专利名称：一种桑叶提取物及其在制备糖尿病药物中的应用和制备方法
技术领域：
本发明涉及一种桑叶提取物及其在制备治疗糖尿病及其并发症药物中的应用和制备方法，属于中药现代化领域。
背景技术：
糖尿病是一种常见的内分泌疾病，它的起因主要是由于遗传因素和环境因素如饮食生活习惯不良(过食、精食等)、运动量不足、肥胖和应激反应等所致。随着世界人口的老龄化，糖尿病已经成为一种常见病、多发病，发病率呈显著上升趋势。
糖尿病是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的，具有明显异质性的慢性高血糖及并发症所组成的综合症。主要分为I型和II型两种，I型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病)患者胰腺产生的胰岛素很少或者完全不产生胰岛素；II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)患者胰腺能继续产生胰岛素，有时甚至胰岛素水平超过正常人，然而机体对胰岛素的作用产生抵抗，导致胰岛素相对缺乏。以非胰岛素依赖的II型为主，约80％为II型糖尿病患者。长期高血糖损害血管、神经及其他内脏结构，复合的糖基物质堆积在小血管壁，使其变厚和易渗漏。血管壁变厚，血管供血量越来越少，尤其是支配皮肤和神经的血管变化更明显。血糖控制不佳亦可引起血中脂肪物质升高，加速动脉粥样硬化(在血管壁形成斑块)。糖尿病患者中，动脉粥样硬化为非糖尿病者2～6倍，男女两性均可发生。大、小血管的循环血量不足可损害心脏、大脑、双下肢、眼、肾脏、神经、皮肤等，使创口愈合缓慢。正因为以上的原因，糖尿病患者易合并许多严重慢性并发症，心脏病发作及卒中很常见；眼睛的血管损害可引起视力丧失(糖尿病性视网膜病变)；肾脏功能异常，导致肾衰竭，需透析治疗；神经损害有数种表现，双手、双下肢、双足神经受损(糖尿病性多神经病)，可出现感觉异常及针刺或烧灼样疼痛，四肢无力；如果皮肤神经受损，病人不能感觉挤压或温度变化，使皮肤可能反复受伤；皮肤血流供应不足也可导致溃疡形成，伤口愈合缓慢。
桑叶作为药食两用的原料，早已在民间广泛应用。自古以来，中医就将其作为治疗消渴证(相当于现代医学的糖尿病)的中药应用于临床，《本草纲目》中记载“汁煎代茗，能止消渴”；“灸熟煎饮，代茶止渴”。现代研究表明，桑叶中主要含有甾体及三萜类化合物、黄酮类化合物、生物碱、氨基酸、有机酸和其他化合物。
自上世纪七十年代年日本学者从植物中分得1-脱氧野尻霉素(DeoxyjirimicinDNJ)以来，多羟基生物碱类化合物以其立体结构多样性、多种生物活性，成为研究热点，尤其是该类化合物作为糖的类似物而具有糖苷酶抑制活性，引起人们极大兴趣。研究表明，桑叶中有多种糖苷酶抑制剂如1-脱氧野尻霉素(DNJ)、fagomine等。药理研究证实，多羟基生物碱类化合物对二糖类分解酶活性的抑制作用从而抑制小肠对双糖的吸收，降低餐后血糖的高峰值。桑叶中黄酮类化合物也报道有降血糖活性，且有降低动脉粥样硬化的损害，降低小肠毛细管通透性等活性。桑叶总生物碱与总黄酮作为有效部位群，不仅可以降低血糖和改善糖耐量同时还有降低动脉粥样硬化的损害等作用，对糖尿病血管并发症有预防和治疗作用。
申请号为CN 01113191.8的中国专利，公开了“具有α-糖苷酶抑制活性的中药提取物的制备方法及用途”，该专利涉及从中药桑叶、桑枝、桑白皮和桑葚中制备总生物碱，但是并没有涉及桑叶总生物碱与总黄酮作为有效部位群的提取物的应用。申请号为CN 200410018677.4的中国专利公开了“具有α-糖苷酶抑制活性的药物组合物及其用途”，该专利涉及了中药桑叶、桑枝、桑白皮和桑葚中制备的总生物碱与外加黄酮类化合物槲皮素、儿茶素及茶多酚的组合物在治疗糖尿病、治疗高血脂、抗氧化和抗衰老药物中的应用。本发明提供了一种从桑叶中同时得到生物碱和黄酮有效部位的方法及该方法得到的提取物。
本发明的目的在于，从桑叶中提取制备总生物碱与总黄酮作为有效部位群，作为治疗和预防糖尿病及其并发症的药物。
发明内容
本发明目的在于提供一种桑叶提取物，其特征在于其中总生物碱和总黄酮的含量之和大于50％。
本发明还提供了上述提取物的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供这种桑叶提取物在制备糖尿病药物中的应用。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种桑叶提取物的制备方法，包括以下步骤1)提取以桑叶为原料，用水、低级醇或含水低级醇提取；2)除杂将提取液浓缩，浓缩液醇沉或加入絮凝剂，使杂质沉淀，过滤；3)富集滤液经过阳离子交换树脂柱，流出液再经过大孔树脂柱；4)洗脱用含水低级醇洗脱吸附于大孔树脂上的桑叶总黄酮，用挥发性碱溶液洗脱吸附于阳离子交换树脂上的桑叶总生物碱；5)干燥洗脱液减压浓缩至干，经干燥粉碎即分别得到桑叶总黄酮和桑叶总生物碱。
6)混合将所得到的总黄酮和总生物碱混合，使总生物碱和总黄酮的含量之和大于50％，即得本发明所述桑叶提取物。
经上述方法得到桑叶总黄酮和桑叶总生物碱还可分别通过聚酰胺和阴离子交换树脂进一步纯化。
所述提取用含水低级醇的碳数为C1-C5，例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等；浓度为X，0＜X≤95％，优选0＜X≤30％。
所述除杂步骤中，加入高浓度乙醇使溶液乙醇浓度为X，40％≤X≤90％，优选50≤X≤60％。
所述除杂步骤中，加入的絮凝剂可以是明胶、壳聚糖、琼脂、ZTC1+1、甲壳素及其衍生物，优选为壳聚糖。
所述大孔树脂可以为苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯中任意一种或几种为骨架材料的极性或非极性树脂。例如D101、D201、AB-8、HP-20、XAD-4和XAD-16等。优选为苯乙烯型大孔吸附树脂。
所述的阳离子交换树脂可以为苯乙烯系或大孔型树脂，例如001X4、001X7、001X14.5、Dowex50、Amberlite IR120或Amberlite252等。优选001X4，001X7型。
所述挥发性碱为0.1％～1的氨水、二乙氨、三乙胺、吡啶的水溶液，优选为0.5％的氨水溶液。
所述洗脱用含水低级醇的碳数为C1-C5，例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等；浓度为X，45≤X≤100％，优选50≤X≤80％。
桑叶提取物的干燥方法为真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥等，最好为真空干燥或冷冻干燥。
一种桑叶提取物，该桑叶提取物采用上述方法制备得到。
一种桑叶提取物的应用，将所述的桑叶提取物用于制备治疗和预防糖尿病及其并发症的药物方面的应用。
一种桑叶提取物制剂，该制剂所述的桑叶提取物为主要活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的任意一种或几种。
所述的药剂学可接受的剂型为口服剂或注射剂，为片剂、丸剂、胶囊、滴丸、水针、粉针或输液。
利用本发明得到的桑叶提取物制备所需药物的各种剂型时，可以按照药剂学领域的常规生产方法制备。如将该提取物与一种或多种载体混合，然后制成相应的剂型。
本发明的优点是本发明所提供的桑叶提取物，其制备工艺简单、含量高、安全、易于操作、不需高温高压和特殊设备、成本低廉。
以下通过实施例详细说明本发明技术方案，并不以此限定本发明的实施范围。
具体实施例方式
实施例1桑叶10kg，粉碎，用30％乙醇回流提取3次，每次50L；合并30％乙醇提取液，减压浓缩至10L，比重为1.18，加入95％的乙醇20L，使乙醇浓度达到约60％，静置24h，滤除沉淀；上清液浓缩去醇后，加水稀释至100L，过D101树脂柱，柱体积为10L，上样后水洗30L，合并流出液和水洗液；D101树脂再用60％乙醇洗脱50L，60％乙醇洗脱液浓缩后减压干燥即得总黄酮130g(含量为57％)；流出液和水洗液加盐酸调pH4后，过10L的001×7聚苯乙烯磺酸氢型阳离子交换树脂，水洗至无色后，用0.5N的氨水洗脱80L，氨水洗脱液浓缩干燥即得总生物碱65g(含量为65％)；混合总黄酮和总生物碱即得本发明所指的桑叶提取物。
取得到的桑叶提取物100g，加淀粉15000g，微晶纤维素70g，以50％7乙醇制粒，压片，得片剂，每片为10mg。
实施例2桑叶5kg，粉碎，用50％乙醇回流提取3次，每次10L；合并50％乙醇提取液，减压浓缩至10L，比重为1.17，加入95％的乙醇7L，使乙醇浓度达到约70％，静置24h，滤除沉淀；上清液浓缩去醇后，加水稀释至100L，过AB8树脂柱，柱体积为5L，上样后水洗20L，合并流出液和水洗液；AB8树脂再用70％乙醇洗脱30L，70％乙醇洗脱液浓缩后减压干燥即得总黄酮70g(含量为62.5％)；流出液和水洗液加盐酸调pH5后，过6L的001X14.5聚苯乙烯磺酸氢型阳离子交换树脂，水洗至无色后，用0.5N的氨水洗脱40L，氨水洗脱液浓缩干燥即得总生物碱32.5g(含量为57％)；混合总黄酮和总生物碱即得本发明所指的桑叶提取物。
实施例3桑叶1kg，粉碎，用70％乙醇回流提取3次，每次5L；合并70％乙醇提取液，减压浓缩至1.5L，比重为1.16，加入絮凝剂壳聚糖，静置24h，滤除沉淀；上清液浓缩去醇后，加水稀释至10L，过HP20树脂柱，柱体积为2L，上样后水洗5L，合并流出液和水洗液；HP20树脂再用60％乙醇洗脱5L，60％乙醇洗脱液浓缩后减压干燥即得总黄酮11g；流出液和水洗液加盐酸调pH4后，过10L的001×7聚苯乙烯磺酸氢型阳离子交换树脂，水洗至无色后，用0.5N的氨水洗脱8L，氨水洗脱液浓缩干燥即得总生物碱5g(含量为73％)；混合总黄酮和总生物碱即得本发明所指的桑叶提取物。
实施例4正常小鼠餐后血糖时间曲线昆明种雄性小鼠体重为22-25g，禁食过夜，灌胃淀粉10g/kg同时灌胃实施例1得到的桑叶提取物150mg/kg，给药后0min、30min、60min、90min、120min测血糖水平，结果如附图
。
实施例5昆明种小鼠40只，随机分成40组，每组10只，雌雄各半，(1)对照组(蒸馏水)；(2)高血糖模型组(蒸馏水)；(3)桑叶提取物低剂量组(50mg/kg)；(4)桑叶提取物高剂量组(150mg/kg)。除正常对照组外，其余各组腹腔注射链脲霉素(200mg/kg)，72小时后测血糖(空腹12h)，然后将(2)-(4)组，根据血糖值均衡调整组别。同时按以上剂量灌胃给予实施例1得到的桑叶提取物，连续7天，第7天给药前空腹12h，于末次给药后1h测定血糖。结果见表表桑叶提取物对链脲霉素诱发小鼠高血糖的影响
注(1)表中数据为X±SD(n＝10)与正常组比较，P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，**P＜0.01(t检验)。
结论小鼠腹腔注册链脲霉素，可使血糖升高，而给予桑叶提取物后，具有降血糖的作用。其中剂量为(150mg/kg)与模型组比较，差异具有显著性意义。
权利要求
1.一种桑叶提取物，其特征在于其中总生物碱和总黄酮的含量之和大于50％。
2.一种桑叶提取物的制备方法，包括以下步骤1)提取以桑叶为原料，用水、低级醇或含水低级醇提取；2)除杂将提取液浓缩，浓缩液醇沉或加入絮凝剂，使杂质沉淀，过滤；3)富集滤液经过大孔树脂柱，流出液再经过阳离子交换树脂柱；4)洗脱用含水低级醇洗脱吸附于大孔树脂上的桑叶总黄酮，用挥发性碱溶液洗脱吸附于阳离子交换树脂上的桑叶总生物碱；5)干燥洗脱液减压浓缩至干，经干燥粉碎即分别得到桑叶总黄酮和桑叶总生物碱。6)混合将所得到的总黄酮和总生物碱混合，使总生物碱和总黄酮的含量之和大于50％，即得本发明所述桑叶提取物。
3.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述提取用含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，0＜X≤95％。
4.根据权利要求3所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述提取用含水低级醇的浓度为X，0＜X≤30％。
5.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述醇沉使溶液乙醇浓度为X，40％≤X≤90％。
6.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述醇沉使溶液乙醇浓度为X，50≤X≤60％。
7.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述絮凝剂可以是明胶、壳聚糖、琼脂、ZTCl+1、甲壳素及其衍生物中的一种或几种。
8.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述大孔树脂可为以苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯中任意一种或几种为骨架材料的极性或非极性树脂。
9.根据权利要求8所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述大孔树脂是苯乙烯型树脂。
10.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述的阳离子交换树脂可以为苯乙烯系或大孔型树脂。
11.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述挥发性碱为0.1％～1％的氨水、二乙氨、三乙胺、吡啶的水溶液。
12.根据权利要求11所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述挥发性碱为0.5％的氨水溶液。
13.根据权利要求2所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述洗脱用含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，40≤X＜100％。
14.根据权利要求13所述的桑叶提取物的制备方法，其特征在于所述浓度为X，50≤X≤80％。
15.一种桑叶提取物，其特征在于该桑叶提取物采用权利要求1至14中任何一项所述的方法制备得到。
16.一种桑叶提取物制剂，其特征在于该制剂以权利要求15所述的桑叶提取物为主要活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。
17.根据权利要求16所述的桑叶提取物制剂，其特征在于所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的任意一种或几种。
18.根据权利要求17所述的桑叶提取物，其特征在于所述的药剂学可接受的剂型为口服剂或注射剂，为片剂、丸剂、胶囊、滴丸、水针、粉针或输液。
19.一种桑叶提取物的应用，其特征在于将权利要求18所述的桑叶提取物用于制备预防和治疗糖尿病极其并发症的药剂。
全文摘要
一种桑叶提取物，其特征在于提取物中含有总生物碱和总黄酮成分，其中总生物碱和总黄酮的含量之和大于提取物总成分的50％。该桑叶提取物的制备方法包括提取、除杂、富集、洗脱、干燥及混合步骤。桑叶提取物的制剂加入常规药剂学辅料可制成常规药剂学的剂型。桑叶提取物的应用可用于治疗和预防糖尿病及其并发症。本发明的优越性在于本发明所提供的桑叶提取物，其制备工艺简单，桑叶总黄酮和桑叶总生物碱含量高，生产安全，易于操作，不需高温高压和特殊设备、成本低。
文档编号A61P3/10GK1981814SQ20051012235
公开日2007年6月20日 申请日期2005年12月15日 优先权日2005年12月15日
发明者潘勤, 肖峰, 孙琳 申请人:天津中新药业集团股份有限公司