专利名称：一种具有活血行气的药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明提供了一种具有活血行气的药物组合物，具体地，是川芎活性成分制备而成的药物组合物，属中药领域。
背景技术：
川芎是著名的四川产大宗道地药材，具有活血行气、祛风止痛的功效，临床应用广泛。由于各地日照、湿度、雨水及土壤环境等因素存在明显的差异，因此，来自于不同产地，甚至于不同采收期的川芎药材不论从外观(包括个头、结实程度、气味等)还是从品质(包括化学成分的种类及含量等)均有很大的不同。药材发挥药效的物质基础是其内在的起协同作用的化学成分，而川芎的化学成分十分复杂，因此，根据川芎药材研究的经济技术现状及发展趋势，为了方便临床上使用，保证川芎临床疗效及质量稳定，有必要制备质量可控、稳定性高的川芎制剂。
由于川芎中的有效成分包括挥发油及其它活性成分。目前川芎制剂主要是山东绿叶制药厂利用川芎挥发油中的苯酞类成分研制开发“川芎苯酞软胶囊”，用于治疗缺血性脑血管疾病；山东凤凰制药股份有限公司利用川芎中的阿魏酸等酚酸类成分研制出“芎芷胶囊”，用于治疗女性产后恶露不尽，血瘀滞痛等；天津中新药业集团利用川芎中的川芎嗪等生物碱类成分研制出“速效救心滴丸”，用于治疗冠心病心绞痛等疾病，这些品种只利用了药材中部分有效部位，目前尚无将川芎不同部位配比制剂的相关报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种具有活血行气的药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法。
本发明提供了一种具有活血行气的药物组合物，它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂川芎挥发油1份、川芎提取物31～250份；所述的川芎提取物中不含挥发油。
进一步地，它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂川芎挥发油1份、川芎提取物250份。
其中，所述的川芎挥发油、川芎提取物来源于伞形科植物川芎Ligusticumchuanxiong Hort.的干燥根茎及其炮制品。
其中，所述的川芎挥发油的相对密度为0.8917～1.0899，折光率为1.3600～1.6641；所述的川芎提取物中每克含阿魏酸(C10H10O4)不得少于0.2mg。
所述的川芎提取物的HPLC指纹图谱如图1所示，色谱条件为色谱柱依利特ODS(250×4.6mm)，5μm；流动相甲醇-1％冰醋酸水溶液(体积比35∶65)；柱温40℃；流速1.0ml/min；灵敏度0.01AUFS；检测波长322nm。
本发明药物组合物是由川芎挥发油、川芎提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的药剂。
所述的药剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、合剂。
本发明还提供了该药物组合物的方法，它包括如下步骤a、川芎加水浸泡，水蒸气提取，收集挥发油；b、将a步骤收集挥发油后的药渣加水煎煮，合并收集挥发油后的药液，浓缩，干燥，得川芎提取物；c、按下述重量配比称取上述制备的川芎挥发油及提取物，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药剂川芎挥发油1份、川芎提取物31～250份。
步骤a所述的川芎挥发油可采用β-环糊精包合，超声时间15-45min；川芎挥发油与β-环糊精、水的重量配比为川芎挥发油1份、β-环糊精4-8份、水60-100份。
进一步地，步骤a所述的川芎挥发油可采用β-环糊精包合，超声时间30min；川芎挥发油与β-环糊精的重量配比为川芎挥发油1份、β-环糊精8份、水60份。
本发明药物是利用川芎多性味、多成分、多靶点的性质，将川芎挥发油与川芎水提物配比，发挥综合作用；明确控制了川芎挥发油、水提取物的质量，使产品质量可控，且对川芎挥发油进行包合，使产品质量稳定，提高了药材的利用率，为临床提供了一种新的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以作出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
图1川芎提取物HPLC2阿魏酸对照品HPLC图具体实施方式
实施例1本发明药物原料各有效部位的提取a、川芎挥发油提取取伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，切成薄片，加12倍量水，浸泡过夜，蒸馏提取挥发油6小时，收集挥发油，备用，得川芎挥发油。
b、川芎提取物制备将a步骤的药液滤过，备用。药渣加10倍量水煎煮1次，时间1小时，滤过，合并药液，高速离心(12000转/分)，滤液减压浓缩至相对密度1.10(60℃)，喷雾干燥(进液速度100ml/14min，进风温度140℃，出风温度85℃；中试进风温度180～185℃，出风温度90～95℃，塔内负压0.1kP)，得浸膏粉，备用。
实施例2本发明药物川芎挥发油的包合挥发油采用β-环糊精包合，每1ml挥发油用β-环糊精8g，60ml蒸馏水摇匀，水浴加热溶解，放冷，加入挥发油无水乙醇溶液(挥发油1ml，用无水乙醇溶液1ml稀释，混匀)，充分振摇，超声30分钟，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，包合物用少量石油醚洗涤，40℃干燥4h。将浸膏粉、挥发油β-环糊精包合物混合，加入糊精，混匀，干法制粒，即得。
实施例3本发明药物川芎挥发油的包合取原料川芎挥发油1ml、β-环糊精4g份、水100ml蒸馏水按实施例2的方法制备包合物。
实施例4本发明药物颗粒剂的制备川芎饮片(薄片)加12倍量水，浸泡过夜，蒸馏提取挥发油6小时，收集挥发油，备用。药液滤过，备用。药渣加10倍量水煎煮1次，时间1小时，滤过，合并药液，高速离心(12000转/分)，滤液减压浓缩至相对密度1.10(60℃)，喷雾干燥(进液速度100ml/14min，进风温度140℃，出风温度85℃；中试进风温度180～185℃，出风温度90～95℃，塔内负压0.1kP)，得浸膏粉，备用。挥发油采用β-环糊精包合，每1ml挥发油用β-环糊精8g，60ml蒸馏水摇匀，水浴加热溶解，放冷，加入挥发油无水乙醇溶液(挥发油1ml，用无水乙醇溶液1ml稀释，混匀)，充分振摇，超声30分钟，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，包合物用少量石油醚洗涤，40℃干燥4h。将浸膏粉、挥发油β-环糊精包合物混合，加入糊精，混匀，干法制粒，即得。
实施例5本发明药物颗粒剂的制备按实施例1方法制备川芎挥发油、川芎提取物，称取川芎挥发油1g、川芎提取物31g，混合，加入淀粉制粒，得颗粒剂。
实施例6本明药物胶囊剂的制备按实施例1方法制备川芎挥发油、川芎提取物，称取川芎挥发油1g、川芎提取物50g，混合，加入淀粉制粒，装胶囊，得胶囊剂。
实施例7本明药物片剂的制备按实施例1方法制备川芎挥发油、川芎提取物，称取川芎挥发油1g、川芎提取物250g，混合，加入淀粉制粒，加入硬脂酸镁，得片剂。
实施例8本发明药物合剂的制备按实施例1方法制备川芎挥发油、川芎提取物，称取川芎挥发油1g、川芎提取物80g，混合，加稀释剂制备成合剂。
实施例9本发明药物的质量控制方法鉴别(1)取本发明药物颗粒剂1g，研细，加石油醚(30～60℃)5ml，放置10小时，时时振摇，静置，取上清液1ml，挥干后，残渣加甲醇1ml使溶解，再加2％3，5-二硝基苯甲酸的甲醇溶液2～3滴与氢氧化钾的甲醇饱和溶液2滴，显红紫色。
(2)取本发明药物颗粒剂10g，研细，加乙醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(体积比9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸水溶液(体积比35∶65)为流动相；检测波长为322nm。理论塔板数按阿魏酸峰计算不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加酸性甲醇(甲醇-甲酸的体积比95∶5)制成每1ml含10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入酸性甲醇各50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用酸性甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每克含阿魏酸(C10H10O4)不得少于0.2mg，即每袋不得少于0.2mg。
阿魏酸的HPLC图谱见图2。
不同本发明药物颗粒剂的含量测定分别精密称取10个不同批次的本发明药物颗粒剂(按实施例2所述的方法制备)，按本品质量标准草案含量测定项下的方法，进行含量测定，结果见表1。
表1本发明药物颗粒剂阿魏酸含量测定结果(n＝2)
结果表明，本品10批样品含量平均值为0.2534mg/g，按平均值的80％计为0.2027mg/g。本次标准研究，测定样品批数有限，10批样品含量相差不大，故将含量限度定为0.2mg/g。
实施例10本发明药物原料川芎挥发油、川芎提取物的质量控制一、川芎挥发油相对密度照《中国药典》2005年版一部附录VIIA相对密度测定法第一法比重瓶测定。具体操作如下取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品(温度应低于20℃)后，装上温度计(瓶中应无气泡)，置20℃的水浴中放置若干分钟，使内容物的温度达到20℃，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算供试品的相对密度＝供试品重量/水重量。分别测定三批川芎挥发油的相对密度，结果见表2。
表2相对密度测定结果(n＝3)
由表可知，川芎挥发油的相对密度应在0.9908±10％，即0.8917～1.0899之间。
折光率测定折光率可以区别不同的油类。照《中国药典》2005年版一部附录VIIF折光率测定法测定。具体如下采用钠光谱的D线(589.3nm)测定供试品相对于空气的折光率，供试品温度为20℃。分别测定三批川芎挥发油的折光率，结果见表3。
表3折光率测定结果(n＝3)
由表可知，川芎挥发油的折光率应在1.5128±10％，即1.3600～1.6641之间。
鉴别取本品10mg，加甲醇20ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，同法制成对照药材溶液。取藁本内酯对照品，加甲醇照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)和石油醚-氯仿(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
两种展开系统相比较，石油醚-氯仿(19∶1)系统分出斑点多，分离效果好，Rf值适宜。
二、川芎提取物质量标准鉴别取本品1g，研细，加石油醚(30～60℃)5ml，放置10小时，时时振摇，静置，取上清液1ml，挥干后，残渣加甲醇1ml使溶解，再加2％3，5-二硝基苯甲酸的甲醇溶液2～3滴与氢氧化钾的甲醇饱和溶液2滴，显红紫色。
检查水分照水分测定法(附录IX H第一法)测定，不得过6.0％。
浸出物照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法(《中国药典》2005年版一部附录X A)测定，用乙醇作溶剂，不得少于40.0％。
含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸水溶液(35∶65)为流动相；检测波长为322nm。理论塔板数按阿魏酸峰计算不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加酸性甲醇(甲醇-甲酸95∶5)制成每1ml含10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入酸性甲醇各50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用酸性甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。川芎提取物的HPLC图谱见图1。
本品按干燥品计，每克含阿魏酸(C10H10O4)不得少于0.2mg。
实施例11本发明药物原料提取工艺筛选(一)挥发油提取1、浸泡时间的筛选称取川芎饮片350g，加12倍量水，提取6小时，结果见表4。
表4浸泡时间的比较
结果表明，浸泡12小时后，挥发油含量高于未浸泡的挥发油含量，故在提取挥发油前应浸泡12小时。
2、加水量的筛选称取川芎饮片350g，加不同量水，浸泡12小时后，提取6小时，结果见表5。
表5加水量的比较
结果表明，加水量为12倍量时，挥发油含量最高，故用12倍量水进行提取。
3、提取时间的筛选称取川芎饮片350g，加12倍量水，浸泡12小时后，提取不同时间，结果见表6。
表6提取时间的比较
结果表明，提取6小时后挥发油含量基本无变化，且提取6小时后挥发油含量为提取8小时后挥发油含量的90.48％，故从生产实际考虑，提取6小时即可。
(二)川芎提取物提取工艺用单因素方法，对川芎提油后药渣进行煎煮次数、加水量、煎煮时间的考察。
1煎煮次数考察对川芎提油后的药渣以阿魏酸含量为评价指标，进行了煎煮次数考察。根据川芎提油后药渣性状，分别加水量为10倍，提取2次，每次1小时，结果见表7。
表7煎煮次数考察结果
结果表明，川芎提油后药渣再加水煎煮2次，第2次阿魏酸提取含量较低，从工业生产实际考虑，川芎饮片提取挥发油后再水煎煮1次。
2加水量考察川芎提油后药渣分别加水8倍、10倍、12倍，煎煮1小时，合并两次药液，以出膏率及阿魏酸含量为评价指标，结果见表8。
表8加水量考察结果
结果表明，三个水平加水量出膏率无显著差异，且10倍量阿魏酸含量最高，故选择加水量为10倍。
3煎煮时间考察川芎提油后药渣加水10倍，分别煎煮0.5小时、1小时、1.5小时，合并两次药液，以出膏率和阿魏酸含量为评价指标，结果见表9。
表9煎煮时间考察结果
结果表明，三个水平煎煮时间出膏率无显著差异，煎煮1小时后阿魏酸含量相对较高，故选择煎煮时间为1小时。
4水煎煮工艺验证试验川芎提取挥发油6小时后工艺为10倍量水煎煮1次，煎煮1小时。取三批川芎饮片照上述工艺做验证试验，结果见表10。
表10水煎煮工艺验证试验结果
结果表明，RSD＝0.45％，该工艺稳定可行。
综上所述，川芎提取工艺为川芎薄片浸泡12小时，加量12倍量水，水蒸气提取6小时，收集挥发油和药液，药渣加10倍量水煎煮1次，煎煮1小时，合并药液。
(三)除杂除杂方法可分为物理除杂和化学除杂，物理除杂方法有离心和过滤，化学除杂方法有醇沉等。本实验首先采用滤布过滤，通过反复多次过滤，基本使滤液达到澄清，再通过离心的方法除杂，以出膏率和阿魏酸含量为评价指标。
1、普通离心条件筛选取水煎液浓缩至相当于0.5g药材/ml，再分别用2000r/min、5000r/min离心30min，以出膏率和阿魏酸含量为评价指标，结果见表11。
表11离心条件考察结果
结果表明，普通离心效果不佳，故需进一步采用高速离心的方法除杂。
2、高速离心条件筛选将川芎水煎液用12000r/min高速离心，以出膏率和阿魏酸含量为评价指标，结果见表12。
表12高速离心考察结果
结果表明，与分离前药液及低速离心分离液相比，高速离心能较大程度的降低出膏率，且阿魏酸含量降低较小，故采用12000r/min高速离心的方法除杂。
(四)浓缩工艺考察将川芎离心分离液分别采用常压浓缩和减压浓缩(60℃，-0.08～-0.06mpa)的方法，浓缩至相对密度1.10(60℃测)，以阿魏酸含量为评价指标，结果见表13。
表13浓缩方法考察结果(n＝2)
结果表明，减压浓缩具有浓缩时间短、浓缩温度低等优点，能够防止有效成分长时间受热破坏，减压浓缩后阿魏酸含量明显比常压浓缩高，故采用减压浓缩的方法进行浓缩。
(五)干燥方法考察喷雾干燥与传统干燥方法相比，具有干燥速度快、物料受热时间短、生产工序简单、产品流动性大、质地均匀、质量可控性强、适用于工业化大生产等优点，因此本工艺采用喷雾干燥制备浸膏粉。
影响喷雾干燥的主要因素有清膏的相对密度、进风温度、出风温度。
1清膏相对密度筛选将清膏相对密度分别调为1.06、1.08、1.10、1.12(60℃)，进行喷雾干燥，进风温度180～185℃，出风温度90～95℃，物料干燥情况见表14。
表14相对密度筛选结果
结果表明，清膏相对密度在1.06～1.10(60℃)范围内进行喷物干燥时可得到质量较好的干燥粉末。相对密度过高，易堵塞管道，并且会造成浸膏粘度大，雾化困难，雾化形成颗粒大，物料易粘结；相对密度过低，需蒸发大量水分，耗时耗能，故将相对密度定为1.10(60℃)。
2进风温度筛选将相对密度为1.10(60℃)的浸膏进行喷雾干燥，进风温度分别为175～180℃、180～185℃、185～190℃，出风温度为90～95℃，物料干燥情况见表15。
表15进风温度筛选结果
3出风温度筛选将相对密度为1.10(60℃)的浸膏进行喷雾干燥，进风温度分别为180～185℃，出风温度分别为85～90℃、90～95℃、95～100℃，物料干燥情况见表16。
表16出风温度筛选结果
结果表明，进风温度在180～190℃，出风温度在90～100℃之间，可得到干燥粉末，考虑节约能源，将进风温度定为180～185℃，出风温度为90～95℃。
(六)β-环糊精包埋挥发油颗粒剂中挥发油的普通加入方法是将采用乙醇稀释后喷入颗粒中，密闭。该法易造成挥发油分布不均，常温下油挥散，且易氧化变质，难保其稳定性。研究资料表明，挥发油用β-环糊精包埋后，与外界环境隔离，可减少挥发油在生产、贮存过程中的挥散或氧化变质，从而提高制剂稳定性。因此，川芎油采用β-环糊精包埋。
1、材料川芎油自制川芎饮片提取β-环糊精上海伯奥生物科技有限公司，批号0305062、方法称取一定量β-环糊精，加适量蒸馏水摇匀，水浴加热溶解，放冷，与2ml的川芎油无水乙醇溶液(50％，V/V)混合，充分振摇，超声一定时间后，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，包合物用少量石油醚洗涤，40℃干燥4小时，即得。
3、包合物的评价指标以包合物收得率及包合率为指标，计算公式如下包合物收得率(％)＝(包合物实际重量/β-环糊精量)*100％包合率(％)＝[(包合物中挥发油量/挥发油加入量)/空白回收率]*100％空白回收率(％)＝(提取出挥发油量/挥发油加入量)*100％4、空白回收试验取1ml挥发油，加200ml蒸馏水，按挥发油测定法测定，计算空白回收率，结果见表17。
表17空白回收率结果
5、β-环糊精包埋川芎挥发油正交试验在影响β-CD包埋川芎挥发油主要因素中，加水量、油β-CD、超声时间为较重要的因素，对以上三个因素进行正交设计，每因素选择三个水平，采用L9(34)正交表进行试验，正交设计见表18。
表18正交试验设计因素水平表
以综合评分为评价指标，采用直观分析和方差分析对试验结果进行判断，其中，综合评分＝包合物收得率*40％+包合率*60％。包埋工艺正交试验及结果见表19，方差分析见表20。
表19正交试验结果
表20方差分析表
由直观分析知，影响提取的因素顺序为油β-CD＞超声时间＞加水量。
由方差分析知，油β-CD、超声时间各水平间具有显著性差异，以油β-CD为1∶8、超声30min为最优，加水量各水平间无显著性差异。
根据方差分析结果，结合直观分析和生产实际需要，确定最优工艺为8倍量β-CD，加60ml蒸馏水，超声30min。
6、验证试验照正交试验所得结果，称取8g β-环糊精，加60ml蒸馏水摇匀，水浴加热溶解，放冷，与2ml的川芎油无水乙醇溶液(50％，V/V)混合，充分振摇，超声30min后，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，包合物用少量石油醚洗涤，40℃干燥4小时，即得。结果见表21。
表21验证试验结果
结果表明，正交试验所确定β-CD包埋川芎油工艺稳定。
通过对川芎药材的不同有效组分提取，并对各有效组分进行质量控制，有效的保证了本发明药物的质量，提高了药物的稳定、可控性。
以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。
一、本发明药物颗粒剂等效性试验1镇痛试验1.1小鼠热板法将热板测痛仪温度控制在55±0.5℃，预热10分钟。取昆明种雌性小鼠数只，体重18～22g，每次1只放在热板上，小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间(秒)作为该鼠的痛域值。凡舔后足时间小于5秒或大于30秒或跳跃者弃之不用。将合格小鼠随机分成6组，每组10只，重复测其正常痛域值，取两次正常痛域值平均值作为该鼠给药前痛域值。
各给药组给药后1h、2h、3h测定小鼠痛域值。
表22对小鼠热板法的影响
注(1)各给药组与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；(2)括号中数据是各给药组与空白对照组比较，其痛域延长百分率。
(3)川芎标准汤剂是将川芎药物直接加水煎煮，与本发明药物颗粒剂比较是在相同的原料用量。
结论本发明药物颗粒剂及川芎标准汤剂在给药1小时后均能显著延长小鼠热板痛域值(P＜0.05)，其痛域延长百分率分别为78.42％和83.45％；给药2小时后均能显著延长小鼠热板痛域值(P＜0.05)，其痛域延长百分率分别为50.26％和52.91％；川芎标准汤剂效果略优于本发明药物颗粒剂，但两者无显著性差异。
1.2小鼠扭体法昆明种小鼠60只，体重18～22g，雌雄各半，按体重和性别随机分成6组，各给药组给药后0.5h后，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，观察各组动物出现扭体反应的首次时间及20分钟内扭体次数。
表23对小鼠扭体法的影响
注各给约组与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结论本发明药物颗粒剂及川芎标准汤剂在给药均能延长小鼠扭体的潜伏期，均能显著减少20分钟内小鼠扭体次数(P＜0.05)，其扭体抑制率分别为41.48％和48.89％；川芎标准汤剂效果略优于本发明药物颗粒剂，但两者无显著性差异。
2对小鼠痛经模型的治疗作用试验昆明种小鼠60只，体重18～22g，雌性，给小鼠每天灌胃已烯雌酚溶液0.2mg/只，连续10天，于第6天开始给药治疗，连续5天，末次给药1小时后对小鼠腹腔注射催产素0.2u/只。观察小鼠在注入催产素后首次扭体反应时间和30分钟内扭体发生次数。
表24对小鼠痛经模型的影响
注各给药组与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结论本发明药物颗粒剂及川芎标准汤剂给药后均能延长小鼠催产素所致扭体反应的潜伏期，均能显著减少30分钟内小鼠扭体次数(P＜0.05)，其扭体抑制率分别为36.23％和39.13％；川芎标准汤剂效果略优于本发明药物颗粒剂，但两者无显著性差异。
3大鼠血液流变学检查SD大鼠70只，体重200～250g，雌雄各半，按体重和性别随机分成7组。各给药组连续给药5天，空白组和模型组动物灌等体积的蒸馏水。给药第5天，模型组和各给药组动物皮下注射0.1％肾上腺素0.9mg/kg，每日2次，2次之间用冰水浸泡5分钟，动物禁食过夜，第6天取血检验。
表25对大鼠血液流变学影响
注(1)模型组与空白组比较，△△P＜0.01；(2)各给药组与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结论本发明药物颗粒剂及川芎标准汤剂给药后均能显著降低血瘀模型大鼠的全血粘度(P＜0.05)；本发明药物颗粒剂给药后能显著降低血瘀模型大鼠的全血高切还原粘度、全血高切相对指数(P＜0.05)；川芎标准汤剂给药后能显著降低血瘀模型大鼠的全血低切还原粘度、纤维蛋白原含量(P＜0.05)。两者无显著性差异。
上述试验说明，针对镇痛、血液流变、痛经的治疗，本发明药物与川芎标准汤剂具有相同的功效，但是由于川芎制剂针对的适应症较广泛，且川芎的来源不同，品种质量不同，采用本发明药物可避免上述的影响川芎质量的因素，有效地保证了药物的质量。
试验例2本发明药物原料不同配比的药效学试验《川芎饮片质量标准草案》含量测定(1)规定挥发油含量不得少于0.8％(ml/g)；本发明药物颗粒剂经3批小试得挥发油为0.5％(ml/g)；经10批中试得挥发油为0.1％(ml/g)，川芎提取物为25％。即川芎挥发油与川芎提取物配比分别为1∶31(理论值)、1∶50(小试量)、1∶250(中试量)。将上述三个比例挥发油经β-环糊精包合后，加入川芎提取物，混匀。
1镇痛试验1.1小鼠热板法将热板测痛仪温度控制在55±0.5℃，预热10分钟。取昆明种雌性小鼠数只，体重18～22g，每次1只放在热板上，小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间(秒)作为该鼠的痛域值。凡舔后足时间小于5秒或大于30秒或跳跃者弃之不用。将合格小鼠随机分成6组，每组10只，重复测其正常痛域值，取两次正常痛域值平均值作为该鼠给药前痛域值。
各给药组给药后1h、2h、3h测定小鼠痛域值。
表26对小鼠热板法的影响
注(1)各给药组与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；(2)括号中数据是各给药组与空白对照组比较，其痛域延长百分率。
(3)上述试验的理论值、小试量、中试量均为相同的服用剂量。
结论三个比例在给药1小时后均能显著延长小鼠热板痛域值(P＜0.05)，其痛域延长百分率分别为97.12％、90.65％、78.42％；给药2小时后均能显著延长小鼠热板痛域值(P＜0.05)，其痛域延长百分率分别为65.61％、56.61％、50.26％；理论值和小试量略优于中试量，但无显著性差异。
1.2小鼠扭体法昆明种小鼠60只，体重18～22g，雌雄各半，按体重和性别随机分成6组，各给药组给药后0.5h后，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，观察各组动物出现扭体反应的首次时间及20分钟内扭体次数。
表27对小鼠扭体法的影响
注各给药组与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结论三个比例在给药后均能延长小鼠扭体的潜伏期，其中理论值能显著延长小鼠扭体的潜伏期(P＜0.05)；三个比例均能显著减少20分钟内小鼠扭体次数(P＜0.05)，其扭体抑制率分别为53.70％、56.30％、41.48％；理论值和小试量略优于中试量，但无显著性差异。
2对小鼠痛经模型的治疗作用试验昆明种小鼠60只，体重18～22g，雌性，给小鼠每天灌胃已烯雌酚溶液0.2mg/只，连续10天，于第6天开始给药治疗，连续5天，末次给药1小时后对小鼠腹腔注射催产素0.2u/只。观察小鼠在注入催产素后首次扭体反应时间和30分钟内扭体发生次数。
表28对小鼠痛经模型的影响
注各给药组与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结论三个比例给药后均能延长小鼠催产素所致扭体反应的潜伏期，均能显著减少30分钟内小鼠扭体次数(P＜0.05)，其扭体抑制率分别为82.13％、68.12％、36.23；理论值和小试量略优于中试量，但无显著性差异。
3大鼠血液流变学检查SD大鼠70只，体重200～250g，雌雄各半，按体重和性别随机分成7组。各给药组连续给药5天，空白组和模型组动物灌等体积的蒸馏水。给药第5天，模型组和各给药组动物皮下注射0.1％肾上腺素0.9mg/kg，每日2次，2次之间用冰水浸泡5分钟，动物禁食过夜，第6天取血检验。
表29对大鼠血液流变学影响
注(1)模型组与空白组比较，△△P＜0.01；(2)各给药组与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结论三个比例给药后均能显著降低血瘀模型大鼠的全血粘度(P＜0.05)；中试量给药后能显著降低血瘀模型大鼠的红细胞聚集指数(P＜0.05)。
虽然上述试验说明，各配比组药效无显著性差异，通过中试放大试验，理论值与小试量试验结果均达不到制剂要求，因此，确定本发明药物中挥发油与川芎提取物的重量配比为1∶250。
权利要求
1.一种具有活血行气的药物组合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂川芎挥发油1份、川芎提取物31～250份；所述的川芎提取物中不含挥发油。
2.根据权利要求1所述的具有活血行气的药物组合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂川芎挥发油1份、川芎提取物250份。
3.根据权利要求1、2所述的具有活血行气的药物组合物，其特征在于所述的川芎挥发油、川芎提取物来源于伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎及其炮制品。
4.根据权利要求1-3任一项所述的具有活血行气的药物组合物，其特征在于所述的川芎挥发油的相对密度为0.8917～1.0899，折光率为1.3600～1.6641；所述的川芎提取物中每克含阿魏酸C10H10O4不得少于0.2mg。
5.根据权利要求4所述的具有活血行气的药物组合物，其特征在于所述的川芎提取物的HPLC指纹图谱如图1所示，色谱条件为色谱柱依利特ODS(250×4.6mm)，5μm；流动相甲醇-1％冰醋酸水溶液，体积比35∶65；柱温40℃；流速1.0ml/min；灵敏度0.01AUFS；检测波长322nm。
6.根据权利要求1-5任一项所述的具有活血行气的药物组合物，其特征在于它是由川芎挥发油、川芎提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的药剂。
7.根据权利要求6所述的具有活血行气的药物组合物，其特征在于所述的药剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、合剂。
8.一种制备权利要求1-7任一项所述的具有活血行气的药物组合物的方法，它包括如下步骤a、川芎加水浸泡，水蒸气提取，收集挥发油；b、将a步骤收集挥发油后的药渣加水煎煮，合并收集挥发油后的药液，浓缩，干燥，得川芎提取物；c、按下述重量配比称取上述制备的川芎挥发油及提取物，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药剂川芎挥发油1份、川芎提取物31～250份。
9.根据权利要求8所述的具有活血行气的药物组合物的方法，其特征在于步骤a所述的川芎挥发油采用β-环糊精包合，超声处理15-45min；川芎挥发油与β-环糊精、水的重量配比为川芎挥发油1份、β-环糊精4-8份、水60-100份。
10.根据权利要求9所述的具有活血行气的药物组合物的方法，其特征在于步骤a所述的川芎挥发油采用β-环糊精包合，超声处理30min；川芎挥发油与β-环糊精的重量配比为川芎挥发油1份、β-环糊精8份、水60份。
全文摘要
本发明提供了一种具有活血行气的药物组合物，它是由川芎挥发油、川芎提取物(不含挥发油)为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。本发明还提供了该药物组合物的制备方法。本发明药物是利用川芎多性味、多成分、多靶点的性质，将川芎挥发油与川芎水提物配比，发挥协同作用，且具有最佳配比，提高了药材的利用率，质量可控，药效明确，为临床提供了一种新的选择。
文档编号A61P43/00GK1994343SQ200510022428
公开日2007年7月11日 申请日期2005年12月29日 优先权日2005年12月29日
发明者韩丽, 罗海燕, 谢秀琼 申请人:谢秀琼, 韩丽, 罗海燕