专利名称：降低血压的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及降低血压的药物。
背景技术：
吴茱萸是一种传统的中药，始载于《神农本草经》，在临床应用已有数百年的历史。近年来，国内外学者对其化学成分和药理作用进行了深入研究。其中重要生物碱成分为吴茱萸碱(evodiamine，Evo)和吴茱萸次碱(rutaecarpine，Rut)。Evo和Rut可增强豚鼠离体心房收缩力，提高其收缩频率。该作用可被竞争性辣椒素受体(VR1)拮抗剂Capsazepine和非竞争性VR1拮抗剂钌红以及选择性降钙素基因相关肽(CGRP)受体拮抗剂CGRP8-37所取消，并且这两种生物碱与辣椒素之间可产生快速交叉耐受，提示Evo和Rut对豚鼠离体心房的兴奋作用与激活VR1促进CGRP释放有关[1]。
Rut可产生剂量(或浓度)依赖性的降压和舒张血管效应，其机制主要涉及内皮细胞Ca2+-NO-cGMP途径，也与减少VSMC Ca2+内流有关[7-9]。其证据有①一氧化氮合酶(NOS)抑制剂Nω-nitro-argine(L-NNA)可明显抑制Rut的降压作用[9]；②在苯肾上腺素预收缩(强直性收缩)的大鼠胸主动脉和肠系膜上动脉环，去除内皮或加入NOS抑制剂如L-NAME、L-NNA、L-NG-nitro-argine和对苯二酚(hydroquinone)以及腺苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝，可取消或减弱Rut Ca2+依赖性的舒血管反应，而细胞内Ca2+动员拮抗剂TMB-8对其作用无明显影响[8，9]；③Rut可促进培养内皮细胞Ca2+依赖性的NO释放，增加胸主动脉环cGMP的产生，去除内皮后其促cGMP产生作用显著减弱[9]；④预先加入Rut，在细胞外有Ca2时，可明显抑制苯肾上腺素所致胸主动脉环位相收缩，无Ca2+时则无明显影响，TMB-8可抑制Rut的血管舒张反应[8]；⑤在细胞外有Ca2+或无Ca2+的情况下，预先加入Rut均可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素所致胸主动脉环位相收缩，去除内皮时可显著减弱其舒张反应[7]；⑥在细胞外有Ca2+时，Rut可增加内皮细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)，而无Ca2+时Rut对内皮细胞[Ca2+]i无影响；在有Ca2+时，Rut可抑制KCl所致培养VSMC[Ca2+]i增加；无Ca2+时也可降低去甲肾上腺素所致VSMC[Ca2+]i增加[7]；⑦全细胞膜片钳实验发现，Rut可开放内皮细胞非电压依赖性Ca2+通道，在VSMC可开放L-电压依赖性Ca2+通道[9]。
申请人发现，静脉注射Rut产生降压效应，同时可升高血浆CGRP浓度，实验前4天皮下注射辣椒素(50mg/kg)耗竭感觉神经递质(包括CGRP)，可取消其降压和促CGRP释放作用；预先应用Capsazepine和CGRP8-37可明显减弱Rut对胸主动脉和肠系膜上动脉环的舒张作用，并且Rut与辣椒素之间可产生快速交叉耐受，提示Rut的降压和舒血管作用可能与激活VR1受体促进CGRP释放有关[10]。
另一方面，高血压的防治一直是心血管领域中的重要研究课题。降钙素基因相关肽(CGRP)是感觉神经的主要递质，为目前已知最强的舒血管物质，其为多肽不能口服，且半衰期短(10分钟左右)，应用受限，故人们一直在寻找促进内源性CGRP合成与释放的药物。
但是，现有技术对Rut降压作用的研究仅显示，Rut能促进CGRP的释放，并且其作用维持时间短暂(仅约2min)。因此依据现有技术，普通技术人员不知道Rut是否可以作为降血压的药物。
现有技术中有许多合成Rut的方法。
发明内容
本发明克服了现有技术认识上的不足，发现Rut的另一个重要性质，因而可以将Rut作为降血压的药物。
本发明提供的降血压药物，含有吴茱萸次碱或和药学上可用的辅剂。
本发明人经研究首次发现长期给予吴茱萸次碱产生剂量依赖性降压，给药后6～8天可达到稳定降压，同时升高血中及背根神经节中CGRP含量。使用辣椒素使感觉神经脱敏后，其降压作用与促CGRP合成和释放作用明显被抑制。因此吴茱萸次碱的降压作用是通过激活辣椒素敏感的感觉神经上辣椒素受体，促进CGRP的合成和释放。
高血压需长期用药，Rut口服有效；Rut不仅可以促进CGRP释放，而且可以促进其合成，故能发挥长期稳定降压作用。这样使Rut作为药物有效成份降血压成为现实。
图1单次静脉给予吴茱萸次碱(RUT)对高血压大鼠平均动脉压的影响；其中Veh溶媒；Cap辣椒素；CAPZCapsazepine(选择性辣椒素受体阻断剂)。数据表示为均数±标准误，n＝9-12。**P＜0.01vs+Veh(RUT)；++P＜0.01vs+RUT(300μg/kg)。
图2单次静脉给予吴茱萸次碱(RUT)对高血压大鼠血浆CGRP浓度的影响；其中Hypertension高血压；Veh溶媒；Cap辣椒素；CAPZCapsazepine(选择性辣椒素受体阻断剂)。数据表示为均数±标准误，n＝9-12。**P＜0.01vs Hypertension；++P＜0.01vs+RUT(300μg/kg)。
图3长期给予吴茱萸次碱(RUT)对高血压大鼠尾动脉收缩压的影响；动物血压升高达稳定后(约15天)，连续灌胃给药12天，每天给药2次，图中血压为每次给药前所测值。其中动物血压升高达稳定后(约15天)，连续灌胃给药12天，每天给药2次，图中血压为每次给药前所测值。Control正常对照组；Hypertension高血压组；RUT(L)低剂量吴茱萸次碱组(1.5mg/kg/次)；RUT(H)高剂量吴茱萸次碱组(3mg/kg/次)；Cap辣椒素。数据表示为均数±标准误，n＝9-12。
图4长期给予吴茱萸次碱(RUT)对高血压大鼠血浆CGRP浓度的影响；动物血压升高达稳定后(约15天)，连续灌胃给药12天，每天给药2次，图中CGRP浓度为处死动物前所测值。其中Control正常对照组；Hypertension高血压组；RUT(L)低剂量吴茱萸次碱组(1.5mg/kg/次)；RUT(H)高剂量吴茱萸次碱组(3mg/kg/次)Cap辣椒素。数据表示为均数±标准误，n＝8-11。**P＜0.01vs Control；++P＜0.01vs Hypertension；；##P＜0.01vs+RUT(H)。
图5长期给予吴茱萸次碱(RUT)对高血压大鼠背根神经节CGRP含量的影响；动物血压升高达稳定后(约15天)，连续灌胃给药12天，每天给药2次，图中CGRP含量为处死动物前所测值。其中Control正常对照组；Hypertension高血压组；RUT(L)低剂量吴茱萸次碱组(1.5mg/kg/次)；RUT(H)高剂量吴茱萸次碱组(3mg/kg/次)；Cap辣椒素。数据表示为均数±标准误，n＝8-9。**P＜0.01vs Control；++P＜0.01vsHypertension；；##P＜0.01vs+RUT(H)。
具体实施方案第一部分 单次给予吴茱萸次碱的降压作用及其机制研究SD大鼠200-250g，左肾下极注射10％苯酚50μl(溶于生理盐水)诱导肾性高血压。动物血压升高达稳定后(约15天)，单次静脉注射不同剂量吴茱萸次碱，给药后记录平均动脉压的变化，待降压达到最大程度时采血测血浆CGRP。
实验分设(1)高血压组；(2)不同剂量吴茱萸次碱组(30，100，300μg/kg，iv)；(3)Capsazepine(1.5mg/kg，iv)+吴茱萸次碱(300μg/kg)组；(4)辣椒素(50mg/kg，sc)+吴茱萸次碱(300μg/kg)组；(5)吴茱萸次碱溶媒(20％二甲亚砜+80％乙醇)组；(6)辣椒素溶媒(10％乙醇+10％吐温-80+80％生理盐水)+吴茱萸次碱(300μg/kg)组。Capsazepine为选择性辣椒素受体阻断剂，辣椒素耗竭CGRP。
结果显示高血压大鼠各组间基础血压差异无显著性。单次静脉给予吴茱萸次碱能产生剂量依赖性的降压效应，同时可剂量依赖性地升高血浆CGRP浓度。辣椒素耗竭感觉神经递质CGRP及选择性辣椒素受体阻断剂capsazepine均能明显抑制吴茱萸次碱的降压作用及CGRP的释放(图1、2)。
第二部分 长期给予吴茱萸次碱的降压作用及其机制研究上述高血压模型，动物血压升高达稳定后(约15天)，然后随机分组(1)正常对照组；(2)高血压组；(3)两个剂量的吴茱萸次碱(3，6mg/kg/d，以0.5％羧甲基纤维素钠配成混悬液，分两次灌胃)组；(4)辣椒素(50mg/kg，sc)+吴茱萸次碱(6mg/kg)。吴茱萸次碱处理前一天给予辣椒素使感觉神经脱敏，然后灌胃给药12天，每天给药前测尾动脉收缩压。处死前，测平均动脉压、血浆CGRP浓度和背根节CGRP含量。
结果显示长期给予吴茱萸次碱产生剂量依赖性降压，给药后6～8天可达到稳定降压，同时升高血中及背根神经节中CGRP含量。使用辣椒素使感觉神经脱敏后，其降压作用与促CGRP合成和释放作用明显被抑制(图3，4，5)。
参考文献1 Kobayashi Y，Hoshikuma K，Nakano Y et al. The positive inotropic and chronotropic effects ofevodiamine and rutaecarpine，indoloquinazoline alkaloids isolated from the fruits of Evodiarutaecarpa，on the guinea-pig isolated right atriapossible involvement of vanilloid receptors.PlantaMed，2001；67(3)244-8。
2 Hu CP，Xiao L，Deng HW，Li YJ.The cardioprotection of rutaecarpine is mediated by endogenouscalcitonin related-gene peptide through activation of vanilloid receptors in guinea-pig hearts.PlantaMed，2002；68(8)705-93 Hu CP，Li NS，Xiao L et al.Involvement of capsaicin-sensitive sensory nerves in cardioprotection ofrutaecarpine in rats.Regul Pept，2003；in press4 Rang WQ，Du YH，Hu CP et al.Protective effects of calcitonin gene-related peptide-mediatedevodiamine on guinea-pig cardiac anaphylaxis.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，2003；367(3)306-115 Chiou WF，Liao JF，Chen CF.Comparative study of the vasodilatory effects of three quinazolinealkaloids isolated from Evodia rutaecarpa.J Nat Prod，1996；59(4)374-86 Chiou WF，Chou CJ，Shum AY，Chen CF.The vasorelaxant effect of evodiamine in rat isolatedmesenteric arteriesmode of action.Eur J Pharmacol，1992；215(2-3)277-837 Wang GJ，Shan J，Pang PK et al.The vasorelaxing action of rutaecarpinedirect paradoxical effects onintracellular calcium concentration of vascular smooth muscle and endothelial cells.J Pharmacol ExpTher，1996；276(3)1016-218 Chiou WF，Shum AY，Liao JF，Chen CF.Studies of the cellular mechanisms underlying thevasorelaxant effects of rutaecarpine，a bioactive component extracted from an herbal drug.JCardiovasc Pharmacol，1997；29(4)490-89 Wang GJ，Wu XC，Chen CF et al.Vasorelaxing action of rutaecarpineeffects of rutaecarpine oncalcium channel activities in vascular endothelial and smooth muscle cells.J Pharmacol Exp Ther，1999；289(3)1237-4410 Hu CP，Xiao L，Deng HW，Li YJ.The depressor and vasodilator effects of rutaecarpine are mediatedby calcitonin gene-related peptide.Planta Medica，2003；69(2)125-9
权利要求
1.吴茱萸次碱在制备降血压药物中的用途。
2.降血压的药物，含有吴茱萸次碱或和药学上可用的辅剂。
全文摘要
本发明涉及降低血压的药物。本发明克服了现有技术认识上的不足，发现Rut的另一个重要性质，因而可以将Rut作为降血压的药物。本发明提供的降血压药物，含有吴茱萸次碱或和药学上可用的辅剂。Rut口服有效；Rut不仅可以促进CGRP释放，而且可以促进其合成，故能发挥长期稳定降压作用。这样使Rut作为药物有效成分降血压成为现实。
文档编号A61P9/00GK1568998SQ200310110450
公开日2005年1月26日 申请日期2003年10月24日 优先权日2003年10月24日
发明者李元建, 胡长平, 胡高云, 邓盘月, 谭桂山 申请人:李元建, 胡长平, 胡高云, 邓盘月, 谭桂山