专利名称：一种麦冬须根有效部位及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材的有效部位及其制备方法和用途，特别涉及一种麦冬须根有效部位及其制备方法和用途。
背景技术：
麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根，其味甘苦，性微寒，归心、肺、胃经，有养阴生津、润肺清心之功效，用于肺燥干咳、心烦失眠及内热消渴之症，其有效成分为麦冬皂苷类成分。传统上一般以麦冬的块根入药，而块根上连带的大量须根在麦冬药材采集时作为废物被废弃。但是据我们的研究发现须根中也含有大量的皂苷类成分，并且须根中麦冬总皂苷的含量较块根中高。因此，为了开发新的药用资源，我们发明了从麦冬须根中制备麦冬总皂苷的方法，希望能废物利用。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种麦冬须根有效部位；本发明的第二个目的在于提供一种麦冬须根有效部位的制备方法；本发明第三个目的在于提供一种麦冬须根有效部位的用途。
本发明提供的麦冬须根有效部位，是从麦冬须根中提取、纯化得到的，其总皂苷的含量在50％以上。其中主要成分麦冬皂苷D的含量在1.6％以上。
本发明提供的麦冬须根有效部位由如下的步骤得到取麦冬须根，加入生药5-12倍量的50～90％(v/v)的甲醇、乙醇或丙酮等有机溶剂进行浸渍、渗漉或加热回流提取1～4次；合并提取液，减压回收溶剂；将得到的浓缩液注入大孔吸附树脂柱，先用5-15倍量柱体积的纯化水洗脱(至无糖反应)，弃去，再用4～10倍量柱体积50～95％溶剂洗脱至无皂苷反应，收集该洗脱液，浓缩，干燥，粉碎。
甲醇、乙醇或丙酮等有机溶剂进行提取时，有机溶剂的优选浓度为60-80％；提取方式以加热回流提取方式为最佳；所述大孔吸附树脂为以苯乙烯为骨架、二乙烯苯为交联剂交联而成的聚合物，或以苯乙烯为骨架、二乙烯苯为交联剂，同时添加丙烯酸甲酯、丙烯腈等物质交联而成的聚合物，包括D系列、HPD系列、SP系列以及NKA型和AB-8型；50～95％的洗脱溶剂优选60～80％；所用的干燥方式可以为加热干燥、真空干燥、冷冻干燥、常温干燥。
本发明提供的提取方法简单、易行，以HPLC为检测手段，以麦冬须根总皂苷中的主要有效成分麦冬皂苷D的含量为检测指标，对整个工艺流程进行了有效的质量控制，提高了有效部位的含量，得到的原料药纯度高，色泽好；另外，该提取方法使用常规提取设备，造价低廉，工艺中没有用到有毒的有机溶剂，无污染，有利于保护环境，适于工业化生产。同时，通过实验证明本发明麦冬须根的有效部位能够对垂体后叶素致大鼠心肌缺血模型具有显著的保护作用(与空白对照组比较，P＜0.05)。
下述实验例用于进一步说明本发明实验例1麦冬块根和须根药材中麦冬皂苷D的含量比较用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(44∶56)为流动相；流速1mL/min；柱温25℃，以蒸发光散射检测器检测。精密称取麦冬皂苷D对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml中含0.6mg的溶液，即得对照品溶液。取本品(麦冬块根和须根药材)粉末1g，精密称定，置园底烧瓶中，加30ml75％甲醇加热回流提取2h，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量溶剂分次洗涤药渣和容器，并入50ml量瓶中，摇匀，即得供试品溶液。分别吸取上述对照品溶液5μl和10μl与供试品溶液40μl，注入液相色谱仪，测定，按外标两点法计算，即得。
测定结果见表1表1 麦冬块根和须根中麦冬皂苷D的含量测定结果
结果表明麦冬须根中麦冬皂苷D的含量为麦冬块根中的6倍。
实验例2麦冬块根和须根中麦冬皂苷类成分的比较色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈(A)--水(B)梯度洗脱，21％～38％A(0～35min)，38％～44％A(35～60min)，44％～60％A(60～80min)；流速1mL/min；柱温30℃；蒸发光散射检测器。取麦冬皂苷D对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，作为麦冬皂苷D对照品溶液。取麦冬(块根和须根)粉末1g，精密称定，置50mL三角瓶中，加30mL甲醇超声提取，滤过，减压浓缩至干，残渣加水溶解并转移至10mL量瓶中，用水稀释至刻度，作为供试品溶液。分别精密吸取以上对照品溶液和供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中，记录90分钟的图谱，即得。
测定结果见图1结果表明麦冬须根含有的皂苷类成分与麦冬块根中的麦冬皂苷类成分有些相似，但还是具有一定的区别，而且须根中皂苷类成分的峰面积大于块根中的皂苷峰面积。
实验例3麦冬须根有效部位与麦冬块根有效部位的比较各取麦冬须根与麦冬块根140g，用75％乙醇(6倍量，5倍量，4倍量)加热回流提取三次，每次1小时。合并滤液，浓缩，上AB-8大孔树脂分离(药材∶干树脂(2∶1))，用水1000ml洗至无糖，用80％乙醇洗脱800ml，浓缩至干，称重，即得麦冬须根有效部位和麦冬块根有效部位。二者比较如下表2 麦冬须根有效部位和麦冬块根有效部位皂苷含量的比较
从上面的结果可以看出麦冬须根有效部位和麦冬块根有效部位二者还是具有较大的区别，麦冬须根有效部位中的麦冬皂苷D的含量比麦冬块根有效部位中麦冬皂苷D的含量高了31％。并且从麦冬须根中制得有效部位的收率比从麦冬块根制取有效部位的收率高了5倍。
实验例4麦冬须根有效部位对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响取体重220-240g的健康SD大鼠50只，雌雄各半，按体重随机分成4组，空白对照组，地奥心血康胶囊(200mg/kg)，麦冬须根有效部位组(200mg/kg)，麦冬块根有效部位组(200mg/kg)。连续给药八天，最后一天于给药后30分钟用戊巴比妥钠ip麻醉后，仰位固定于鼠台上，肢体导联，心电图机选择标准电压1mv＝20mm，纸速25mm/s，稳定约5-10min，描记正常II导联心电后，舌下静脉注射垂体后叶素(1U/kg)，5s内注完。分别描记5s、15s、30s、1min、5min、8min各时间点的心电图。
计算给予垂体后叶素前后，ST段和T波变化的差值，对差值进行t检验，判断显著性差异。
麦冬须根有效部位对大鼠注射垂体后叶素后II导联心电图ST波变化及变化率的影响各组大鼠注射垂体后叶素后即刻观察II导联心电图ST段变化情况，与给垂体后叶素前比较，ST段明显上移，于5-20秒左右为高峰，30秒后逐渐恢复，说明用1U/ml的垂体后叶素制造心肌缺血模型是成功的。从各组ST波变化来看，在30s内，麦冬须根有效部位组(200mg/kg)在5s、15s时间点能显著对抗ST波变化，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，地奥心血康在5s与空白对照比较有显著性差异(P＜0.05)；从ST变化率来看，麦冬须根有效部位组(200mg/kg)和地奥在1min的变化率与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，麦冬块根有效部位组(200mg/kg)在各时间点与空白对照组比较均无论是变化值还是变化率均无显著性差异。这一结果表明麦冬须根有效部位组(200mg/kg)可减轻ST波的位置变化(见表3)。
麦冬须根有效部位对大鼠注射垂体后叶素后II导联心电图T波变化的影响从T波变化来看，30s内各给药组大鼠给垂体后叶素后T波均抬高，与对照组大鼠比较各给药组T波抬高的程度减轻，麦冬须根有效部位(200mg/kg)在5s、15s和1min三个时间点能明显抑制T波变化，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，并且1min时变化率与空白对照组比较也有显著性差异(P＜0.05)；地奥心血康在5s和1min时变化值与变化率均显著降低，与空白对照组比较有显著差异(P＜0.05)。麦冬块根有效部位(200mg/kg)对T波变化有不同程度的抑制，但与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05)这一结果表明麦冬须根有效部位可减轻T波的变化(见表4)。
麦冬须根有效部位对垂体后叶素致大鼠心肌缺血具有明显的保护作用，提示麦冬须根有效部位可用于心、脑血管疾病方面的治疗。
实验例5麦冬须根有效部位对冠心病心肌缺血模型大鼠心梗面积的影响1材料
1.1动物雄性Wistar大鼠50只，体重200～220g，购自北京市通利实验动物养殖厂，合格证号京动许字(2000)第010号。
1.2药物和仪器SC3型呼吸机，上海医疗设备厂；MPIAS-500型多媒体彩色病理图像分析系统，北京空海公司。
2方法2.1分组和给药制造冠心病大鼠模型大鼠，腹腔注射水合氯醛，胸骨左侧第四、五肋间开胸，剪开心包，暴露心脏，轻轻挤压大鼠胸腔侧壁，将心脏挤出胸腔，于肺动脉圆锥与左心耳之间，左心耳根部下方2～3mm处穿线、结扎冠状动脉左前降支，剔除标准II导联心电图无ST段或T波改变的大鼠；关闭胸腔，缝合胸壁，恢复自主呼吸。将造模成功的大鼠随机分为2组①模型组，②地奥心血康组，③麦冬须根有效部位组，每组10只。大鼠灌胃给药，模型组给予等体积的蒸馏水。药后24h，在心脏结扎线以下将心脏横切为5片，N-BT染色，多媒体彩色病理图文分析系统固定取像，测量正常心肌及梗塞心肌面积，计算心肌梗塞程度。
2.2数据统计数据用X±S表示，SPSS10.0软件统计处理，单因素方差分析组间比较。
3结果结果显示，麦冬须根有效部位组显著减小冠心病模型大鼠的心肌梗死面积(与模型组比较，P＜0.05)，见表5。提示麦冬须根及其麦冬须根有效部位可用于治疗心、脑血管疾病。
表5 对冠心病心肌缺血模型大鼠心肌梗塞面积的影响(X±S，)
*P＜0.05
图1麦冬块根和须根中麦冬皂苷类成分的比较(备注由下至上依次是麦冬皂苷D、麦冬块根、麦冬须根)实施例1取麦冬须根，加生药8倍量的85％的乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液备用；残渣再加10倍量的85％的乙醇加热回流提取1小时，滤过，合并两次滤液，减压浓缩，浓缩液放置至室温，徐徐注入NKA大孔吸附树脂柱，先用8倍柱床体积的去离子水洗脱至无糖反应，再用6倍柱床体积80％乙醇洗脱至无皂苷反应。收集该洗脱液，浓缩，真空干燥，粉碎，即得。
实施例2取麦冬须根，加生药12倍量的70％的乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液备用；残渣再加8倍量的70％的乙醇加热回流提取两次，每次1小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩，浓缩液放置至室温，徐徐注入HPD100大孔吸附树脂柱，先用10倍柱床体积的去离子水洗脱至无糖反应，再用6倍柱床体积80％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，即得。
实施例3取麦冬须根，加生药6倍量的75％的乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液备用；残渣再加5倍量的75％的乙醇加热回流提取2次，每次1小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩，浓缩液放置至室温，徐徐注入大孔吸附树脂柱，先用6倍柱床体积的去离子水洗脱至无糖反应，再用6倍柱床体积70％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，粉碎，即得。
实施例4取麦冬须根，加入8倍生药量的50％(v/v)的乙醇进行加热回流提取2次，每次1小时；合并提取液，减压回收溶剂；将得到的浓缩液注入D101大孔吸附树脂柱，先用8倍量柱体积的纯化水洗脱至无糖反应，再用4倍量柱体积95％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩，真空干燥，干燥温度为50℃，粉碎。
表3 麦冬须根有效部位对垂体后叶素引起的大鼠心电ST波变化的影响(x±s，n＝10)
注与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；(下同)
表4 麦冬须根有效部位对垂体后叶素引起的大鼠心电T波变化的影响(x±s，n＝10)
权利要求
1.一种麦冬须根有效部位，其中麦冬总皂苷的含量在50％以上。
2.如权利要求1所述的麦冬须根有效部位，其中的主要有效成分麦冬皂苷D的含量在1.5％以上。
3.如权利要求1或2所述的麦冬须根有效部位的制备方法，其特征在于该方法为取麦冬须根，加入生药5-12倍量的50～95％的甲醇、乙醇或丙酮进行浸渍、渗漉或加热回流提取1～4次；合并提取液，减压回收溶剂；将得到的浓缩液注入大孔吸附树脂柱，先用5～15倍量柱体积的纯化水洗脱至无糖反应，再用4～10倍量柱体积50％～95％溶剂洗脱至无皂苷反应；收集该洗脱液，浓缩，干燥，粉碎。
4.如权利要求3所述的麦冬须根有效部位的制备方法，其特征在于该方法为取麦冬须根，加生药8倍量的85％的乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液备用；残渣再加10倍量的85％的乙醇加热回流提取两次，每次1小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩，浓缩液放置至室温，徐徐注入HPD100大孔吸附树脂柱，先用8倍柱床体积的去离子水洗脱至无糖反应，再用6倍柱床体积80％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，即得。
5.如权利要求3所述的麦冬须根有效部位的制备方法，其特征在于该方法为取麦冬须根，加生药12倍量的70％的乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液备用；残渣再加8倍量的70％的乙醇加热回流提取两次，每次1小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩至相对密度为1.25～1.30，浓缩液放置至室温，徐徐注入HPD100大孔吸附树脂柱，先用10倍柱床体积的去离子水洗脱至无糖反应，再用6倍柱床体积80％乙醇洗脱，收集该洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25，干燥，粉碎，即得。
6.如权利要求3所述的麦冬须根有效部位的制备方法，其特征在于该方法为取麦冬须根，加生药6倍量的75％的乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液备用；残渣再加5倍量的75％的乙醇加热回流提取2次，每次1小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩，浓缩液放置至室温，徐徐注入大孔吸附树脂柱，先用6倍柱床体积的去离子水洗脱至无糖反应，再用6倍柱床体积70％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，粉碎，即得。
7.如权利要求3所述的麦冬须根有效部位的制备方法，其特征在于该方法为取麦冬须根，加入8倍生药量的50％的乙醇进行加热回流提取2次，每次1小时；合并提取液，减压回收溶剂；将得到的浓缩液注入D101大孔吸附树脂柱，先用8倍量柱体积的纯化水洗脱至无糖反应，再用4倍量柱体积95％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩，真空干燥，干燥温度为50℃，粉碎，即得。
8.如权利要求1或2所述的麦冬须根有效部位在制备治疗心、脑血管疾病的药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述的治疗心、脑血管疾病是指减小心肌梗死面积、改善心肌缺血。
10.麦冬须根在制备治疗心、脑血管疾病的药物中的应用。
11.如权利要求10所述的应用，其特征在于所述的治疗心、脑血管疾病是指减小心肌梗死面积、改善心肌缺血。
全文摘要
本发明涉及一种来源于麦冬须根的麦冬须根有效部位及其制备方法和用途。该有效部位中麦冬总皂苷的含量在50％以上，其中的主要有效成分麦冬皂苷D的含量在1.6％以上。其制备方法为麦冬须根用一定浓度的溶剂提取，回收提取溶剂并浓缩至一定的相对密度，过大孔吸附树脂，先用水洗脱至无糖反应，再用较高浓度的溶剂进行洗脱，干燥、粉碎而得。本发明的提取方法简单、易行，得到的原料药纯度高，色泽好，无污染，适于工业化生产；本发明可利用废物麦冬须根、节约资源，成本低廉。
文档编号A61K125/00GK1903315SQ20051008555
公开日2007年1月31日 申请日期2005年7月28日 优先权日2005年7月28日
发明者屠鹏飞, 齐学兵, 姜勇, 逄剑 申请人:北京华医神农医药科技有限公司