专利名称：虎眼万年青提取物及其制备方法、药物组合物以及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种虎眼万年青提取物，其制备方法，含有此提取物的药物组合物，以及这种提取物和含有此提取物的药物组合物的用途，尤其涉及在治疗胆囊炎及胆囊炎相关疾病中的用途。
背景技术：
虎眼万年青(Omithogalum Caudatum Ait.)原产非洲南部，为百合科观赏植物(《中国种子植物科属词典》)。在我国北方有盆栽，主产于吉林省长白朝鲜族自治县，为朝鲜传入，未见历代草本收载。
1992年日本科学家Sashida从桑德西万年青(Ornithogalumsaundersiae)中分离到具有强抗癌作用的虎眼万年青皂甙类化合物—虎眼万年青皂甙OSW-1。它对多种癌细胞的毒性比现有临床用药高100倍以上，对正常细胞却毒性很小。从此人们开始研究虎眼万年青的药用作用，但主要集中在它的抗癌作用上，例如本发明人的中国专利申请公开CN 1085439号、CN 1352986号和CN 1354011号。
研究表明虎眼万年青味甘、微寒，归肝、脾经。具有清热解毒，消坚散结的功能。本发明人发现，该植物内含虎眼万年青皂甙，见表1、生物碱、黄酮、多糖、多种氨基酸，见表2、大量微量元素，见表3。此外，还含有高级烷烃混合物、香豆素、苯甲酸、单糖、低聚糖等。
其中虎眼万年青皂甙、生物碱、黄酮既是抗肿瘤的药效成分，又有较强的抗炎作用；多糖组分能增强人体体液免疫和细胞免疫功能，与人参皂甙Rg1相近；微量元素中硒(Se)的含量达42.361μg/g，比人参要高，是黄芪的2.5倍(“虎眼万年青氨基酸及无机元素的含量测定”，《特产研究》1996第5期)，硒在药理学、生理学等方面具有极其重要的作用(“硒的药理学研究”，《中国医药报》2003.9.9)。
胆囊炎在临床上分为急性胆囊炎和慢性胆囊炎。急性胆囊炎是胆囊的急性炎症，80％伴有胆囊结石，多因胆管阻塞、创伤感染及胰液返流等因素，造成胆囊壁充血水肿、胆管扩张，严重时甚至化脓坏死，是临床常见的急腹症之一。慢性胆囊炎，多因胆囊运动功能障碍、感染创伤、胆固醇代谢失常以及胆囊壁血管病变，导致胆囊粘膜损害，造成粘膜扁平、萎缩、胆囊壁增厚且纤维化。上述病症都突出表现为右上腹疼痛，伴有恶心、呕吐、消化不良。在中医学中属于痛证—胁痛范畴。主要病因一为气积久郁，气滞血瘀，胆腑气阻络痹；二为湿热久蕴，交蒸肝胆，胆腑疏泄不利；三为胆汁久滞，热邪煎熬成石，胆道痹阻；四为湿热炽盛，胆汁滞而不通而致胁痛。
依据本发明的研究，本发明的虎眼万年青提取物以及含有此提取物的药物组合物可用于治疗胆囊炎及与胆囊炎相关的疾病。虎眼万年青提取物与虎眼万年青全草入药相比，用药量降低，吸收加快。到目前为止，还没有关于虎眼万年青提取物治疗胆囊炎及与胆囊炎相关疾病的报道。
表1虎眼万年青皂甙的结构式
表2虎眼万年青中氨基酸的含量(％)
表3虎眼万年青中微量元素的含量(％)
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有药用价值的虎眼万年青的提取物。
本发明的另一个目的在于提供从虎眼万年青中提取这种提取物的方法。
本发明进一步的目的是提供一种可以治疗胆囊炎及与胆囊炎相关疾病的含有此提取物的药物组合物。
本发明的另一目的是提供上述提取物和组合物在制备治疗胆囊炎及与胆囊炎相关疾病的药物方面的用途。
本发明的虎眼万年青提取物，其至少含有虎眼万年青皂甙1-44wt％生物碱1-44wt％黄酮 1-12.5wt％。
优选含有虎眼万年青皂甙37.5wt％生物碱50wt％黄酮 12.5wt％并进一步含有多糖、氨基酸、微量元素、低聚糖等。
本发明的虎眼万年青提取物的制备方法，依次包括A.用有机溶剂提取虎眼万年青，过滤沉淀，回收滤液中的有机溶剂，得到提取液。所述有机溶剂优选甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、丙酮、氯仿；更优选为相当于虎眼万年青1至10重量倍的乙醇，最优选为相当于新鲜虎眼万年青1至2重量倍的乙醇；B.对A步骤的滤渣用水提取，得到提取液。优选用相当于虎眼万年青的1至12重量倍的水煎煮1至4次；更优选用水煎煮两次，第一次加相当于虎眼万年青8重量倍的水，煎煮2小时，第二次加相当于虎眼万年青7重量倍的水，煎煮1小时。
C.合并A和B步骤得到的提取液；D.对C步骤的提取液进行浓缩。优选在20～90℃的温度下进行浓缩，更优选在80℃的温度下进行减压浓缩。
这种提取方法生物碱的收率可达到0.60％，高于现在使用的方法的收率0.47％(见本发明人的中国专利申请公开CN 1354011号)。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的上述虎眼万年青提取物，其他具有活血化瘀、舒肝利胆功能的中草药，还可以含有一种或多种药学上可接受的载体。
上文所述具有活血化瘀、舒肝利胆功能的中草药可以是活血化瘀、舒肝利胆类中药是白花蛇舌草、半枝莲、丹参、虎杖、温郁金、人参、北黄芪、东亚钳蝎、少棘巨蜈蚣或其结合。
上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如稀释剂、赋形剂如水等、填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、明胶等；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁等。另外还可以在组合物中加入其他辅剂如矫味剂等。
本发明的药物组合物可通过口服、经皮、静脉或肌肉的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂等，制成液体制剂如水和油混悬剂或其他液体制剂如糖浆，乳剂等，用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性混悬剂等。优选的形式是注射剂、片剂、胶囊剂。
本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。
发明人发现本发明的虎眼万年青提取物和含有此提取物的药物组合物可以用于制备治疗急、慢性胆囊炎及与胆囊炎相关疾病的药物，这种药物用量小、吸收快、疗效明显而确切。
本发明的虎眼万年青提取物和含有此提取物的药物组合物在动物实验中显示出明显的抗炎作用。它们比目前在慢性胆囊炎的保守治疗中药效最好的消炎利胆片相比抗炎作用更好。
本发明的虎眼万年青提取物和含有此提取物的药物组合物在动物实验中显示出优异的促胆汁分泌作用。它们比上述消炎利胆片效果显著。
本发明的虎眼万年青提取物和含有此提取物的药物组合物在动物实验中显示出良好的镇痛作用。它们比上述消炎利胆片效果显著。
本发明人还通过动物实验发现本发明的虎眼万年青提取物毒性甚低，服用安全。
对应制剂的收率折算，本发明的含有虎眼万年青提取物的药物组合物的口服、注射剂量为0.10-0.15g生药/kg体重/天，和全草入药(相比用药量为其1/5或更少。
虎眼万年青提取物作为一种天然药物成分，对胆囊炎及与胆囊炎相关疾病具有良好的疗效，制备成药物组合物，具有毒性小、作用强、安全有效等优点，为胆囊炎及与胆囊炎相关疾病的治疗开辟新的途径，具有重要的社会价值、经济价值和广阔的应用前景。
具体实施例方式
以下通过实施例，对本发明做进一步说明。实施例仅用来说明本发明的实施方法和效果，并不以任何形式限制本发明。
实施例1用浸膏提取法提取虎眼万年青(1)将本发明药物以生药量(水分14％，下同)8倍的80％乙醇回流2小时，滤过；(2)药渣加生药量8倍的30％乙醇回流2小时，滤过；(3)合并两次滤液，减压回收乙醇后备用；(4)药渣加生药量8倍水煎煮2小时，滤过；(5)药渣再加入生药量7倍水煎煮1小时，滤过，弃去药渣。
(6)合并两次水提滤液与回收乙醇后的药液，减压浓缩至相对密度约1.10(80℃)时，精滤此浓缩液。
如此得到的提取物中含有虎眼万年青皂甙0.45％生物碱0.6％黄酮 0.15％多糖 68％其余为氨基酸、微量元素、蛋白质、高级烷烃、低聚糖等。
实施例2单组分分离提取法提取虎眼万年青(1)弱生物碱提取取干燥恒重的本品60.0g称定，粉成60目，以85％乙醇回流2小时(200ml×3)，滤过，合并滤液，回收乙醇至干。用50ml水溶解，乙醚萃取(30ml×2)，弃去乙醚层，水层用氯仿萃取(30ml×5)，回收氯仿至干，得弱生物碱提取物约230mg。
(2)强生物碱提取取干燥恒重的本品60.0g称定，粉成60目，以0.5％盐酸—乙醇回流2小时(300ml×2)，滤过，合并滤液，回收乙醇至干，用100ml水溶解，以氯仿萃取(50ml×3)。水层调节pH达到11后，再用氯仿萃取(50ml×5)，回收氯仿至干得强生物碱约130mg。
(3)总虎眼万年青皂甙提取按(2)法，第一次氯仿萃取所得水层，用正丁醇萃取(50ml×3)，减压回收正丁醇至干，得总虎眼万年青皂甙约300mg。
(4)多糖组分及黄酮提取取本品(水分14％)，以生药量10、8、7倍水煎煮，时间依次为3、2、1小时，滤过，合并3次滤液，经醇沉淀得多糖组分与蛋白质混合物，再除去蛋白质，得多糖组分液，收率(以干膏汁)约68％，另含黄酮约占0.18％。
如此得到的提取物中含有虎眼万年青皂甙 0.43％生物碱 0.57％黄酮0.14％其余为氨基酸、微量元素、高级烷烃混合物、低聚糖等。
上述各提取物分别以柱析、超滤、丙酮萃取等精制后，配以载体可制成针剂。
实施例3含有虎眼万年青提取物的胶囊剂的制备方法原料虎眼万年青334g、白花蛇舌草150g、半枝莲150g、丹参75g、虎杖67g、温郁金75g、人参75g、北黄芪150g、东亚钳蝎30g、少棘巨蜈蚣30g计十味组方。
制备方法取虎眼万年青，用实施例1的方法得到提取物，经喷雾干燥或冷冻干燥制成细粉备用；东亚钳蝎、少棘巨蜈蚣三味粉碎成细粉备用；温郁金酌予碎断，置挥发油提取器中提取挥发油，收集挥发油另器收集备用；提取挥发油后的温郁金与白花蛇舌草等六味加水8、8、6倍量煎煮3次，依次为3、2、1小时。滤过，合并3次滤液，浓缩至相对密度约1.12-1.18(80℃)，与上述细粉混匀，制粒，干燥，整粒，喷入温郁金挥发油，装入胶囊，即得本品。每粒装0.35-0.4g。
实施例4虎眼万年青提取物对大鼠角叉菜胶足肿胀抗炎实验1.实验材料实验动物SD大鼠150-220g，购于中国人民解放军208医院，合格证号10-1010。
实验药物实施例1制得的虎眼万年青提取物，进一步制成细粉，含8.5％的水，阳性对照药物是消炎利胆片，广东怡康制药有限公司生产，批号040306规格0.3g/片。
2.实验方法取SD大鼠50只，随机分组，分别为空白对照组、阳性药对照组(1.13g/kg)、虎眼万年青提取物高剂量组(2.40g/kg)、虎眼万年青提取物中剂量组(1.20g/kg)、虎眼万年青提取物低剂量组(0.60g/kg)。连续灌胃给药5天，每天1次，于末次给药1小时后，于每只鼠右后足腱膜下注射0.05％角叉菜胶0.15ml。预先测量每只鼠右后足的周长，于注射0.05％角叉菜胶后1、2、3、4、6小时测量其足肿胀值，并以其与正常值的差作为肿胀程度，经t检查，结果见表4表4对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响X±SD
注与对照组比较*p＜0.05**p＜0.01以下同。
由表4可以看出虎眼万年青提取物具有明显的抗炎作用，并能持续4小时以上。
实施例5虎眼万年青胶囊对大鼠角叉菜胶足肿胀抗炎实验1、实验材料实验动物SD大鼠150-220g，取自12中国人民解放军208医院，合格证号10-1010。
实验药物虎眼万年青胶囊由实施例3制得。阳性对照药消炎利胆片，广东怡康制药有限公司生产，批号040306规格0.3g/片。
2、方法及结果取SD大鼠50只，随机分组，分为空白对照组、阳性药对照组(1.20/kg)、虎眼万年青胶囊高剂量组(1.8g/kg)、虎眼万年青胶囊中剂量组(0.9g/kg)、虎眼万年青胶囊低剂量组(0.45g/kg)。连续灌胃给药5天，每天1次。于末次给药1小时后，于每只鼠右后足腱膜下注射0.05％角叉菜胶0.15ml。预先测量每只鼠右后足的周长，于注入0.05％角叉菜胶后1、2、3、4、6小时测量其足肿胀值，并以其与正常值的差作为肿胀程度，经t检查，结果见表5表5对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响X±SD
由表5可知虎眼万年青胶囊具有明显的抗炎作用，并能持续4小时以上。
实施例6虎眼万年青提取物对大鼠胆汁分泌的影响1.实验材料同实施例4。
2.实验方法取大鼠50只，随机分组，分为空白对照组，阳性药对照组(1.13g/kg)，虎眼万年青提取物高剂量组(2.40g/kg)，虎眼万年青提取物中剂量组(1.20g/kg)、虎眼万年青提取物低剂量组(0.60g/kg)。连续灌胃给药5天，每天一次。实验前将大鼠饥饿12小时，腹腔注射乌拉坦(1g/kg)麻醉，固定在手术台上，胆总管用直径为0.6mm的聚乙烯管插入，引流胆汁出腹腔，用10ml的离心管收集胆汁。术后用止血钳夹闭腹壁创口，并用盐水纱布覆盖。待稳定15min后，先收集1小时胆汁，然后各组大鼠分别由十二指肠注入不同剂量的药物，再分别收集给药后不同时间的胆汁，结果见表6表6对大鼠胆汁分泌的影响X±SD
表6结果表明虎眼万年青提取物可明显地促进胆汁流量。
实施例7虎眼万年青胶囊对大鼠胆汁分泌的影响1、实验材料同实施例5。
2、实验方法取大鼠50只，随机分组，分为空白对照组、阳性药对照组(1.20g/kg)、虎眼万年青胶囊高剂量组(1.8g/kg)、虎眼万年青胶囊中剂量组(0.9g/kg)、虎眼万年青胶囊低剂量组(0.45g/kg)。连续灌胃给药5天，每天1次。实验前将大鼠饥饿12小时，腹腔注射乌拉坦(1g/kg)麻醉，固定在手术台上，胆总管用直径为0.6mm的聚乙烯管插入，引流胆汁出腹腔，用10ml的离心管收集胆汁。术后用止血钳夹闭腹壁创口，并用盐水纱布覆盖。待稳定15-20min后，先收集1小时胆汁，然后各组大鼠分别由十二指肠注入不同剂量的药物，再分别收集给药后不同时间的胆汁，结果见表7。
表7对大鼠胆汁分泌的影响X±SD
表7结果表明虎眼万年青胶囊可明显地促进胆汁流量。
实施例8虎眼万年青提取物的镇痛作用1.实验材料实验动物昆明种小鼠18-22g(购于长春生物制品所，合格证号SCXK-2003-0008)实验药物同实施例4。
2.实验方法(1).对醋酸所致小鼠扭体反应的影响取小鼠50只，随机分组，分别设为对照组、阳性药对照组(1.40g/kg)、虎眼万年青提取物高剂量组(3.50g/kg)、虎眼万年青提取物中剂量组(1.75g/kg)、虎眼万年青提取物低剂组(0.90g/kg)。连续灌胃给药5天。末次给药1小时后腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只，记录15min内小鼠扭体次数。其结果各组分别是为33.2±15.6、20.4±8.6(P＜0.05)、15.2±7.2(P＜0.01)、16.8±6.6(P＜0.01)、20.8±9.7(P＜0.05)。
上述结果表明了虎眼万年青提取物具有较明显的镇痛作用。
(2)对热板所致小鼠疼痛影响取小鼠50只，分组及给药方法均同上述方法(1)。末次给药1小时后，用热板仪，测定给药后1、3、5小时小鼠在1min后舔后足的次数，测前预选痛阈在10-60min内的小鼠，结果见表8表8对热板所致小鼠疼痛的影响X±SD
由表8可见虎眼万年青提取物可明显降低热板所致小鼠舔后足的次数，提示本发明具有明显的镇痛作用。
实施例9虎眼万年青胶囊的镇痛作用。
1、实验材料实验动物昆明种小鼠18-22g，取自长春生物制品所，合格证号SCXK-2002-0001。
实验药物同实施例5。
2、实验方法(1)对醋酸所致小鼠扭体反应的影响取小鼠50只，随机分组，分为空白对照组、阳性药对照组(1.70g/kg)、虎眼万年青胶囊高剂量组(2.6g/kg)、虎眼万年青胶囊中剂量组(1.3g/kg)、虎眼万年青胶囊低剂量组(0.65g/kg)。连续给药5天。末次给药1小时后，腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只，记录15min内小鼠扭体次数。其结果各组分别为33.3±15.7、20.8±8.7(P＜0.05)、14.8±6.1(P＜0.01)、16.8±6.5(P＜0.01)、19.8±9.7(P＜0.05)。
上述结果表明了虎眼万年青胶囊具有明显的镇痛作用。
(2)对热板所致小鼠疼痛影响取小鼠50只，分组及给药方法均同上述方法(1)。末次给药1小时后，用热板仪，测定给药后1、3、5小时小鼠在1min后舔后足的次数，测试前预选痛阈在10-60min内的小鼠，结果见表9。
表9对热板所致小鼠疼痛的影响X±SD
由表9可见虎眼万年青胶囊可明显降低热板所致小鼠舔后足的次数，提示本发明具有明显的镇痛作用。
实施例10虎眼万年青提取物毒性试验1、实验材料实验动物昆明种小鼠18-22g(购于长春生物制品所，合格证号SCXK-2002-0003)实验药物实施例4制得的虎眼万年青提取物细粉。
2、实验方法取小鼠20只，于禁食24小时后，将虎眼万年青提取物细粉配制成30％的悬浮液，按0.2ml/10g体重剂量，于24小时内给药四次(1、2、3次间隔4小时，3-4次间隔10小时)，连续灌胃给药七日，观察药物的毒性反应及受试动物的死亡数。
3、实验结果小鼠服药后，由于给药次数增加，仅表现安静状态。观察七日，无一死亡。测得小鼠灌胃给药剂量达24.0g/kg体重时，相当于成人日服剂量0.15g/kg体重(人体重按60kg计)的160倍。因限于给药的浓度和体积无法再增加，故末求出LD50。
上述试验说明了本发明的药物毒性甚低，服用安全。
权利要求
1.一种虎眼万年青提取物，其至少含有虎眼万年青皂甙1-44wt％生物碱1-44wt％黄酮 1-12.5wt％。
2.根据权利要求1所述的虎眼万年青提取物，其特征在于至少含有虎眼万年青皂甙37.5wt％生物碱50wt％黄酮 12.5wt％。
3.根据权利要求1或2中所述的虎眼万年青提取物，其特征在于还可进一步含有多糖、氨基酸、微量元素、低聚糖等中的一种或几种。
4.权利要求1至3中任一项所述的虎眼万年青提取物在制备治疗急、慢性胆囊炎及与胆囊炎相关疾病的药物中的用途。
5.一种提取权利要求1至3中任一项所述的虎眼万年青提取物的方法，依次包括A.用有机溶剂提取虎眼万年青，过滤沉淀，除去有机溶剂，得到提取液；B.对A步骤的滤渣用水提取，得到提取液；C.合并A和B步骤得到的提取液；D.对C步骤的提取液进行浓缩。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、丙酮、氯仿中的一种或几种。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述有机溶剂为相当于虎眼万年青1至10重量倍的乙醇。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述乙醇的用量为相当于新鲜虎眼万年青1至2重量倍。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述水提取为用相当于虎眼万年青的1至12重量倍的水煎煮1至4次。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于用水煎煮两次，第一次加相当于虎眼万年青8重量倍的水，煎煮2小时，第二次加相当于虎眼万年青7重量倍的水，煎煮1小时。
11.根据权利要求5所述的方法，其特征在于得到所有的提取液后，在20～90℃的温度下进行浓缩。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于浓缩是在80℃的温度下进行的减压浓缩。
13.根据权利要求5至12中任一项所述的方法，其特征在于可进一步包含除去多糖的步骤。
14.一种可治疗急、慢性胆囊炎及与胆囊炎相关疾病的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1至3中任一项所述的虎眼万年青提取物、和药学上可接受的载体。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其特征在于所述药物是以注射剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液、悬浮剂、乳剂的形式使用。
16.根据权利要求14所述的药物组合物，其特征在于还可以含有活血化瘀、舒肝利胆类中药。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其特征在于所述活血化瘀、舒肝利胆类中药是白花蛇舌草、半枝莲、丹参、虎杖、温郁金、人参、北黄芪、东亚钳蝎、少棘巨蜈蚣或其结合。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的给药途径包括口服、经皮、静脉或肌肉。
19.根据权利要求14至18中任一项所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物的口服、注射剂量对应制剂的收率以0.10-0.15g虎眼万年青/Kg体重/天为标准计算。
全文摘要
本发明公开了一种虎眼万年青提取物及其制备方法，含有治疗有效量的此提取物的药物组合物，以及它们在治疗急、慢性胆囊炎及胆囊炎相关疾病中的用途。这种药物组合物具有毒性小、作用强、安全有效等优点，为胆囊炎及胆囊炎相关疾病的治疗开辟新的途径，具有重要的社会价值、经济价值和广阔的应用前景。
文档编号A61P1/16GK1672728SQ20041007413
公开日2005年9月28日 申请日期2004年8月31日 优先权日2004年8月31日
发明者吕新波, 韩忠旭 申请人:吕新波, 韩忠旭