治疗心脑血管疾病的中药组合物的制作方法

专利名称：治疗心脑血管疾病的中药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种医用配制品，更具体地说，涉及一种治疗心脑血管疾病的中药组合物。
背景技术：
根据我国流行病学调查，近五十年来不论在农村或城市，心脑血管疾病的发病率和死亡率均呈上升趋势。50～60年代我国人口死亡原因中心血管病和脑血管病分别居第五六位，1975年以后则分别上升至第二三位，心脑血管疾病死亡者已占全部疾病死因第一位。我国因心脑血管疾病死亡者占总死亡人口的百分比，已由1957年的12.07％上升到2001年的42.6％，每年死于心脑血管疾病者达200万，另有部分患者虽经抢救而幸存，但多数留下残疾，生活不能自理，给亲属及社会造成严重负担。心脑血管疾病也是西方国家人群死亡的主要原因。根据目前已有的流行病学资料推测，疾病的发展趋势是到2020年，人类疾病死因排列顺序将有重大变化，但是冠心病和脑卒中仍将是人类死因的第一位和第二位。到那时，估算全球冠心病死亡人数将自1990年的630万增至1100万；脑卒中自440万增至770万。30年中循环系统死因构成将增高59.6％，冠心病和脑卒中分别增高74.6％和75％。这些资料充分说明，心脑血管疾病不仅是危害人类健康的主要疾病，更是目前和未来20年内人类致死、致残的“头号杀手”。
在心脑血管疾病的治疗药物中，中西药的应用各有侧重，中药以其副作用小的优势也占据较大的市场份额。在目前众多治疗心脑血管疾病的中成药中，以有效部位为主要活性成分如三七总皂苷、丹参总酚酸、葛根黄酮、绞股蓝总苷等的中成药愈来愈受到人们的重视。治疗心脑血管疾病的各种中药有效部位的功效各有不同和侧重，因此，临床上存在联合用药的巨大需求。目前各单一有效部位的中药品种，特别是中药有效部位的注射剂如血塞通、血栓通等，难以满足临床联合用药的需求。另外，未经国家药品食品监督管理局的批准而将中药注射剂简单地混和使用，将冒巨大的风险，有可能引起不可预料的不良反应，如血压急剧增高，发热，过敏反应等等。因此，提供更加方便有效的中药有效部位复方制剂具有重要的临床意义。

发明内容
本发明的目的是为了克服单一中药有效部位难以满足临床上治疗心脑血管疾病联合用药的需求的不足，避免药物简单混合使用可能造成的副反应，提供一种临床上疗效更好、更加方便的中药有效部位复方组合物及其制剂。
本发明通过下述技术方案予以实施。
本发明的中药组合物，按重量百分比包括下列组分丹参提取物 5.0％～70.0％三七提取物 10.0％～85.0％黄芪提取物 5.0％～70.0％冰片或降香油 1.0％～15.0％本发明的中药组合物，优选为按重量百分比包括下列组分丹参提取物 15.0％～50.0％三七提取物 25.0％～65.0％黄芪提取物 15.0％～50.0％冰片或降香油 2.0％～12.0％本发明的中药组合物，更优选为按重量百分比包括下列组分丹参提取物 20.0％～30.0％三七提取物 30.0％～55.0％黄芪提取物 20.0％～30.0％冰片或降香油 4.0％～10.0％本发明的中药组合物，最佳为按重量百分比包括下列组分丹参提取物 23％三七提取物 45％
黄芪提取物 23％冰片 9％上述中药组合物中的丹参提取物，可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利申请CN1352985A、CN1247855A、CN1242364A、CN1384090A、02117923.9，郭莹等(云南中医学院学报，2001，24(4)6)的制备方法获得。也可以自行摸索制备工艺获得。本发明丹参提取物中丹酚酸B含量在45％～70％，丹酚酸E含量在2～10％，迷迭香酸含量在4％～20％，紫草酸含量在1％～10％，其总酚酸含量在70％以上，最好在80％以上。无论是通过现有技术还是自行摸索制备工艺制备本发明的丹参提取物，如果未达到上述含量标准，则应进行精制，使之符合上述含量标准。其含量测定和指纹图谱如下(1)上述丹参提取物中丹酚酸B、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)为流动相；检测波长为288nm。理论板数按丹酚酸B峰计算，应不低于5000。
对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品，加流动相制成每1ml含0.2mg的溶液；丹酚酸E制成每1ml含0.02mg的溶液；迷迭香酸制成每1ml含0.05mg的溶液；紫草酸制成每1ml含0.01mg的溶液。
供试品溶液的制备 精密称取本品约35mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(2)上述丹参提取物总酚酸的测定(分光光度法)对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品，用乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)混合溶液制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品约25mg，置50ml量瓶中，用乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，以乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)为空白，照分光光度法(中国药典1995版一部附录VA)，在288nm波长处测定吸收度，按下式计算，即得。
总酚酸含量(％)＝f(A-B)+B式中f为校正因子0.626；A为分光光度法测定以丹酚酸B为对照计算的总酚酸的含量；B为高效液相色谱法测定的丹酚酸B的含量。
(3)上述丹参提取物HPLC指纹图谱测定方法参见(1)上述丹参提取物中丹酚酸B、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸的含量测定(高效液相色谱法)。纪录色谱时间为60分钟。
采用共有指纹峰中峰面积较大且相对稳定的共有峰丹酚酸B作为参照峰，以参照峰为基础计算相对保留时间和相对峰面积。上述丹参提取物的指纹图谱应有5～7个共有峰，一般为6个共有峰。6个共有峰的相对保留时间依次为0.55～0.65(丹酚酸E峰)，0.66～0.70(迷迭香酸峰)，0.71～0.79(紫草酸峰)，1(丹酚酸B)，1.03～1.12，1.21～1.30。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的只有丹酚酸B(即参照峰)，丹酚酸B峰的峰面积占总峰面积的57％～87％，其相对峰面积为1；相对保留时间为0.66～0.70的共有峰(即迷迭香酸峰)峰面积占总峰面积的3％～18％，其相对峰面积为0.03～0.25。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。
上述中药组合物中的三七提取物，可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利ZL1095363C、中国专利申请CN1352985A、钱天香等(国外医学·植物药分册，1997，12(4))、唐第光(中成药1990，12(8)5)、国家部颁标准WS3-B-3590-2001(Z)的制备方法获取三七提取物。也可以自行摸索制备工艺提取三七提取物。还可以直接从市场上购得三七提取物，例如含量为95％(UV测定)的三七总皂苷(其中Rb1≥30％、Rg1≥20％、R1≥5％，HPLC测定)。本发明三七提取物中三七皂苷R1含量应为2％～10％，人参皂苷Re含量应为2％～6％，人参皂苷Rg1含量应为15％～40％，人参皂苷Rb1含量应为15％～40％，人参皂苷Rd含量应为5％～12％，其三七总皂苷的含量应在70％以上，最好在80％以上。无论是通过现有技术制备还是市场购买，如纯度未达到上述含量标准，则应进行精制，使之符合上述含量标准。其含量测定和指纹图谱如下(1)上述三七提取物中人参皂苷Re、人参皂苷Rd、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温40℃；流速0.7ml/min；检测波长为203nm；梯度洗脱之流动相如下

对照品溶液的制备 精密称取对照品，加甲醇分别制成每1ml含0.2mg人参皂苷Re的溶液，每1ml含0.4mg人参皂苷Rd的溶液，每1ml含0.2mg人参皂苷R1的溶液，每1ml含0.4mg三七皂苷Rg1的溶液，每1ml含0.4mg人参皂苷Rb1的溶液。
供试品溶液的制备 精密称取本品约20mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(2)上述三七提取物中三七总皂苷的测定(分光光度法)标准曲线的制备 精密称取人参二醇2.6mg，置10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀。精密吸取5ml，置50ml量瓶中，甲醇定容，摇匀。精密吸取对照液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置具塞试管中，热水浴中挥去溶剂，放冷，精密加入新鲜配制的5％香兰素冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，于60℃水浴中加热15min，冰浴冷却，分别精密加入冰醋酸5ml，混匀，放置10min。并取同样条件下空白液作空白，在550nm波长处测定吸收度，制作标准曲线。
供试品溶液的制备及测定 精密称取本品0.3g，置锥形瓶中，加水少量润湿后，加水饱和的正丁醇回流提取3次(30，20，15m1)，每次一小时，合并正丁醇液，加正丁醇饱和的水少量洗涤，弃去水液，用水饱和的正丁醇稀释至100ml，摇匀。精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加水饱和的正丁醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.5ml，水浴蒸干，放冷，精密加入新鲜配制的5％香兰素冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，于60℃水浴中加热15min，冰浴冷却，分别精密加入冰醋酸5ml，混匀，放置10min。在550nm波长处测定吸收度，根据标准曲线计算含量。
(3)上述三七提取物HPLC指纹图谱测定方法参见(1)上述三七提取物中人参皂苷Re、人参皂苷Rd、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定(高效液相色谱法)。纪录色谱时间为30分钟。
采用共有指纹峰中峰面积较大且相对稳定的共有峰人参皂苷Rg1作为参照峰，以参照峰为基础计算相对保留时间和相对峰面积。上述三七提取物的指纹图谱应有9～12个共有峰，一般为11个共有峰。11个共有峰的相对保留时间依次为0.77～0.85(三七皂苷R1峰)，0.87～0.97(人参皂苷Re峰)，1(人参皂苷Rg1峰即参照峰)，2.58～2.67，0.68～2.76，2.77～2.81，2.82～2.91(人参皂苷Rb1峰)，2.95～3.03，3.05～3.13，3.15～3.22(人参皂苷Rd峰)，3.24～3.91。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的有人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰。人参皂苷Rg1峰(即参照峰)的峰面积占总峰面积的20％～35％，其相对峰面积为1；人参皂苷Rb1峰的峰面积占总峰面积的30％～50％，其相对峰面积为0.85～2.50；三七皂苷R1峰的峰面积占总峰面积的2％～8％，其相对峰面积为0.06～0.40；人参皂苷Rd峰的峰面积占总峰面积的5％～14％，其相对峰面积为0.14～0.70。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。
上述中药组合物中的黄芪提取物，可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利CN1096269C、余灏等(华西药学杂志，1993，8(3)163)、滕兴隆等(黑龙江医药，2002，15(5)340)、王志洁等(浙江中医学院学报，2001，25(5)43)的制备方法获取黄芪提取物。也可以自行摸索制备工艺提取黄芪提取物。还可以直接从市场上购得黄芪提取物，例如含量为80～98％(UV测定)的黄芪提取物。本发明黄芪提取物中黄芪甲苷含量为5％～15％，其黄芪提取物的含量在70％以上，最好在80％以上。无论是通过现有技术制备还是市场购买，如纯度未达到上述含量标准，则应进行精制，使之符合上述含量标准。其含量测定如下(1)上述黄芪提取物中黄芪甲苷的含量测定(高效液相色谱法)
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(36∶64)；流速1ml/min；ELSD检测参数漂移管温度为105℃，N2流速为2.84ml/min。
对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液。
供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的160mg，加水溶解后上D101大孔树脂，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液挥去乙醇后，转移至分液漏斗中，以水饱和的正丁醇萃取3次(8、8、6ml)，合并正丁醇萃取液，用氨试液洗涤2次(10、10ml)，然后用正丁醇饱和的水将正丁醇层洗至中性，蒸发至干，用甲醇溶解定容至1ml，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(2)上述黄芪提取物中黄芪总皂苷的测定(分光光度法)标准曲线的制备 精密称取干燥至恒重黄芪甲苷对照品约30mg，置25ml容量瓶中，用乙醇溶解定容至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分别置具塞试管中，于真空恒温干燥器(80℃)内将溶剂挥尽后，精密加入新鲜配制的5％香兰素冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，于70℃水浴中加热15min，冷却，分别精密加入冰醋酸5ml，混匀，放置10min。在560nm波长处测定吸收度，制作标准曲线。
供试品溶液的制备及测定 精密称取干燥至恒重的本品约60mg，加水15ml溶解后，加水饱和的正丁醇萃取3次，每次10ml。合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，弃去水液，正丁醇层至水浴上蒸干，用甲醇溶解并定容至10ml。精密吸取0.1ml，置具塞试管中，于真空恒温干燥器(80℃)内将溶剂挥尽后，精密加入新鲜配制的5％香兰素冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，于70℃水浴中加热15min，冷却，精密加入冰醋酸5ml，混匀，放置10min。在560nm波长处测定吸收度，根据标准曲线计算含量。
上述中药组合物中的冰片为人工冰片或天然冰片。组合物中可用樟脑代替冰片。
上述中药组合物中的降香油为降香经水蒸馏或超临界二氧化碳萃取制得。
本发明的中药组合物，可与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成注射剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂。优选剂型为片剂、滴丸、粉针剂、胶囊剂。本发明中药组合物制成注射剂、粉针剂，其丹参总酚酸、三七总皂苷和黄芪总皂苷的含量最好在80％以上。
本发明中药组合物原料来源易得，易于产业化；可根据需要制成各种剂型，为临床提供更加方便、更加有效、质量更加可控的现代中药，为患者带来更多的利益，从而产生巨大的社会效益。
本发明采用三氯化铁局部贴敷大脑中动脉造成局灶性脑缺血损伤模型，通过对模型大鼠神经症状和脑梗塞范围的测定，比较了本发明中药组合物、丹参总酚酸加三七总皂苷加冰片或降香油、丹参总酚酸加三七总皂苷、丹参总酚酸、三七总皂苷的抗脑缺血作用。结果显示，本发明中药组合物具有明显的抗脑缺血作用，其疗效优于单独使用丹参总酚酸或三七总皂苷，优于丹参总酚酸加三七总皂苷，也优于丹参总酚酸加三七总皂苷加冰片或降香油，表明本发明中药组合物即丹参提取物加三七提取物加黄芪提取物加冰片，或者丹参提取物加三七提取物加黄芪提取物加降香油四者具有较强的协同作用。
实验例1 几种中药提取组合物对大鼠局灶性脑缺血的影响(一)实验材料1、动物SD大鼠，雄性，体重180g～200g，合格证号SCXK(京)2002-0003，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2、药品与试剂受试药实施例一的中药组合物，实施例二的中药组合物，实施例一的丹参提取物，实施例一的三七提取物，实施例一黄芪提取物，降香油，冰片。血塞通为市售产品，由昆明制药集团股份有限公司生产，批号为20020922.03。
试剂红四氮唑(TTC)，为淡黄色粉末，北京马氏精细化学品有限公司产品，批号011102。
3、仪器XTT实体显微镜，云南光学仪器厂产品；AEG-220型电子分析天平，日本Shimadzu公司产品；307-6台式牙科车，上海齿科医械厂产品；HZQ-C空气浴振荡器，哈尔滨东明医疗仪器厂产品。
(二)实验方法和结果1、分组及给药实验动物按体重随机分组。各组动物均于术后30分钟舌下静脉给药，术后2小时和23小时腹腔注射给药二次。各药物均以生理盐水稀释至所需浓度，注射剂量采用0.4ml/100g体重。
2、大脑中动脉血栓模型制作大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约1.5cm，夹断颞肌并切除，暴露颞骨，于实体显微镜下，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧1mm处作一直径2.5mm的骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)，置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。将吸有50％氯化铁溶液10μL的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。室温控制在24℃。
3、神经症状评分标准对试验动物在术后24h，进行行为检测。评分标准①提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称前伸，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或兼具，记为1分。②将动物置于平面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，记为0分；如手术对侧阻力下降，记为1分。③将动物两前肢置一金属网上，观察肌张力。双侧肌张力对等且有力为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。④提鼠尾，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。
4、脑梗塞范围的测定动物经行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干后的剩余部分在4℃以下冠状切成5片，并迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml，其余加蒸馏水至刻度)，37℃避光温孵30分钟，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量及患侧脑重量的百分比作为脑梗塞范围。
5、结果上述实验结果用x±s表示，统计学检验采用组间比较t检验，结果见表1和表2。
表1几种中药提取物对(MCAO)大鼠神经症状的影响(x±s)剂量组别 动物数6小时神经症状评分24小时神经症状评分(mg/kg)实施例一的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提5+10+5+210 1.22±0.41**##&&@1.07±0.59**##&&@取物+冰片)实施例二的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提5+10+5+210 1.32±0.45**##&&@1.13±0.56**##&&@取物+降香油)丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片 6+12+2 10 1.68±0.43**##&1.61±0.63**##&
丹参总酚酸+三七总皂苷6.7+13.310 2.14±0.60**#2.14±0.59**#丹参总酚酸 20 10 2.95±0.67*2.57±0.42*三七总皂苷 20 10 2.65±0.32*2.52±0.51*血塞通 20 10 2.65±0.37*2.56±0.54*模型组 10 3.22±0.42 3.04±0.53注*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比；#P＜0.05，**P＜0.01，与丹参总酚酸或三七总皂苷组相比；&P＜0.05，&&P＜0.01，与丹参总酚酸+三七总皂苷组相比；@P＜0.05与丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片组比较。
表2几种中药提取物对(MCAO)大鼠脑梗塞范围的影响(x±s)剂量组别 动物数梗塞重占全脑％ 梗塞重占半脑％(mg/kg)实施例一的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提5+10+5+2101.28±0.74**##&&@2.57±1.41**##&&@取物+冰片)实施例二的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提5+10+5+2101.34±0.69**##&&@2.61±1.50**##&&@取物+降香油)丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片 6+12+2 101.66±0.69**##&3.37±1.30**##&
丹参总酚酸+三七总皂苷6.7+13.3102.32±0.84**#4.61±1.80**#丹参总酚酸 20 103.21±0.86*6.41±1.76*三七总皂苷 20 103.02±1.21*5.99±2.33*血塞通 20 102.99±1.11*5.98±2.23*模型组 104.33±0 818.69±1.59注*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比；#P＜0.05，##P＜0.01，与丹参总酚酸或三七总皂苷组相比；&P＜0.05，&&P＜0.01，与丹参总酚酸+三七总皂苷组相比；@P＜0.05，与丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片组比较。
以上表1及表2的结果显示，各给药组都具有明显的抗脑缺血作用，其中实施例一的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提取物+冰片)、实施例二的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提取物+降香油)的疗效最强，单用丹参总酚酸组或单用三七总皂苷组与阳性对照药血塞通组疗效相似，丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片组的疗效优于丹参总酚酸+三七总皂苷组或单用丹参总酚酸组或单用三七总皂苷组或血塞通组，但弱于实施一的中药组合物和实施例二的中药组合物。
本发明采用大鼠实验性心肌梗死模型及体外灌流法，比较了本发明中药组合物、丹参总酚酸加三七总皂苷加冰片或降香油、丹参总酚酸加三七总皂苷、丹参总酚酸、三七总皂苷的抗心肌缺血作用。结果显示，本发明中药组合物具有明显的抗心肌缺血作用，其疗效优于单独使用丹参总酚酸或三七总皂苷，优于丹参总酚酸加三七总皂苷，也优于丹参总酚酸加三七总皂苷加冰片或降香油，表明本发明中药组合物即丹参提取物加三七提取物加黄芪提取物加冰片，或者丹参提取物加三七提取物加黄芪提取物加降香油四者具有较强的协同作用。
实验例2 几种中药提取物抗心肌缺血作用的实验研究1、分组及给药Wister雄性大鼠70只，体重250.8±24.6，按体重随机分为7组生理盐水对照组；血塞通组；丹参总酚酸组；三七总皂苷组；丹参总酚酸加三七总皂苷组；实施例一中药组合物；实施例二中药组合物。各药物均以生理盐水稀释至所需浓度，给药量为4ml/kg，尾静脉给药。
2、方法(1)、大鼠实验性心肌梗死模型动物戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(45mg/kg)，仰位固定。气管插管，在胸骨左侧作2cm的纵切口，近胸骨侧剪断第3、第4勒软骨，打开胸腔后，连接人工呼吸机(通气量2ml/100g，50次/min)。剪开心包膜，暴露心脏，冠状动脉左前降支根部穿线以备结扎，记录标准II导联心电图，稳定10分钟，结扎冠状动脉左前降支，关闭胸腔。用针筒吸出动物喉部分泌物，使动物恢复自主呼吸。结扎冠状动脉15min后，静脉给药。结扎冠状动脉4小时后，摘取心脏，在结扎线以下横切5片，进行氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色，计算心肌梗死区面积占心室及心脏面积的百分比，并进行统计学处理(t检验)。
(2)、离体langendorff心脏灌流法参考药理实验方法学第三版进行。
3、结果(1)、对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响，结果见表3。
表3各种提取物对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响(x±s)剂量组别动物数梗死区/心室(％) 梗死区/心脏(％)(mg/kg)实施例一的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提5+10+5+210 12.53±4.57**##&&@10.96±3.35**##&&@取物+冰片)实施例二的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提5+10+5+210 12.62±4.49**##&&@11.01±3.42**##&&@取物+降香油)丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片 6+12+2 10 16.72±6.43**##&13.15±4.16**##&
丹参总酚酸+三七总皂苷6.7+13.310 20.51±6.58**#14.03±5.18**##丹参总酚酸 20 10 24.08±8.56*18.11±4.49*三七总皂苷 20 10 25.97±4 65*21.03±3.82*血塞通 20 10 25.02±5.72*19.64±4.71*模型组 10 33.67±7.8526.48±5.11注*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比；#P＜0.05，##P＜0.01，与丹参总酚酸或三七总皂苷组相比；&P＜0.05，&&P＜0.01与丹参总酚酸+三七总皂苷组相比；@P＜0.05，与丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片组相比。
(2)、对离体豚鼠心脏冠脉流量及心率的影响，结果见表4。
表4各种提取物对离体豚鼠心脏冠脉流量及心率的影响(x±s)组别 剂量(mg/ml) 动物数 冠脉流量增加值(ml/min) 心率减低值(次/min)实施例一的中药组合物 10(丹参提取物+三七提取物+黄5+10+5+2 16.67±1.74**&&#40±14**&&#芪提取物+冰片)实施例二的中药组合物 10(丹参提取物+三七提取物+黄5+10+5+2 10 16.76±1.68**&&#41±15**&&#芪提取物+降香油)丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片 6+12+210 14.85±1.76**&32±12**&
丹参总酚酸+三七总皂苷6.7+13.3 10 11.34±2.24*21±9*丹参总酚酸 2010 7.91±1.36 9±4三七总皂苷 2010 8.88±1.51 10±5血塞通 2010 8.82±1.11 10±4注*P＜0.05，**P＜0.01，与丹参总酚酸组或三七总皂苷组或血塞通组相比&P＜0.05，&&P＜0.01与丹参总酚酸+三七总皂苷组相比，#P＜0.05，与丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片组相比。
以上表3及表4的结果显示，各给药组都具有明显的抗心肌缺血作用，其中实施例一的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提取物+冰片)、实施例二的中药组合物(丹参提取物+三七提取物+黄芪提取物+降香油)的疗效最强，单用丹参总酚酸组或单用三七总皂苷组与阳性对照药血塞通组疗效相似，丹参总酚酸+三七总皂苷+冰片组的疗效优于丹参总酚酸+三七总皂苷组或单用丹参总酚酸组或单用三七总皂苷组或血塞通组，但弱于实施一的中药组合物和实施例二的中药组合物。


图1丹参提取物HPLC指纹图谱(0～60分钟)图2三七提取物HPLC指纹图谱(0～30分钟)具体实施方式
参考下列实施例将更易于理解本发明，给出实施例是为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例一丹参提取物按中国专利申请(申请号02117923.9)的制备方法获得。具体提取方法为丹参5kg粉碎成粗粉，加去离子水在100℃微沸状态下加热提取3次。第一次5.5倍水，加热1小时；第二、三次各加3倍量水分别加热0.5小时。提取液用10％盐酸调PH值为2后，滤过，滤液上聚酰胺柱(干树脂量为生药量2/3)。用5倍量去离子水洗，继续用0.1％碳酸氢钠水溶液洗脱，用量为柱体积的5倍。收集洗脱液，用10％盐酸调PH到2后上D101大孔吸附树脂，用去离子水冲洗至中性，继续用95％乙醇洗脱，待色带下来即收集此色带。减压浓缩收集液至尽干，用适量水溶解后冰箱冷藏过夜，通过0.3μm混合纤维素微孔滤膜过滤即得丹参总酚酸提取液，以2％氢氧化钠调节PH值到6.0后立即冷冻干燥，得丹参提取物原料冻干粉221g，成品收率为生药量的4.4％。
上述丹参提取物中丹酚酸B为53.73％，丹酚酸E为3.7％，迷迭香酸为5.2％，紫草酸为1.7％，其丹参总酚酸含量为83.94％。丹参提取物HPLC指纹图谱(10批次平均)有6个共有峰。6个共有峰的平均相对保留时间依次为0.60(丹酚酸E峰)，0.68(迷迭香酸峰)，0.73(紫草酸峰)，1(丹酚酸B)，1.08，1.26。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的只有丹酚酸B(即参照峰)，丹酚酸B峰(即参照峰)的峰面积占总峰面积的72％(平均)，其相对峰面积为1；迷迭香酸峰的峰面积占总峰面积的10％(平均)，其相对峰面积为0.14(平均)。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。丹参提取物HPLC指纹图谱见图1。
从市场购得三七总皂苷，经常规进一步精制，得三七提取物。三七提取物中人参皂苷Re为3.9％，人参皂苷Rg1为34.3％，人参皂苷Rb1为31.0％，人参皂苷Rd为8.8％，三七皂苷R1为6.8％，其三七总皂苷含量为94％。三七提取物HPLC指纹图谱(10批次平均)有11个共有峰。11个共有峰的平均相对保留时间依次为0.82(三七皂苷R1峰)，0.94(人参皂苷Re峰)，1(人参皂苷Rg1峰即参照峰)，2.63，2.74，2.79，2.85(人参皂苷Rb1峰)，2.99，3.08，3.18(人参皂苷Rd峰)，3.28。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的有人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰。人参皂苷Rg1峰(即参照峰)的峰面积占总峰面积的28％(平均)，其相对峰面积为1；人参皂苷Rb1峰的峰面积占总峰面积的39％(平均)，其相对峰面积为1.36(平均)；三七皂苷R1峰的峰面积占总峰面积的6％(平均)，其相对峰面积为0.20(平均)；人参皂苷Rd峰的峰面积占总峰面积的10％(平均)，其相对峰面积为0.37(平均)。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。三七提取物HPLC指纹图谱见图2。
从市场购得黄芪提取物，经常规进一步精制，得黄芪提取物。黄芪提取物中黄芪甲苷含量为9.5％，黄芪提取物的含量在88.9％。
取上述丹参提取物75mg、上述三七提取物150mg、上述黄芪提取物75mg、冰片30mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例二取实施例一的丹参提取物100mg、实施例一的三七提取物200mg、实施例一黄芪提取物75mg、降香油30mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例三取实施例一的丹参提取物96mg、实施例一的三七提取物136mg、实施例一的黄芪提取物70mg、冰片28mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例四取实施例一的丹参提取物70mg、实施例一的三七提取物150mg、实施例一的黄芪提取物90mg、樟脑20mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例五取实施例一的丹参提取物165mg、实施例一的三七提取物80mg、实施例一的黄芪提取物60mg、冰片25mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例六取实施例一的丹参提取物75mg、实施例一的三七提取物135mg、实施例一的黄芪提取物82mg、冰片38mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例七取实施例一的丹参提取物230mg、实施例一的三七提取物75mg、实施例一的黄芪提取物17mg、冰片8mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例八取实施例一的丹参提取物17mg、实施例一的三七提取物70mg、实施例一的黄芪提取物230mg、樟脑13mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例九取实施例一的丹参提取物55mg、实施例一的三七提取物160mg、实施例一的黄芪提取物63mg、冰片48mg，混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。
实施例十取实施例一的丹参提取物96mg、实施例一的三七提取物136mg、实施例一的黄芪提取物70mg、降香油28mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例十一取实施例一的丹参提取物70mg、实施例一的三七提取物150mg、实施例一的黄芪提取物90mg、降香油20mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例十二取实施例一的丹参提取物165mg、实施例一的三七提取物80mg、实施例一的黄芪提取物60mg、降香油25mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例十三取实施例一的丹参提取物75mg、实施例一的三七提取物135mg、实施例一的黄芪提取物82mg、降香油38mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例十四取实施例一的丹参提取物230mg、实施例一的三七提取物75mg、实施例一的黄芪提取物17mg、降香油8mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例十五取实施例一的丹参提取物17mg、实施例一的三七提取物70mg、实施例一的黄芪提取物230mg、降香油13mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例十六取实施例一的丹参提取物55mg、实施例一的三七提取物160mg、实施例一的黄芪提取物63mg、降香油48mg，加400mg聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，冷却后得中药组合物。
实施例十七取实施例一的丹参提取物75g、实施例一的三七提取物135g、实施例一的黄芪提取物96g、冰片25g、甘露醇90g、依地酸钙钠15g和蒸馏水15ml，上述组分混匀后，冷冻干燥，分装1000支。
实施例十八取丹参提取物67g(中国专利CN1352985A实施例1)、实施例一的三七提取物180g、实施例一的黄芪提取物67g、冰片16g，与40g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥30～45分钟，整粒，加入4g滑石粉，混匀，充于胶囊中，即得。
实施例十九取丹参提取物50g(水提75％醇沉法制备郭莹等，云南中医学院学报，2001，24(4)6)、三七提取物210g(钱天香等，国外医学·植物药分册，1997，12(4))、实施例一的黄芪提取物50g、冰片20g，分别用少量生理盐水溶解，加入吐温-80适量，研磨均匀，再加生理盐水后脱色，抽滤至溶液澄明，装于盐水瓶中，密封，沸水加热灭菌；再将三种澄明液混合，调pH至5，补加生理盐水至适量，抽滤至澄明，即得注射液。
实施例二十取丹参提取物60g(中国专利CN1384090A实施例1)、三七提取物80g(唐第光，中成药，1990，12(8)5)、实施例一的黄芪提取物165g、冰片25g，与40g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥30～45分钟，整粒，加入4g滑石粉，混匀，压片，即得。
实施例二十一取丹参提取物90g(中国专利CN1384090A实施例1)、实施例一的三七提取物150g、实施例一的黄芪提取物82g、冰片8g，与40g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥30～45分钟，整粒，加入4g滑石粉，混匀，整粒，装袋，即得。
实施例二十二取丹参提取物85g(中国专利CN1384090A实施例1)、实施例一的三七提取物135g、黄芪提取物80g(滕兴隆等，黑龙江医药，2002，15(5)340)、冰片30g，与700g聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，滴入低温液体石蜡中，选丸，除液体石蜡，即得。
实施例二十三取丹参提取物17g(中国专利CN1384090A实施例1)、实施例一的三七提取物280g、实施例一的黄芪提取物17g(提取余灏等，华西药学杂志1993，8(3)163；精制滕兴隆等，黑龙江医药，2002，15(5)340)、冰片16g，与700g聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，滴入低温液体石蜡中，选丸，除液体石蜡，即得。
实施例二十四取丹参提取物67g(中国专利CN1352985A实施例1)、实施例一的三七提取物180g、实施例一的黄芪提取物67g、降香油16g，与40g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥30～45分钟，整粒，加入4g滑石粉，混匀，充于胶囊中，即得。
实施例二十五取丹参提取物60g(中国专利CN1384090A实施例1)、三七提取物80g(唐第光，中成药，1990，12(8)5)、实施例一的黄芪提取物165g、降香油25g，与40g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥30～45分钟，整粒，加入4g滑石粉，混匀，压片，即得。
实施例二十六取丹参提取物90g(中国专利CN1384090A实施例1)、实施例一的三七提取物150g、实施例一的黄芪提取物82g、降香油8g，与40g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥30～45分钟，整粒，加入4g滑石粉，混匀，整粒，装袋，即得。
实施例二十七取丹参提取物85g(中国专利CN1384090A实施例1)、实施例一的三七提取物135g、黄芪提取物80g(滕兴隆等，黑龙江医药，2002，15(5)340)、降香油30g，与700g聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，滴入低温液体石蜡中，选丸，除液体石蜡，即得。
实施例二十八取丹参提取物17g(中国专利CN1384090A实施例1)、实施例一的三七提取物280g、实施例一的黄芪提取物17g(提取余灏等，华西药学杂志1993，8(3)163；精制滕兴隆等，黑龙江医药，2002，15(5)340)、降香油16g，与700g聚乙二醇-6000混合均匀，熔融，滴入低温液体石蜡中，选丸，除液体石蜡，即得。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，按重量百分比由下列组分组成丹参提取物 5.0％～70.0％三七提取物 10.0％～85.0％黄芪提取物 5.0％～70.0％冰片 1.0％～15.0％上述丹参提取物中丹酚酸B含量为45％～70％，丹酚酸E含量为2～10％，迷迭香酸含量为4％～20％，紫草酸含量为1％～10％，其总酚酸含量在70％以上；三七提取物中三七皂苷R1含量为2％～10％，人参皂苷Re含量为2％～6％，人参皂苷Rg1含量为15％～40％，人参皂苷Rb1含量为15％～40％，人参皂苷Rd含量为5％～12％，其三七总皂苷的含量在70％以上；黄芪提取物中黄芪甲苷含量为5％～15％，其黄芪总皂苷的含量在70％以上。
2.权利要求1所述中药组合物，其特征在于，所述各组分的重量百分比为丹参提取物 15.0％～50.0％三七提取物 25.0％～65.0％黄芪提取物 15.0％～50.0％冰片 2.0％～12.0％上述丹参提取物中丹酚酸B含量为45％～70％，丹酚酸E含量为2～10％，迷迭香酸含量为4％～20％，紫草酸含量为1％～10％，其总酚酸含量在70％以上；三七提取物中三七皂苷R1含量为2％～10％，人参皂苷Re含量为2％～6％，人参皂苷Rg1含量为15％～40％，人参皂苷Rb1含量为15％～40％，人参皂苷Rd含量为5％～12％，其三七总皂苷的含量在70％以上；黄芪提取物中黄芪甲苷含量为5％～15％，其黄芪总皂苷的含量在70％以上。
3.权利要求1所述中药组合物，其特征在于，所述各组分的重量百分比为丹参提取物 20.0％～30.0％三七提取物 30.0％～55.0％黄芪提取物 20.0％～30.0％冰片 4.0％～10.0％上述丹参提取物中丹酚酸B含量为45％～70％，丹酚酸E含量为2～10％，迷迭香酸含量为4％～20％，紫草酸含量为1％～10％，其总酚酸含量在70％以上；三七提取物中三七皂苷R1含量为2％～10％，人参皂苷Re含量为2％～6％，人参皂苷Rg1含量为15％～40％，人参皂苷Rb1含量为15％～40％，人参皂苷Rd含量为5％～12％，其三七总皂苷的含量在70％以上；黄芪提取物中黄芪甲苷含量为5％～15％，其黄芪总皂苷的含量在70％以上。
4.权利要求1所述中药组合物，其特征在于，所述各组分的重量百分比为丹参提取物 23％三七提取物 45％黄芪提取物 23％冰片 9％上述丹参提取物中丹酚酸B含量为45％～70％，丹酚酸E含量为2～10％，迷迭香酸含量为4％～20％，紫草酸含量为1％～10％，其总酚酸含量在70％以上；三七提取物中三七皂苷R1含量为2％～10％，人参皂苷Re含量为2％～6％，人参皂苷Rg1含量为15％～40％，人参皂苷Rb1含量为15％～40％，人参皂苷Rd含量为5％～12％，其三七总皂苷的含量在70％以上；黄芪提取物中黄芪甲苷含量为5％～15％，其黄芪总皂苷的含量在70％以上。
5.权利要求1～4任一所述的中药组合物，其特征在于，所述丹参提取物的HPLC指纹图谱有5～7个共有峰，共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的只有丹酚酸B峰，丹酚酸B峰即参照峰的峰面积占总峰面积57％～87％，其相对峰面积为1；共有峰中迷迭香酸峰的峰面积占总峰面积3％～18％，其相对峰面积为0.03～0.25；非共有峰总面积不大于总峰面积的10％；所述三七提取物的指纹图谱有9～12个共有峰，共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的有人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰，共有峰中人参皂苷Rg1峰即参照峰的峰面积占总峰面积20％～35％，其相对峰面积为1；共有峰中人参皂苷Rb1峰的峰面积占总峰面积30％～50％，其相对峰面积为0.85～2.50；共有峰中三七皂苷R1峰的峰面积占总峰面积2％～8％，其相对峰面积为0.06～0.40；共有峰中人参皂苷Rd峰的峰面积占总峰面积5％～14％，其相对峰面积为0.14～0.70。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。
6.权利要求1～4任一所述的中药组合物，其特征在于，所述丹参提取物的HPLC指纹图谱有6个共有峰，6个共有峰的相对保留时间依次为0.55～0.65(丹酚酸E峰)，0.66～0.70(迷迭香酸峰)，0.71～0.79(紫草酸峰)，1(丹酚酸B峰即参照峰)，1.03～1.12，1.21～1.30，所述三七提取物的HPLC指纹图谱有11个共有峰，11个共有峰的相对保留时间依次为0.77～0.85(三七皂苷R1峰)，0.87～0.97(人参皂苷Re峰)，1(人参皂苷Rg1峰即参照峰)，2.58～2.67，0.68～2.76，2.77～2.81，2.82～2.91(人参皂苷Rb1峰)，2.95～3.03，3.05～3.13，3.15～3.22(人参皂苷Rd峰)，3.24～3.91。
7.权利要求1～4任一所述的中药组合物，其特征在于，所述丹参提取物中丹参总酚酸含量在80％以上，所述三七提取物中三七总皂苷含量在80％以上，所述黄芪提取物中黄芪总皂苷含量在80％以上。
8.权利要求1～4任一所述的中药组合物为活性成分制成的注射剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂。
9.权利要求8所述的中药组合物为活性成分制成的注射剂、粉针剂。
10.权利要求1～4任一所述的中药组合物，其特征在于，用降香油代替冰片或樟脑。
11.权利要求5所述的中药组合物，其特征在于，用降香油代替冰片或樟脑。
12.权利要求6所述的中药组合物，其特征在于，用降香油代替冰片或樟脑。
13.权利要求10所述的中药组合物，其特征在于，所述丹参提取物中丹参总酚酸含量在80％以上，所述三七提取物中三七总皂苷含量在80％以上，所述黄芪提取物中黄芪总皂苷含量在80％以上。
14.权利要求10所述的中药组合物为活性成分制成的注射剂、片剂、滴丸、颗粒剂、缓释片、粉针剂、胶囊剂、微粒剂。
全文摘要
本发明公开一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，它由丹参提取物5.0％～70.0％、三七提取物10.0％～85.0％、黄芪提取物5.0％～70.0％、冰片或降香油1.0％～15.0％组成，具有明显的抗脑缺血、心肌缺血作用，其疗效优于单独使用丹参总酚酸或三七总皂苷，也优于丹参总酚酸加三七总皂苷，为临床提供了一种疗效更好、更加方便的中药有效部位复方组合物及其制剂。
文档编号A61P9/10GK1600319SQ0314431
公开日2005年3月30日 申请日期2003年9月23日 优先权日2003年9月23日
发明者魏峰, 李德坤, 罗崇念, 岳洪水, 陈庆闯, 黄芝娟 申请人:天津天士力制药股份有限公司