专利名称：治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法
技术领域：
本发明涉及由植物类中药饮片提取的药物，特别是一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法。
背景技术：
川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎)味辛性温，既能活血化瘀又可行气止痛，以川芎为主药的“冠心II号”，“速效救心丸”等，都是临床上治疗缺血性心脏病的有效成药。缺血性心脏病的基本病机是“虚气留滞，毒损心络”，而川芎具有辛香透络，活血化瘀之功，可以条达气血，俾气血条畅，毒邪无所依附而消散，则心络舒展自如。可见，川芎是通过祛邪以扶正，同时，又具有止痛之效。因此，为治疗心血瘀阻，毒损心络胸痹之良药。
但是，目前对川芎的临床应用主要依靠饮片煎煮制取，由于饮片质量不易控制，作用不稳定，用量大而作用小。因此，近年来中药界已开始研究川芎对心血管系统的药理作用，以提高其药效。川芎对心血管系统的药理作用研究，在阴健主编的《中药现代研究与临床应用I》pp108-118的综述中表明，川芎具有扩张冠脉，增加冠脉血流量，降低心肌氧耗，并对心肌缺血性损伤有保护作用，但其有效成分的研究几乎全集中于川芎嗪(四甲基吡嗪)，许多文献甚至以合成四甲基吡嗪的作用来阐明川芎药理活性。我们的研究表明，川芎中四甲基吡嗪含量甚微，有些产地的川芎生药中甚至未能检出四甲基吡嗪，因此，川芎对心血管系统的药理作用物质基础是否归于四甲基吡嗪，值得商榷。
发明内容
本发明的目的在于从中药川芎中分离精制内酯类化合物，用于治疗缺血性心脏病。其创新点在于川芎内酯为结构确定的化合物，比川芎饮片易于质量控制而作用稳定，而且用量小作用强，可开发成二类乃至一类新药而具有较好的应用前景。
本发明治疗缺血性心脏病的川芎内酯，是由川芎饮片提取的川芎总内酯包含的，其中川芎内酯A与川芎内酯B分别占总内酯成分重量的50％±10％和20％±5％，总内酯中还有少量二聚体，该二聚体共有3种，内酯A、B及二聚体的分子结构式如下 川芎内酯A 川芎内酯B
二聚体1 二聚体2 二聚体3利用1HNMR，13CNMR及EIMS法鉴定了川芎内酯的结构，其光谱数据如下川芎内酯A为化合物4，5-二氢-3-丁叉基苯肽(4，5-dihydro-3-butylidene-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)190(M+，72)，161(100)，134(28)，133(26)，106(50)，105(60)，78(50)，77(50)，55(90).分子式C12H14O2。分子量190。1HNMR(CDCl3)δ0.91(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.46(2H，Hexa，J＝7.5，H-10)，2.33(2H，q，J＝7.5，H-9)，2.44(2H，m，H-5)，2.57(2H，t，J＝7.2，H-4)，5.19(1H，t，J＝7.5，H-8)，5.97(1H，dt，J＝10.0，5.0，H-6)，6.23(1H，dt，J＝10.0，2.0，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ13.7(q，C-11)，18.4(t，C-10)，22.3(t，C-9，5)，28.0(t，C-4)，112.8(d，C-8)，116.9(d，C-7)，123.9(s，C-7a)，129.9(d，C-6)，147.0(s，C-3a)，148.5(s，C-3)，167.5(s，C-1)；川芎内酯B为化合物4，5-二氢-3-丁基苯肽(4，5-dihydro-3-butyl-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)192(M+，25)，163(5)，135(10)，107(100)，79(40)，77(35)，分子式C12H16O2，分子量192。1HNMR(CDCl3)δ0.87(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.36(4H，m，H-9，10)，1.50(1H，m，H-8a)，1.85(1H，m，H-8b)，2.43(2H，m，H-4)，2.47(2H，m，H-5)，4.90(1H，dd，J＝8.0，3.5，H-3)，5.88(1H，dt，J＝9.5，4.5，H-6)，6.16(1H，dt，J＝9.5，2.5，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ13.8(q，C-11)，20.7(t，C-10)，22.3(t，C-9)，22.4(t，C-8)，26.7(t，C-5)，31.9(t，C-4)，82.5(d，C-3)，116.8(d，C-7)，124.4(s，C-7a)，128.3(d，C-6)，161.4(s，C-3a)，171.2(s，C-1)。
由川芎总内酯分离出川芎内酯A、B，即该川芎内酯是指川芎内酯A或川芎内酯B。
以川芎内酯A、B为原料，可人工合成川芎内酯A、B二聚体，该二聚体为结晶性化合物，它具有与川芎内酯A、B相同的不饱和五元内酯环及环外丁(烯)基活性基团。
用于上述治疗缺血性心脏病的川芎内酯的制备方法是取川芎饮片以乙醇渗漉，二者重量比为1∶4，渗漉液减压回收乙醇至无乙醇味，加入与残物等体积的水，充分搅拌后静置分层，取上层油脂层以石油醚溶解，用含水甲醇萃取，甲醇萃取物行硅胶柱层析，以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)除油脂，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗出川芎总内酯。川芎总内酯再行硅胶及ODS层析分离得到川芎内酯A、B及其二聚体化合物。
药理实验研究结果表明
1、川芎内酯A，B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，持续时间缩短；显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A，B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
2、川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，提示川芎内酯A，B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
3、川芎内酯A、B降低血小板聚集率，全血粘度及血浆粘度，表明川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
4、川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响，表明川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
以上结果为川芎内酯A，B治疗缺血性心脏病提供了实验依据。
图1为川芎内酯A的1HNMR谱图2为川芎内酯A的13CNMR谱图3为川芎内酯B的1HNMR谱图4为川芎内酯B的13CNMR谱图5为二聚体1的1HNMR谱图6为二聚体1的13CNMR谱图7为二聚体2的1HNMR谱图8为二聚体2的13CNMR谱图9为二聚体3的1HNMR谱图10为二聚体3的13CNMR谱具体实施方式
提取分离工艺及药效学研究实施例实施例1 川芎总内酯的提取分离取川芎饮片粗粉10kg，以95％乙醇拌匀后，置渗漉筒内室温闷润24h，饮片与乙醇重量比为1∶4，开始用95％乙醇渗漉，渗漉速度1000ml/h，渗漉8h，静置16h后再行渗漉，共收集渗漉液5万ml(5000ml渗漏液/kg饮片)。渗漉液减压回收乙醇至无醇味(残物约1万ml)后，加入1万ml水，充分搅拌后静置2h，分取上层油脂状物，以石油醚含水甲醇系统萃取分离。取甲醇萃取液，减压回收甲醇。甲醇萃取物(油状物)置硅胶柱，以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)洗去油脂后，再以石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗脱川芎总内酯。
实施例2 川芎内酯A、B的分离取总内酯置硅胶柱中，以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)进行层析分离。收集亮兰色荧光部分，用作川芎内酯A的精制。取随后之荧光吸收部分用作川芎内酯B的精制。
实施例3 川芎内酯A、B的精制取实施例2中收集的亮兰色荧光部分(油状物)进行ODS层析分离，以含水甲醇为洗脱剂，收集亮兰色荧光部分，减压回收甲醇，残物加入无水乙醇反复脱水，得浅黄色油状物川芎内酯A。
取实施例2中荧光吸收部分(油状物)按上述方法层析分离，收集TLC单一荧光吸收斑点组分，回收甲醇，无水乙醇脱水，得浅黄色油状物川芎内酯B。
实施例4 川芎内酯A、B的纯度检查方法HPLC法；仪器Waters 996型HPLC仪；固定相Kromasil 100 C185μm；检测波长240nm；流速0.9ml/min；流动相∶甲醇-水(70∶30)；柱温18-19℃。川芎内酯A纯度为98.35％，川芎内酯B纯度为99.05％。
实例5 川芎内酯A，B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用采用麻醉大鼠整体动物实验模型，开胸后结扎冠状动脉前降支，观察了川芎内酯A，B1g.kg-12g.kg-1对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。结果表明川芎内酯A，B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，缩短其持续时间；显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A，B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
实例6 川芎内酯A、B对小鼠耐缺氧作用采用常规小鼠耐缺氧实验方法，观察川芎内酯A、B灌胃给药对耐缺氧能力的影响。结果表明川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，提示川芎内酯A，B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
实例7 川芎内酯A.B对大鼠血液流变学的影响Wistar大鼠，雄性，体重240-270g，戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1iv)后，腹主动脉采血，枸橼酸钠抗凝，测定血小板聚集率(比浊法)，全血粘度及血浆粘度。结果表明川芎内酯A、B降低血小板聚集率，全血粘度及血浆粘度，提示川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
实例8 对麻醉大鼠心脏功能和血流动力学的影响采用麻醉大鼠整体动物实验模型，观察了川芎内酯A、B对正常大鼠心脏功能和血流动力学的影响。结果表明川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响，提示川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
从3个二聚体的结构分析，二聚化后其结构中仍然保留着不饱和五元内酯环之结构部分，从构效学的观点出发，预计二聚体应保持与聚合单元化合物相似的生物活性，而且二聚体均为结晶性化合物，其熔点分别为113~115℃，108~110℃，154~156℃，与聚合单元化合物相比要稳定得多，而且由于其可结晶性质而易于分离纯化，而且采用适当的化学方法可从单元化合物聚合反应而成。
另外，具有如下结构类型的化合物同样具有不饱和五元环内酯结构，也应具有与川芎内酯A、B相似的生理活性。
R1~R8可为氢，亦可为羟基及其它简单取代基团由于川芎内酯A占总内酯成分的50％±，B占20％±，因此可以认定川芎总内酯也同样对心血管系统有类似的生理活性。
同理，任何以川芎总内酯为主，配伍其它中药的复方制剂，并以川芎内酯A，B或相关化合物为质控标准的药物亦应有类似的药效作用。
附 药理研究实验报告书一、川芎内酯A，B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用1.材料1.1 药物及试剂 川芎。硝基蓝四唑(N-BT)，军事医学科学院药材供应站批号，971120。乳酸脱氢酶测定试剂盒(比色法)，北京化工厂，批号，020205。磷酸肌酸激酶(CPK)测定试剂盒，北京化工厂，批号，020104。川芎内酯A，B1.2 动物 雄性Wistar大鼠，体重300-400克，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号医动字第01-3008。
1.3 仪器DH-140B型动物人工呼吸机(浙江医科大学实验仪器厂)，BIOPAC多导生理记录仪(美国)，ZS-3型半自动生化分析(北京中生生物工高科技公司)。
2.方法2.1 实验模型实验动物用戊巴比妥钠麻醉(30mg·kg-1ip)。气管切开，行人工呼吸。呼吸频率45-50次/分。暴露左颈总动脉，插动脉套管以监测血压。于胸骨左源3-4肋间，打开胸腔及心包膜，暴露心脏；在肺动脉圆锥与左心耳下缘之间，经左冠状动脉下浅层心肌穿一丝线，线的两端穿过一条直径2mm的聚乙烯塑料管，其末端用一小动脉夹固定。通过打开和夹紧动脉夹造成冠状动脉的阻断与再通。连续记录冠状动脉结扎前后及再通后Π导心电图。观察VT、VF的起始时间和持续时间。动脉血压和心电图均同步记录于多导生理记录仪。实验结束后，腹主动脉取血，分离血浆测LDH、CPK活性。然后，迅速摘取心脏，左心室称重后，将其切成1-2mm的心肌薄片，浸于N-BT溶液中染色30分钟。非缺血区的心肌组织为深蓝，缺血区心肌不染色。按称重法计算心肌梗死面积。
2.2 实验分组 大鼠48只。随机随机分为6组，每组8只。1)对照组等量生理盐水；2)川芎内酯A2g.kg-1组；3)川芎内酯A1g.kg-1组；4) 川芎内酯B2g.kg-1组；5)川芎内酯B1g.kg-1组；上述各组于给药40分钟后，结扎左主冠状动脉10分钟，再灌注20分钟。6)，假手术组左主冠状动脉下穿线，不结扎。
2.3统计分析实验数据均用均数±标准差表示；心律失常的发生率，用X2检验；其他数据分析用单因素方差分析方法。
3.实验结果3.1对缺血再灌注所致心律失常的影响 川芎内酯A，B2g.kg-1可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，并缩短其持续时间。与单纯缺血再灌注组比较，有显著性差异。结果见表1。
3.2对心肌梗塞面积和血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶的影响 川芎内酯A，B2g.kg-1均能显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低，与单纯缺血再灌注组相比，均有显著性差异。结果见表2。
表1 对大鼠心肌缺血再灌注所致心律失常的影响(x±s) n＝8剂量 VT和VF发生率(％)持续时间(VT+VF)(s)组别(g·kg-1)缺血期 再灌期 缺血期 再灌期假手术组- - - - -单纯I/R组 - 75 312.3±34.8 288.3±55.387.5川芎内酯A组 1 50 50 416.6±12.5 212.8±61.22 37.5* 37.5* 48.3±14.6**25.8±1.26**川芎内酯B组 1 75 75 360.4±12.8 229.43±85.92 37.5* 37.5* 43.7±21.5**47.3±19.4***P＜0.05； **P＜0.01，与单纯I/R组相比。
表2 对大鼠心肌缺血再灌注所致梗塞面积和LDH、CPK活性的影响X±SD n＝8剂量 LDH CPK 梗塞面积组 别(g.kg-1) (U.mL-1)) (10-3IU.L-1) (％)假手术组- 112±34 234±87 -单纯I/R组 - 211±16**613±114**29.18±4.09川芎内酯A组 1 216±22 568±13635.18±3.172 176±32* 286±64*15.38±4.16*川芎内酯B组 1 286±55 611±61 35.38±14.762 164±20* 268±46*17.25±6.83*
*P＜0.05；与单纯I/R组相比；**P＜0.01；与假手术组相比。
二、川芎内酯A、B对小鼠耐常压缺氧作用1.原理缺氧对机体是一种劣性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化功能，最终会导致机体的心脑等重要器官缺氧供能不足而死亡。
2.材料2.1动物 小鼠，雄性，体重25-30g，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号医动字第01-3008。
2.2药品 川芎内酯A，B钠石灰3.方法3.1实验分组及过程取32只小鼠，随机分成4组；给药组分别灌胃给予川芎内酯A，B1.1g.kg-1，2.2g.kg-1；对照组小鼠给等量生理盐水；给药后30分钟，将小鼠放入盛有5g钠石灰的广口瓶内，用凡士林涂抹瓶口盖严，防止漏气，并立即计时；以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧死亡的时间。与对照组比较，测其显著性。
3.2统计分析实验数据均用均数±标准差表示；其他数据分析用单因素方差分析方法。
4.实验结果川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，与对照组相比，差别有显著性意义。结果见表3。
表3 对小鼠耐常压缺氧作用的影响X±SDn＝8组 别动物数(n)剂量(g.kg-1) 存活时间(min)对照组8- 12.39±1.07川芎内酯A组 81.1 12.76±4.57川芎内酯A组 82.2 13.91±5.66*川芎内酯B组 81.1 20.38±6.89川芎内酯B组 82.2 26.11±7.56**与对照组比较，P＜0.05三、川芎内酯A.B对大鼠血液流变学的影响1.材料1.1 动物Wistar大鼠，雄性，体重240-270g，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号医动字第01-3008。
1.2 器材DIC-PA 3210型血小板聚集仪(日本)LBY-NW1自动清洗毛细管式血浆粘度计(北京普利生)LBY-NA6自动清洗旋转式粘度计(北京普利生)1.3药品及试剂川芎内酯A、B二磷酸腺苷ADP(5.3mg/ml)
枸橼酸钠抗凝液(3.8％)2方法2.1 实验分组及过程大鼠按体重随机分成5组，每组8只；给药组分别灌胃给予川芎内酯A，B1.0g.kg-1，2.0g.kg-1，对照组给等量生理盐水；1小时后，用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1)；固定后由腹主动脉采血，枸橼酸钠抗凝(1∶9)；部分血液1000rpm离心10分钟，制备富血小板血浆(PRP)；3000rpm再次离心15分钟，制备贫血小板血浆(PPP)。将PRP与PPP按一定比例调至所需浓度，用光密度法测定由ADP诱导的血小板聚集的百分率；部分血液3000rpm离心15分钟，测定血浆粘度；部分血液测定全血粘度。
2.2 统计分析 实验数据均用均数±标准差表示；其他数据分析用单因素方差分析方法。
3.实验结果川芎内酯A、B降低血小板聚集率，与对照组相比，差别有显著性意义。结果见表4。
表4 川芎内酯A对血小板聚集功能的影响X±SD(n＝8)全血粘度 血浆粘度剂量 血小板聚集组别(mPa.s) (mPa.s)(g.kg-1) (％)100S-1200-1对照组- 48.0±4.954.77±0.92 4.22±0.70 1.44±0.03川芎内酯A组 1.041.0±12.98 3.80±0.25*3.37±0.16* 1.24±0.05*川芎内酯A组 2.028.9±5.67* 3.39±0.37*3.15±0.31* 1.22±0.08*川芎内酯B组 1.040.39±8.45 3.95±0.49*3.51±0.30* 1.35±0.07*川芎内酯B组 2.033.98±11.37* 3.92±0.40*3.57±0.23* 1.33±0.12**P＜0.05与对照组比较四、对麻醉大鼠心脏功能和血流动力学的影响1.材料1.1 药物川芎1.2 动物雄性SD大鼠，体重300-400g，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号医动字第01-3008。
1.3 仪器DH-140B型动物人工呼吸机，MP-100多导生理记录系统(美国)，CBI血流仪(美国)。
2.方法2.1 心功能的测定实验动物用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1iv)。气管切开，行人工呼吸。呼吸频率45-50次/分。暴露左颈总动脉，插动脉套管以监测血压(BP)。于胸骨左缘3-4肋间，打开胸腔及心包膜，暴露心脏；用内充肝素生理盐水的聚乙烯塑料管从心尖部插入左室腔内，接压力换能器，观察左室内压(LSVP)。分离升主动脉，嵌入直径适当的探头，通过CBI血流仪测主动脉流量。左室压最大上升及下降速率(±dp/dtmax)，用MP-100的专用程序通过对LVP的微分求得。BP、HR、LVP、主动脉流量和±dp/dtmax均同步记录于MP-100多导生理记录系统。术后稳定30分钟后，首先记录上述指标的正常值；然后经十二指肠给药，观察给药后5份、10分、15分、30分、60分上述指标的变化。
2.2 实验分组大鼠40只，随机分为5组，每组8只。1.正常对照组等量生理盐水组；2.川芎内脂A2g.kg-1组；3.川芎内脂A1g.kg-1组；4.川芎内脂B2g.kg-1组；5.川芎内脂B 1g.kg-1组。
2.3统计分析用统计软件SPSS10.0中重复测量方差分析方法进行数据处理，实验数据以均数±SD表示。
3.实验结果3.1 对血压、心率和心电图的影响十二指肠给予川芎内脂A、B1g.kg-1、2g.kg-1，在观察时间内对动脉收缩压和舒张压、心率没有影响。结果见表5、6。
3.2 对左室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量的影响十二指肠给予川芎内脂A、B1g.kg-1、2g.kg-1，在观察时间内对左室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响。结果见表7。
表5 川芎内脂A、B对麻醉大鼠血压的影响 X±SD n＝8测定 川芎内酯A 川芎内酯B测定时间空白组指标2.0g/kg2.0g/kg102.20± 113.14±给药前 100.97±20.2519.01 9.79100.40± 103.67±5分 96.70±15.7318.25 10.00收 102.41± 116.63±10分 96.75±15.43缩 10.30 20.71给压 96.50±115.70±药 15分 96.37±13.40(mmHg) 14.90 19.79后95.56±118.20±30分 91.35±16.3516.24 17.0897.48±106.57±60分 93.62±13.9512.47 20.6866.23±给药前 61.65±16.73 68.23±14.5918.1665.46±5分 65.67±18.37 69.76±16.9610.52舒 60.38±10分 60.55±16.44 64.93±17.70张 14.91给压 66.50±药 15分 58.55±17.87 70.80±16.00(mmHg) 19.43后64.28±30分 57.65±18.52 65.12±17.2513.0959.49±60分 59.10±17.34 60.62±16.7319.97表6 川芎内脂A、B对麻醉大鼠心率(bpm)的影响(X±SD n＝8)川芎内酯A川芎内酯B测定时间 空白组2.0g/kg 2.0g/kg
203.19± 239.06±给药前 236.85±7.8433.67 27.31190.27±241.97± 240.00±5分24.15 12.41 23.76192.48±219.81± 241.83±10分 24.74 23.73 24.55给15分 209.23±222.50± 215.97±药15.68 16.97 23.23后216.19±220.15± 261.25±30分 20.04 20.29 18.6360分 207.14±221.55± 221.04±25.93 15.72 20.08表7 川芎内脂A、B对麻醉大鼠LVSP、LVP±dp/dtmax及CO的影响X±SD n＝8测定川芎内酯A 川芎内酯B测定时间 空白组指标2.0g/kg 2.0g/kg149.21± 160.10±给药前 170.02±11.1119.83 11.73148.06± 162.03±5分164.17±5.968.68 18.9110 146.40± 147.78±171.81±7.02LVSP 分 16.03 16.79给(mmHg) 15 143.78± 145.17±药 172.31±5.85分 14.37 19.31后30 137.48±136.20±5.47 171.09±15.63分 13.8760 138.31±136.20±8.14 159.53±23.16分 11.492551.9± 4138.8±给药前 3903.3±194.2248.6 425.12604.3± 3952.8±5分 3940.7±281.7264.2 365.810 2621.3± 4100.9±LVP+dp/dtmax3784.9±271.5分 236.8 386.2给15 2572.4± 4018.2±(mmHg/s)药 3715.3±309.9分 257.9 361.7后30 2365.2± 4135.6±3489.8±330.8分 213.8 349.860 2502.7± 3846.8±3303.7±243.0分 202.8 261.5LVP-dp/dtmax1477.9± 2469.5±给药前 2847.4±429.8136.8 175.1
(mmHg/s) 1673.2±2330.6±5分 2522.4±330.6183.9292.8101603.3±2683.4±2605.2±385.9分159.2238.9给151673.2±2346.7±药 2415.3±155.9分156.8377.8后301604.4±2536.5±2424.5±258.9分200.4250.8601464.0±2381.9±2349.7±327.7分187.8255.9135.50±给药前 136.6±14.9 142.58±17.3914.63129.35±5分 141.9±15.4 159.81±19.0122.4810 134.23±147.8±14.6 153.57±26.32CO分 19.14给(ml/min) 15 131.67±药156.0±19.4 159.42±26.81分 17.47后30 141.90±200.4±13.8 172.75±35.96分 18.7660 131.06±187.3±14.2 137.47±31.93分 16.85结论药理实验研究结果表明1.川芎内酯A，B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，持续时间缩短；显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A，B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
2.川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，提示川芎内酯A，B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
3.川芎内酯A、B降低血小板聚集率，全血粘度及血浆粘度，表明川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
4.川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响，表明川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
以上结果为川芎内酯A，B治疗缺血性心脏病提供了实验依据。
权利要求
1.一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于该川芎内酯是由川芎饮片提取的川芎总内酯所包含的，其中川芎内酯A与川芎内酯B分别占总内酯成分重量的50％±10％和20％±5％，总内酯中还有少量二聚体，该二聚体共有3种，上述成分的分子结构式如下 川芎内酯A 川芎内酯B 二聚体1 二聚体2 二聚体3利用1HNMR，13CNMR及EIMS法鉴定了川芎内酯的结构，其光谱数据如下川芎内酯A为化合物4，5-二氢-3-丁叉基苯肽(4，5-dihydro-3-butylidene-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)190(M+，72)，161(100)，134(28)，133(26)，106(50)，105(60)，78(50)，77(50)，55(90).分子式C12H14O2。分子量190。1HNMR(CDCl3)δ0.91(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.46(2H，Hexa，J＝7.5，H-10)，2.33(2H，q，J＝7.5，H-9)，2.44(2H，m，H-5)，2.57(2H，t，J＝7.2，H-4)，5.19(1H，t，J＝7.5，H-8)，5.97(1H，dt，J＝10.0，5.0，H-6)，6.23(1H，dt，J＝10.0，2.0，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ13.7(q，C-11)，18.4(t，C-10)，22.3(t，C-9，5)，28.0(t，C-4)，112.8(d，C-8)，116.9(d，C-7)，123.9(s，C-7a)，129.9(d，C-6)，147.0(s，C-3a)，148.5(s，C-3)，167.5(s，C-1)；川芎内酯B为化合物4，5-二氢-3-丁基苯肽(4，5-dihydro-3-butyl-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)192(M+，25)，163(5)，135(10)，107(100)，79(40)，77(35)，分子式C12H16O2，分子量192。1HNMR(CDCl3)δ0.87(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.36(4H，m，H-9，10)，1.50(1H，m，H-8a)，1.85(1H，m，H-8b)，2.43(2H，m，H-4)，2.47(2H，m，H-5)，4.90(1H，dd，J＝8.0，3.5，H-3)，5.88(1H，dt，J＝9.5，4.5，H-6)，6.16(1H，dt，J＝9.5，2.5，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ13.8(q，C-11)，20.7(t，C-10)，22.3(t，C-9)，22.4(t，C-8)，26.7(t，C-5)，31.9(t，C-4)，82.5(d，C-3)，116.8(d，C-7)，124.4(s，C-7a)，128.3(d，C-6)，161.4(s，C-3a)，171.2(s，C-1)。
2.根据权利要求1所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于该川芎内酯是指川芎内酯A。
3.根据权利要求1所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于该川芎内酯是指川芎内酯B。
4.根据权利要求1或2所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于该川芎内酯是由川芎内酯A、B合成的川芎内酯A、B二聚体，该二聚体为结晶性化合物，它具有与川芎内酯A、B相同的不饱和五元内酯环及环外丁(烯)基活性基团。
5.用于权利要求1所述的川芎内酯的制备方法，其特征在于取川芎饮片以乙醇渗漉，二者重量比为1∶4，渗漉液减压回收乙醇至无乙醇味，加入与残物等体积的水，充分搅拌后静置分层，取上层油脂层以石油醚溶解，用含水甲醇萃取，甲醇萃取物行硅胶柱层析，以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)除油脂，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗出川芎总内酯。
6.用于权利要求5所述的川芎内酯的制备方法，其特征在于取总内酯置硅胶柱中，以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)进行层析分离。收集亮兰色荧光部分，用作川芎内酯A的精制；取随后之荧光吸收部分用作川芎内酯B的精制。
7.用于权利要求6所述的川芎内酯的制备方法，其特征在于取收集的亮兰色荧光部分(油状物)进行ODS层析分离，以含水甲醇为洗脱剂，收集亮兰色荧光部分，减压回收甲醇，残物加入无水乙醇反复脱水，得浅黄色油状物川芎内酯A；取荧光吸收部分(油状物)按上述方法层析分离，收集TLC单一荧光吸收斑点组分，回收甲醇，无水乙醇脱水，得浅黄色油状物川芎内酯B。
全文摘要
本发明是一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法，由中药川芎饮片中提取出川芎总内酯，该总酯中川芎内酯A、B占70％，并有少量川芎内酯A、B二聚体。实验药理学证明川芎内酯A、B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤具有非常显著的保护作用，并能显著提高小鼠耐缺氧能力，该二化合物及其相关化合物结构明确，可研制成用于治疗缺血性心脏病的二类或一类新药。
文档编号A61P9/10GK1569848SQ03146029
公开日2005年1月26日 申请日期2003年7月14日 优先权日2003年7月14日
发明者肖永庆, 梁日欣, 李文, 李丽, 张村 申请人:中国中医研究院中药研究所