专利名称：用于传送肽yy和pyy激动剂的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于将肽YY(PYY)和PYY激动剂传送至靶点的组合物。这些组合物包括良好适合于与口服施用于动物的PYY和PYY激动剂形成非共价混合物的化合物。本发明还公开了制备、给药和治疗的方法。
背景技术：
目前的抗肥胖症药物的功效有限并有多种副作用。Crowley，V.E.，Yeo，G.S.& O′Rahilly，S.，Nat.Rev.Drug Discov 1，276-86(2002).随着肥胖症在世界范围内变得流行，迫切需要在该领域发展合适的治疗。近年来，在调节食欲、体能消耗和脂肪量累积中涉及的激素和神经肽已经作为有潜力的抗肥胖症药物出现。McMinn，J.E.，Baskin，D.G.& Schwartz，M.W.，Obes Rev 137-46(2000)，Drazen，D.L.& Woods，S.C.，Curr Opin ClinNutr Metab Care 6621-629(2003)。然而，目前这些肽需要经胃肠道外给药。每日注射以控制肥胖的前景不很乐观，并且可能限制这些药物的应用。
一种这样的肽，PYY，餐后由末端胃肠道的内分泌细胞分泌并作用于下丘脑信号饱食中枢。Batterham，R.L.等人，Nature 418650-654(2002).最近的研究表明肥胖患者禁食和餐后PYY含量较低，这可以解释他们食欲旺盛和食物消耗多的原因。当静脉内给药时，它抑制瘦弱者和肥胖患者的食欲和食物摄入。Batterham，R.L.等人，N Engl J Med 349941-948(2003)。源自胰腺肽(PP)家族的其它肽如肽YY片段(例如PYY[3-36])和PYY激动剂(包括不属于PP家族的肽)也能抑制食欲。然而，由于在胃肠道吸收少且降解快，其口服活性可以忽略不计。
在PYY和PYY激动剂传送至动物的过程中，身体赋予了各种屏障。物理障碍的实例有皮肤、脂质双层和各种器官膜，它们对某些活性剂而言是相对不可渗透的，但在到达靶点如循环系统之前必须穿过它们。化学屏障包括但不限于胃肠(GI)道的pH变化和降解酶。
这些屏障在口服传送系统的设计中特别重要。要不是因为这些生物、化学和物理屏障，PYY和PYY激动剂的口服传送将是动物给药途径的选择。这些治疗剂在胃肠道中可能由于酸解、酶等导致迅速失活或被破坏。此外，大分子药物的大小和结构可能阻止吸收。结果，蛋白质和肽类药物的口服给药在某种程度上由于它们的吸收少和降解快而具有挑战性。
早期口服施用易被破坏的药物治疗剂的方法依赖于共同给予辅剂(例如，间苯二酚和非离子型表面活性剂如聚氧乙烯油基醚和正十六烷基聚乙烯醚)以人为地增加肠壁的通透性、以及共同给予酶抑制剂以抑制酶促降解。脂质体作为胰岛素和肝素的给药系统也已经有记载。然而，这类给药系统的广泛应用受到阻碍，部分因为(1)该系统需要有毒量的辅剂或抑制剂；(2)不能获得适宜低分子量的被传送物，即活性剂；(3)该系统显示出稳定性差和贮存期限不够长；(4)该系统难以制备；(5)该系统不能保护活性剂(被传送物)；(6)该系统不利地改变活性剂；或(7)该系统不允许或促进活性剂的吸收。
新近，类蛋白微球体已经用于传送药物。例如参见美国专利5,401,516、5,443,841和Re.35,862。此外，某些改性氨基酸已经用于传送药物。例如参见美国专利5,629,020、5,643,957、5,766,633、5,776,888和5,866,536。
根据Batterham等人，Nature 418650-654(2002)(引入本文作为参考)的描述，肽YY[3-36]系统可以为肥胖症的治疗提供治疗靶点。
国际申请WO 02/47712和美国专利2002/0141985公开了用肽YY和肽YY激动剂如肽YY[3-36]治疗肥胖症和糖尿病的方法。
然而，还需要有简单、廉价的传送肽YY和PYY激动剂的递药系统。
需要有非侵入性地传送肽YY[3-36]的途径以确保患者的依从性，优选口服途径。
发明概述本发明提供了包含(a)至少一种传送剂(delivery agent)化合物和(b)肽YY(PYY)、PYY激动剂或其混合物的组合物(例如药物组合物)。优选该组合物包含治疗有效量的肽YY和/或PYY激动剂以及传送剂化合物。与没有传送剂化合物的给药相比，本发明的组合物便于PYY和/或PYY激动剂的传送，并提高了其生物利用度。PPY和PYY激动剂具有与降低营养利用度、包括减少食物摄入的药物相同的活性。
优选的传送剂化合物包括但不限于N-(8-[2-羟基苯甲酰基]氨基)辛酸和N-(10-[2-羟基苯甲酰基]氨基)癸酸以及它们的盐、溶剂化物和水合物。在优选的实施方案中，其盐为钠盐，如一钠盐。
在一个优选的实施方案中，该组合物包括肽YY、PYY激动剂或其混合物以及至少一种具有下式结构或其盐的传送剂， 式A其中Ar为苯基或萘基；Ar任选地被-OH、卤素、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4卤代烷氧基中的一个或多个基团取代；R7选自C4-C20烷基、C4-C20链烯基、苯基、萘基、(C1-C10烷基)苯基、(C1-C10链烯基)苯基、(C1-C10烷基)萘基、(C1-C10链烯基)萘基、苯基(C1-C10烷基)、苯基(C1-C10链烯基)、萘基(C1-C10烷基)或萘基(C1-C10链烯基)；
R8选自氢、C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基和C1-C4卤代烷氧基；R7任选地被C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、-OH、-SH、-CO2R9或它们的任意组合取代；R9是氢、C1-C4烷基或C2-C4链烯基；R7任选地被氧、氮、硫或它们的任意组合间隔；条件是该化合物在酸基团的α位上不被氨基取代。
在另一优选的实施方案中，该组合物包含肽YY、PYY激动剂或其混合物以及至少一种具有下式结构或其盐的传送剂 式B其中，R1、R2、R3和R4独立地为H、-OH、卤素、C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基、-C(O)R8、-NO2、-NR9R10或-N+R9R10R11(R12)-；R5为H、-OH、-NO2、卤素、-CF3、-NR14R15、-N+R14R15R16(R13)-、酰氨基、C1-C12烷氧基、C1-C12烷基、C2-C12链烯基、氨基甲酸酯基、碳酸酯基、脲基或-C(O)R18；R5任选地被卤素、-OH、-SH或-COOH取代；R5任选地被O、N、S或-C(O)-间隔；R6为C1-C12亚烷基、C2-C12亚烯基或亚芳基；R6任选地被C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基、-OH、-SH、卤素、-NH2或-CO2R8取代；R6任选地被O或N间隔；R7为键或亚芳基；
R7任选地被-OH、卤素、-C(O)CH3、-NR10R11或-N+R10R11R12(R13)-取代；R8每次出现时独立地为H、C1-C4烷基、C2-C4链烯基或-NH2；R9、R10、R11和R12独立地为H或C1-C10烷基；R13为卤离子、氢氧根、硫酸根、四氟硼酸根或磷酸根；R14、R15和R16独立地为H、C1-C10烷基、被-COOH取代的C1-C10烷基、C2-C12链烯基、被-COOH取代的C2-C12链烯基或-C(O)R17；R17为-OH、C1-C10烷基或C2-C12链烯基；且R18为H、C1-C6烷基、-OH、-NR14R15或N+R14R15R16(R13)-。
任选地，当R1、R2、R3、R4和R5为H且R7为键时，R6不是C1-C6、C9或C10烷基。
任选地，当R1、R2、R3和R4为H，R5为-OH且R7为键时，R6不是C1-C3烷基。
任选地，当R1、R2、R3和R4中至少一个不是H，R5为-OH，且R7为键时，R6不是C1-C4烷基。
任选地，当R1、R2和R3为是H，R4为-OCH3，R5为-C(O)CH3，且R6为键时，R7不是C3烷基。
任选地，当R1、R2、R4和R5为H，R3为-OH，且R7为键时，R6不是甲基。
在另一实施方案中，该组合物包含肽YY、PYY激动剂或其混合物以及至少一种具有下式结构或其盐的传送剂， 化合物C其中R1、R2、R3、R4和R5独立地为H、-CN、-OH、-OCH3或卤素，且R1、R2、R3、R4和R5中至少一个为-CN；且R6为C1-C12直链或支链亚烷基、亚烯基、亚芳基、烷基(亚芳基)或芳基(亚烷基)。
按照一个实施方案，当R1为-CN，R4为H或-CN，且R2、R3和R5为H时，R6不是亚甲基((CH2)1)。
本发明还提供了包含本发明组合物的剂量单位形式(例如，口服剂量单位形式)。剂量单位形式可以是液体或固体的形式，如片剂、胶囊或颗粒，包括粉末或囊剂。
另一实施方案是给需要其的动物施用肽YY、PYY激动剂或其混合物的方法，该方法通过将本发明的组合物或剂量单位形式施用于动物来进行。优选的给药途径是口服给药。
另一实施方案是给需要其的动物施用肽YY、PYY激动剂或其混合物的方法，该方法通过将本发明的组合物或剂量单位形式以最小化或阻止肽YY和/或PYY激动剂的抗体形成的方式施用于动物来进行。
另一实施方案是使需要其的动物(如人)减轻体重的方法，该方法通过将有效量的本发明的组合物或剂量单位形式施用于动物来进行。换言之，施用有效量的便于PYY或PYY激动剂传送的传送剂化合物和有效量(例如治疗有效量)的PYY或PYY激动剂。
另一实施方案是治疗需要其的动物(如人)的肥胖症的方法，该方法通过将有效量的本发明的组合物施用于动物来进行。
另一实施方案是在动物(如人)中治疗可通过降低营养利用度来缓和的病症或紊乱的方法，该方法通过给动物施用治疗有效量的本发明的组合物或剂量单位形式来进行。这类病症和紊乱包括但不局限于高血压、血脂异常症、心血管疾病的危险、进食障碍、胰岛素抵抗、肥胖症和糖尿病。
另一实施方案是改善动物(如人)的脂质性质的方法，该方法通过给动物施用有效量的本发明的组合物或剂量单位形式来进行。
另一实施方案是制备本发明组合物的方法，该方法通过将至少一种传送剂化合物与肽YY与PYY激动剂中的至少一种混合来进行。
附图简述
图1是按照实施例1中描述的步骤有和无传送剂SNAC的情况下口服施用PYY[3-36]后PYY[3-36]血药浓度(pg/ml±标准差)-时间图。
图2是按照实施例1中描述的步骤在有和无传送剂SNAD的情况下口服施用PYY[3-36]后PYY[3-36]血药浓度(pg/ml±标准差)-时间图。
图3是按照实施例2中描述的步骤在无传送剂化合物的情况下腹膜内注射PYY[3-36]后PYY[3-36]血药浓度(pg/ml±标准差)-时间图。
图4是按照实施例3中描述的步骤对大鼠口服施用PYY[3-36]和多种传送剂、仅施用传送剂3和施用PYY与甘露醇后PYY[3-36]血药浓度(pg/ml±标准差)-时间图。
图5是按照实施例4中描述的步骤在将PYY[3-36]与传送剂1一起口服施用于非人灵长类动物之后PYY[3-36]血药浓度(pg/ml±标准差)-时间图。
图6是按照实施例3c中描述的步骤在口服施用PYY[3-36]与SNAD的组合后PYY[3-36]血药浓度-时间图。
图7是在按照实施例5中描述的步骤在用PYY[3-36]与SNAD的组合处理雄性Sprague Dawley大鼠的4天期间与安慰剂相比的食物摄入图。
图8a是在按照实施例6中描述的步骤在用PYY[3-36]-与SNAD的组合处理雄性Sprague Dawley大鼠的7天期间与安慰剂相比的累计体重增加图。
图8b是在按照实施例6中描述的步骤在用PYY[3-36]与SNAD的组合处理雄性Sprague Dawley大鼠的7天期间与安慰剂相比的累计食物摄入和体重增加图。
发明详述定义如本文所用的术语“水合物”包括但不限于(i)含有以分子形式结合的水的物质和(ii)含一个或多个结晶水分子的晶体物质或含游离水的晶体物质。
如本文所用的术语“溶剂化物”包括但不限于溶剂的分子或离子与传送剂化合物或其盐或其水合物或溶剂化物的分子或离子形成的分子或离子络合物。
术语“传送剂”指本文中公开的任何传送剂化合物。
术语“SNAC”指N-(8-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)辛酸一钠盐。
术语“SNAD”指N-(10-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)癸酸一钠盐。术语“SNAD二钠盐”指N-(10-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)癸酸二钠盐。
“有效量的PYY、PYY激动剂或其混合物”是PYY、PYY激动剂或其混合物在施用于活生物体一段时间后有效治疗或预防病症的量，例如在期望的给药时间内提供了治疗效果。
“有效量的传送剂”是传送剂允许和/或便于经任何途径(如本申请中详述的那些，包括但不限于口服(例如穿过胃肠道的生物膜)、经鼻、经肺、皮肤、口腔、阴道和/或眼途径)施用的预期量的PYY或PYY激动剂被吸收的量。
如本文所用的术语“AUC”指血浆浓度-时间曲线下面积，如通过梯形法在整个给药期间、例如24小时期间计算。
除非另有说明，术语“平均”当放在药代动力学数值(例如平均峰值)之前时表示该药代动力学数值的算术平均值。
如本文和所附的权利要求所用的单数形式“一个”和“一种”包括所涉及对象的复数，除非上下文另外清楚地标明。因而，例如，“一个分子”包括一个或多个该分子，“一种试剂”包括一种或多种这类不同的试剂，“一种抗体”包括一种或多种这类不同的抗体，“方法”包括本领域普通技术人员已知的可以变通为或代替本文中所述方法的同等的步骤和方法。
术语“约”通常指在给定值或范围的10％、优选5％、更优选1％之内变化。
如本文所用的术语“烷基”和“链烯基”分别包括直链和支链的烷基和链烯基取代基。
如本文所用的术语“患者”指哺乳动物，且优选人。
短语“可药用的”指当施用于哺乳动物时是生理可耐受的并且通常不产生过敏或类似不良反应如胃部不适、眩晕等的添加剂或组合物。
PYY和PYY激动剂“肽YY”或“PYY”指由任何物种获得或衍生的肽YY多肽。因此，术语“PYY”包括人的全长、36氨基酸肽，如国际申请WO 02/47712(它是美国专利公开号2002/0141985相应的PCT申请，该文献引入本文作为参考)和Tatemoto，Proc Natl Acad Sci U.S.A.792514-8，1982中SEQ IDNO2所示，以及包括PYY不同种属的变体，例如包括鼠科、仓鼠、鸡、牛、大鼠和狗的PYY。“PYY激动剂”指引起PYY降低营养利用度作用的任何化合物，例如这样的化合物(1)在WO 02/47712和美国专利公开号2002/0141985的实施例1、2、5或6中描述的食物摄入、胃排空、胰液分泌或体重减轻的检测中具有活性的化合物，和(2)在Y受体检测(WO02/47712和美国专利公开号2002/0141985的实施例10)中或在竞争性结合检测中特异性结合源自富含Y受体的某些组织(例如包括最后区，WO02/47712和美国专利公开号2002/0141985的实施例9)的标记PYY或PYY[3-36]，其中所述PYY激动剂不是胰多肽。优选PYY激动剂在诸如此类的检测中亲和力大于约1μM，更优选亲和力大于约1至约5nM。
这类激动剂可包括含PYY功能结构域的多肽、PYY的活性片段或化学的或小分子。PYY激动剂可以是肽或非肽化合物，包括“PYY激动剂类似物”，PYY激动剂类似物指任何在结构上与PYY相似的具有PYY活性的化合物，这种活性通常由于与PYY受体或PYY本身与之相互作用产生生物响应的其它受体结合或者通过其它方式直接或间接与之相互作用。这类化合物包括PYY衍生物、PYY片段、含多于36个氨基酸的扩展PYY分子、含少于36个氨基酸的截短PYY分子以及含一种或多种不同氨基酸的取代PYY分子或以上所述的任何组合。这类化合物还可以通过如聚乙二醇化、酰胺化、糖基化、酰化、硫酸化、磷酸化、乙酰化和环化的方法进行修饰。
一种这样的PYY激动剂类似物是PYY[3-36]，被鉴定为WO 02/47712和美国专利公开号2002/0141985中的SEQ ID NO3；Eberlein Eysselein等，Peptides 10797-803(1989)；和Grandy，Schimiczek等，Regul Pept 51151-9(1994)。括弧内有数目的多肽指具有全长肽在括弧内的氨基酸位置上的序列的截短多肽。因此，PYY[3-36]具有与PYY的3位至36位氨基酸相同的序列。PYY[3-36]含大约40％的人及犬的肠提取物的总肽YY-样免疫反应性和约36％的禁食状态下总血浆肽YY免疫反应性至略大于50％(餐后)。显然它是肽YY的二肽基肽酶-IV(DPP4)裂解产物。据报道肽YY[3-36]是Y2和Y5受体的选择性配体，这两种受体在优选N-末端截短(即C端片段)神经肽Y类似物中显示出药理学的独特性。PYY激动剂可能以较高或较低的亲和力与PYY受体结合，这表示有较长或较短的体内或体外半衰期，或者比天然PYY作用更大或更小。
其它适宜的PYY激动剂包括国际申请公开号WO 98/20885中描述的PYY激动剂，该文献引入本文作为参考。
“可通过减少热量(或营养)利用度来缓和的病症或紊乱”指动物由相对高的营养利用度所引起、并发或恶化的任何病症或紊乱，或者可通过降低营养利用度、例如通过减少食物摄入来缓和的任何病症或紊乱。这类病症或紊乱包括但不限于肥胖症、糖尿病且包括2型糖尿病、进食障碍以及胰岛素抵抗综合症。
一方面，本发明提供了治疗肥胖或体重过重动物的肥胖症的方法，该方法通过施用治疗有效量的PYY、PYY激动剂或其混合物以及至少一种传送剂化合物。尽管“肥胖症”通常被定义为体重指数超过30，但对本发明公开内容的目的而言，需要或希望减轻体重的任何受治疗者、包括体重指数低于30的受治疗者都包括“肥胖”范围内。患有胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受或任何形式糖尿病(例如1型、2型或妊娠期糖尿病)的患者都可从本方法受益。
在其它方面，本发明使减少食物摄入、治疗糖尿病和改善脂质性质(包括降低LDL胆固醇和甘油三酯水平和/或改变HDL胆固醇水平)的方法具有特色，该方法包括给受治疗者施用治疗有效量的PYY、PYY激动剂或其混合物以及至少一种传送剂化合物。在优选的实施方案中，本发明的方法用于治疗可通过减少需要其的受治疗者的营养利用度来缓和的病症或紊乱，包括给所述受治疗者施用治疗有效量的PYY、PYY激动剂或其混合物以及至少一种传送剂化合物。这类病症和紊乱包括但不局限于高血压、血脂异常症、心血管疾病、进食障碍、胰岛素抵抗、肥胖症以及任何类型的糖尿病。
本发明的方法中，优选的PYY激动剂是在WO 02/47712和美国专利公开号2002/0141985中描述的检测之一中的作用高于NPY在相同检测中作用的PYY激动剂。
在一个实施方案中，对于本文中描述的所有病症和紊乱的治疗，优选的PYY激动剂是PYY[3-36]，以单一剂量或分份剂量每天施用(外周)约1pg至约5mg。或者，PYY[3-36]可以根据受治疗者总体重以单一剂量或分份剂量按每天约0.01μg/kg至约500μg/kg、约0.05μg/kg至约250μg/kg或低于约50μg/kg的量给药。当然在这些范围内的剂量将随各种激动剂的效能而变化，并且很容易由本领域技术人员确定。
在本发明的方法中，PYY和PYY激动剂与传送剂化合物可以单独或与一种或多种显示出长期或短期降低营养利用度作用的其它化合物和组合物一起给药，这些化合物和组合物包括但不限于包括胰岛淀粉样多肽或胰岛淀粉样多肽激动剂、缩胆囊肽(CCK)或CCK激动剂、瘦蛋白(OB蛋白))瘦蛋白激动剂、exendin或exendin激动剂或者GLP-1或GLP-1激动剂的其它化合物和组合物。例如，适宜的胰岛淀粉样多肽激动剂包括[25，28，29Pro-]-人胰岛淀粉样多肽(又名“普兰林肽”，在美国专利号5,686,511和5,998,367中有描述)、降钙素(例如鲑降钙素)，包括美国专利号5,739,106中描述的那些，该文献引入本文作为参考。所用的CCK优选CCK八肽(CCK-8)。瘦蛋白例如在Pelleymounter，C.等人，Science 269540-543(1995)、Halaas，G.等，Science 269543-6(1995)和Campfield，S.等，Science 269546-549(1995)中有讨论。适宜的CCK激动剂包括美国专利号5,739,106中描述的那些，该文献引入本文作为参考。适宜的exendin包括exendin-3和exendin-4，exendin激动剂化合物包括例如PCT申请公开WO 99/07404、WO 99/25727和WO 99/25728中描述的那些，所有这些文献均引入本文作为参考。按照一个实施方案，本发明的组合物包含至少一种传送剂化合物、PYY、PYY激动剂或其混合物、至少一种胰岛淀粉样多肽激动剂和CCK激动剂。适宜的胰岛淀粉样多肽激动剂和CCK激动剂的组合包括但不限于美国专利号5,739,106中描述的组合，该文献引入本文作为参考。
PYY和PYY[3-36]当在生理上表达时是C末端酰胺化的，但对本发明的目的而言没有必要如此。这些肽还可以进行其它翻译后修饰。
本文中描述的PYY和基于肽的PYY激动剂可以采用本领域已知的标准重组体表达或化学肽合成技术来制备，例如使用自动化或半自动化的肽合成仪。本文中描述的PYY包括任何形态的PYY[3-36]，包括通过冷冻干燥、结晶、重构、喷雾干燥以及超临界流化过程获得的PYY[3-36]。
固相肽合成可以用肽自动合成仪(例如430A型，Applied BiosystemsInc.，Foster City，CA)采用NMP/HOBt(选项1)系统和加帽tBoc或Fmoc化学(参见Applied Biosystems User′s Manual for the ABI 430A PeptideSynthesizer，1.3B版，1988年7月1日，64970，Applied Biosystems，Inc，Foster City，CA)进行。还可以利用Advanced ChemTech Synthesizer(高级化学技术合成仪，MPS 350型，路易斯维尔，肯塔基)装配。肽可以采用例如Waters Delta Prep 3000系统和C4、C8或C18制备柱(10p，2.2×25cm；Vydac，Hesperia，CA)通过RP-HPLC(制备型和分析型)进行纯化。
在本发明中有用的肽类化合物还可以采用重组DNA技术、使用目前本领域已知的方法制备。例如参见Sambrook等，Molecular CloningALaboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor(1989)。在本发明中有用的非肽类化合物可以通过本领域已知的方法制备。例如，含磷酸酯的氨基酸和含这类氨基酸的肽可以采用本领域已知的方法制备。例如参见Bartlett和Landen，Biorg Chem.14356-377(1986)。
用于本发明的组合物可以以例如用于注射或输液的胃肠道外组合物的形式提供。例如，可以将它们悬浮在含水的载体中，例如悬浮在pH为约3.0至约8.0的等渗缓冲溶液中。有用的缓冲液包括柠檬酸钠-柠檬酸和磷酸钠-磷酸以及醋酸钠/醋酸缓冲液。可以使用贮库或“仓库”缓释制剂的形式以便将治疗有效量的制剂在经皮注射或传送后传送到血流中达数小时或数天。
由于PYY和多种PYY激动剂是两性的，因此它们可以以游离碱、以酸加成盐或以金属盐的形式使用。所述盐优选是可药用的盐，这些盐将包括金属盐、尤其是碱金属和碱土金属盐，例如钾盐或钠盐。各种各样的可药用酸加成盐都是可以获得的。通过本领域技术人员熟知的方法很容易制备这类产物。
治疗有效量的用于降低营养利用度的PYY或PYY激动剂是抑制食欲至期望程度的那些。正如本领域的人员将能认识到的那样，有效量的治疗剂将随多种因素而变，包括患者的年龄和体重、患者的身体健康状况、血糖水平、将获得的体重水平及其它因素。
对于体重50kg的患者而言，PYY、PYY激动剂或其混合物抑制食欲的有效日剂量为约1至30μg至约50mg/天，或约10至30μg至约20mg/天，或约5至100μg至约10mg/天，或约5μg至约5mg/天。有效量的PYY或PYY激动剂可以以单一剂量或分份剂量给药。剂量可以为约0.01至约1mg/kg/剂量。所施用的精确剂量可以由本领域技术人员确定，这依赖于PYY、PYY激动剂或其混合物的药效以及依赖于个体的年龄、体重和身体状况。只要期望抑制营养利用度、食物摄入、体重、血糖或降低血脂，例如在最初的病征出现时或在诊断为肥胖症、糖尿病或胰岛素抵抗综合症之后不久，就应当开始用药。
其它PYY激动剂的筛选其它PYY激动剂可以通过采用下文中描述的(例如WO 02/47712和美国专利公开号2002/0141985的实施例9和10)或本领域已知的受体结合检测法并结合WO 02/47712和美国专利公开号2002/0141985的实施例中描述的生理筛选法进行鉴定。将潜在的PYY激动剂与PYY或PYY[3-36]的活性进行比较。
或者，一旦一种或多种PYY-优选(Y7)受体被表征和克隆，就可以按下文中详述的或本领域已知的方法实施可选择的检测和高流通量筛选。Y7受体是对PYY或PYY[3-36]的亲和力高于它们对神经肽Y(NPY)亲和力的那些受体。筛选调节PYY受体活性的化合物的方法包括使试验化合物与PYY受体接触并检测该化合物和PYY受体之间络合物的存在。在这类检测中，试验配体通常被标记。在适当温育之后，游离的配体与以结合形式存在的配体分离，游离或未络合的标记物的量为具体化合物结合PYY受体能力的量度。
或者，可以测量所结合的标记配体(例如利用表达膜结合的Y7受体)。
可以进行对具有适宜PYY受体结合亲和力的PYY激动剂的高流通量筛选。例如，在固体基质上合成大量不同的小的肽试验化合物。使这些肽试验化合物与PYY受体接触，然后冲洗。然后用本领域公知的方法检测所结合的PYY受体。纯化的试验化合物还可以直接涂布在用于前述药物筛选技术的板上。此外，假如试验化合物是蛋白质，则可以使用抗体来捕获该蛋白质并通过本领域已知的方法将其固定于固体载体上。
可以使用竞争筛选分析法，其中能特异性结合本发明多肽的中和抗体与试验化合物竞争性地结合多肽。在该方法中，抗体可用于检测与PYY激动剂共享一个或多个抗原决定簇的任何肽的存在。放射性标记的竞争性结合研究在Lin，A.H.等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy41(10)2127-2131(1997)中作了描述，其公开的内容全文引入本文作为参考。
传送剂化合物传送剂化合物可以是下述文献中描述的任何化合物美国专利5,650,386和5,866,536以及国际申请公开号WO94/23767、WO95/11690、WO95/28920、WO95/28838、WO96/10396、WO96/09813、WO96/12473、WO96/12475、WO96/30036、WO96/33699、WO97/31938、WO97/36480、WO98/21951、WO98/25589、WO98/34632、WO98/49135、WO99/16427、WO00/06534、WO00/07979、WO00/40203、WO00/46182、WO00/47188、WO00/48589、WO00/50386、WO00/59863、WO00/59480、WO01/32130、WO01/32596、WO01/34114、WO01/44199、WO01/51454、WO01/70219、WO01/92206、WO02/02509、WO02/15959、WO02/16309、WO02/20466、WO02/19969、WO02/070438、WO03/026582、WO02/100338、WO03/045306和WO0326582，所有这些文献均引入本文作为参考。
传送剂化合物非限制性的实例包括N-(8-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)辛酸、N-(10-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)癸酸、8-(2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氨基)辛酸，8-(2，6-二羟苯甲酰氨基)辛酸、8-(2-羟基-5-溴苯甲酰氨基)辛酸、8-(2-羟基-5-氯苯甲酰氨基)辛酸、8-(2-羟基-5-碘苯甲酰氨基)辛酸、8-(2-羟基-5-甲基苯甲酰氨基)辛酸、8-(2-羟基-5-氟苯甲酰氨基)辛酸、8-(2-羟基-5-甲氧基苯甲酰氨基)辛酸、8-(3-羟基苯氧基)辛酸、8-(4-羟基苯氧基)辛酸、6-(2-氰基苯氧基)己酸、8-(2-羟基苯氧基)辛基-二乙醇胺、8-(4-羟基苯氧基)辛酸酯盐、8-(4-羟基苯氧基)辛酸盐、8-(2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氨基)辛酸、8-(2-羟基-5-甲氧基苯甲酰氨基)-辛酸以及它们的盐。优选的盐包括但不限于一钠和二钠盐。
传送剂化合物可以是羧酸或其可药用盐如钠盐、以及其水合物和溶剂化物的形式。这些盐可以是单价或多价盐，如一钠盐和二钠盐。这些传送剂化合物可以含有例如由于它们对修饰载体的溶出性质的作用而选择的不同抗衡离子。
传送剂化合物可以通过本领域已知的方法制备，如在前述的申请公开(例如国际公开号WO 98/34632、WO 00/07979、WO 01/44199、WO01/32596、WO 02/20466和WO 03/045306)中详述的那些。SNAC、SNAD及其游离酸和其它盐可以通过本领域已知的任何方法来制备，例如通过美国专利号5,650,386和5,866,536中描述的方法来制备。
本发明传送剂化合物的盐可以通过本领域已知的方法制备。例如，钠盐可以通过将传送剂化合物溶解在乙醇中并加入氢氧化钠水溶液来制备。
传送剂化合物可以通过重结晶或通过在一个或多个单独或串联的固态色谱固定相分馏来纯化。适宜的重结晶溶剂体系包括但不限于乙腈、甲醇和四氢呋喃。分馏可如下进行在适宜的色谱固定相如氧化铝上采用甲醇/正丙醇混合物作为流动相来进行；采用三氟乙酸/乙腈混合物作为流动相进行反相色谱法分离；和采用水或适当缓冲液作为流动相进行离子交换色谱法。当进行阴离子交换色谱法时，优选采用0-500mM的氯化钠梯度。
传送系统本发明的组合物包含一种或多种本发明的传送剂化合物和/或一种或多种PYY和PYY激动剂。传送剂化合物和PYY和/或PYY激动剂通常在给药之前混合形成给药组合物。
该组合物可以包含一种或多种降低食物摄取、降低血浆葡萄糖或改变血浆脂质的治疗剂，如胰岛淀粉样多肽、胰岛淀粉样多肽激动剂、CCK或CCK激动剂、瘦蛋白或瘦蛋白激动剂或exendin或exendin激动剂。
给药组合物可以是液体的形式。溶液介质可以是水、25％丙二醇水溶液或磷酸盐缓冲液。其它给药载体包括聚乙二醇。给药溶液可以恰好在给药之前将传送剂化合物的溶液与活性剂的溶液混合来制备。或者，可以将传送剂化合物(或PYY、PYY激动剂或其混合物)的溶液与固体形式的PYY或PYY激动剂(或传送剂化合物)混合。也可以将传送剂化合物与PYY、PYY激动剂或其混合物以干粉的形式混合。还可以将传送剂化合物与PYY、PYY激动剂或其混合物在制备过程中混合。
给药溶液可以任选地含有添加剂如磷酸盐缓冲盐、柠檬酸、乙二醇或其它分散剂。稳定添加剂可掺入到该溶液中，优选浓度为约0.1-20％(w/v)。
或者，该给药组合物可以是固体的形式，如片剂、胶囊或颗粒，如粉末或囊剂。固体剂型可以通过将固体形式的该化合物与固体形式的PYY、PYY激动剂或其混合物混合来制备。或者，固体可以通过本领域已知的方法如冻干(冷冻干燥)、沉淀、结晶和固体分散由化合物和PYY、PYY激动剂或其混合物的溶液获得。或者，该给药组合物可以是半固体，为凝胶(gel)、糊剂、胶体、凝胶体(gelatin)、乳剂或混悬液等的形式。
本发明的给药组合物还可以包含一种或多种酶抑制剂。这类酶抑制剂包括但不限于诸如放线酰胺素(actinonin)或表放线酰胺素(epiactinonin)及其衍生物的化合物。其它酶抑制剂包括但不限于抑肽酶(Trasylol)和Bowman-Birk抑制剂。
用于本发明的给药组合物的PYY和/或PYY激动剂的量为有效治疗目标适应症的量。然而，当组合物以剂量单位形式使用时，该量可以低于上述量，因为剂量单位形式可能含有传送剂化合物/PYY或PYY激动剂的多个组合物或者可能含有分开有效量。因此，总有效量可以累计单位施用，这些单位总体含有有效量的PYY、PYY激动剂或其混合物。而且，本领域技术人员将认识到PYY、PYY激动剂或其混合物的有效量将随多种因素而变化，包括患者的年龄和体重、患者的身体状况、血糖水平、所欲获得的体重水平以及其它因素。
PYY或PYY激动剂的总用量可通过本领域技术人员已知的方法来确定。然而，因为本发明的组合物与仅含PYY或PYY激动剂的组合物相比可以更有效地传送PYY或PYY激动剂，因此可给患者施用少于以往剂量单位形式或递药系统中用量的PYY或PYY激动剂，而仍然获得相同的血液水平和/或治疗效果。
按照一个实施方案，与传送剂一起施用的PYY、PYY激动剂或其混合物的量为足以抑制食欲至期望水平的量。对于体重50kg的患者，PYY、PYY激动剂或其混合物抑制食欲的有效日剂量通常是单一剂量或分份剂量形式的约1μg至约5mg/天，优选约5μg至约2mg/天，更优选约5μg至500μg/天。优选本发明的剂型含有约0.01至约10μg/kg/剂量的PYY、PYY激动剂或其混合物。
本发明还包括其中包含上述量的PYY、PYY激动剂或其混合物以及至少一种传送剂的药物组合物和剂型。
通常便于传送PYY和/或PYY激动剂的有效量的传送剂与PYY、PYY激动剂或其混合物一起施用。通常，传送剂与PYY、PYY激动剂或其混合物的摩尔比为约25000∶1至约50∶1，优选约8000∶1至约100∶1，最优选约4000∶1至约300∶1。
本发明公开的传送剂化合物便于PYY、PYY激动剂或其混合物的传送，尤其是口服、鼻内、舌下、十二指肠内、皮下、口腔、结肠内、直肠、阴道、粘膜、经肺、经皮、皮内、胃肠道外、腹膜内、静脉内、肌内和眼系统中时，以及穿透血脑屏障。本发明的组合物和剂量单位形式可经上述任何途径施用。
当口服施用于人时，本发明的组合物和剂量单位形式在体内可获得PYY[3-36]的已知治疗水平，如在Batterham等人，Nature 418650-654(2002)中列举的那些。
剂量单位形式还可以包含赋形剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、增塑剂、着色剂、香料、掩味剂、糖、甜味剂、盐和给药载体中的任何一种或其组合，包括但不限于水、1，2-丙二醇、乙醇、橄榄油或它们的任意组合。
本发明的化合物和组合物可用于将生物或化学活性治疗剂施用于任何动物，包括但不限于鸟类如鸡；鱼，爬行动物，哺乳动物如啮齿类、牛、猪、狗、猫、灵长类且尤其是人，以及昆虫。
实施例以下实施例用于非限制性地举例说明本发明。除非另有陈述，所有部分都按重量给出。
实施例1-大鼠中PYY[3-36]的液体口服传送如下制备传送剂化合物和肽YY残基3-36(PYY[3-36])(可从加拿大托兰斯的Bachem California Inc.，获得)在去离子水中的口服强饲(PO)给药溶液。
传送剂1(SNAC)和PYY[3-36]的给药溶液的制备如下。将SNAC一钠盐固体溶于水中。该溶液的pH接近7.5，因此不必调节pH。将等分试样的该SNAC溶液与等分试样的PYY溶液(pH7.5)混合。按照该步骤制备100或200mg/kg SNAC和0.1或0.5mg/kg PYY[3-36]的溶液。这些溶液的最终pH为7.5。
传送剂2一钠盐(SNAD)和PYY[3-36]的给药溶液的制备如下。将固态的SNAD二钠盐溶于水中。所得溶液的pH为11.1。然后通过加入HCl(5N)将其pH调低到7.7。然后将等分试样的SNAD溶液等分试样的PYY[3-36]溶液(pH7.5)混合。按照该步骤制备100或200mg/kg SNAD和0.1或0.5mg/kg PYY[3-36]的溶液。这些溶液的最终pH在7.5-7.6之间变化。
传送剂4-15一钠盐和PYY[3-36]的给药溶液的制备如下。将各传送剂化合物(游离酸或一钠盐形式)溶于水中。根据需要加入HCl(5N)和NaOH(5N)将其pH调至约7.5。然后将等分试样的传送剂溶液与等分试样的PYY[3-36]溶液(pH7.5)混合。按照该步骤制备200mg/kg的传送剂和0.3mg/kg PYY[3-36]的溶液。这些溶液的最终pH为约7.5。
典型的给药和取样方案如下。将体重240-320g的雄性Sprague-Dawley大鼠在试验前禁食至最多24小时，在施用试验制品之前经肌内注射施用氯胺酮(44mg/kg)和氯丙嗪(1.5mg/kg)。之后，通过口服强饲给麻醉动物施用试验制品。对给药组的五只动物施用所述给药溶液之一。对于口服强饲(PO)，采用11cm的Rusch 8 French导管适合于带有吸管端的1ml注射器。经导管吸取溶液，使注射器填充有给药溶液，然后擦干导管。将导管置入食管，留1cm试管通过切牙。压注射器柱塞施用给药溶液。
经尾动脉或心脏穿刺连续收集血样，通常在时间＝0、15、30、45、60和90分钟时收集。采用PYY[3-36]放射免疫测定法(目录号RK-059-02，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，CA)测量血清PYY浓度。将各时间点由各组动物获得的结果取平均值。这些平均值中的最大值(即平均血清PYY[3-36]浓度峰值±标准差(SD))报道于下述表1中。当动物仅口服给予PYY[3-36]时，在血中没有检测到明显的PYY[3-36]。用传送剂SNAC和SNAD所得的结果(±标准差)也分别显示于图1和2中。
表1.大鼠中PYY[3-36]的口服传送
传送剂1为N-(8-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)辛酸一钠盐(SNAC)。
传送剂2为N-(10-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)癸酸一钠盐(SNAD)。
传送剂4为8-(2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂5为8-(2，6-二羟基苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂6为8-(2-羟基-5-溴苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂7为8-(2-羟基-5-氯苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂8为8-(2-羟基-5-碘苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂9为8-(2-羟基-5-甲基苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂10为8-(2-羟基-5-氟苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂11为8-(2-羟基-5-甲氧基苯甲酰氨基)辛酸一钠盐。
传送剂12为8-(3-羟基苯氧基)辛酸一钠盐。
传送剂13为8-(4-羟基苯氧基)辛酸一钠盐。
传送剂14为6-(2-氰基苯氧基)己酸一钠盐。
传送剂15为8-(2-羟基苯氧基)辛基-二乙醇胺一钠盐。
实施例2大鼠中肽YY[3-36]的腹膜内传送在无菌盐水溶液(0.9％氯化钠，pH 7.5)中制备PYY[3-36]的腹膜内给药溶液。典型的给药和取样方案如下。将体重240-320g的雄性Sprague-Dawley大鼠在试验前禁食至最多24小时，在施用试验制品之前经肌内注射施用氯胺酮(44mg/kg)和氯丙嗪(1.5mg/kg)。之后，通过腹膜内注射给麻醉动物施用试验制品。对给药组的五只动物施用所述给药溶液之一。
经尾动脉或心脏穿刺连续收集血样，通常在时间＝0、15、30、45、60和90分钟时收集。采用PYY[3-36]放射免疫测定法(目录号RK-059-02，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，CA)测量血清PYY浓度。将各时间点由各组动物获得的结果取平均值。这些平均值中的最大值(即平均血清PYY浓度峰值)报道于下述表2。所得的结果(±标准差)还显示于图3中。
表2.大鼠中PYY[3-36]的腹膜内(IP)传送
实施例3-大鼠PYY[3-36]的固体口服传送实施例3a.固体PYY3-36对限制喂养大鼠的施用使用以去离子水制备的PYY[3-36]储备液(80mg/ml)。
加入约0.08mg/片(约0.3mg/kg)的PYY(约1μl)并与约13.5或约27mg/片(约50或100mg/kg)的传送剂混合。将Natoli Engineering Company，Inc.销售的带有小胶囊形模具的Carver 4350手工压片机的上冲、下冲和冲模用硬脂酸镁(0.1％)处理。将约13.58或约27.08mg的混合粉末输入冲模并在约1000PSI bar压力下制备成小球形片剂。所得固体剂型当为27.08mg时其大小约为标准9号胶囊的尺寸(直径约2.65mm，长约8.40mm)，当为13.58mg固体时为直径约2.65mm且长约4.20mm。
将雄性Sprague Dawley大鼠(约260-约280g)禁食过夜，然后用标准CO2吸入技术麻醉约10至30秒，使之处于麻醉状态约不到一分钟，优选约10秒至约30秒。
使用口服给药管。将给药管插入大鼠口中并小心沿大鼠的咽和食管插入约8cm至约15cm，这取决于大鼠的体重(通常约11cm)。通过压口服给药管的柱塞将固体剂型传送到末端食管和/或胃内。
经尾动脉或心脏穿刺连续收集血样，或者在这种情形下通过后眼眶取血，通常在时间＝0、15、30、60和90分钟时收集。采用PYY[3-36]放射免疫测定法(目录号RK-059-02，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，CA)测量血清PYY浓度。将各时间点由各组动物获得的结果取平均值。这些平均值中的最大值(即平均血清PYY[3-36]浓度峰值)报道于下述表3。
表3.限制喂养的大鼠中PYY[3-36]的口服传送
传送剂16为N-(10-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)癸酸二钠盐(SNAD)。
传送剂17为8-(4-羟基苯氧基)辛酸二钠盐。
传送剂18为8-(4-羟基苯氧基)辛酸酯一钠盐。
传送剂19为8-(2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氨基)辛酸二钠盐。
传送剂20为8-(2-羟基-5-甲氧基苯甲酰氨基)辛酸二钠盐。
甘露醇用作对照剂。
实施例3b.固体PYY[3-36]对非限制喂养大鼠的施用除了在施用固体剂型之前没有对大鼠采取食物限制外，按实施例3a中的描述给大鼠接受由PYY[3-36]和载体组成的固体口服剂型。在各时间点测定每只动物的血清PYY浓度，将各时间点由各组动物获得的结果取平均值。这些平均值中的最大值(即平均血清PYY[3-36]浓度峰值±标准差(SD))报道于下述表4。
表4.非限制喂养的大鼠中PYY[3-36]的口服传送
实施例3c.限制喂养大鼠中微型片的施用将雄性Sprague Dawley大鼠禁食过夜。通过物理混合和压制制备含PYY[3-36]和SNAD的微型片(直径约2.5mm)，然后通过口服强饲施用于大鼠。用放射免疫测定法测定血清PYY[3-36]水平。在施用分别含0.3和100mg/kg(体重)的PYY[3-36]及SNAD的一片微型片后，血清PYY[3-36]增至940±74pg/ml(n＝5，均值±s.e.m.)，并保持在基线水平之上达90分钟。当单独施用PYY[3-36]或SNAD时没有检测到血清PYY[3-36]的变化。
90分钟测试时间中的结果如图6所示。
实施例4-猕猴(Rhesus Monkey)中肽YY(PYY[3-36]固体口服传送逐渐加入约1mg/片的PYY固体粉末并与50或100mg/片传送剂混合。将Natoli Engineering Company，Inc.销售的带有小胶囊形模具的Carver4350手工压片机的上冲、下冲和冲模用硬脂酸镁(0.1％)处理。将约51或约101mg的混合粉末输入冲模并在约1000PSI bar压力下制备成小球形片剂。所得固体剂型当为51mg固体时其直径约3mm且高约1mm，当为101mg固体时为直径约3mm且高约2mm。
对于各剂量水平，在试验前将重3.5-5.0kg的2只雄性和2只雌性猕猴禁食过夜，在固体给药约2小时后恢复进食。在给药前后30分钟期间，除用于给药的水外，停止喂水。
使用弹丸枪将各固体剂型传送到口腔后部。在固体剂型释放后，给予5ml反渗水至口腔以便于吞咽。传送之后，检查口腔以确保固体被吞咽。
从股静脉、臂静脉或隐静脉连续收集血样(约1.3ml)，通常在时间＝0(给药前)和给药后10、20、30、45、60、90、150、240和360分钟时收集。将样品置于血清分离管中，并在室温下放置30-45分钟以使其凝固。然后将样品在2500rpm下于约2-8℃离心10分钟。将所得血清转移到试管内并置于干冰上，然后在-70±10℃下冷冻贮藏至检测。采用PYY[3-36]放射免疫测定法(目录号RK-059-02，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，CA)测量血清PYY浓度。将各时间点由各组动物获得的结果取平均值。这些平均值中的最大值(即平均血清PYY[3-36]浓度峰值±标准差)报道于下述表4。该结果(±标准差)还显示于图5中。
表4.猕猴中PYY的口服传送
传送剂1为N-(8-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)辛酸一钠盐(SNAC)。
实施例5-口服施用PYY[3-36]对4小时食物摄入的影响用去离子水制备的PYY[3-36]储备液(80mg/ml)用于制备PYY[3-36]片剂。
加入约0.132mg/片(约0.5mg/kg)的PYY[3-36](约1.7μl)并与约27mg/片(100mg/kg)的传送剂SNAD混合。将带有小胶囊形模具的Carver 4350手工压片机(可从Natoli Engineering Company，Inc.获得)的上冲、下冲和冲模用硬脂酸镁(0.1％)处理。将约27.132mg的混合PYY[3-36]/SNAD粉末输入冲模并在约1000PSI bar压力下制备成小球形片剂。所得固体剂型的大小约为标准9号胶囊的尺寸(直径约2.65mm，长约8.40mm)。
安慰剂片只含SNAD，约27mg/片(100mg/kg)，以同样方法制备。
雄性Sprague Dawley大鼠(约260至约280g)在给药前禁食24小时。每只大鼠给予一片PYY[3-36]/SNAD片剂或一片安慰剂片。
使用口服给药管。将给药管插入大鼠口中并小心沿大鼠的咽和食管插入约8cm至约15cm，这取决于大鼠的体重(通常约11cm)。通过压口服给药管的柱塞将固体剂型传送到末端食管和/或胃内。给药时未使用麻醉剂。
称取食物并在给药后一小时给予大鼠。四小时后，撤掉食物并称重。根据食物重量差测定消耗的食物量。
以克表示的4小时累计食物摄入(平均值±s.e.m.)如表5和图7所示。双星号表示P＜0.01。
表5.4小时食物摄入
如上表和图7所示，接受一片PYY[3-36]片剂的大鼠所消耗的食物显著少于接受一片安慰剂片的大鼠。
实施例6-口服施用PYY[3-36]处理7天后体重增加和食物摄入的影响用去离子水制备的PYY[3-36]储备液(110mg/ml)用于制备PYY[3-36]片剂。
按照实施例6中描述的步骤制备含约0.11mg/片(约0.5mg/kg)PYY[3-36]和约16.5mg/片(75mg/kg)传送剂SNAD的微球形片剂。
安慰剂片仅含SNAD，约16.5mg/片(75mg/kg)，同样按实施例6描述的步骤制备。
对雄性Sprague Dawley大鼠(约220g)给予一片PYY[3-36]片剂或一片安慰剂片，每天两次，共7天。在给药前，大鼠用标准CO2吸入技术麻醉约10至30秒，使之处于麻醉状态约不到一分钟，优选约10秒至约30秒。在给药前撤掉食物并在给药30分钟后恢复。
使用口服给药管。将给药管插入大鼠口中并小心沿大鼠的咽和食管插入约8cm至约15cm，这取决于大鼠的体重(通常约11cm)。通过压口服给药管的柱塞将固体剂型传送到末端食管和/或胃内。
每24小时由给予各大鼠的食物和剩下食物的重量差测定食物消耗。每24小时测各大鼠体重。
结果如表6和图8a和8b所示。在7天治疗期间的体重增加(以克表示)如图8a所示。星号表示P＜0.05。在7天治疗期间的累计食物摄入(以克表示)(平均值±s.e.m.)如图8b所示。双星号表示P＜0.01。
表6.7天治疗期间的体重增加
如上表和图8a和8b所示，与接受安慰剂的大鼠相比，接受PYY[3-36]/SNAD的大鼠的体重增加和食物消耗显著较少。PYY[3-36]对胃排空没有影响。在7天研究结束时，胃内食物量极少且对于安慰剂组和治疗组动物其量相当。在研究结束后，进行肉眼尸检时在胃肠道没有观察到病理或其它现象。
实施例7-SNAD二钠盐和PYY[3-36]的剂型以及PYY[3-36]的腹膜内给药液体剂型制备如下。用去离子水制备的PYY[3-36]储备液(80mg/ml)。通过将SNAD二钠盐溶于水中制备传送剂的液体溶液。所得SNAD二钠盐溶液的pH为约10。将等分试样的SNAD二钠盐溶液与等分试样的PYY[3-36]溶液(pH约8)混合。按该步骤制备含约100-200mg/kg SNAD二钠盐和约0.3-1mg/kg PYY[3-36]的液体剂型。该液体剂型的最终pH为约9-10。
固体剂型制备如下。加入约0.08mg/片(约0.3mg/kg)的PYY(约1μl)并与约13.5或约27mg/片(约50或100mg/kg)的传送剂混合。将NatoliEngineering Company，Inc.销售的带有小胶囊形模具的Carver 4350手工压片机的上冲、下冲和冲模用硬脂酸镁(0.1％)处理。将约13.58或约27.08mg的混合粉末输入冲模并在约1000PSI bar压力下制备成小球形片剂。所得固体剂型当为27.08mg时其大小约为标准9号胶囊的尺寸(直径约2.65mm，长约8.40mm)，当为13.58mg固体时为直径约2.65mm且长约4.20mm。
将雄性Sprague Dawley大鼠(约260-约280g)禁食过夜，然后用标准CO2吸入技术麻醉约10至30秒，使之处于麻醉状态约不到一分钟，优选约10秒至约30秒。
使用口服给药管。将给药管插入大鼠口中并小心沿大鼠的咽和食管插入约8cm至约15cm，这取决于大鼠的体重(通常约11cm)。通过压口服给药管的柱塞将固体剂型传送到末端食管和/或胃内。
经尾动脉或心脏穿刺连续收集血样，或者在这种情形下通过后眼眶取血，通常在时间＝0、15、30、60和90分钟时收集。采用PYY[3-36]放射免疫测定法(目录号RK-059-02，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，CA)测量血清PYY浓度。将各时间点由各组动物获得的结果取平均值。这些平均值中的最大值(即平均血清PYY浓度峰值)报道于下述表7。
表7.大鼠中PYY[3-36]的传送
实施例8-肽YY(PYY[3-36])，短尾猴(Cynomoleus monkey)中的固体口服传送胶囊制备如下。逐渐加入约1mg PYY固体粉末并与50或100mgSNAD混合。用干净的金属药勺将预先称重的2号胶囊壳填充该混合物。将最终的胶囊再次称重并确定含＞98％的所转移的混合物。
片剂制备如下。逐渐加入约1mg/片的PYY固体粉末并与约50mg/片的传送剂混合。将Natoli Engineering Company，Inc.销售的带有小胶囊形模具的Carver 4350手工压片机的上冲、下冲和冲模用硬脂酸镁(0.1％)处理。将约51mg的混合粉末输入冲模并在约1000PSI bar压力下制备成小球形片剂。所得固体剂型直径约3mm且高约1mm。
对于各剂量水平，在试验前将重3.5-5.0kg的2只雄性和2只雌性短尾猴禁食过夜，在固体给药约2小时后恢复进食。在给药前后30分钟期间，除用于给药的水外，停止喂水。
使用强饲管将各固体剂型直接送至胃中。通过吹气将胶囊或片剂射出。
从股静脉、臂静脉或隐静脉连续收集血样(约1.3ml)，通常在时间＝0(给药前)和给药后10、20、30、45、60、90、150、240和360分钟时收集。将样品置于血清分离管中，并在室温下放置30-45分钟以使其凝固。然后将样品在2500rpm下于约2-8℃离心10分钟。将所得血清转移到试管内并置于干冰上，然后在-70±10℃下冷冻贮藏至检测。采用PYY[3-36]放射免疫测定法(目录号RK-059-02，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，CA)测量血清PYY浓度。将各时间点由各组动物获得的结果取平均值。这些平均值中的最大值(即平均血清PYY浓度峰值)报道于下述表8。
表8.短尾猴中PYY[3-36]固体口服传送的结果
**********以上提到的专利、申请、试验方法以及出版物在此全文引入作为参考。
根据上述的详细说明，本发明的多种变通方式本身可提示给本领域技术人员。所有这些显而易见的变化都在所附权利要求的充分预期的范围之内。
权利要求
1.药物组合物，包含(a)肽YY、肽YY激动剂或其混合物以及(b)具有下式结构或其盐的传送剂， 其中Ar为苯基或萘基；Ar任选地被-OH、卤素、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4卤代烷氧基中的一个或多个基团取代；R7选自C4-C20烷基、C4-C20链烯基、苯基、萘基、(C1-C10烷基)苯基、(C1-C10链烯基)苯基、(C1-C10烷基)萘基、(C1-C10链烯基)萘基、苯基(C1-C10烷基)、苯基(C1-C10链烯基)、萘基(C1-C10烷基)或萘基(C1-C10链烯基)；R8选自氢、C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基和C1-C4卤代烷氧基；R7任选地被C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、-OH、-SH、-CO2R9或它们的任意组合取代；R9为氢、C1-C4烷基或C2-C4链烯基；R7任选地被氧、氮、硫或它们的任意组合间隔；条件是该化合物在酸基团的α位上不被氨基取代。
2.药物组合物，包含(a)肽YY、肽YY激动剂或其混合物以及(b)具有下式结构或其盐的传送剂， 其中，R1、R2、R3和R4独立地为H、-OH、卤素、C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基、-C(O)R8、-NO2、-NR9R10或-N+R9R10R11(R12)-；R5为H、-OH、-NO2、卤素、-CF3、-NR14R15、-N+R14R15R16(R13)-、酰氨基、C1-C12烷氧基、C1-C12烷基、C2-C12链烯基、氨基甲酸酯基、碳酸酯基、脲基或-C(O)R18；R5任选地被卤素、-OH、-SH或-COOH取代；R5任选地被O、N、S或-C(O)-间隔；R6为C1-C12亚烷基、C2-C12亚烯基或亚芳基；R6任选地被C1-C4烷基、C2-C4链烯基、C1-C4烷氧基、-OH、-SH、卤素、-NH2或-CO2R8取代；R6任选地被O或N间隔；R7为键或亚芳基；R7任选地被-OH、卤素、-C(O)CH3、-NR10R11或-N+R10R11R12(R13)-取代；R8每次出现时独立地为H、C1-C4烷基、C2-C4链烯基或-NH2；R9、R10、R11和R12独立地为H或C1-C10烷基；R13为卤离子、氢氧根、硫酸根、四氟硼酸根或磷酸根；且R14、R15和R16独立地为H、C1-C10烷基、被-COOH取代的C1-C10烷基、C2-C12链烯基、被-COOH取代的C2-C12链烯基或-C(O)R17；R17为-OH、C1-C10烷基或C2-C12链烯基；且R18为H、C1-C6烷基、-OH、-NR14R15或N+R14R15R16(R13)。
3.药物组合物，包含(a)肽YY、肽YY激动剂或其混合物以及(b)具有下式结构或其盐的传送剂， 其中，R1、R2、R3、R4和R5独立地为H、-CN、-OH、-OCH3或卤素，且R1、R2、R3、R4和R5中至少一个为-CN；且R6为C1-C12直链或支链亚烷基、亚烯基、亚芳基、烷基(亚芳基)或芳基(亚烷基)。
4.权利要求1、2或3中任一项的药物组合物，其中传送剂选自传送剂1-20。
5.权利要求1的药物组合物，其中传送剂为N-(8-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)辛酸或其可药用盐。
6.权利要求1的药物组合物，其中传送剂为N-(10-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)癸酸或其可药用盐。
7.前述权利要求中任一项的药物组合物，其中肽YY激动剂选自PYY的功能结构域、PYY的活性片段、PYY衍生物、PYY片段以及PYY类似物。
8.前述权利要求中任一项的药物组合物，其中肽YY激动剂为PYY[3-36]。
9.剂量单位形式，其包含(A)前述权利要求中任一项的药物组合物；和(B)(a)赋形剂，(b)稀释剂，(c)崩解剂，(d)润滑剂，(e)增塑剂，(f)着色剂，(g)给药载体，或(h)它们的任意组合。
10.权利要求9的剂量单位形式，其中剂量单位形式为片剂、胶囊、颗粒、粉末、囊剂或液体的形式。
11.权利要求9的剂量单位形式，其中给药载体为选自水、丙二醇水溶液、磷酸盐缓冲液、1，2-丙二醇、乙醇以及它们的任意组合的液体。
12.将有效量的肽YY或肽YY激动剂施用于需要其的患者的方法，该方法包括口服施用权利要求1-8中任一项的药物组合物的步骤。
13.在需要其的患者中治疗肥胖症的方法，该方法包括给患者施用有效量的权利要求1-8中任一项的药物组合物的步骤。
14.在需要其的患者中治疗可通过降低营养利用度来缓和的病症或紊乱的方法，该方法包括给动物施用有效量的权利要求1-8中任一项的药物组合物的步骤。
15.权利要求14的方法，其中所述病症或紊乱选自高血压、血脂异常症、心血管疾病危险、进食障碍、胰岛素抵抗、肥胖症以及糖尿病。
16.在需要其的患者中降低营养吸收的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1-8中任一项的药物组合物的步骤。
17.在需要其的患者中改善脂质性质的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1-8中任一项的药物组合物的步骤。
18.权利要求12-17中任一项的方法，其中肽YY激动剂为PYY[3-36]且传送剂为N-(8-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)辛酸或N-(10-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)癸酸或其可药用盐。
19.改善动物的肽YY或肽YY激动剂的生物利用度的方法，该方法包括施用权利要求1或2的制剂的步骤。
20.制备药物组合物的方法，该方法包括将至少一种传送剂化合物和肽YY与肽YY激动剂中的至少一种混合的步骤。
全文摘要
本发明提供了包含至少一种传送剂化合物和肽YY(PYY)与PYY激动剂中至少一种的组合物(例如药物组合物)。优选该组合物包含治疗有效量的肽YY或PYY激动剂和传送剂化合物。与没有传送剂化合物的给药相比，本发明的组合物便于PYY、PYY激动剂或其混合物的传送，并提高了其生物利用度。PPY和PYY激动剂具有与降低营养利用度、包括减少食物摄入的药物相同的活性。
文档编号A61K38/00GK1787830SQ200480013063
公开日2006年6月14日 申请日期2004年5月14日 优先权日2003年5月14日
发明者S·丁, H·王, M·I·戈梅－奥雷兰纳 申请人:爱密斯菲尔科技公司