合物、以及组合物在制造球虫病治疗药物中的用途。
球虫病是家禽(例如小鸡)肠内层(lining)疾病，由原生动物艾美球虫属(Eimeria)球虫寄生虫引起，例如禽艾美虫(Eimeria tenella)、尼氏艾美虫(Eimeria necatrix)、堆形艾美虫(Eimeria acervulina)、波氏艾美虫(Eimeria brunetti)、巨型艾美虫(Eimeria maxima)、和缓艾美虫(Eimeria.mitis)、Eimeria mivati、塞前艾美虫(Eimeria praecox)和哈氏艾美虫(Eimeria hagani)。属于该属的种引发小鸡临床疾病，对任何一个种的免疫性不能保护禽类防止其它种的感染。球虫病在3-6周龄的小鸡中最为常见。艾美虫科家族的原生动物引发球虫病。感染肠内不同部位。感染过程快速(4-7天)，其特征为寄生虫在宿主细胞内复制，肠粘膜广泛受损。只有在易感性禽类摄食比较大量的产孢子卵囊以后，才临床发病。临床感染以及痊愈的禽类均在粪便中排泄卵囊，污染饲料、灰尘、水、草窝和土壤。
抗球虫药物市场有售，用于预防和治疗特别是小鸡和火鸡的球虫病。为防止急性疾病，通常在饲料中给予家禽抗球虫药。对治疗而言，水剂一般优于饲料给药。有时使用抗生素提高恢复率并防止二次感染。
以下所述为先前已知的抗球虫药物安普罗铵(Amprolium)、二氯二甲吡啶酚(Clopidol)、叶酸拮抗剂、氢溴酸溴氯哌喹酮(halofuginonehydrobromide)、离子载体(莫能菌素(monensin)、盐霉素(salinomycin)、拉沙里菌素(lasalocid)、萘良菌素(narasin)、马杜霉素(maduramicin))、硝卡巴嗪(Nicarbazin)、硝基苯甲酰胺(例如二硝甲苯酰胺(dinitolmide))、喹诺酮(例如丁喹酯(buquinolat)、癸氧喹酯(decoquinate)、苄氧喹甲酯(nequinate))以及双氯苄氨胍(Robenidine)。由于对大多数抗球虫药物的普遍抗性，不断需要副作用较小的新的组合物。
本发明一方面提供了新的组合物，其包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物。
本发明另一方面提供了药用组合物，其包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物，所述成分以治疗有效量存在，任选与治疗可接受的载体混合。
本发明另一方面提供了组合物在制造球虫病治疗药物中的用途，该组合物包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物。
本发明的组合物包含三种主要成分，即(A)叶酸，(B)氨基糖苷以及(C)抗溃疡剂。但是不要求所有三种成分同时存在于组合物中。因此，该组合物可能包含任选自上述三种成分之中两种成分的混合物。
根据优选实施方案，该组合物包含络合剂，例如EDTA(乙二胺四乙酸)。
本发明一个有趣并惊人的特征是，根据发表的文献，单个成分治疗球虫病无效。然而下述试验将会发现，包含至少两种上述成分的组合物有效。
以下详述每个主要成分。
叶酸叶酸具有结构式 叶酸是基本上所有食物和饲料的重要成分。啤酒和饲料酵母尤其富含叶酸。此外，植物的所有绿色部分、提取的豆粉、马铃薯、麸皮和肝含有比较大量的叶酸。叶酸特别参与氨基酸和核酸的合成。叶酸与维生素B12一道，为形成红、白血细胞所必需。
叶酸被用作动物饲料添加剂。动物由于胃肠道的微生物而具有大量的叶酸合成。特别是家禽和小动物中，按这种方式获得的最初叶酸数量不足，必需在饲料中补充。对于小鸡、小母鸡、肉仔鸡(broiler)、母鸡和火鸡，饲料补充的一般推荐剂量为每公斤饲料(88％干物质)大约0.6-1.5mg。关于使用叶酸作为饲料添加剂，可参考BASF FineChemicals.Know-how and quality for animal nutrition，＂On feedadditivesTechnical Information＂.Edition 97/98，p.33，46-51。应当指出，叶酸对家禽没有抗溃疡作用。
氨基糖苷氨基糖苷主要用于治疗好氧的革兰氏阴性生物所致感染。其对厌氧生物没有活性。氨基糖苷分为三类窄谱氨基糖苷、广谱氨基糖苷和混杂的(miscellaneous)氨基糖苷。下文叙述了氨基糖苷的实例。
链霉素是最早引入的氨基糖苷。它对分枝杆菌属(mycobacteria)、钩端螺旋体属(Leptospira)、土拉热弗朗西斯菌(Francisella tularensis)和鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)有活性。双氢链霉素化学上与链霉素非常相似。
在链霉素几年之后，新霉素得以应用。新霉素对许多革兰氏阴性生物及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有效。毒性较高的危险限制了新霉素使用。
引入毒性较小的卡那霉素代替较老的氨基糖苷，不久又有庆大霉素(gentamicin)以及其后的丁胺卡那霉素(amikacin)。
丁胺卡那霉素来自卡那霉素，具有氨基糖苷的广谱活性。它可以耐受某些氨基糖苷灭活酶，故认为对其它氨基糖苷不敏感的菌株有效。
阿泊拉霉素(Apramycin)是化学结构与氨基糖苷非常相似的氨基环醇抗生素，但其差别足以使其不受许多氨基糖苷灭活酶的影响。阿泊拉霉素对金黄色葡萄球菌、许多革兰氏阴性生物以及某些支原体菌株有活性。据报道，阿泊拉霉素体外对耐受链霉素和新霉素的沙门氏菌(Salmonella)种尤其有效。
在上述氨基糖苷中，已经发现双氢链霉素是本发明组合物中的高度优选成分。如上所述，氨基糖苷用于治疗好氧生物所致感染，同样对寄生虫没有活性。然而根据本发明，如果氨基糖苷与至少一种其余成分(即成分A和成分C，下文详述后者)混合存在，则显示抗球虫病的治疗效果。
抗溃疡剂抗溃疡剂可分为两组，即质子泵抑制剂和组胺H2拮抗剂。化学上，质子泵抑制剂(PPI)由置换的苯并咪唑部分通过必要的亚磺酰甲基基团与置换的吡啶环连接所组成。奥美拉唑(Omeprazol)是该组的重要一员，是Astra，Sweden开发的制剂洛赛克(Losec)的活性成分。组胺H2拮抗剂是组胺的结构类似物，竞争性以及可克服性阻断位于壁细胞基底外膜的H2受体。在后一组成员中，可能提及西咪替丁(甲氰咪胍，Cimetidine)、尼扎替丁(Nitzatidine)、法莫替丁(Famotidine)和雷尼替丁(Ranitidine)。常规抗溃疡剂及其疗效特别参考Ullmann′sEncyclopedia of Industrial Chemistry，Sixth Edition，2000 ElectronicRelease，ANTIULCER DRUGS。
本发明组合物相当普遍适用于保护家禽，即治疗有用的饲养家禽，例如小鸡、火鸡、鸭或鹅，或者也治疗其它禽类，例如野鸡等。
本发明组合物以治疗制剂形式使用，以治疗受球虫侵袭的动物，特别是禽类。所谓＂治疗＂也包括预防。治疗制剂通常可能包含治疗可接受的载体。因此，这种制剂可应用于肉用仔鸡场或家禽饲养院的小母鸡，因为粪便中不断分泌永久形式的球虫(卵囊)，那里家禽群体的感染负担重。按照标准方式使用本发明的组合物以及抗击球虫病的方法。对于肠道中的球虫，主要适于口服给药。在此情况下，本发明组合物可与饲料或饮用水混合。
饲料或饮用水中组合物的浓度可以在一定的范围内广泛变化。根据饲料或饮用水，组合物浓度一般为5-5000ppm(以重量计)。优选50-2000PPm。最优选50-300ppm。选择最终组合物中每个成分的浓度在兽医的能力范围之内。此处该浓度经常被指作＂治疗有效量＂，定义为足以成功抗击球虫病而保持副作用最小的剂量。将在以下实施例中给出各成分的不同浓度。
组合物的浓度以自由饲料或饮用水制剂为基础，即在正常的生产催肥或饲养期间自由喂养或饮用水。养禽业常用的所有饲料配方均适于用作本发明组合物的载体。下文指定的家禽饲料配方是正常生产配方的实例。另外，也可能使用其它基于某类粮谷的饲料，其中包含维生素浓缩物、矿物质浓缩物或其它活性物质以及任何浓度的饲料添加剂。常用的干粉状或粒状饲料以及液体饲料悬浮液(包括例如酒糟和牛奶副产品饲料)均可用在本发明组合物的情况下。
为了制备家禽饲料，一般首先制备浓缩的预混合料，其中包含高浓度的至少两种成分的该组合物，例如按重量的0.2-75％。为此目的，将各成分分散或混入惰性载体物质中，例如蛭石、硅藻土、硅镁土(attapulgite)、碳酸钙等，连同生理上无害的载体，例如丙二醇、聚乙二醇、惰性油剂(例如植物油)、高度精制的矿物油、乙醇、水、或含水酒精。有机载体物质，例如麸皮、碎玉米、大豆粉、苜蓿粉、谷壳或磨碎的玉米穗以及来自植物产物的其它任何有机载体物质，同样适于此目的。
如上所述，本发明组合物另外也可能与饮用水一起给予家禽。通过在饮用水中加入一定量的溶于水或能悬浮于水中形式的组合物，将其包含于饮用水中。一般选择该组合物的水溶性形式，制备这种制剂。也可使用水不溶性的形式，例如悬浮液。在此情况下，使用生理上无害的辅助剂，使本发明的组合物长期悬浮于水中。适于此目的的辅助剂为膨胀剂，例如藻酸盐、明胶、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮。表面活性剂性化合物，例如萘磺酸盐、烷基苯磺酸盐或聚氧乙烯山梨聚糖酯，可用来使组合物成为悬浮液。通常按某一混合比制备本发明组合物与悬浮剂的浓缩悬浮液或干燥制剂，然后用饮用水稀释到要求的应用浓度，或按合适浓度与正常应用的饲料混合成预混合物。然后将加药的饮用水或饲料饲喂家禽，起初自由(ad lib)进食或者饲喂一段时间。
尽管上文已经就治疗家禽球虫感染描述了本发明，但是治疗其它家养有益动物，例如其它禽类、兔、猪和反刍动物，也属于本发明范畴之内。
因此，本发明另一目的也在于治疗动物球虫病的方法，其包含给予该动物治疗有效量的组合物，该组合物包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物，该组合物任选包含治疗可接受的载体。
使用先前已知的抗球虫药物和本发明的组合物的混合物抗击球虫病，属于本发明的范畴。
由以下实施例解释本发明。
下表A概括了本发明组合物的例子。在常规混合器中，按表中定义的量混合各成分，形成组合物。
表A
*)dhsm＝双氢链霉素动物饲料组合物的例子以下例子涉及可用于给予本发明组合物的动物饲料组合物。
I.肉用仔鸡催肥饲料组分％(以重量计)鱼粉(60-65％ 6.0饲料酵母 2.0牛肉汁(beef dripping) 4.7粗制大豆粉(44％) 24.0苜蓿青粉(green meal) 1.0玉米 44.89小麦 6.35粗制小麦粉8.5磷酸盐饲用石灰1.4碳酸盐饲用石灰0.96
微量元素预混合物*0.04饲用盐 0.09甲硫氨酸DL 0.07100.00(a)每公斤饲料加入下列维生素A I.U. 12,000D3I.U. 1,500E mg 18B1mg 1.5B2mg 6泛酸mg 9烟酸维生素 mg 24B6mg 4.5B12μg24K3mg 3氯化胆碱mg 1,300*(b)1.0kg饲料包含Mn mg106Zn mg71Fe mg44Cu mg3.56Img0.4Co mg0.16II.小鸡(0-8周)的饲养饲料组分％(以重量计)鱼粉(60-65％5.0苜蓿青粉6.0
粗制大豆粉(44％) 13.0饲料酵母 2.8牛肉汁2.0大麦 6.0燕麦 6.0玉米 37.0小麦 13.0麸皮 7.3碳酸盐饲用石灰1.29.RTM.Hostaphos0.57微量元素预混合物*0.04100.00*参见例I(b)；此外，如例I(a)所述，加入维生素III.小鸡(9-20周)的饲养饲料组分％(以重量计)苜蓿青粉 6.0粗制大豆粉(44％) 10.24饲料酵母 1.8牛肉汁2.0大麦 8.0燕麦 6.0玉米 40.0小麦 15.0麸皮 8.3碳酸盐饲用石灰1.53.RTM.Hostaphos1.02微量元素预混合物*0.04甲硫氨酸DL0.07
100.00*参见例I(b)；另外加入维生素，参见例I(a)，IV.小鸡(从第21周起)的饲养饲料组分％(以重量计)鱼粉(60-65％ 1.5粗制大豆粉(44％) 19.31牛肉汁 1.0燕麦 6.7玉米 40.0小麦 18.0粗制小麦粉 3.0甲硫氨酸DL 0.07饲用辣椒粉 0.3碳酸盐饲用石灰 8.16.RTM.Hostaphos 1.91微量元素预混合物*0.05100.00如例I(a)所述，另外加入维生素。
生物学实施例Al抗球孢子菌的(anticoccidiocidal)活性材料和方法小鸡测试中使用总共92只一日龄的Habbared X品种小鸡。将其分成4组(每组23只鸡)，其中一组作为对照组。
药物组每种待测试组合物混合入每组足量饲料中，用于从测试的第0天开始每日喂食。新鲜水随意(ad-libetum)供应。
测试组为第1组 饲料包含200ppm的叶酸和双氢链霉素的组合(比例1∶1)，第2组 饲料包含200ppm的法莫替丁和双氢链霉素的组合(比例1∶1)，第3组 饲料包含标准抗球虫剂(二氯二甲吡啶酚，125ppm)，第4组 感染未处理组。
结果如表1所示。
表1
d.p.i.＝实验性感染后天数。
A2抗球孢子菌活性材料和方法小鸡测试中使用总共88只一日龄的Habbared X品种小鸡。将其分成4组(每组22只鸡)，其中一组作为对照组。
药物组每种待测试组合物混合入每组足量的饲料中，用于从测试的第0天开始每日喂食。新鲜水随意供应。
测试组为第1组 饲料包含200ppm的叶酸、法莫替丁、双氢链霉素的组合(1∶1∶1)，第2组 饲料包含200ppm的叶酸、法莫替丁、双氢链霉素的组合(1∶1∶1)+EDTA(50ppm)，第3组 二氯二甲吡啶酚，125ppm第4组 感染未处理组。
结果如下表2所示。
表2
d.p.i.＝实验性感染后天数。
A3抗球孢子菌活性材料和方法小鸡测试中使用总共100只一日龄的Habbared X品种小鸡。它们前3天为一组，用未加药饲料喂养。然后分成5组(每组20只)，放在5个分开的围栏中(1×1米)。
药物组从小鸡生命的第8天开始，将待测组合物与各组饲料混合，每日喂食。新鲜水随意供应。
测试组为第1组 饲料包含200ppm双氢链霉素，第2组 饲料包含100ppm法莫替丁，第3组 饲料包含100ppm叶酸，第4组 饲料包含标准抗球虫剂(可实得(Coxistac)，60ppm)，第5组 感染未处理组。
小鸡维持加药饲料共2天。第3天，每只鸡实验性口服感染成熟的产孢子卵囊混合物，其中包含5种菌株，即堆形艾美虫、巨型艾美虫、尼氏艾美虫、禽艾美虫和波氏艾美虫。
从实验性感染后第4天开始，每天收集新鲜的排泄物液滴，直到感染后第13天为止。使用根据Soulsby(1984)的Mc-Master方法，计算各组每克排泄物中的卵囊平均数。
结果如下表3所示。
表3
d.p.i.＝实验性感染后天数。
权利要求
1.新的组合物，其包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物。
2.药用组合物，其包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物，所述成分以治疗有效量存在，任选与治疗可接受载体混合。
3.权利要求2的组合物，其中所述混合物为两种成分的混合物。
4.权利要求2的组合物，其中所述混合物为三种成分的混合物。
5.组合物在制造球虫病治疗药物中的用途，该组合物包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物。
6.治疗动物球虫病的方法，包含给予该动物治疗有效量的组合物，该组合物包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物，该组合物任选包含治疗可接受的载体。
全文摘要
本发明涉及组合物，其包含选自叶酸、氨基糖苷和抗溃疡剂之中至少两种成分的混合物，涉及包含所述混合物的药用组合物，以及该组合物在制造球虫病治疗药物中的用途。
文档编号A61K31/44GK1482920SQ0182133
公开日2004年3月17日 申请日期2001年11月30日 优先权日2000年12月4日
发明者S·阿卜杜勒－拉赫曼, S 阿卜杜勒-拉赫曼 申请人:新药物研究瑞典股份公司